具有益生菌的婴儿配方食品的制作方法

专利名称：：具有益生菌的婴儿配方食品的制作方法具有益生菌的嬰儿配方食品本发明涉及具有益生菌的婴儿配方食品。推荐对所有婴儿使用母乳。然而，在一些情况下，因为医学原因或母亲选择不母乳喂养，母乳喂养不足够或不成功。已开发了针对这些情况的嬰儿配方食品。近来，细菌的某些菌林已引起了人们相当大的注意，因为已发现如果摄入，其对人表现为有价值的性质。特别地，已发现乳杆菌属(Lactobacilli)和双歧杆菌属(Bifidobacteria)的特定菌林能够在肠粘膜建群，以减少病原菌附着肠上皮的能力，从而具有免疫调节效应并有助于保持健康。此类细菌有时纟皮称为益生菌。已进行了更深入的研究以鉴定新的益生菌菌林。例如，EP0199535、EP0768375、WO97/00078、EP0577卯3和WO00/53200公开了乳杆菌属和双歧杆菌属的特定菌林和其有益效应。具体地，对于即将出生的婴儿，认为孩子的胃肠道是无菌的。在出生的过程中，其遇到来自母亲消化道和皮肤的细菌并且开始建群。根据婴儿的喂养，消化道小型生物群的组成存在巨大的差异。母乳喂养的婴儿的粪便菌群包括可观的双歧杆菌属菌群和一些乳杆菌属物种，但是配方食品喂养的嬰儿具有更复杂的小型生物群，通常存在双岐杆菌属、拟杆菌属(5actefwVifes)、梭菌属(C7o^nVf/fl)和链球菌属(^S^印,oocc/)。在大约2岁断奶后，开始建立与成人模式相似的消化道小型生物群模式。为此，已提出给婴儿配方食品加入益生菌，以促进消化道建群的发生，并且促进"有益"细菌——双歧杆菌属和乳杆菌属物种——而非有害的细菌画病原体例如梭菌属等的建群。通常，最少加入10cfu/g配方食品，虽然更大量例如多至1012cfu/g配方食品是优选的。最近，对于旨在生命最初6个月中作为婴儿的唯一营养来源的嬰儿配方食品中加入益生菌已产生了一些关注。这些关注总结在ESPGHANCommitteeonNutrition(欧洲小儿胃肠、肝脏和营养学会)的标题为"ProbioticBacteriainDieteticProductsforInfants,，(JournalofPaediatricGastroenterologyandNutrition,38:365-374)的医学论文中。同时，人乳成分的研究正快速发展。以前总是假定人母乳是无菌的。然而，最近以来例i口Martin等人在其论文"Humanmilkisasourceoflacticacidbacteriafortheinfantgut，，(J.Pediatr.2003;143:754-8)中所描述的，已从人母乳中分离出许多细菌菌林。现在不可能确定地声称这些细菌能够繁殖或至少所有鉴定的菌林有此能力。然而，认为这些细菌和细菌碎片(bacterialfragment)因一个或多个特定的目的必须存在于人乳中。为了有益于非完全母乳喂养的婴儿，需要持续开发尽可能在其营养和生物活性特性方面和人乳相同的婴儿配方食品。发明概述本发明人已吃惊地发现，当继续进行对人初乳和人乳中的细菌和细菌碎片的存在的研究时，共同特征开始显现，即发现无论什么特定的菌林，其浓度表现为比先前提到的加入婴儿配方食品的浓度要低得多。因此，本发明提供了包含蛋白质来源(不超过2.0g/100千卡的量)、脂质来源、糖类来源和益生菌的嬰儿配方食品，其中该益生菌存在的量等于102至105cfu/g干配方食品。本发明也涵盖益生菌在制备婴儿配方食品中的用途，其用于在该婴儿生命的最初几周内促进新生儿免疫系统的成熟，其中该益生菌存在的量等于102至105cfu/g干配方食品。本发明还涵盖益生菌在制备嬰儿配方食品中的用途，其用于调节新生儿的免疫系统以在该婴儿生命的最初几周中促进与在母乳喂养嬰儿中发现的有益肠道小型生物群相当的有益肠道小型生物群的发展，其中该益生菌存在的量等于102至105cfu/g干配方食品。在另一方面中，本发明涵盖用于在婴儿生命的最初几周中促进需要免疫系统的新生儿的免疫系统成熟的方法，其包括给予婴儿治疗量的嬰儿配方食品，其中该益生菌存在的量等于102至105cfu/g干配方食品。在后一方面中，本发明涵盖这样的方法，其用于调节需要免疫系统的新生儿的免疫系统，以在嬰儿生命的最初几周中促进与在母乳喂养的嬰儿中发现的有益肠道小型生物群相当的有益肠道小型生物群的产生，该方法包括给予嬰儿治疗量的婴儿配方食品，其中包含的益生菌的量等于102至105cfu/g干配方食品。不希望受理论束缚，本发明A^目信以一些方式向新生儿的消化道导入相对低水平的益生菌可能促进婴儿免疫系统的成熟，并且使婴儿的免疫系统准备或预备阻抑任何产生针对有益生物建群的炎症应答的倾向，从而在生命的接下来几周和几个月内有利于有益的消化道小型生物群的发展，同时保持针对病原体建群的有效免疫防御。该效应(虽然仍为免疫调节效应)可能在生理学上与更大量的益生菌对免疫系统的效应不同，该益生菌被常规加入嬰儿配方食品，并且甚至加入用于人食用的其他食品中。本发明甚至可能提供"再训练"年长的儿童和成人的免疫系统的可能性，所述儿童和成人患有与免疫系统不能识别有益的共生细菌例如双歧杆菌属(因此免疫系统以与其攻击病原菌相同的方式攻击这些细菌)相关的病症。发明详述在本说明书中，当阅读和解释说明书、实施例和权利要求时必须考虑下列词语的定义。下列定义出现在1991年5月14日的关于婴儿配方食品和第二阶段配方食品(follow-onformulae)的EuropeanCommissionDirective(欧盟委员会指令)91/321/EEC的第1.2条中，并且为本说明书所采用。"婴儿，，小于12个月的儿童；"婴儿配方食品，，用于在生命的最初6个月内作为嬰儿全部营养的食口口o表达"与在母乳喂养的婴儿中发现的有益肠道小型生物群相当的有益肠道小型生物群"指由可观的双岐杆菌属和乳杆菌属物种群体占主体的肠道小型生物群，从而排除可观的这类物种如拟杆菌属、梭菌属和链球菌属的群体。"益生菌"将益生菌定义为对宿主的健康或康乐具有有益效果的^L生物细胞制品或微生物细胞成分。(SalminenS，OuwehandA.BennoY.等人"Probiotics:howshouldtheybedefined"TrendFoodSci.Technol.1999:10107-10)。表达"婴儿生命的最初几周，，是指生命的最初两个月。益生菌在配方食品中存在的量等于102至105cfu/g干配方食品。该表达包括该细菌是活的、失活的或死亡的或甚至以碎片例如DNA或细胞壁材料存在的可能性。换句话说，配方食品包含的细菌的量是通过该量的细菌的集落形成能力来表示的，就好象所有细菌是活的，无论事实上其是否是活的、失活的或死亡的、碎片的，或任意或所有这些状态的混合物。该益生菌存在的量优选等于102至104cfu/g干配方食品，甚至存在的量更优选等于103至104cfu/g干配方食品。本发明的婴儿配方食品包含不超过2.0g/100千卡，优选1.8至2.0g/100千卡量的蛋白质来源。认为蛋白质的种类对于本发明不是至关重要的，只要达到必需氨基酸含量的最小需要并且确保良好的生长即可，但是优选蛋白质来源的超过50wt。/。是乳清。因此，可使用基于乳清、酪蛋白及其混合物的蛋白质来源，以M于大豆的蛋白质来源。当涉及乳清蛋白时，该蛋白质来源可基于酸性乳清或甜乳清或其混合物，并且可以以任何期望的比例包含a-乳清蛋白和P-乳球蛋白。但是优选该蛋白质来源基于改性的甜乳清。甜乳清是干酪生产的容易获得的副产品，且经常用于制备基于牛奶的婴儿配方食品。然而，甜乳清包含净皮称为酪蛋白糖巨肽(caseinoglyco-macropeptide)(CGMP)的成分，该成分令人不希望地富含苏氨酸并且色氨酸含量很低。从甜乳清除去CGMP以产生具有与人乳的苏氨酸含量更接近的苏氨酸含量的蛋白质。然后该改性的甜乳清可补充甜乳清中含量较低的那些氨基酸(主要是组氨酸和色氨酸)。用于从甜乳清中除去CGMP的方法描述于EP880卯2，基于该改性的甜乳清的婴儿配方食品描述于WO01/11990中。通过^f吏用改性的甜乳清作为蛋白质来源中的主要蛋白质使得能够以1.8至2.0g/100千卡的蛋白质含量提供所有必需氨基酸。在动物和人研究中已显示，除了其减少的蛋白质含量外，此类蛋白质来源与每100千卡具有更大蛋白质含量的标准乳清适应性蛋白质来源相比，具有相当的蛋白质功效比、氮消化率、生物值和净蛋白利用率，并且产生良好的生长。如果将改性的甜乳清用作蛋白质来源，优选以按蛋白质来源的重量计算的0.1至1.5%的量补充游离组氨酸。该蛋白质可以是完整的蛋白质或经水解的蛋白质，或完整的和经水解的蛋白质的混合物。可能希望提供部分水解的蛋白质(水解程度在2和20%之间)，例如为了有发生牛奶变态反应危险的婴儿。如果需要经水解的蛋白质，根据需要进行水解过程，这是本领域已知的。例如，可通过在一个或多个步骤中酶促水解乳清级分来制备乳清蛋白水解物。为了高度水解的蛋白质，可将乳清蛋白进行三重水解，使用Alcalase2.4L(EC940459)，然后使用Neutrase0.5L(可从NovoNordiskFermentAG获得)，然后在55°C下使用胰酶制剂。备选地，对于较少水解的蛋白质，可将乳清进行双重水解，使用NOVOZYMES，然后为胰酶制剂。如果用作起始材料的乳清级分基本上不含乳糖，那么发现该蛋白质在水解过程中受到少得多的赖氨酸阻断。这使得赖氨酸阻断的程度能够从按总赖氨酸的重量计算的大约15%减少至按赖氨酸重量计算的少于大约10%;例如按赖氨酸重量计算为大约7%，这极大地提高了蛋白质来源的营养价值。本发明的嬰儿配方食品包含糖类来源。尽管优选糖类来源是乳糖，但是可以使用在嬰儿配方食品中常规发现的任何糖类来源例如乳糖、蔗糖、麦芽糊精、淀粉及其混合物。优选该糖类来源提供了配方食品总能量的35至65%。本发明的嬰儿配方食品包含脂质来源。脂质来源可以是适合用于婴儿配方食品的任何脂质或脂肪。优选脂肪来源包括棕榈油精、高油酸向日葵油和高油酸红花油。也可加入必需脂肪酸亚油酸和a-亚麻酸，以及少量的包含大量预制的花生四烯酸和二十二碳六烯酸的油，例如鱼油或孩吏生物油。总之，脂肪含量优选贡献配方食品总能量的(例如)30至55%。脂肪来源优选具有大约5:1至大约15:1的n-6对n-3脂肪酸的比，例如大约8:1至大约10:1。嬰儿配方食品也可包含认为在日常饮食中是必需的所有维生素和矿物质，并且以营养显著的量包含之。已确定了某些维生素和矿物质的最小需要量。任选存在于嬰儿配方食品中的矿物质、维生素和其他营养物的实例包括维生素A、维生素B"维生素82、维生素B。维生素Bu、维生素E、维生素K、维生素C、维生素D、叶酸、肌醇、烟酸、生物素、泛酸、胆碱、锔、磷、碘、铁、镁、铜、锌、锰、氯化物、钾、钠、硒、铬、钼、牛磺酸和L-肉碱。通常以盐的形式加入矿物质。特定矿物质和其他维生素的存在和量将4艮据所用婴儿群体而变化。根据需要，婴儿配方食品可包含乳化剂和稳定剂，例如大豆磷脂酰胆碱、甘油单酯和甘油二酯的柠檬酸酯等。如果以液体形式提供配方食品，情况尤其如此。嬰儿配方食品可任选包含具有有益效果的其他物质，例如纤维、乳铁蛋白、核普酸、核苷等。益生菌可选自满足上面给出的益生菌定义的任何菌抹。其可以是例如乳杆菌属、双岐杆菌属、链球菌属、乳球菌属(Z^ctococc附)、明串珠菌属(丄ewcow(Wtoc)、肠杆菌科(J5"wten6crctenVicefle)或肠球菌属(五"teWC0CCMS)。优选乳杆菌属物种的实例是鼠李糖乳杆菌(丄tfCto6fl"7/附f/rfl/miasw51)和富'J干酪乳杆菌(丄"cto6fla7/ws1p"mcas^i')。特另'J优选的菌林是可从芬兰的ValioOy获得的商标为LGG的鼠李糖乳杆菌ATCC53103、鼠李糖乳杆菌CGMCC1.3724和副干酪乳杆菌CNCM1-2116。优选的双岐杆菌属物种的实例是乳双歧杆菌(丑折AMcteW"柳/fl"/s)、短双歧杆菌(5zyf/o6"cteWM附6reve)、长双歧杆菌(5ly^to6flcteWw附/owg"附)和动物双歧杆菌(必折《fo6flCte/7'"WIfl"f7Mflf/&)。特别优选的菌林是由丹麦的ChristianHansen公司销售的商标为BB12的乳双歧杆菌、乳双歧杆菌CNCM1-3446、可从日本的MorinagaMilkIndustryCo.Ltd.获得的商标为BB536的长双歧杆菌ATCCBAA-999和可从Rhodia商购获得的商标为Bb-03的短双歧杆菌的菌抹。优选的链球菌属物种的实例是嗜热链球菌(iS^ptoCOCC附幼e/7W印/^/llS1)和唾液链球菌(5^印toCOCCM515^//VW."S)。特别优选的菌林是由ChristianHansen公司销售的商标为TH4的嗜热链球菌菌林。优选的乳球菌属物种的实例是乳酸乳球菌(/flC泡)。优选明串珠菌属物种的实例是乳明串珠菌(Z^wam^toc/flc船)。优选肠球菌属物种的实例是屎肠球菌(五"teracocc附/aed"附)。优选存在至少两种不同的益生菌，条件是符合105cfu/g干配方食品的上限。一个特别优选的组合是乳杆菌属例如鼠李糖乳杆菌或副干酪乳杆菌物种和双岐杆菌属例如乳双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌或动物双歧杆菌物种。这类菌林组合的实例是长双歧杆菌ATCCBAA-999和鼠李糖乳杆菌ATCC53103、副干酪乳杆菌CNCM1-2116或鼠李糖乳杆菌CGMCC1.3724。另一个特别优选的组合是两种双岐杆菌属菌林。该组合的一个实例是长双歧杆茵ATCCBAA-999和乳双歧杆菌CNCM1-3446。如上面所指出的，使用的一种或多种益生菌的量不应当超过105cfu/g干产品且优选为103和104cfu/g之间。当加入至配方食品或混合物中时，该菌林可以是活的或失活的或死亡的或碎片的。备选地，可使用任意或所有这些不同状态的细菌混合物。可以以任何合适的方式制备婴儿配方食品。例如，可通过将蛋白质来源、糖类来源和脂肪来源以适当的比例混合在一起来制备嬰儿配方食品。如果使用，可将乳化剂包含在该混合物中。可在此时加入维生素和矿物质，但通常随后加入以避免热降解。可在混合之前将任何亲脂性维生素、乳化剂等溶解入脂肪来源。然后可混入水(优选已进行反渗透的水)，从而形成液体混合物。然后可热处理液体混合物以减少细菌的量(load)。例如，可将该液体混合物快速加热至大约80'C至大约ll(TC范围内的温度，进行大约5秒至大约5分钟。这可通过蒸汽注射或通过热交换器例如盘状热交换器(plateheatexchanger)进行。然后可通过例如瞬时冷却将液体混合物冷却至大约60'C至大约85。C。然后可在例如两个阶段(在第一阶段中大约7MPa至大约40MPa以及在第二阶段中大约2MPa至大约14MPa)均化该液体混合物。然后进一步冷却均化的混合物以加入任何热敏成分例如维生素和矿物质。此时方便地标准化均化混合物的pH和固体含量。将均化的混合物转移至合适的干燥装置例如喷雾干燥器或冷冻干燥器并，将其转变为粉末。粉末应当具有低于大约5wt。/。的含湿量。选择的一种或多种益生菌可按照任何合适的方法进行培养，并通过例如冷冻干燥或喷雾干燥制备以用于加入至婴儿配方食品。备选地，可从专业供应商例如ChristianHansen和Morinaga购买已经以适合用于力口入至食品例如嬰儿配方食品的形式制备的细菌制品。实施例1下面提供本发明的婴儿配方食品组成的实例。该组成只是以举例说明的方式给出。<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>实施例2下面的动物研究描述了评价施用本发明的益生菌对新生小鼠幼崽的免疫系统成熟的作用的研究。将30只怀孕的无菌小鼠随机分成5组。将幼患分配至5组中的一组(11=每组24至28只幼患)。来自同一母亲的所有幼崽进入相同的组。其中4个组如下接受单独的或与来自正常鼠类小型生物群(肠细菌)的细菌组合的益生菌组1:对照(安慰剂)组2:益生菌(l()4cfu)组3:益生菌+鼠类菌群(104cfu益生菌和103cfu肠细菌)组4:益生菌(l()Scfu)组5:益生菌+鼠类菌群(108cfu益生菌和103cfu肠细菌)本实验装置用于检测下列益生菌鼠李糖乳杆菌ATCC53103、长双歧杆菌ATCCBAA-999、副千酪乳杆菌CNCM1-2116，以及鼠李糖乳杆菌ATCC53103、长双歧杆菌ATCCBAA-999、副干酪乳杆菌CNCMI-2116与长双歧杆菌ATCCBAA-999的组合。母亲和幼崽接受典型的无菌饮食。将其置于隔离器中直至出生后10天，并使其自由进食和饮水。组2至5中的幼崽接受浓缩在一滴PBS(相当于大约10nl)中的细菌，同时对照组中的幼崽接受单独的PBS。在出生后7天直至断奶，基于日常基础，根据组给幼崽口服施用具有和不具有细菌的PBS。在出生后10天将幼崽和其母亲转移至常规环境中。将各组中的幼崽分成4个亚组。在出生后7天处死来自每组的一个亚组的幼患以确定基线上的不同标记。分别在第10和14日龄时处死来自每组的另外两个亚组的幼崽。在断奶时(21日龄)用系统疫苗免疫(皮下施用在氢氧化铝中的破伤风类毒素疫苗0.125Lf/小鼠)每组中剩余亚组中的幼崽。三周内每周跟踪对疫苗的免疫应答，然后处死剩余的幼崽。在21日龄、28日龄和35日龄时从所有幼崽釆集血液(用于检测IgG抗体)和排泄物(用于评估小型生物群和检测IgA抗体)。在无菌条件下采集死后的血液和组织样品(脾、肠、肝、肠系膜淋巴结和乳腺)。测量下列输出变量通过肠组织的组织学和免疫组织化学评估，以及免疫细胞的比例和表型以及朝夂泄物IgA的亚型和水平的确定来评估免疫的成熟；通过使用ELISA技术确定血液中基于特异性IgG和细胞因子水平的对接种疫苗的免疫应答；内源小型生物群的分析，排泄物中的细菌的计数和确定。权利要求1.婴儿配方食品，其包含不超过2.0g/100千卡量的蛋白质来源、脂质来源、糖类来源和益生菌，其中所述益生菌存在的量等于102至105cfu/g干配方食品。2.根据权利要求l的嬰儿配方食品，其中所述蛋白质来源存在的量等于1.8至2.0g/100千卡。3.根据权利要求1或2的婴儿配方食品，其中蛋白质来源的超过50wt。/。为乳清蛋白。4.根据前述任一权利要求的婴儿配方食品，其中所述益生菌是乳杆菌属菌林、双岐杆菌属菌林、链球菌属菌林、乳球菌属菌林、明串珠菌属菌林、肠杆菌科菌林或肠球菌属菌抹。5.根据权利要求4的婴儿配方食品，其中所述乳杆菌属是鼠李糖乳杆菌物种或副干酪乳杆菌物种。6.根据权利要求5的婴儿配方食品，其中所述乳杆菌属菌林是鼠李糖乳杆菌ATCC53103、副干酪乳杆菌CNCM1-2116或鼠李糖乳杆菌CGMCC1.3724。7.根据权利要求4的嬰儿配方食品，其中所述双歧杆菌属菌林是乳双歧杆菌物种、长双歧杆菌物种、短双歧杆菌物种或动物双歧杆菌物种。8.根据权利要求7的婴儿配方食品，其中所述双歧杆菌属菌抹是长双歧杆菌ATCCBAA-999或乳双歧杆菌CNCM1-3446。9.根据前述任一权利要求的婴儿配方食品，其包含至少两种不同的益生菌。10.根据权利要求9的婴儿配方食品，其包含乳杆菌属菌抹和双歧杆菌属菌林。11.根据权利要求10的婴儿配方食品，其中所述乳杆菌属菌抹是鼠李糖乳杆菌ATCC53103或副干酪乳杆菌CNCM1-2116，并且所述双歧杆菌属菌林是长双歧杆菌ATCCBAA-999或乳双歧杆菌CNCM1-3446。12.才艮据前述任一权利要求的嬰儿配方食品，其中所述一种或多种菌林存在的总量等于103至104cfu/g干配方食品。13.益生菌在制备婴儿配方食品中的用途，其用于调节新生儿的免疫系统，以在所述嬰儿生命的最初几周中促进与在母乳喂养的婴儿中发现的有益肠道小型生物群相当的有益肠道小型生物群的发展，其中所述益生菌在配方食品中存在的量等于102至105cfu/g干配方食品。14.益生菌在制备嬰儿配方食品中的用途，其用于在所述嬰儿生命的最初几周中促进新生儿免疫系统的成熟，其中所述益生菌在配方食品中存在的量等于102至105cfu/g干配方食品。全文摘要本发明涉及婴儿配方食品，其包括不超过2.0g/100千卡量的蛋白质来源、脂质来源、糖类来源和益生菌，其中该益生菌存在的量等于10²至10⁵cfu/g干配方食品。本发明还涵盖此类婴儿配方食品的用途，即其用于调节新生儿的免疫系统，以在该婴儿生命的最初几周内促进与在母乳喂养的婴儿中发现的有益肠道小型生物群相当的有益肠道小型生物群的发展，并且在生命的最初几周内促进新生儿免疫系统的成熟。文档编号A23L1/29GK101193559SQ200680020793公开日2008年6月4日申请日期2006年4月10日优先权日2005年4月13日发明者A·多内图格斯,E·席夫林,F·哈施克,K-J·胡贝尔-哈格,M-C·菲绍申请人:雀巢技术公司