专利名称：无氰化钾溶血剂的生产方法
技术领域：
本发明涉及一种无氰化钾溶血剂的生产方法，特别涉及一种不含氰化钾的国产TEK系列三分群血细胞分析仪使用的无毒溶血剂的生产方法。
背景技术：
三分群血细胞分析仪是目前我国普及使用的血常规检测仪器，长期以来这类仪器和试剂在我国均为进口，因试剂价格高昂和供货不及时等原因给医院和患者带来沉重的经济负担和不便。在我国普及使用的三份群血细胞分析仪中，各种品牌不少于20种，由于各种仪器的稀释比例和测定方法的差异，各种仪器的试剂配方各不相同，不同型号和生产厂家的血细胞分析仪必须使用专用的配套试剂，这是血细胞分析仪试剂开发的一个重要难点。
溶血剂是三分群血细胞分析仪试剂中的最主要试剂，它第一个作用是在稀释液的配合作用下，使红细胞膜在极短的时间内完全溶解，使各种白细胞在规定时间内通过改变白细胞的细胞膜结构，适当的释放各类白细胞内容物，控制各类白细胞体积大小维持在一定范围。第二个作用是血红蛋白含量的测定，是当溶血剂使红细胞破碎释放出血红蛋白(Hb)后，血红蛋白与溶血剂中的氰化钾结合形成氰化血红蛋白，在特定波长(一般在530～550nm)下比色，吸光度的变化与液体中Hb含量成比例，仪器便可显示Hb浓度。
因此评价溶血剂质量的好坏，不仅要考虑在一定作用时间内分类计数的准确性，还要考虑血红蛋白测定的准确性。
现有的TEK血细胞分析仪溶血剂的主要缺点是1、产品成本高；2、使用剧毒氰化钾测定血红蛋白；3、加入防腐剂影响分类测定效果、增加生产成本。
发明内容
本发明的目的是提供一种无氰化钾溶血剂的生产方法，它工艺配方合理、原料易得，生产成本低廉，生产的溶血剂无毒、不含防腐剂。
本发明是这样来实现的，生产的原料主要是十二烷基季胺盐和乙二胺四乙酸，其工艺步骤为1、纯净水制备纯净水采用自来水制备，步骤包括(1)电渗析除盐；(2)阴、阳离子交换柱除盐；(3)0.22微米超虑过滤除微粒，使纯净水的电导率小于5μs/cm；2、缓冲液配制配制1/30M，PH＝7.0的Na2HPO4-KH2PO4缓冲液100升，充分搅混匀，0.22微米超滤过滤；3、乙二胺四乙酸溶解将25～200克乙二胺四乙酸用10～20升Na2HPO4-KH2PO4缓冲液加热溶解，充分搅混匀，冷却备用；4、十二烷基季胺盐溶解将500～4000克十二烷基季胺盐用10～20升Na2HPO4-KH2PO4缓冲液加热溶解，充分搅拌匀，冷却备用；5、定容将溶解备用的乙二胺四乙酸溶液和十二烷基季胺盐溶液与剩余的磷酸盐缓冲液混和，用电导率小于5μs/cm的纯净水定容到100升，充分搅混匀；6、过滤灌装将定容混匀好的溶血剂，用0.22微米超虑过滤，用塑料瓶灌装，密封，包装；7、包装材料处理(1)5L软包装或1L塑料瓶用5～30％洗洁精浸泡6～12小时；(2)电导率小于5μs/cm的纯净水荡洗3～4次，要求没有泡沫为止；(3)荡洗完毕，将水清空，每个包装里加入50～1000μl的甲醛，密封待用；8、产品生产过程要求是在30万级的洁净厂房或相对封闭的洁净生产环境中进行。所有生产设备和管道(包括纯净水阳离子交换柱之后的设备和管道)每天配制之后必须用5~30％NaOH溶液浸泡，配制之前放出NaOH溶液，用电导率小于5μs/cm的纯净水冲洗3～4遍，测定洗水PH值接近中性为止。最后的过滤灌装必须尽可能的在密闭条件下进行，灌装完毕立刻密封包装。
本产品为无毒环保产品，其淋巴和中性粒细胞检测结果与显微镜检测结果可达极为相关(r＞0.96)，t检验，P＞0.05，无显著性差异。
血红蛋白测定采用无毒无害的乙二胺四乙酸代替剧毒的氰化钾，该试剂在血红蛋白含量0～300g/l浓度范围，线性R2＝0.9951，用20份低、中、高值血样检测结果与经典氰化高铁法检测结果，相关性r＝0.9995，t检验，P＞0.05，无显著性差异。
本发明的积极效果是1、利用十二烷基季胺盐作为溶血剂的主要成分，十二烷基季胺盐对细胞的作用强度合适，可以在很宽的浓度范围进行选择配制，且在这些浓度范围中对不同细胞的作用强度有明显的区分，可以根据细胞计数和分类的要求选择合适的作用浓度；2、通过对乙二胺四乙酸测定血红蛋白的吸收峰的扫描，可知其在537nm处有明显的吸收峰。通过对乙二胺四乙酸测定血红蛋白的线性测定，可知乙二胺四乙酸测定血红蛋白，在0～300g/l的血红蛋白的浓度范围内检测准确性可以达到临床要求，可以替代氰化钾用于血红蛋白测定。产品无毒环保，更加受到消费者的青睐；3、本产品运用GMP质量管理原则，结合实际经验，制定了科学合理的生产工艺，产品不添加防腐剂，保质期可达到2年；4、本方法的生产工艺简单、容易实现工业化。
具体实施例方式
实施例一、以国产TEK-II三分群血细胞分析仪溶血剂为例，其工艺步骤为1、纯净水制备纯净水采用自来水制备，步骤包括(1)电渗析除盐；(2)阴、阳离子交换柱除盐；(3)0.22微米超虑过滤除微粒，使纯净水的电导率小于5μs/cm；2、缓冲液配制配制1/30M，PH＝7.0的Na2HPO4-KH2PO4缓冲液100升，充分搅混匀，0.22微米超滤过滤；
3、乙二胺四乙酸溶解将100克乙二胺四乙酸用10～20升Na2HPO4-KH2PO4缓冲液加热溶解，充分搅混匀，冷却备用；4、十二烷基季胺盐溶解将2000克十二烷基季胺盐用10～20升Na2HPO4-KH2PO4缓冲液加热溶解，充分搅拌匀，冷却备用；5、定容配制将溶解备用的乙二胺四乙酸溶液和十二烷基季胺盐溶液用剩余的磷酸盐缓冲液混和，用电导率小于5μs/cm的纯净水定容到100升，充分搅混匀；6、过滤灌装将定容混匀好的溶血剂，用0.22微米超虑过滤，用5L软包装或1L塑料瓶灌装，密封，包装；7、包装材料处理(1)5L软包装或1L塑料瓶用10％洗洁精浸泡6～12小时；(2)电导率小于5μs/cm的纯净水荡洗3～4次，要求没有泡沫为止；(3)荡洗完毕，将水清空，每个包装里加入100～300μl的甲醛，密封待用；8、产品生产过程要求是在30万级的洁净厂房或相对封闭的洁净生产环境中生产。所有生产设备和管道(包括纯净水阳离子交换柱之后的设备和管道)每天配制之后必须用5~30％NaOH溶液浸泡，配制之前放出NaOH溶液，用电导率小于5μs/cm的纯净水冲洗3～4遍，测定洗水PH值接近中性为止。最后的过滤灌装必须尽可能的在密闭条件进行，灌装完毕立刻密封包装。
权利要求
1.一种无氰化钾溶血剂的生产方法，生产的原料主要是十二烷基季胺盐和乙二胺四乙酸，其特征是工艺步骤为1)纯净水制备纯净水采用自来水制备，步骤包括(1)电渗析除盐；(2)阴、阳离子交换柱除盐；(3)0.22微米超虑过滤除微粒，使纯净水的电导率小于5μs/cm；2)缓冲液配制配制1/30M，PH＝7.0的Na2HPO4-KH2PO4缓冲液100升，充分搅混匀，0.22微米超滤过滤；3)乙二胺四乙酸溶解将25～200克乙二胺四乙酸用10～20升Na2HPO4-KH2PO4缓冲液加热溶解，充分搅混匀，冷却备用；4)十二烷基季胺盐溶解将500～4000克十二烷基季胺盐用10～20升Na2HPO4-KH2PO4缓冲液加热溶解，充分搅拌匀，冷却备用；5)定容将溶解备用的乙二胺四乙酸溶液和十二烷基季胺盐溶液与剩余的磷酸盐缓冲液混和，用电导率小于5μs/cm的纯净水定容到100升，充分搅混匀；6)过滤灌装将定容混匀好的溶血剂，用0.22微米超虑过滤，用塑料瓶灌装，密封，包装。
全文摘要
一种不含氰化钾的国产TEK系列三分群血细胞分析仪使用的溶血剂的生产方法，采用十二烷基季胺盐为溶血剂主要作用试剂，使用无毒物质替代剧毒氰化钾测定血红蛋白，其工艺步骤为(1)纯净水制备；(2)缓冲液配制；(3)乙二胺四乙酸溶解；(4)十二烷基季胺盐溶解；(5)定容配制；(6)过滤灌装。本产品工艺配方合理，原料易得，易于加工、成本低廉，不添加防腐剂。
文档编号C12Q1/02GK101021524SQ20071005157
公开日2007年8月22日 申请日期2007年2月12日 优先权日2007年2月12日
发明者罗舜菁, 刘成梅, 邹常春, 涂宗财 申请人:南昌大学