专利名称：肝素钠生产新工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种肝素钠的生产工艺，尤其是一种利用生物酶解低温方法从 猪小肠粘膜中提取肝素钠的生产新工艺。
背景技术：
肝素钠是由生物材料中提取出来的天然多糖物质，在临床使用中受到广大患 者和医生的青睐，广泛用于防治各种心脑血管疾病， 一直是最有效的抗凝血药物， 特别是对动静脉血栓、血塞具有独特疗效。肝素钠广泛分布于哺乳动物的肠粘膜、 肺、肝中，特别是猪小肠粘膜中含量最高。目前国内生产肝素钠的方法，主要是 盐解法和酸解法，这二种方法都是采用猪小肠粘膜为原料，在碱性条件下通过盐 解酶解，除去部分蛋白质后，通过三甲胺委铵性强碱性阳离子交换树脂吸附及洗 脱，在洗脱液中加以乙醇沉淀即得肝素钠初级原料出售，其缺点是生产周期长为
48h，反应温度高为95 100'C，能源消耗大,水解不完全，纯度低，收率低，
效价低，产生大量的废肠渣和废水，污染环境。
发明内容
本发明的目的在于为克服现有技术的不足而提供一种利用生物酶解低温提 取肝素钠的新工艺，其生产周期短、反应温度低、纯度高、收率高、效价低、无 污染物排出。
本发明的目的由以下技术方案来实现，其生产工艺包括以下步骤
①酶解
将新鲜猪肠粘膜吸入反应锅，量取体积，用Na0H调PH至8.5 9.5，温度在45 50'C，按猪肠粘膜的体积加入3 5%的NaCL、0. 03 0. 036%的鲜胰浆、0. 03~ 0.036%的蛋白酶，搅拌1 2小时，保温2小时，升温至70 80'C，停止加温， 用滤布过滤，滤液吸入吸附罐；
② 树脂交换吸附
将滤液降温到50'C以下，量取体积，调ra至8. 5 9. 0，按每1000升滤液 加入8升肝素钠专用树脂，搅拌吸附8小时以上，收集肝素钠专用树脂，弃去废 液；测定排放废液中肝素钠的含量，要求在1.2以下；
③ 树脂洗涤
先用自来水及温水洗涤，然后用4 4.2度的盐水溶液洗涤肝素钠专用树脂 30分钟，去除树脂表面杂质；
④ 肝素洗脱
第一次洗脱，用NaCL溶液与肝素钠专用树脂体积按l: l的比例混合，再加 入0. 196的生物专用缓冲剂，搅拌均匀，洗脱3小时，洗脱液中NaCL的浓度为18 20度；第二次洗脱，调NaCL溶液至18度以上，然后按1: 1的比例加入肝素钠 专用树脂，搅拌均匀，洗脱液中NaCL的浓度为16 18度，将二次洗脱液合并；
(D酒精沉淀；
保证洗脱液的KI值在6.0 6.5范围内，缓慢加入酒精，搅拌均匀，酒精浓 度为35 40度，沉淀8小时以上，弃去上清液，收集沉淀物，在70 80'C的温 度下干燥IO小时以上；
复沉
将干燥物用纯水溶解，水量为干燥物的10倍，用NaOH调ra至9.0 9.5， 吸入反应罐，用框式压滤机过滤除去杂质，再用NaOH溶液调HI至6. 0 6. 5， 再缓慢加入酒精，搅拌均匀，使酒精浓度在42 46。范围内，沉淀8小时以上；
⑦ 脱水干燥
收集复沉物，离心脱水，装入搪瓷盘中，在70 80'C温度下干燥20小时以 上，即得成品肝素钠；
⑧ 粉碎、混合和包装
收集成品肝素钠进行粉碎，混合4小时，送样检测合格后，包装即可出厂。 所述的蛋白酶是胰蛋白酶，使肠粘膜中肝素充分完全裂解释放在提取溶液 中；所述的肝素钠专用树脂为强碱性阴离子交换树脂，强化了其承载能力，微孔数目及活性，提高了肝素钠的收率、纯度、光吸收能力，降低了反应时间；所述 生物专用缓冲液，由胶亚硫酸食品改良剂和水组成，其配比为2: 1，保证在反 应中，小分子蛋白质尽量不与有效的粘多糖反应、结合，而单一的大分子量蛋白 质与从粘膜中分离出来的有效粘多糖分子相结合，从而形成纯度髙、效价合理的 肝素；
由于本发明采用生物酶粉替代盐解法和酶解法中的鲜胰浆，对酶解的反应时 间、温度和PH值等工艺参数进行了优化，解决了现有技术加工时间长为48小时， 温度高为95 100'C，提取肝素收率低、工艺操作复杂、废渣、废水排放超标等 问题，工艺流程科学合理，酶解反应完全彻底，反应时间縮短为30h，生产能耗 低，反应温度低为70 80'C，肝素提取收率达90%以上，肝素单位产量高，每亿 单位肝素仅需猪小肠1500 1700副，生产成本低，操作简单方便，自动化控制 程度高，增加经济效益30%以上，工艺成熟稳定，无废肠渣和超标废水排放，符 合国家"节能降耗减排增收"的发展方向。
具体实施例方式
实施例1
① 酶解
将新鲜猪肠粘膜吸入反应锅，量取体积，用NaOH调ra至8.5 9.5,温度在 45 50°C,按猪肠粘膜的体积加入3 5%的NaCL、0. 03 0. 036%的鲜胰浆、0. 03 0.036%的胰蛋白酶，搅拌1 2小时，保温2小时，开温至70 80'C,停止加温， 用滤布过滤，滤液吸入吸附罐；
② 树脂交换吸附
将滤液降温到50'C以下，量取体积，调HI至8.5 9.0，按每1000升滤液 加入8升强碱性阴离子交换树脂，搅拌吸附8小时以上，收集肝素钠专用树脂， 弃去废液；测定排放废液中肝素钠的含量，要求在1.2以下；
③ 树脂洗涤
先用自来水及温水洗涤，然后用4 4. 2度的盐水溶液洗涤肝素钠专用树脂 30分钟，去除树脂表面杂质；(D肝素洗脱
生物专用缓冲剂第一次洗脱用NaCL溶液与肝素钠专用树脂体积按1: 1的比 例混合，再加入0. 1%的生物专用缓冲剂，生物专用缓冲剂由胶亚硫酸食品改良 剂和水组成，配比为2: 1，然后搅拌均匀，洗脱3小时，洗脱液中NaCL的浓度 为18 20度；第二次洗脱调NaCL溶液至18度以上，然后按1: 1的比例加入肝 素钠专用树脂，搅拌均匀，洗脱液中NaCL的浓度为1S 18度，将二次洗脱液合 并；
⑤酒精沉淀；
保证洗脱液的PH值在6.0 6.5范围内，缓慢加入酒精，搅拌均匀，酒精浓 度为35 40度，沉淀8小时以上，弃去上清液，收集沉淀物，在70 80。C的温 度下干燥IO小时以上；
(D复沉
将干燥物用纯水溶解，水量为干燥物的10倍，用NaOH调ra至9.0 9.5， 吸入反应罐，用框式压滤机过滤除去杂质，再用NaOH溶液调PH至6. 0 6. 5， 再缓慢加入酒精，搅拌均匀，使酒精浓度在42 46。范围内，沉淀8小时以上;
⑦ 收集复沉物，离心脱水，装入搪瓷盘中，在70 80'C温度下干燥20小时 以上，即得成品肝素钠；
⑧ 粉碎、混合和包装
收集成品肝素钠进行粉碎，混合4小时，送样检测合格后，包装即可出厂。
权利要求
1、一种肝素钠生产新工艺，其特征在于包括以下步骤①酶解将新鲜猪肠粘膜吸入反应锅，量取体积，用NaOH调PH至8.5～9.5，温度在45～50℃，按猪肠粘膜的体积加入3～5％的NaCL、0.03～0.036％的鲜胰浆、0.03～0.036％的蛋白酶，搅拌1～2小时，保温2小时，升温至70～80℃，停止加温，用滤布过滤，滤液吸入吸附罐；②树脂交换吸附将滤液降温到50℃以下，量取体积，调PH至8.5～9.0，按每1000升滤液加入8升肝素钠专用树脂，搅拌吸附8小时以上，收集肝素钠专用树脂，弃去废液；测定排放废液中肝素钠的含量，要求在1.2以下；③树脂洗涤先用自来水及温水洗涤，然后用4～4.2度的盐水溶液洗涤肝素钠专用树脂30分钟，去除树脂表面杂质；④肝素洗脱第一次洗脱，用NaCL溶液与肝素钠专用树脂体积按1∶1的比例混合，再加入0.1％的生物专用缓冲剂，搅拌均匀，洗脱3小时，洗脱液中NaCL的浓度为18～20度；第二次洗脱，调NaCL溶液至18度以上，然后按1∶1的比例加入肝素钠专用树脂，搅拌均匀，洗脱液中NaCL的浓度为16～18度，将二次洗脱液合并；⑤酒精沉淀保证洗脱液的PH值在6.0～6.5范围内，缓慢加入酒精，搅拌均匀，酒精浓度为35～40度，沉淀8小时以上，弃去上清液，收集沉淀物，在70～80℃的温度下干燥10小时以上；⑥复沉将干燥物用纯水溶解，水量为干燥物的10倍，用NaOH调PH至9.0～9.5，吸入反应罐，用框式压滤机过滤除去杂质，再用NaOH溶液调PH至6.0～6.5，再缓慢加入酒精，搅拌均匀，使酒精浓度在42～46°范围内，沉淀8小时以上；⑦脱水干燥收集复沉物，离心脱水，装入搪瓷盘中，在70～80℃温度下干燥20小时以上，即得成品肝素钠；⑧粉碎、混合和包装收集成品肝素钠进行粉碎，混合4小时，送样检测合格后，包装即可出厂。
2、 根据权利要求1所述的肝素钠生产新工艺，其特征在于所述的蛋白酶 是胰蛋白酶。
3、 根据权利要求1所述的肝素钠生产新工艺，其特征在于；所述的肝素钠 专用树脂为强碱性阴离子交换树脂。
4、 根据权利要求1所述的肝素钠生产新工艺，其特征在于所述生物专用 缓冲液由胶亚硫酸食品改良剂和水组成，其配比为2: 1。
全文摘要
本发明为一种肝素钠生产新工艺，其包括以下步骤酶解、树胶交换吸附、树脂洗涤、肝素洗脱、酒精沉淀、复沉、脱水干燥、粉碎、混合和包装。本发明工艺流程成熟、操作方便，无废肠渣和超标废水排出，酶解反应完全彻底，反应时间缩短为30小时，生产能耗低，反应温度低为70-80℃，肝素提取率达90％以上，肝素单位产量高，每亿单位肝素仅需猪小肠1700副，生产成本低，每亿单位增加经济效益30％以上，无污肠渣和超标废水排放，适合于大规模生产。
文档编号C12P19/00GK101649336SQ200810045880
公开日2010年2月17日 申请日期2008年8月25日 优先权日2008年8月25日
发明者刘泰山, 胡小翠, 静 蔡, 蔡天贵, 蔡成良, 蔡承儒 申请人:射洪县天贵畜产品加工厂