专利名称：一种肝素钠的生产新工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种肝素钠的生产新工艺。
背景技术：
肝素钠是一种粘多糖硫酸酯雷抗凝血药，主要用于治疗急性心梗塞，能够减轻不稳定型心绞痛、抗血栓形成及降血脂、降胆固醇的作用。1916年人们在肝脏中首次发现了肝素，接着，又发现该物质广泛的存在于动物肝、肺和小肠粘膜中。由于我国猪资源丰富，小肠粘膜价格低廉，因此，人们常以猪小肠为原料生产肝素钠。目前，传统的肝素钠提取工艺包括原料处理、酶解提取、离子交换吸附、洗涤、洗 脱、沉淀蛋白、精制，该工艺存在水解不完全、产品纯度低和生产效率低等缺点。
发明内容
本发明的目的是提供一种肝素钠的生产新工艺。为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为一种肝素钠的生产新工艺，其特征在于在于包括以下步骤
O酶解取新鲜猪小肠粘膜用清水洗净，由绞肉机绞成肉糜状，向其中加水，水与猪小肠粘膜的质量比为8-10:1，再加入O. 2-0. 3wt%的胰蛋白酶，加碱调节pH值至8. 5-9之间，搅拌反应30-60min后，再加入3_5%的氯化钠溶液，置于微波炉中，微波功率为300-400W，提取时间为12_15min，结束后，过滤，得到酶解液；
2)絮凝处理在上述酶解液中加入3-5wt%的絮凝剂，以100-150r/min的速度搅拌混合液15-30min，室温静置5_6h后，送入离心机离心过滤，离心速度为2000-3000r/min，时间为IOmin,除去固体杂质后得到含有肝素钠的上清液；
3)树脂吸附和洗脱采用强碱性阴离子交换树脂D208吸附上清液，树脂的用量占母液的质量比为5%，在35-40°C下，以100r/min的搅拌速度，吸附4_5小时，滤出树脂，以3倍体积的6-8%的氯化钠溶液洗脱，洗脱时间为2-3h，第二次用2倍体积的3-4%的氯化钠洗脱3_4h，收集两次洗脱液合并；
4)醇沉将上述洗脱液，加入2倍体积的85-90%的乙醇，沉淀处理18-24h，收集沉淀物，干燥后得到肝素钠粗品；
5)精制过程将洗脱液滤液加入5-8wt%的大孔吸附树脂，在常温下，搅拌混合液，脱色处理3-4h后，滤出树脂，收集澄清的滤液，以氢氧化钠调节滤液pH值至10-11之间，再加入1-2%的过氧化氢，处理12h后，加入I. 2倍体积的95%的乙醇静置沉淀，抽滤得沉淀物，最后用无水乙醇清洗2-3次，干燥后得到肝素钠精品。优选地，步骤2所述絮凝剂为壳聚糖或脱乙酰壳聚糖衍生物。本发明的优点在于在酶解过程采用微波法促进猪小肠内肝素的释放至酶解液中，并对酶解液进行絮凝处理，除去大部分的杂质，再经树脂吸附和洗脱、醇沉干燥得粗品，然后将大孔吸附树脂和双氧水结合起来对产品脱色精制，通过这些工序制得的肝素钠效价大于150U/mg，该工艺简单，产品纯度高。
具体实施例方式为了使公众能充分了解本发明的技术实质和有益效果，申请人将在下面对本发明的具体实施方式
详细描述，但申请人对实施例的描述不是对技术方案的限制，任何依据本发明构思作形式而非实质的变化都应当视为本发明的保护范围。实施例I
O酶解取新鲜猪小肠粘膜用清水洗净，由绞肉机绞成肉糜状，向其中加水，水与猪小肠粘膜的质量比为8:1，再加入O. 2wt%的胰蛋白酶，加碱调节pH值至8. 5之间，搅拌反应30min后，再加入3%的氯化钠溶液，置于微波炉中，微波功率为300W，提取时间为12min，结束后，过滤，得到酶解液；· 2)絮凝处理在上述酶解液中加入5wt%的壳聚糖絮凝剂，以150r/min的速度搅拌混合液15-30min，室温静置5-6h后，送入离心机离心过滤，离心速度为2000r/min，时间为lOmin，除去固体杂质后得到含有肝素钠的上清液；
3)树脂吸附和洗脱采用强碱性阴离子交换树脂D208吸附上清液，树脂的用量占母液的质量比为5%，在35-40°C下，以100r/min的搅拌速度，吸附4小时，滤出树脂，以3倍体积的6%的氯化钠溶液洗脱，洗脱时间为2-3h，第二次用2倍体积的3%的氯化钠洗脱3-4h，收集两次洗脱液合并；
4)醇沉将上述洗脱液，加入2倍体积的85%的乙醇，沉淀处理18h，收集沉淀物，干燥后得到肝素钠粗品；
5)精制过程将洗脱液滤液加入5wt%的大孔吸附树脂，在常温下，搅拌混合液，脱色处理3-4h后，滤出树脂，收集澄清的滤液，以氢氧化钠调节滤液pH值至10之间，再加入1-2%的过氧化氢，处理12h后，加入I. 2倍体积的95%的乙醇静置沉淀，抽滤得沉淀物，最后用无水乙醇清洗3次，干燥后得到肝素钠精品，效价为158 U/mg。实施例2
O酶解取新鲜猪小肠粘膜用清水洗净，由绞肉机绞成肉糜状，向其中加水，水与猪小肠粘膜的质量比为10:1，再加入O. 3wt%的胰蛋白酶，加碱调节pH值至9之间，搅拌反应60min后，再加入5%的氯化钠溶液，置于微波炉中，微波功率为400W，提取时间为15min，结束后，过滤，得到酶解液；
2)絮凝处理在上述酶解液中加入5wt%的脱乙酰壳聚糖衍生物絮凝剂，以150r/min的速度搅拌混合液15-30min，室温静置5_6h后，送入离心机离心过滤，离心速度为3000r/min，时间为lOmin，除去固体杂质后得到含有肝素钠的上清液；
3)树脂吸附和洗脱采用强碱性阴离子交换树脂D208吸附上清液，树脂的用量占母液的质量比为5%，在35-40°C下，以100r/min的搅拌速度，吸附4_5小时，滤出树脂，以3倍体积的8%的氯化钠溶液洗脱，洗脱时间为2-3h，第二次用2倍体积的4%的氯化钠洗脱3-4h，收集两次洗脱液合并；
4)醇沉将上述洗脱液，加入2倍体积的85-90%的乙醇，沉淀处理18-24h，收集沉淀物，干燥后得到肝素钠粗品；
5)精制过程将洗脱液滤液加入8wt%的大孔吸附树脂，在常温下，搅拌混合液，脱色处理4h后，滤出树脂，收集澄清的滤液，以氢氧化钠调节滤液pH值至11之间，再加入1-2%的 过氧化氢，处理12h后，加入I. 2倍体积的95%的乙醇静置沉淀，抽滤得沉淀物，最后用无水 乙醇清洗3次，干燥后得到肝素钠精品，效价为164U/mg。
权利要求
1.一种肝素钠的生产新工艺，其特征在于在于包括以下步骤 1)酶解取新鲜猪小肠粘膜用清水洗净，由绞肉机绞成肉糜状，向其中加水，水与猪小肠粘膜的质量比为8-10:1，再加入O. 2-0. 3wt%的胰蛋白酶，加碱调节pH值至8. 5-9之间，搅拌反应30-60min后，再加入3_5%的氯化钠溶液，置于微波炉中，微波功率为300-400W，提取时间为12_15min，结束后，过滤，得到酶解液； 2)絮凝处理在上述酶解液中加入3-5wt%的絮凝剂，以100-150r/min的速度搅拌混合液15-30min，室温静置5_6h后，送入离心机离心过滤，离心速度为2000-3000r/min，时间为IOmin,除去固体杂质后得到含有肝素钠的上清液； 3)树脂吸附和洗脱采用强碱性阴离子交换树脂D208吸附上清液，树脂的用量占母液的质量比为5%，在35-40°C下，以100r/min的搅拌速度，吸附4_5小时，滤出树脂，以3倍体积的6-8%的氯化钠溶液洗脱，洗脱时间为2-3h，第二次用2倍体积的3-4%的氯化钠洗脱3_4h，收集两次洗脱液合并； 4)醇沉将上述洗脱液，加入2倍体积的85-90%的乙醇，沉淀处理18-24h，收集沉淀物，干燥后得到肝素钠粗品； 5)精制过程将洗脱液滤液加入5-8wt%的大孔吸附树脂，在常温下，搅拌混合液，脱色处理3-4h后，滤出树脂，收集澄清的滤液，以氢氧化钠调节滤液pH值至10-11之间，再加入1-2%的过氧化氢，处理12h后，加入I. 2倍体积的95%的乙醇静置沉淀，抽滤得沉淀物，最后用无水乙醇清洗2-3次，干燥后得到肝素钠精品。
2.根据权利要求I所述的一种肝素钠酶解液的絮凝处理方法，其特征在于步骤2所述絮凝剂为壳聚糖或脱乙酰壳聚糖衍生物。
全文摘要
本发明公开了一种肝素钠的生产新工艺，包括酶解、絮凝处理、树脂吸附和脱附、醇沉和精制过程，在酶解过程采用微波法促进猪小肠内肝素的释放至酶解液中，并对酶解液进行絮凝处理，除去大部分的杂质，再经过树脂吸附和洗脱、醇沉干燥得粗品，然后将大孔吸附树脂和双氧水结合起来对产品脱色精制，通过这些工序制得的肝素钠效价大于150U/mg，该工艺简单，产品纯度高。
文档编号C08B37/10GK102952204SQ201210378760
公开日2013年3月6日 申请日期2012年10月9日 优先权日2012年10月9日
发明者顾永军 申请人:江苏联众肠衣有限公司