专利名称：橙色粘球菌jch-04及抗菌代谢产物的培养方法
技术领域：
本发明涉及粘球菌及抗菌物质的培养方法，具体涉及橙
色粘球菌JCH-04及抗菌代谢产物的培养方法，属于生物技
术领域。
背景技术：
粘细菌(M少jco^c^/ra)是一类具有复杂多细胞行为的原 核生物，是一类可滑动的、专性好氧革兰氏阴性杆菌，在细 胞分化、发育和生物进化研究中占有重要地位。粘细菌的次 级代谢产物与放线菌相似，包含多种化合物结构类型，根据 己经报道的粘细菌次级代谢产物的结构类型，绝大多数是仅 在粘细菌中发现新结构化合物，到目前为止，只有4种化合 物在其他生物中发现过，粘细菌的一个菌株可以产生一种基 本结构的许多衍生物，例如，Sora"g/w附ceZ/w/oww—株菌可 产生soraphen的50多种不同的活性衍生物。同种的不同菌株 产生抗菌物质种类也是不同的，差异较大，相同抗菌物质的 产生菌的分布也可跨越种、属、甚至科的界限。因此，粘细
4菌是重要的、具有巨大药物开发潜力的药源菌类群。
自最近十年来，尤其是德国人从纤维堆囊菌中发现抗癌
药物紫杉醇的类似结构物epothilone以后，粘细菌作为一类可 产生丰富次级代谢产物的微生物类群日趋受到重视。在生物
活性物质合成方面，粘细菌的阳性率高于放线菌，并且能够 产生许多全新结构的活性物质，粘细菌丰富的胞外粘液质和 特殊的酶蛋白等，也具有极好的应用价值。根据已报道的发 现物质种类排名，粘细菌在放线菌和芽孢杆菌之后，假单胞 杆菌之前，但产生活性物质的阳性率最高。
此外，目前从放线菌等微生物中筛选新抗生素的重复几 率越来越高，而粘细菌在这方面具有独特的优势。就目前情 况看，在溶细菌群粘细菌中50%的菌株可产生生物活性物质， 而溶纤维素群粘细菌甚至高达96%，这为新抗菌物质的筛选 提供了很好的一类微生物资源。而且近年来作为一种可产生 丰富而有用的次级代谢物的微生物类群逐渐受到世界青睐， 其中有些可抗细菌、有些可抗真菌、有些抗癌、有些溶栓， 因此，利用分离纯化的粘细菌发酵，寻找更有效的抗菌物质 具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供橙色粘球菌JCH-04及抗菌 谢产物的培养方法，由橙色粘球菌JCH-04发酵培养获得抗 菌物质，为抗菌物质的筛选提供一类微生物资源，降低筛选新抗生素的重复几率。
本发明的技术解决方案是该橙色粘球菌JCH-04
，保藏日期为2009年01月22日，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCCNo.2893。
本发明的抗菌代谢产物的培养方法包括以下步骤
(1) 取保藏编号为CGMCC No.2893的橙色粘球菌JCH-04的菌种，取一环菌种接种于装有种子培养基的摇瓶中，3(TC180rpm培养5天，得种子液；其中，1000ml种子培养基由10g可溶性淀粉、15g黄豆粉、2.5g葡萄糖、0.5g酵母膏、lg氯化钙、0.5g硫酸镁和970.5g水组成，pH为7.4;
(2) 将上述种子液以体积比1: 10接种于含有发酵培养基的三角瓶中，3(TC180rpm培养8天，得发酵液；其中，1000ml发酵培养基由10g可溶性淀粉、15g黄豆粉、2.5g葡萄糖、0.5g酵母膏、lg氯化钙、0.5g硫酸镁、5gSIPI-8树脂和965.5g水组成，pH为7.4;
(3) 将上述发酵液4000rpm离心10min，得树脂菌体和
滤液；
(4) 树脂菌体用与发酵液等体积的甲醇3(TC180rpm解析24h, 5(TC旋转蒸发，浓縮得抗菌代谢产物A;
(5) 滤液依次由等体积的正已烷和乙酸乙酯抽提，用超滤膜截留分子量1KD以内的生物分子，经纳滤膜得抗菌代谢产物B。
本发明的优点是1、以橙色粘球菌JCH-04培养得到的抗菌物质对细菌、真菌具有广谱的抗菌活性，对多株致病菌和腐败菌有显著的抗菌活性，抗菌产物A对多种有害细菌和霉菌具有明显抑制作用，尤其对水产品养殖致病菌表现出高效广谱特性，在防腐剂、水产饲料添加剂及医药方面有较高的实际应用价值和广阔的市场前景；2、培养方法简单方便，筛选得到的抗生素重复几率低。
图1为本发明的橙色粘球菌JCH-04的DNA的G+C含量图。
具体实施例方式
实例橙色粘球菌JCH-04依以下步骤培养得抗菌代谢
产物
(1) 取保藏编号为CGMCC No.2893的橙色粘球菌JCH-04的菌种，取一环菌种接种于装有种子培养基的摇瓶中，30。C180rpm培养5天，得种子液；其中，1000ml种子培养基由10g可溶性淀粉、15g黄豆粉、2.5g葡萄糖、0.5g酵母膏、lg氯化钙、0.5g硫酸镁和970.5g水组成，pH为7.4;
(2) 将上述种子液以体积比1: 10接种于含有发酵培养基的三角瓶中，3(TC180rpm培养8天，得发酵液；其中，1000ml发酵培养基由10g可溶性淀粉、15g黄豆粉、2.5g葡萄糖、0.5g酵母膏、lg氯化钙、0.5g硫酸镁、5gSIPI-8树脂和965.5g水组成，pH为7.4;
(3) 将上述发酵液4000rpm离心10min，得树脂菌体和
滤液；
(4) 树脂菌体用与发酵液等体积的甲醇3(TC180rpm解析24h， 5(TC旋转蒸发，浓縮得抗菌代谢产物A;
(5) 滤液依次由等体积的正已垸和乙酸乙酯抽提除脂溶性杂质，用超滤膜截留分子量1KD以内的生物分子，经纳滤膜得抗菌代谢产物B。
本发明的橙色粘球菌JCH-04的形态特征橙色粘球菌JCH-04的菌落呈红橙色圆冠形，具有晶亮的物色扩展，单菌落直径小于5mm，薄膜状扩展，有明显辐射状波纹，分泌黄色物质；粘孢子接近球形，直径在0.45 u m X 0.45 ii m 0.51u mX0.47u m之间，根据《伯杰氏细菌鉴定竽册》(第九版)的形态描述，该菌株符合粘球菌形态特征。
本发明的橙色粘球菌JCH-04的生物特征
1)子实体观察
橙色粘球菌JCH-04子实体为球形隆起，软，下端收縮，并具有一根明显的柄，柄通常不能持久；开始是连着的，在
潮湿的情况下后来就潮解； 一般为黄橙色；干了后变成深红色到褐色；直径约为60 300um。2) 染色观察
(一)用革兰氏染色法对菌株进行观察，染色后在光显微镜下用油镜观察，全部显示为红色，菌株为革兰氏阴性菌。
(二)用改良的Schaeffer-Fulton氏染色法对菌株培养一周后的粘细菌进行孔雀绿染色，在油镜下并未观察到绿色的芽孢，说明该株菌不产芽孢。
3) 鞭毛情况
将橙色粘球菌JCH-04以穿刺法接种于含0.3%琼脂的CY培养基中，3(TC培养3天，取出观察，菌落成直线状，未向四周扩散,说明8株粘细菌皆无鞭毛;其中，CY培养基(g/L):酪素水解蛋白胨3，酵母膏1，氯化钙1，琼脂15，去离子水定溶至1000mL， pH7.4。
4) 好氧与否的判断
将粘球菌04制成菌悬液，取一环接入装有CY培养基的试管中，3(TC恒温箱中培养3天，只有液面处形成一层菌膜，液面下很少有菌体生长，说明菌株属好氧菌。
5) 生理生化试验
(一) CMC-Na平板测试菌株都没有透明圈出现，说明这些菌株都不具有分解纤维素的能力。
(二) 酶的活性试验按沈萍等编《微生物学实验》中方法试验，淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、核酸酶、尿素酶、氧化酶和过氧化氢酶阳性，说明菌株能产上述各酶。
(三)对抗生素的药敏试验将其最适涂布浓度(ODeoo为0. 02-0. 03)涂布于CY平板上，在平板不同位置等距离放置高温灭菌的牛津杯，再将不同浓度梯度抗生素200^1加于牛津杯(牛津杯直径5皿，抗生素为绿霉素，链霉素，卡那霉素，浓度梯度分别为5， 10， 15， 20昭/ml)，每稀释度两个平行在30。C下培养2-3天，观察子实体的形成；结果显示橙色粘球菌JCH-04耐15微克的链霉素，对15微克的绿霉素和卡那霉素敏感。6)橙色粘球菌JCH-04的DNA的G+C含量测定
(1) 菌株培养和收集接种菌种于装有CY培养基的三角瓶内，置200r/min的摇床培养24h后离心，用0.15mol/LNaCl与0.1mol/LEDTA (pH 8.0)缓冲液洗细胞，最终溶于同样的缓冲液中，浓度为2 3g湿细胞/25ml缓冲液。
(2) DNA的提取与纯化在上述细胞悬液中加溶菌酶0.5 lmg/ml(终浓度)，置37t:水浴30min;加质量浓度20%十二烷基磺酸钠至终浓度2%, 6(TC水浴10min;加5mol/LNaC104至终浓度lmol/L，加等体积氯仿-异戊醇(24:1 v/v)，振荡10min， 5000r/min离心10min;吸取含DNA的上清水层，加上清水层2倍体积质量浓度95%乙醇，用玻棒巻出DNA丝，溶于1SSC (0.015mol/LNaCl-0.015mol/L柠檬酸钠)；加终浓度为50ug/ml的RNA酶，置37。C水浴30min;加等体积氯仿-异戊醇摇10min， 5000r/min离心5min，吸取水相，加水相2倍体积质量浓度95%乙醇，用玻棒巻出DNA丝；力口 lml3mol/LNaAC-0.001mol/LEDTApH7.0，边
搅边加0. 54倍体积的异戊醇，溶于水用紫外分光光度计测定验纯，若A26q/A28o在1.9说明DNA已纯。
(3) Tm测定将紫外分光光度计的波长固定于260nm，首先记录25。C的吸光度，然后温度上升至5(TC，每隔2'C稳定一段时间，记录温度和吸光度，直至吸光度不变表示变性完毕。
(4) Tm值计算以温度为横坐标，以相对吸光度(所测吸光度除以25'C下的吸光度)为纵坐标，绘制热变性曲线，热变性曲线中点相对应的温度即为熔链温度(Tm值)。
(5) G+Cmol。/。含量计算同等条件下，以枯草芽孢杆菌某菌株DNA的Tm值为参照，DNA中G+C mol%含量计算可以使用以下公式1SSC， G+C mol%= 42.2+2.44 (Tm测试菌-Tm枯草杆菌)；用不同温度下DNA溶液吸光度除以25'C时大的吸光度，得出各温度下的相对吸光度；结果如图l。
结果显示，橙色粘球菌JCH-04的Tm值为94°C;在此条件下，以枯草芽孢杆菌某菌株DNA的Tm值为83°C ，DNA中G+C mol。/。含量计算可以使用以下公式1SSC， G+Cmol%=42.2+2.44 (Tm测试菌-Tm枯草芽孢杆菌某菌株)，得出结论，菌株JCH-04的DNA中G+C mol%=42.2+2.44 X(94-83) =69.0%;由《伯杰氏细菌鉴定手册》(第九版)及相关资料可知，这个数据符合粘细菌的特征。7)16srDNA序列分析方法
DNA的提取按前述6)方法；常规PCR扩增16SrDNA ，PCR产物经上海捷生公司纯化后测序；序列如下
aacgaacgctggcggcgtgcctaacacatgcaagtcgagcgcgaataggggcaaccctta gtagagcggcgcacgggtgcgtaacacgtggataatctgcctggatgctcgggataacca gtcgaaagattggctaataccggataagcccacggtttcttcggagactgagggaaaagg tggcctctgtatacaagctatcacaaccagatgagtccgcggcccatcagctagttggcg gggtaatggcccaccaaggcgacgacgggtagctggtctgagaggacgatcagccacact ggaactgagacacggtcc柳ctcctacgggaggcagceigtggggaattttgcgcaatgg gcg犯agcctgacgcagcaacgccgcgtgtgtgatgaaggtctttggattgtaaagcact ttcgaccgggaagaaaacccgtagcccaacacgctacggcttgacggtaccgggagaaga agcaccggctaactctgtgccagcagccgcggtaatacagagggtgcaagcgttgttcgg aattattgggcgt犯agcgcgtgtaggcggcgtgacaagtcgggtgtg犯agccctcagc tcaactgaggaagtgcgcccgaaactgtcgtgcttgagtgccgg卿gggtggcggaatt ccccaagteLgaggtgaaattcgtageitatggggaggaacaccggtggcga^ggcggccac ctggacggtaactgacgctgagacgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccct ggtagtccacgccgtaaacgatgagaactaggtgtcgtgggagttgacccccgcggtgcc gtagctaacgcattaagttctccgcctgggaagtacggtcgcaagactaaaactca犯gg aattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgacgcaacgcgcaga accttacctggtcttgacatcctcggaatctctcagagatgagggagtgcccgcaaggga accgagagacaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtg卿tgttgggttaagt cccgcaacgagcgcaaccctcgcctttagttgccacgcaagtggatctctagagggactg ccggtgttaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaagtcctcatggcctttatgaccag ggctacacacgtgctacaatggccggtacagagcgttgccaacccgcgagggggagctaa tcgcataaaaccggtctcagttcagattggagtctgcaactcgetctccatgaaggcggaa tcgctagtaatcgcagatcagcacgctgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacacc gcccgtcacaccatgggagtcgattgctccagaagtcatctcaccaagaggtgcccaeigg agtggtcggtaactggggtg犯g
本发明的橙色粘球菌JCH-04的鉴定
橙色粘球菌JCH-04的16SrDNA核苷酸序列为1463bp，将其与GeneBank等数据库中进行最大同源性比较，发现橙色粘球 菌JCH-04的16SrDNA序列与粘球菌属16SrDNA序列同源性 达到100%;橙色粘球菌JCH-04和橙色粘球菌16SrDNA核苷 酸序列相差16bp ，在NCBI网BLAST,序列同源性为99%; 本发明的橙色粘球菌JCH-04菌株和M;aococcws/M/vw在生理生 化特性上比较相似，仅在淀粉酶和氧化酶活性和药敏试验上有 所差异，这表明两个菌株在系统分类上的亲缘关系非常接近；从 形态特征、培养特征、生理生化特性以及16SrDNA序列的综合 分析结果，结合《伯杰氏细菌鉴定手册》(第九版)所阐述的 原理，我们认为橙色粘球菌JCH-04是M戸ococcws属成员/w/ms 种下一个亚种。
本发明的橙色粘球菌JCH-04的发酵代谢产物的抗菌谱 测定
1)供试菌种
大肠杆菌toc/zen'c/z/fl[ co//)，霍乱弧菌(附W c/zo/era)， 次副溶血性弧菌(W6Wo / flra/^ewo/声/cM)，嗜水气单胞菌 C4ero附o"os /y;c ro/7/ '/flr)， 铜乡录假单胞菌(i^ewdowo"s aerwg/"osfl)，鲍氏不动杆菌C4c/"eto6fif"e : 6"wwflf""//)， 水生 黄杆菌CF/flvo6acter/ww Af《wfl"7e)， 蜡状芽孢杆菌C6tfc/〃ws ce ws)，藤黄八叠球菌(5^ r/"fl Zw&fl)，枯草芽孢杆菌 C6fl。7/ws sw6她、)，金黄色葡萄球菌(S鄉/^/ococcws , 米曲霉C4s/^g/〃M51 o^yzae)，毛霉(Mwco/y'ava"/cws)，黑曲霄C4s/7erg/〃ws w/ge》，酿酒酵母CS"cc/2aram少ces cerev/s/ae)由本 院微生物实验室提供；小麦赤霉病菌(i^^W"m grflfw/wearwm )、 f帛花枯菱病菌 (Fwsar/w附 vos/^cfww ACCC3. 224 )、稻瘟病菌(Mflgwapw^egr/wflf )由淮安农科 院提供。
2) 细菌抗菌试验细菌培养采用营养琼脂培养基MH， 其中，培养次副溶血性弧菌时MH中加质量3%的盐；用无 菌生理盐水稀释成不同梯度，涂平板并测定OD6。。，确定不 同细菌最适涂布浓度(OD6(K)为0.02-0.03 ，将不同指示菌0.2ml 均匀涂于直径为9cm平板表面,晾干后，在平板不同位置等 距离放置高温灭菌的牛津杯，再将抗菌产物20(^1加于牛津 杯(牛津杯直径5mm )，在37。C下培养16-24小时，记录 抑菌圈直径大小。
3) 真菌抗菌试验真菌培养采用马铃薯PDA培养基； 用无菌生理盐水将孢子洗下，制成孢子悬液，稀释至最适涂 布浓度(以指示菌生长布满平皿为宜)，吸取0.21111涂平板， 晾干后，在平板不同位置等距离放置高温灭菌的牛津杯，再 将抗菌产物20(^1加于牛津杯，3(TC下培养48-72小时，记 录抑菌圈直径大小。
4) 橙色粘球菌JCH-04的发酵代谢产物A和B的抗菌 谱，如表l:表1橙色粘球菌jch-04的发酵代谢产物a和b的抗菌谱
指示菌种抑菌圈直径(mm) A B革兰氏阴性菌大肠杆菌(Esc/ enWH'a co/,')10.4-
霍乱弧菌(W6W c/jo/era)12.1-
次副溶血性弧菌(7访r!'o; ara/wewjo(vft'CK5)12.7-
嗜水气单胞菌(」ero附o"os /7>^*0/ / 7。)13.7-
铜绿假单胞菌(尸sew^o柳"s 。《-"g/"。《i)11.5-
鲍氏不动杆菌C4c!'""ofea"er.6aM附a朋fO13.3-
水生黄杆菌(F/ovo6a"e"'M附叫w加7e)14.1-
革兰氏阳性菌蜡状芽孢杆菌(A^7/w cereus)12.314.1
藤黄八叠球菌(Sarc7'"a14.815.2
枯草芽孢杆菌(5a"7/us犯A础s)10.612.5
金黄色葡萄球菌OStopAy/ococcus ai/A"ei/5)15.616.7
真菌 米曲霉0is;wgz7/itf o y^e)6.2-
7.8-
6.5-
酿酒酵母(SaccAaTO/M[yces cerev&!'ae)7.8-
小麦赤霉病菌(Fwsa"'鹏gra柳'"ear"ffj)7.8-
棉花枯萎病菌(尸wsa"'柳va57'/^"鹏ACCC3.224 )6.9-
稻瘟病菌(AfagnaportAe gn'seot)8.1-
注抑菌圈直径(mm )为3次重复平均值，A:代谢产物A抑菌圈直径，B:代谢产物B抑菌圈直径
由表1抑菌效果可见，橙色粘球菌JCH-04 (M戸ococcms JCH-04)的抗菌产物A对4种革兰氏阳性菌(蜡样芽抱
15杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌、枯草芽抱杆菌)和
7种革兰氏阴性菌(大肠埃希氏杆菌、霍乱弧菌、次副溶血 性弧菌、嗜水气单胞菌、鲍氏不动杆菌、水生黄杆菌、铜绿 假单胞菌)以及7种真菌(啤酒酵母、米曲霉、黑曲霉、毛 霉、小麦赤霉病菌、棉花枯萎病菌、稻瘟病菌)均具有显著 的抑菌效果，尤其对造成水产品养殖直接经济损失的致病菌 嗜水气单胞菌、鲍氏不动杆菌、水生黄杆菌表现出高效抗性， 因此可以开发成为一种天然水产品养殖用词料添加剂以及 防腐剂或药品，具有重要应用价值；橙色粘球菌JCH-04 (M少jcococcm /w/vws JCH-04)的发酵代谢产物B虽然只对4种 革兰氏阳性菌有抗菌活性，但它的抗性强于发酵代谢产物A， 也是一种待开发抗菌活性产物。序列表
〈110 〉淮阴工学院
〈120 〉橙色粘球菌JCH-04及抗菌代谢产物的培养方法
〈160 > 1 〈210 〉 1 < 211 〉 1463 〈212 〉 DNA
〈222 〉 ( 1 )…(1463) 〈400 〉 1
aacgaacgctggcggcgtgcctaacacatgc犯gtcgagcgcgaataggggcaaccctta gtagagcggcgcacgggtgcgtaacacgtggataatctgcctggatgctcgggataacca gtcgaaagattggctaataccggataagcccacggtttcttcggagactgagggaaaagg tggcctctgtatacaagctatcacaaccagatgagtccgcggcccatcagctagttggcg gggtaatggcccaccaaggcgacgacgggtagctggtctgagaggacgatcagccacact ggaactgagacacggtccagactcctacgggaggcagcagtggggaattttgcgcaatgg gcgaaagcctgacgcagcaacgccgcgtgtgtgatgaaggtctttggattgtaaagcact ttcgaccgggaagaa^acccgtagcccaacacgctacggcttgacggtaccgggagaaga agcaccggctaactctgtgccagcagccgcggtaatacagagggtgcaagcgttgttcgg aattattgggcgtaaagcgcgtgtaggcggcgtgacaagtcgggtgtgaaagccctcagc tcaactgaggaagtgcgcccgaaactgtcgtgcttgagtgccgg卿gggtggcgg犯tt ccccaagtagaggtgaaattcgtagatatggggaggaacaccggtggcgaaggcggccac ctggacggtaactgacgctgagacgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccct ggtagtccacgccgtaaacgatgagaactaggtgtcgtgggagttgacccccgcggtgcc gtagctaacgcattaagttctccgcctgggaagtacggtcgcaagactaaaactcaaagg aattgacgggggcccgc3caagcggtggagcatgtggtttaattcg3cgc犯cgcgcaga accttacctggtcttgacatcctcggaatctctcagagatgagggagtgcccgcaaggga accgagagac鄉tgctgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtg卿tgttgggttaagt cccgcaacgagcgcaaccctcgcctttagttgccacgcaagtggatctctagagggactg ccggtgttaaaccggaggaaggtggggatgacgtc犯gtcctcatggcctttatgaccag ggctacacacgtgctacaatggccggtacagagcgttgccaacccgcgagggggagctaa tcgcataaaaccggtctcagttcagattggagtctgcaactcgactccatgaaggcggaatcgctagtaatcgcagatcagcacgctgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacacc gcccgtcacaccatgggagtcgattgctccageiagtcatctcaccaageiggtgcccaagg agtggtcggtaactggggtgaag
权利要求
1.橙色粘球菌JCH-04，其特征在于该橙色粘球菌JCH-04(Myxococcus fulvus JCH-04)的保藏编号为CGMCCNo.2893。
2. 根据权利要求1所述的橙色粘球菌JCH-04的抗菌代 谢产物的培养方法，其特征在于橙色粘球菌JCH-04依以 下步骤培养得抗菌代谢产物(1) 取一环保藏编号为CGMCC No.2893的橙色粘球 菌JCH-04的菌种，菌种接种于装有种子培养基的摇瓶中， 3(TC180rpm培养5天，得种子液；其中，1000ml种子培养 基由10g可溶性淀粉、15g黄豆粉、2.5g葡萄糖、0.5g酵母 膏、lg氯化钙、0.5g硫酸镁和970.5g水组成，pH为7.4;(2) 将上述种子液以体积比1: 10接种于含有发酵培 养基的三角瓶中，3(TC180rpm培养8天，得发酵液；其中， lOOOml发酵培养基由10g可溶性淀粉、15g黄豆粉、2.5g葡 萄糖、0.5g酵母膏、lg氯化钙、0.5g硫酸镁、5gSIPI-8树脂 和965.5g水组成，pH为7.4;(3) 将上述发酵液4000rpm离心10min，得树脂菌体和滤液；(4) 树脂菌体用与发酵液等体积的甲醇3(TC180rpm解析24h， 5(TC旋转蒸发，浓縮得抗菌代谢产物A;(5)滤液依次由等体积的正已垸和乙酸乙酯抽提，用 超滤膜截留分子量1KD以内的生物分子，经纳滤膜得抗菌代 谢产物B。
全文摘要
本发明公开了橙色粘球菌JCH-04及抗菌代谢产物的培养方法，该橙色粘球菌JCH-04(Myxococcus fulvus JCH-04)的保藏编号为CGMCC No.2893；取保藏编号为CGMCCNo.2893的一环菌种接种于装有种子培养基的摇瓶中，30℃180rpm培养5天得种子液；将种子液以体积比1∶10接种于含有发酵培养基的三角瓶中，30℃180rpm培养8天得发酵液；将发酵液4000rpm离心10min，得树脂菌体和滤液；树脂菌体用甲醇30℃180rpm解析24h，50℃旋转蒸发，浓缩得抗菌代谢产物A；滤液依次由等体积的正己烷和乙酸乙酯抽提，用超滤膜截留分子量1KD以内的生物分子，经纳滤膜得抗菌代谢产物B。本发明提供微生物资源，降低筛选新抗生素的重复几率。
文档编号C12N1/20GK101638625SQ200910024678
公开日2010年2月3日 申请日期2009年2月26日 优先权日2009年2月26日
发明者号 时, 贾建波 申请人:淮阴工学院