专利名称：一种鉴别点篮子鱼精子活力的方法
技术领域：
本发明属于水产养殖技术领域，尤其涉及到一种鉴别点篮子鱼精子活力的方法。
背景技术：
在生产实践中，鱼类精子活力的好坏是反应受精率高低的重要指标之一，因此，客 观准确评价鱼类精子的活力具有非常重要的理论意义与应用价值。在评价鱼类精子活力 时，目前主要有以下几种方法一、利用普通显微镜观察记录精子的活动状况和运动时间， 这种方法受人为因素的影响较大，不能客观反应精子的活动状况；二、利用鱼类精子直接开 展受精试验，统计受精率、孵化率、出膜率等，这种方法受外界环境因子影响较多，且随着不 同鱼类的早期发育时间的长短试验周期会有较大变化；三、最近又开发出一套计算机辅助 分析系统(CASA)，用于分析精子的运动速率和运动距离等，这种方法能客观反应精子的活 动情况，但仪器设备较为昂贵。
发明内容
本发明需要解决的问题是提供一种避免受人为因素、外界环境因子的影响，能客 观准确评价、鉴别点篮子鱼精子活力的方法。本发明的技术方案是在点篮子鱼的繁殖季节，分批采集一定量的精子，用试剂盒 分别测定不同批次精子中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽还原酶和谷胱甘肽过氧 化物酶的活性，如果精子中超氧化物歧化酶的活性高于421. 68士 12. 66U/ml，过氧化氢酶 的活性高于121. 17士 15. 04U/ml,谷胱甘肽过氧化物酶的活性高于55. 22士2. llU/min. ml，谷胱甘肽还原酶的活性高于239. 33士22. 24U/L，判断为精子活力较好；如果精子中超 氧化物歧化酶的活性介于199. 56士50. 55U/ml和421. 68士 12. 66U/ml之间，过氧化氢酶 的活性介于74. 60 士 12. 70U/ml和121. 17 士 15. 04U/ml之间，谷胱甘肽过氧化物酶的活 性介于28. 15士 1. 78U/min. ml和55. 22士2. llU/min. ml之间，谷胱甘肽还原酶的活性介 于163. 54士 17. 14U/L和239. 33士22. 24U/L之间，则判断为精子活力一般；如果精子中超 氧化物歧化酶的活性低于199. 56士50. 55U/ml,过氧化氢酶的活性低于74. 60士 12. 70U/ ml，谷胱甘肽过氧化物酶的活性低于28. 15士 1.78U/min. ml，谷胱甘肽还原酶的活性低于 163. 54士 17. 14U/L，则判断为精子活力差。本发明针对不同活力的点篮子鱼精子进行酶活性检测，根据酶活性的高低建立了不同活力的点篮子鱼精子相关能量代谢酶的活性数据，并提供了鉴别点篮子鱼精子中超氧 化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽还原酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性的相应区分数据， 通过精子相关能量代谢酶活性检测，用本方法的区分数据来鉴别点篮子鱼精子的活力。本 方法与现有方法相比，减少了通过人为观察判断的主观因素，可检测样本数量大，所需时间 短，而且鉴别准确率达到98%以上。利用本方法鉴别出的不同活力的精子开展受精试验，活 力好的精子受精率可达到95%以上，活力一般的精子受精率只有50%左右，活力差的精子 基本无受精能力。本方法所用仪器设备简单，只需一台普通的分光光度计，成本低廉，不需要昂贵的仪器设备。
具体实施例方式
在点篮子鱼的繁殖季节，分批采集点篮子鱼的精子，每批次取5尾鱼精子，用试剂盒(南京建成生物工程研究所出品的试剂盒)在分光光度计下分别测定不同批次精子中 超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-PX)的活性，每个样重复三次，结果取平均值，运用统计软件对结果进行分析处理，如 果精子中SOD的平均活性高于421. 68士 12. 66U/ml，CAT的活性平均高于121. 17士 15. 04U/ ml，GSH-PX 的平均活性高于 55. 22 士 2. 1IU/ (min. ml)，GR 的活性高于 239. 33 士 22. 24U/ L，判断为精子活力较好；如果精子中SOD的平均活性介于199. 56 士 50. 55U/ml和 421. 68士 12. 66U/ml 之间，CAT 的平均活性介于 74. 60士 12. 70U/ml 和 121. 17士 15. 04U/ml 之间，GSH-PX 的平均活性介于 28. 15士 1. 78U/ (min. ml)和 55. 22士2. IlU/ (min. ml)之间， GR的平均活性介于163. 54士 17. 14U/L和239. 33士22. 24U/L之间，则判断为精子活力一般； 如果精子中SOD的平均活性低于199. 56士50. 55U/ml，CAT的平均活性低于74. 60士 12. 70U/ ml, GSH-PX 的平均活性低于 28. 15 士 1. 78U/ (min. ml), GR 的平均活性低于 163. 54 士 17. 14U/ L，则判断为精子活力差。
权利要求
一种鉴别点篮子鱼精子活力的方法，配备试剂盒、分光光度计，其特征是在点篮子鱼的繁殖季节，分批采集一定量的精子，用试剂盒分别测定不同批次精子中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽还原酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性，如果精子中超氧化物歧化酶的活性高于421.68±12.66U/ml，过氧化氢酶的活性高于121.17±15.04U/ml，谷胱甘肽过氧化物酶的活性高于55.22±2.11U/min.ml，谷胱甘肽还原酶的活性高于239.33±22.24U/L，为精子活力较好；如果精子中超氧化物歧化酶的活性介于199.56±50.55U/ml和421.68±12.66U/ml之间，过氧化氢酶的活性介于74.60±12.70U/ml和121.17±15.04U/ml之间，谷胱甘肽过氧化物酶的活性介于28.15±1.78U/min.ml和55.22±2.11U/min.ml之间，谷胱甘肽还原酶的活性介于163.54±17.14U/L和239.33±22.24U/L之间，则为精子活力一般；如果精子中超氧化物歧化酶的活性低于199.56±50.55U/ml，过氧化氢酶的活性低于74.60±12.70U/ml，谷胱甘肽过氧化物酶的活性低于28.15±1.78U/min.ml，谷胱甘肽还原酶的活性低于163.54±17.14U/L，则为精子活力差。
2.根据权利要求1所述的一种鉴别点篮子鱼精子活力的方法，其特征是测定每批次取 5尾鱼精子。
全文摘要
一种鉴别点篮子鱼精子活力的方法，涉及水产养殖技术领域，需要提供一种鉴别点篮子鱼精子活力的方法，本发明配备试剂盒、分光光度计，其特征是在点篮子鱼的繁殖季节，分批采集一定量的精子，用试剂盒分别测定不同批次精子中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽还原酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性来区分精子活力较好、一般或活力差。本发明用于鉴别点篮子鱼精子活力。
文档编号C12Q1/28GK101838678SQ20091004765
公开日2010年9月22日 申请日期2009年3月16日 优先权日2009年3月16日
发明者冯广朋, 刘鉴毅, 姚志峰, 庄平, 张涛, 江琪, 章龙珍, 赵峰, 闫文罡, 黄晓荣 申请人:中国水产科学研究院东海水产研究所