专利名称：一种鉴别罗氏沼虾前无节幼体期胚胎发育质量的方法
技术领域：
本发明属于水产养殖技术领域，尤其涉及到一种鉴别罗氏沼虾胚胎发育质量的方 法。
背景技术：
在生产实践中，水生生物胚胎发育质量的好坏直接影响养殖生产效益的高低，因 此，客观准确评价水生生物胚胎发育质量的好坏具有非常重要的理论意义与应用价值。在 评价水生生物胚胎发育质量的好坏时，目前主要有以下几种方法一、利用显微镜直接观察 在不同发育时期水生生物胚胎的发育情况，这种方法需要不间断地取样进行拍照观察；二、 通过体外培养的方法，统计最后的孵化率、出膜率和成活率等，这种方法受外界环境因子较 多，且随着不同鱼类的早期发育时间的长短试验周期会有较大变化。
发明内容
本发明需要解决的问题是提供一种准确判别罗氏沼虾前无节幼体期胚胎发育质 量的方法。本发明配备试剂盒、紫外分光光度计，其特征是在罗氏沼虾的繁殖季节，收集一 定数量的抱卵虾，分批采集前无节幼体期的胚胎，这个时期胚胎的发育特征如下胚区似 桥细胞群相继形成三对附肢原基，包括两对触角原基和一对大颚原基，位于各附肢原基的 内侧形成神经节原基；用这个时期的胚胎制备组织勻浆，用试剂盒分别测定不同批次胚胎 中总ATP酶、肌酸激酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶的活性，如果胚胎中总ATP酶的活性高 于1. 322士0. 162U/mgprot，肌酸激酶的活性高于0. 404士0. 015U/mgprot，琥珀酸脱氢酶的 活性高于2. 067士0. 139U/mgprot，乳酸脱氢酶的活性高于352. 225士23. 214U/gprot，为 胚胎质量较好；如果胚胎中ATP酶的活性介于0. 087士0. 003U/mgprot和1. 322士0. 162U/ mgprot 之间，肌酸激酶的活性介于 0. 010士0. 002U/mgprot 和 0. 404士0. 015U/mgprot 之 间，琥珀酸脱氢酶的活性介于0. 552士0. 138U/mgprot和2. 067士0. 139U/mgprot之间，乳 酸脱氢酶的活性介于5. 890士0. 658U/gprot和352. 225士23. 214U/gprot之间，为胚胎发 育质量一般；如果胚胎中ATP酶的活性低于0. 087士0. 003U/mgprot，肌酸激酶的活性低于 0. 010士0. 002U/mgprot，琥珀酸脱氢酶的活性低于0. 552士0. 138U/mgprot，乳酸脱氢酶的 活性低于5. 890士0. 658U/gprot，则为胚胎发育质量差。本发明通过测试胚胎发育中几种重要酶活性的高低，结合本方法提供的区分胚胎 发育质量的鉴别数据来判别胚胎发育质量的好坏，与常用方法相比，减少了通过人为观察 判断的主观因素，并可同时检测不同批次数量大的样本，检测时间短，具有鉴别准确和客观 的显著效果，鉴别准确率可达到98%以上。利用本方法鉴别出的胚胎，质量好的胚胎出膜率 可达到90%以上，质量一般的胚胎出膜率只有60%左右，质量差的胚胎基本不能正常孵化 出膜。本发明所用仪器设备简单，只需一台普通的分光光度计，成本低廉。
具体实施例方式在罗氏沼虾的繁殖季节，购买一定数量的抱卵虾，每批次取5尾前无节幼体期的 胚胎，超声波离心后制备成10%的组织勻浆，用试剂盒(南京建成生物工程研究所出品的 试剂盒)在分光光度计下分别测定不同批次前无节幼体期胚胎中总ATP酶、肌酸激酶(CK)、 琥珀酸脱氢酶(SDH)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性，每个样重复三次，结果取平均值，运用统 计软件对结果进行分析处理。如果胚胎中总ATP酶的活性高于1. 322士0. 162U/mgprot, CK 的活性高于 0. 404士0. 015U/mgprot, SDH 的活性高于 2. 067 士0. 139U/mgprot, LDH 的活 性高于352. 225士23. 214U/gprot，判断为胚胎质量较好；如果胚胎中总ATP酶的活性介于 0. 087士0. 003U/mgprot 和 1. 322士0. 162U/mgprot 之间，CK 的活性介于 0. 010士0. 002U/ mgprot 和 0. 404 士 0. 015U/mgprot 之间，SDH 的活性介于 0. 552 士 0. 138U/mgprot 和 2. 067士0. 139U/mgprot 之间，LDH 的活性介于 5. 890士0. 658U/gprot 和 352. 225士23. 214U/ gprot之间，则判断为胚胎发育质量一般；如果胚胎中总ATP酶的活性低于0. 087士0. 003U/ mgprot, CK 的活性低于 0. 010士0. 002U/mgprot, SDH 的活性低于 0. 552士0. 138U/mgprot, LDH的活性低于5. 890士0. 658U/gpr0t，则判断为胚胎发育质量差。运用这种方法鉴别罗氏沼虾前无节幼体期胚胎质量较为准确和客观，鉴别准确率 可达到98%以上。
权利要求
一种鉴别罗氏沼虾前无节幼体期胚胎发育质量的方法，配备试剂盒、紫外分光光度计，其特征是在罗氏沼虾的繁殖季节，收集一定数量的抱卵虾，分批采集前无节幼体期的胚胎，用这个时期的胚胎制备组织匀浆，用试剂盒分别测定不同批次胚胎中总ATP酶、肌酸激酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶的活性，如果胚胎中总ATP酶的活性高于1.322±0.162U/mgprot，肌酸激酶的活性高于0.404±0.015U/mgprot，琥珀酸脱氢酶的活性高于2.067±0.139U/mgprot，乳酸脱氢酶的活性高于352.225±23.214U/gprot，为胚胎质量较好；如果胚胎中ATP酶的活性介于0.087±0.003U/mgprot和1.322±0.162U/mgprot之间，肌酸激酶的活性介于0.010±0.002U/mgprot和0.404±0.015U/mgprot之间，琥珀酸脱氢酶的活性介于0.552±0.138U/mgprot和2.067±0.139U/mgprot之间，乳酸脱氢酶的活性介于5.890±0.658U/gprot和352.225±23.214U/gprot之间，为胚胎发育质量一般；如果胚胎中ATP酶的活性低于0.087±0.003U/mgprot，肌酸激酶的活性低于0.010±0.002U/mgprot，琥珀酸脱氢酶的活性低于0.552±0.138U/mgprot，乳酸脱氢酶的活性低于5.890±0.658U/gprot，则为胚胎发育质量差。
2.根据权利要求1所述的一种鉴别罗氏沼虾前无节幼体期胚胎发育质量的方法，其特 征是分批采集是每批次取5尾同一发育时期抱卵虾的胚胎。
全文摘要
一种鉴别罗氏沼虾前无节幼体期胚胎发育质量的方法，涉及水产养殖技术领域，需要提供一种准确判别罗氏沼虾胚胎发育质量的方法，本发明配备试剂盒、紫外分光光度计，其特征是将收集抱卵虾分批采集同一发育时期的胚胎，制备组织匀浆，用试剂盒分别测定不同批次胚胎中总ATP酶、肌酸激酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶的活性来区分胚胎质量的好坏。本发明用于鉴别罗氏沼虾前无节幼体期胚胎发育质量。
文档编号C12Q1/50GK101839855SQ20091004765
公开日2010年9月22日 申请日期2009年3月16日 优先权日2009年3月16日
发明者冯广朋, 刘鉴毅, 姚志峰, 庄平, 张涛, 江琪, 章龙珍, 赵峰, 闫文罡, 黄晓荣 申请人:中国水产科学研究院东海水产研究所