专利名称：一种在培养基中添加半乳糖以提高林可霉素产量的方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体地说，涉及一种在培养基中添加半乳糖 以提高林可霉素产量的方法。
背景技术：
林可霉素(Lincomydn，简称LCM)又称洁霉素，对革兰氏阳性菌有很 好的抑制作用，它没有交叉耐药性而且本身的毒性较低，所以被广泛应用于 由革兰氏阳性菌引起的疾病，同时，对革兰氏阴性菌亦有一定的抑制作用。 林可霉素及其下游半合成产品称为林可酰胺类抗生素，林可酰胺类抗生素已
成为临床应用上主要的抗生素之一。
一般所说的林可霉素是指其A组份，它是由古柯叶液碱PHA (反式-N-甲基-4-正丙基脯氨酸(PPL)和甲硫林可酰胺MTL (6-氨基-6， 8-二脱氧-1-硫代-0-赤式-2-D-半乳糖吡喃糖苷)两部分通过肽键连接而成的抗生素。如图 1所示，林可霉素A的生物合成途径分为两个分枝，两个分枝分别生成丙基 脯氨酸(PPL)和甲硫林可胺(MTL)。
国外研究发现，发酵过程中直接添加作为前体的丙基脯氨酸可以提高林 可霉素A的产量而相应减少林可霉素B的产量，但添加半乳糖(甲硫林可胺 的结构类似物)是否会提高林可霉素A的产量则尚未有相关报道。
发明内容
本申请的发明人在研究提高林可霉素产量的过程中发现，向林可霉素的 发酵培养基中加入适量的半乳糖，能提高林可霉素的产量。因此，本发明的目的在于，提供一种提高林可霉素产量的方法，该方法 通过向林可霉素的发酵培养基中加入适量的半乳糖来实现。
根据本发明的一个优选实施例，使用的林可霉素产生菌为林肯链霉菌
(5^e户tom少cM //wco/"e"w、)，保藏号为CCTCC M 208064 。
根据本发明的一个优选实施例，半乳糖加入的量为培养基重量的0.01
0.1%,更优选的为0.05 0.1%;
根据本发明的一个优选实施例，加入的时间为在培养基中加入林肯链霉
菌0 144小时，更优选的加入时间为在培养基中加入林肯链霉菌48 120小时。
使用本发明提供的方法，通过在发酵培养基中添加适量的在林可霉素合 成中不作为前体物质的半乳糖，可明显提高林可霉素的产量。
图1是林可霉素A的生物合成途径。
具体实施例方式
以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅 用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
在本发明的下述实施例中，使用的林肯链霉菌(5^印towyc^ //wco/"em&) 已于2008年04月25日提交位于武汉大学的中国典型培养物保藏中心 (CCTCC)保藏，保藏号为CCTCCM 208064。
在本发明的实施例中，除特别说明外，所使用的比例均为重量百分比。 在本发明的实施例中，发酵培养基的配方为0.8% (NH4)2S04， 0.8%
NaN03， 0.5%NaCl， 0.02% K2HP04， 3%黄豆饼粉，0.2%玉米浆，0.8% CaC03，
5%葡萄糖，pH7.0。在本发明的实施例中，林可霉素的效价采用杯碟法进行检测，中国药典
2005版(二部)。
实施例1 、不同浓度半乳糖对林可霉素生物合成的影响 向林可霉素发酵培养基中分别加入不同浓度的半乳糖，同时以不添加半
乳糖的培养基作为对照，接入林肯链霉菌(&^ptom>^"//"c0/"em&)发酵培 养168小时后，取样测定林可霉素的效价，结果如表l所示。
表l、不同浓度半乳糖对林可霉素生物合成
半乳糖添加量(％)0.010.050.10.51对照
相对效价(u/ml)1091121139597100
表l的结果显示，在培养基中添加0.01 0.1%的半乳糖，使林可霉素的 产量提高9 13%，但随着半乳糖加入量的逐步提高，林可霉素的产量开始 下降，当半乳糖加入量至0.5%时，林可霉素的相对效价下降至对照的95%。
实施例2、不同浓度半乳糖对林可霉素生物合成的影响 取添加半乳糖浓度为0.05%,在不同时间添加到林可霉素发酵培养基中，
发酵培养168小时后，取样测定林可霉素的效价，同时以不添加半乳糖的培
养基作为对照，结果如表2所示。
表2、不同时间添加半乳糖对林可霉素生物合成
半乳糖添加时间(h)024487296120144对照
生物效价(u/ml)109112116117117117107100表2的结果显示，在发酵过程中添加半乳糖能提高林可霉素的生物合成 产量，尤其在发酵的48h 120h，添加0.05°/。的半乳糖，可使林可霉素的产量 提高17%。
综上所述，在林肯链霉菌(Sfre/ tow^c^/zV2co/"em&)的发酵培养基中添 加0.01 0.1%的半乳糖，可明显提高林可霉素的产量，产量最高提高了 17%; 其最适添加量、最适添加时间分别为48h 120h添加0.05X脯氨酸。
权利要求
1、一种提高林可霉素产量的方法，其特征在于，该方法通过向林可霉素产生菌的发酵培养基中加入半乳糖来实现。
2、 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述林可霉素产生菌为林肯 链霄菌(5^，o附yces //"co/wms/sO 。
3、 如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述林肯链霉菌保藏号为 CCTCCM 208064。
4、 如权利要求l所述的方法，其特征在于，所述半乳糖加入的量为培养 基重量的0.01 0.1%。
5、 如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述半乳糖加入的量为培养 基重量的0.05 0.1%。
6、 如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述半乳糖加入的时间为在 培养基中加入林肯链霉菌0 144小时。
7、 如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述半乳糖加入的时间为在 培养基中加入林肯链霉菌48 120小时。
8、 如权利要求l所述的方法，其特征在于，所述林可霉素产生菌的发酵 培养基的配方为0.8% (NH4)2S04， 0.8D/。NaNO3， 0.5%NaCl， 0.02%K2HPO4， 3%黄豆饼粉，0.2%玉米浆，0.8%CaCO3, 5%葡萄糖，pH7.0。
全文摘要
本发明提供了一种在培养基中添加半乳糖以提高林可霉素产量的方法，该方法通过向林可霉素产生菌的发酵培养基中加入适量的半乳糖来实现。使用本发明提供的方法，通过在发酵培养基中添加适量的半乳糖，可明显提高林可霉素的产量。
文档编号C12R1/565GK101684482SQ20091005359
公开日2010年3月31日 申请日期2009年6月23日 优先权日2009年6月23日
发明者储成亮, 叶蕊芳, 周晓芳, 锐 张, 张宏周, 朱义彬 申请人:华东理工大学;河南天方药业股份有限公司