采用nell-1的组织、器官的异位再生控制技术的制作方法

专利名称：采用nell-1的组织、器官的异位再生控制技术的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种细胞、组织以及器官的异位再生控制技术，尤其涉及一种采用 NELL-I的细胞、组织和器官的异位再生控制技术。
背景技术：
现在，有很多患者需要移植肝脏、胰脏、甲状腺、肾脏等器官。例如，在厚生劳动省公布的《2006年国民健康、营养调查结果概要》中，糖尿病患者以及疑似糖尿病患者的人群约合1870万人，与2002年相比，增加了 250万人(15. 4% )。其中，内因性胰岛素缺乏患者， 连日自我注射胰岛素，否则无法控制血糖，生活难以自理，很多患者需要移植胰脏(胰脏β 细胞)或实施相应的替代技术。并且，甲状腺荷尔蒙过剩，会出现异常代谢上升，引发巴塞杜氏病等。相反，甲状腺荷尔蒙不足，会引发甲状腺功能减退。不仅是甲状腺分泌减少的患者，还有因分泌过剩而实施甲状腺切除手术之后引发代谢功能极度减退的并发症患者等，需进行器官移植或实施相应的替代手术，以恢复甲状腺功能。但是，实际需要移植器官时，必须获得用于移植的器官。目前，只能等待出于第三方善意提供的器官。对于未分化细胞，有很多强制诱导分化方向的技术，且正在大力进行这方面的研究。再生医疗领域中，也针对临床应用开展了各类研发活动。但是，迄今为止，取得成功的也仅限于角膜、皮肤、黏膜、骨头、软骨等移植片水平，而在体内发挥正常作用的器官，至今仍未成功。据报道，NELL-I (Nel样1型分子)与骨生成细胞、软骨生成细胞的诱导等有关(专利文献1-4和非专利文献1)。NELL-I对骨进行的修复，应在原有位置进行。但是，各种器官异位产生和/或维持的行为与NELL-I有关，这先前完全不为人所知，且也无法预见。专利文献5公开了如下内容在存在活化素(activin)的情况下，对两栖动物的外胚叶进行前处理，移植到胚胎，产生各种组织。这种方法是以与哺乳动物相比自我修复能力极强的两栖动物为对象。即使是两栖动物其移植后的生存率也不超过30% (70%死亡)。 因此，专利文献5记载的方法对于哺乳动物而言，是不可行的。没有在添加TGFii或活化素的哺乳动物的培养组织中能够耐受移植的报道。并且，如果将专利文献5中记载的方法适用到人类，则将初期胎儿从胎盘中剥离， 预计未来疾病然后再进行处理，这在物理和伦理方面都不切实可行。在这种方法中，当胚胎内用于组入移植细胞的细胞异常繁殖以及因活性细胞产生不利时，无法挽救被移植的个体。因此，专利文献5记载的方法不适合哺乳动物。非专利文献2和文献3公开了以下内容采用众所周知作为骨生成因子的BMP，在活体内异位生成骨。但是，所报道的仅限于采用BMP生成骨，并没有报道还可生成其他的细胞、组织、器官。非专利文献4公开了以下内容在试验室内对从人体内切下来的软骨组织进行分解，添加强力的软骨生成蛋白质，在耳郭形状的胶原海绵上播种，当移植到裸小鼠(NudeMouse)上，生成了人的耳郭软骨。但是，所报道的仅限于采用软骨生成蛋白质而生成耳软骨，并没有报道还可生成其他的细胞、组织、器官。专利文献1 国际公布2006/089023手册专利文献2 国际公布2004/072100手册专利文献3 国际公布2004/024893手册专利文献4 国际公布01/024821手册专利文献5 专利公开2000-217571号公报非专利文献1 J Bone Miner Res. 2007Jun ；22 (6) 918—30非专利文献2 J Dent Res 82(8) :581-584,2003非专利文献 3 :P last. Reconstr. Surg. 108 :952,2001__专禾1J文献 4 Isogai N, Comparison of different chondrocytes for use in tissue engineering of cartilage model structures ( M fl^itlMg 丰勾白勺 ti^R 工禾呈白勺不同软骨细胞比较).Tissue Eng. 2006Apr ； 12 (4) :691-70
发明内容
本发明的技术问题是提供一种应用于再生医疗领域中通过分化诱导来产生和/ 或维持细胞、组织以及器官的技术。本发明的另一技术问题是提供一种在免役排异反应中保护移植在活体内的分化诱导得到的细胞、组织以及器官，并提供其维持在活体内的技术。解决问题的手段为了解决上述问题，本发明人等专心研究发现，NELL-I具有对分化诱导阶段的细胞进一步分化诱导的能力，并完成了本发明。同时，本发明人等还发现在NELL-I中具有抑制活体内免疫排异的作用，并完成了本发明。在本发明前NELL-I的这种作用并不为人所知，通过本发明首次提出。为达到上述目的，本发明提供例如以下方法(项目1)
—种组合物，用于对具有一定分化方向的细胞进行分化诱导，从而产生在该分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官，该组合物包含NELL-1，或包含在分化时能转变成具有NELL-I功能的物质。(项目2)如上述项目所述的合成物，用于在有脂肪组织以及在有维持该脂肪组织的血管环境下，异位产生在所述分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官。(项目3)如上述项目所述的组合物，其中，具有所述一具有一定分化方向的细胞是成体干细胞。(项目4)如上述项目所述的组合物，其中，所述成体干细胞是存在于从由造血组织、上皮组织、结缔组织、肌肉组织和神经组织所构成的组中选出的组织内的躯体干细胞。
(项目5)如上述项目所述的组合物，其中，所述成体干细胞是具有向造血组织、上皮组织或结缔组织的分化方向的干细胞。(项目6)如上述项目所述的组合物，其中，存在于所述造血组织内的成体干细胞是一种造血干细胞，是具有自我修复能力和多分化能力的血液细胞的母细胞。(项目7)如上述项目所述的组合物，其中，存在于所述上皮组织的成体干细胞是一种具有向上皮组织的分化方向的干细胞，是具有自我修复能力和多分化能力的上皮细胞的母细胞。(项目8)如上述项目所述的组合物，其中，存在于所述上皮组织内的成体干细胞是一种腺原细胞或者发根所含的细胞。(项目9)如上述项目所述的组合物，其中，所述被分化诱导的细胞、组织或器官是向造血系统或上皮系统诱导的。(项目10)如上述项目所述的组合物，其中，所述向造血系统被分化诱导的细胞、组织或器官，是从造血干细胞分化的、从中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴细胞构成的组中选出的白细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞，以及它们组合构成的组中选出的血细胞。(项目11)如上述项目所述的组合物，其中，所述向上皮系统被分化诱导的细胞、组织或器官是外分泌腺及其导管。(项目12)如上述项目所述的组合物，其中，所述外分泌腺是从汗腺、脂腺、肠腺、胃腺和唾液腺构成的组中选出。(项目13)如上述项目所述的组合物，其中，所述向上皮系统被分化诱导的细胞、组织或器官是毛、毛球、毛根或附在毛根上的腺组织。(项目14)如上述项目所述的组合物，其中，所述具有一定分化方向的细胞是腺原细胞，上述被分化诱导的细胞、组织或器官是外分泌腺及其导管。(项目15)如上述项目所述的组合物，其中，具有所述一定分化方向的细胞是含在毛根上的细胞，所述被分化诱导的细胞、组织或器官为毛、毛球、毛根或附在毛根上的腺组织。(项目16)如上述项目所述的组合物，其中，所述NELL-I的含量为约0. 01 μ g/ml以上。(项目17)
如上述项目所述的组合物，其中，所述NELL-I的含量为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml。(项目18)如上述项目所述的组合物，其中，所述被分化诱导的细胞、组织或器官具有天然存在的应对作用。(项目19)一种用于对具有一定分化方向的细胞进行分化诱导，从而产生在该分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官的材料，该材料是包括A)缓释支架，以及B) NELL-I，或者在分化时能转变成具有NELL-I功能的物质。(项目20)如上述项目所述的材料，用于在有脂肪组织以及在有维持该脂肪组织的血管环境下，异位产生在所述分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官。(项目21)如上述项目所述的材料，其中，所述缓释支架为细胞外基质。(项目22)如上述项目所述的材料，其中，所述缓释支架是从由骨胶原和去端肽胶原构成的组中选出的。(项目23)如上述项目所述的材料，其中，所述具有一定分化方向的细胞是成体干细胞。(项目24)如上述项目所述的材料，其中，所述成体干细胞是存在于从造血组织、上皮组织、 结缔组织、肌肉组织以及神经组织构成的组中选出的组织中的成体干细胞。(项目25)如上述项目所述的材料，其中，所述成体干细胞是存在于造血组织、上皮组织或结缔组织中的成体干细胞。(项目26)如上述项目所述的材料，其中，所述存在于造血组织中的成体干细胞是一种造血干细胞，是具有自我修复能力和多分化能力的血液细胞的母细胞。(项目27)如上述项目所述的材料，其中，所述存在于上皮组织的成体干细胞是一种具有向上皮组织的分化方向的干细胞，是具有自我修复能力和多分化能力的上皮细胞的母细胞。(项目28)如上述项目所述的材料，其中，所述存在于上皮组织内的成体干细胞是腺原细胞或毛根所含的的细胞。(项目29)如上述项目所述的材料，其中，所述被分化诱导的细胞、组织或器官是向造血系统或上皮系统被分化诱导的细胞、组织或器官。(项目30)如上述项目所述的材料，其中，所述向造血系统被分化诱导的细胞、组织或器官，是从造血干细胞分化的、从中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴细胞构成的组中选出的白细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞，以及它们组合构成的组中选出的血细胞。(项目31)如上述项目所述的材料，其中，所述向上皮系统被分化、诱导的细胞、组织或器官是外分泌腺及其导管。(项目32)如上述项目所述的材料，其中，所述外分泌腺是从汗腺、脂腺、肠腺、胃腺以及唾液腺构成的组中选出的。(项目33)如上述项目所述的材料，其中，所述向上皮系统被分化诱导的细胞、组织或器官是毛、毛球、毛根或附在毛根上的腺组织。(项目34)如上述项目所述的材料，其中，所述具有一定分化方向的细胞是腺原细胞，所述被分化诱导的细胞、组织或器官是外分泌腺及其导管。(项目35)如上述项目所述的材料，其中，所述具有一定分化方向的细胞是毛根所含的细胞， 所述已被分化诱导的细胞、组织或器官毛、毛球、毛根或附在毛根上的腺细胞。(项目36)如上述项目所述的材料，其中，所述NELL-I的含量为约O.Olyg/ml以上。(项目37)如上述项目所述的材料，其中，所述NELL-I的含量为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml。(项目38)如上述项目所述的材料，其中，所述被分化诱导的细胞、组织或器官具有天然存在的应对作用。(项目39)一种试剂盒，用于对具有一定分化方向的细胞进行分化诱导，产生在分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官，并且，该试剂盒具有NELL-1，或在该分化时能转变成具有NELL-I功能的物质。(项目40)上述项目所述的试剂盒，其中，在有脂肪组织以及在有维持该脂肪组织的血管环境下，用于异位产生在所述分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官。(项目41)如上述项目所述的试剂盒，其中，所述被分化诱导的细胞、组织或器官，是向造血系统或上皮系统被分化诱导的细胞、组织或器官。(项目42)如上述项目所述的试剂盒，其中，所述向造血系统被分化诱导的细胞、组织或器官，是从造血干细胞分化的、从中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴细胞构成的组中选出的白细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞，以及它们组合构成的组中选出的血细胞。(项目43)
如上述项目所述的试剂盒，其中，所述向上皮系统被分化诱导的细胞、组织或器官是外分泌腺及其导管。(项目44)如上述项目所述的试剂盒，其中，所述外分泌腺是从汗腺、脂腺、肠腺、胃腺以及唾液腺构成的组中选出的。(项目45)如上述项目所述的试剂盒，其中，所述向上皮系统被分化诱导的细胞、组织或者器官是毛、毛球、毛根或附在毛根上的腺组织。(项目46)如上述项目所述的试剂盒，其中，所述NELL-I的含量为约0. 01 μ g/ml以上。(项目47)如上述项目所述的试剂盒，其中，所述NELL-I的含量为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml。(项目48)一种医疗器具，用于对具有一定分化方向的细胞进行分化诱导，产生在分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官，并且，该医疗器具是备有A) NELL-I，或在该分化时能转变成具有NELL-I功能的物质；B)缓释支架；以及C)容器。(项目49)如上述项目所述的医疗器具，其中，该医疗器具在有脂肪组织以及在有维持脂肪组织的血管环境下，用于异位产生在分化方向的被进一步分化诱导的细胞、组织或器官。(项目50)如上述项目所述的医疗器具，其中，所述缓释支架是从细胞外基质构成的组中选择的。(项目51)如上述项目所述的医疗器具，其中，所述缓释支架是骨胶原和去端肽胶原。(项目52)如上述项目所述的医疗器具，其中，所述被分化诱导的细胞、组织或器官，是向造血系统或上皮系统被分化诱导的细胞、组织或器官。(项目53)如上述项目所述的医疗器具，其中，所述向造血系统被分化诱导的细胞、组织或器官，是从造血干细胞中分化的、从中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴细胞构成的组中选出的白细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞，以及它们组合构成的组中选出的血细胞。(项目54)如上述项目所述的医疗器具，其中，所述向上皮系统被分化诱导的细胞、组织或器官为外分泌腺及其导管。(项目55)如上述项目所述的医疗器具，其中，所述外分泌腺是从由汗腺、脂腺、肠腺、胃腺以及唾液腺构成的组中选出的。(项目56)如上述项目所述的医疗器具，其中，所述向上皮系统被分化诱导的细胞、组织或器官是毛、毛球或附在毛根上的腺组织。(项目57)如上述项目所述的医疗器具，其中，所述NELL-I的含量为约0. 01 μ g/ml以上。(项目58)如上述项目所述的医疗器具，其中，所述NELL-I的含量为约5 μ g/ml_约50 μ g/ ml ο(项目59)一种生产细胞、组织或器官的方法，其中，该方法包含以下步骤提供具有一定分化方向的细胞；使该具有一定分化方向的细胞与NELL-I或在维持时能转变成具有NELL-I功能的物质接触。(项目60)如上述项目所述的方法，其中，在有脂肪组织以及在有维持脂肪组织的血管环境下，提供所述具有一定分化方向的细胞。(项目61)如上述项目所述的方法，其中，所述具有一定分化方向的细胞和所述NELL-I，在缓释支架上接触。(项目62)如上述项目所述的方法，其中，所述缓释支架是从细胞外基质构成的组中选出的。(项目63)如上述项目所述的方法，其中，所述缓释支架是骨胶原和去端肽胶原。(项目64) 如上述项目所述的方法，其中，所述具有一定分化方向的细胞是成体干细胞。(项目65)如上述项目所述的方法，其中，所述成体干细胞是存在于从造血组织、上皮组织、 结缔组织、肌肉组织以及神经组织构成的组中选出的组织内的成体干细胞。(项目 66)如上述项目所述的方法，其中，所述成体干细胞是存在于造血组织、上皮组织或结缔组织内的成体干细胞。(项目67)如上述项目所述的方法，其中，成体干细胞存在于所述造血组织内，是一种造血干细胞，是具有自我修复能力和多分化能力的血液细胞的母细胞。(项目68)如上述项目所述的方法，其中，成体干细胞存在于所述上皮组织内，是一种具有向上皮组织的分化方向的干细胞，是具有自我修复能力和多分化能力的上皮细胞的母细胞。(项目69)
如上述项目所述的方法，其中，成体干细胞存在于所述上皮组织内，是腺细胞或毛根所含的细胞。(项目70)一种组合物，是用于维持被分化诱导的细胞、组织或器官的组合物，该组合物含有 NELL-I，或在维持时能转变成具有NELL-I功能的物质。(项目71)如上述项目所述的组合物，其中，所述维持是在不容许存在所述被分化诱导的细胞、组织或器官的场所下进行的。(项目72)如上述项目所述的组合物，其中，所述被分化诱导的细胞、组织或器官具有天然存在的应对功能。(项目73)如上述项目所述的组合物，其中，所述被分化诱导的细胞、组织或器官是从由肝脏、肾脏、胰脏、肾上腺、甲状腺、卵巢和精巢构成的组中选出的。(项目74)一种维持被分化诱导的细胞、组织或器官的方法，其中，该方法包含以下步骤提供被分化、诱导的细胞、组织或器官；在该被分化诱导的细胞组织或器官内，提供NELL-I或在维持时能转变成具有 NELL-I功能的物质。(项目75)在用于从具有一定分化方向的细胞形成被分化诱导的细胞、组织或器官的医药制造中，使用NELL-I或在在该形成时能转变成具有NELL-I功能的物质。(项目76)在用于维持被分化诱导的细胞、组织或器官的医药制造中，使用NELL-I或在该维持时能转变成具有NELL-I功能的物质。(项目Al)一种在移植到活体内的脂肪组织或肌肉组织内产生腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该活体内制作可移植容器的空间；B)根据容器大小，将活体的脂肪组织或肌肉组织与维持该脂肪组织或肌肉组织的血管一同分切，制作含血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器中配置含NELL-I的缓释支架，并插入该带蒂组织片；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，向该空间内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在充分产生该腺组织的期间内， 在该活体内维持该容器。(项目A2)一种在移植到活体内的脂肪组织或肌肉组织内产生腺组织的方法，其中，该方法包含以下几种步骤A)在该活体内制作可移植容器的空间；
B)根据容器大小，将活体的脂肪组织或肌肉组织该脂肪组织或肌肉组织维的血管一同分切，制作含血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上插入该带蒂组织片，添加NELL-I ；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，向该空间内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在充分产生该腺组织的期间内， 在该活体内维持该容器，其中，在该维持期间，在该带蒂组织片上定期添加NELL-I。(项目A3)如上述所述方法，其中，所述空间是可装入所述容器大小的空间。(项目A4)如上述所述方法，其中，所述空间在大腿部的肌肉中制作。(项目A5)如上述所述方法，其中，所述NELL-I的含量为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml。(项目A6)如上述所述方法，其中，所述缓释支架是从由骨胶原和去端肽胶原构成的组中选出的。(项目A7)一种在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中产生腺组织的方法，其中，该方法包含以下几种步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；B)根据容器大小，以下腹壁动静脉分支部为中心，分切该哺乳动物的腹部皮下脂肪组织，制作以下腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上配置包含约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-1的骨胶原或去端肽胶原，插入该带蒂组织片；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该肌肉内维持该容器至少大约 2周。(项目A8)一种在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中产生腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；B)根据容器大小，以下腹壁动静脉分支部为中心，分切该哺乳动物腹部皮下脂肪组织，制作以下腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片； C)在该容器上插入该带蒂组织片，添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-1 ；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该肌肉内维持该容器至少大约2周，其中，在维持期间，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-约50μ g/ml的 NELL-I。(步骤 A9)如上述项目所述的方法，其特征在于，所述NELL-I在50 μ g/ml的浓度下，每隔一周添加0. Iml,四周共添加20 μ g/ml。(项目A10)—种在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；B)根据容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；C)在该容器内配置包含约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-1的骨胶原海绵或去端肽胶原，插入该带蒂组织片；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该肌肉内维持该容器至少大约 2周；(项目All)一种在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；B)根据容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；C)在该容器内插入该带蒂组织片，添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-1 ；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该肌肉内维持该容器至少大约 2周，其中，在维持期间，在该带蒂组织片上定期添加的NELL-I (5 μ g/ml-约50 μ g/ml)。(项目Al2)如上述项目所述的在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中产生腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该大鼠的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以腹壁动静脉的分支部为中心分切该哺乳动物腹部皮下脂肪组织，制作以下腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml，所述缓释支架为骨胶原海绵或去端肽胶原；以及在所述步骤E)中，充分产生所述腺组织的时间为至少大约2周。
(项目Al3)如上述项目所述的在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml，所述缓释支架为骨胶原海绵或去端肽胶原；以及在所述步骤E)中，充分产生的所述腺组织的时间为至少大约2周。(项目A14)如上述项目所述的在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中产生腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以下腹壁动静脉分支部为中心，分切该哺乳动物腹部皮下脂肪组织，制作以下腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml ；所述步骤D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；在所述步骤E)中，充分产生该腺组织的时间为至少大约2周，其中，在该维持期间，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-I。(项目Al5)如上述项目所述的在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml ；所述步骤D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；在所述步骤E)中，充分产生所述腺组织的时间为至少大约2周，其中，在维持所述腺组织期间，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-I。(项目B 1)一种在移植到活体内的脂肪组织或肌肉组织中产生造血组织的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该活体内制作可移植容器的空间；B)根据容器大小，将活体的脂肪组织或肌肉组织与维持该脂肪组织或肌肉组织的血管一同分切，制作含血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上配置含NELL-I的缓释支架，并插入该带蒂组织片；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该空间内移植该容器E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在充分产生该造血组织的期间内，在该活体内维持该容器。(项目B2)一种在移植到活体内的脂肪组织或肌肉组织中产生造血组织的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该活体内制作可移植容器的空间；B)根据容器大小，将活体的脂肪组织或肌肉组织与维持该脂肪组织或肌肉组织的血管一同分切，制作含血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上插入该带蒂组织片，添加NELL-I ；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该空间内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在充分产生该造血组织的期间内，在该活体内维持该容器，其中，在该维持期间，在该带蒂组织片中定期添加该带蒂组织片。(项目B3)如上述项目所述的方法，其中所述空间是可装入所述容器大小的空间。(项目B4)如上述项目所述的方法，其中，所述空间在大腿部的肌肉内制作。(项目B5)如上述项目所述的方法，大约含有5 μ g/ml-50 μ g/ml的所述NELL-1。(项目B6)如上述项目所述的方法所述缓释支架是从由骨胶原和去端肽胶原构成的组中选出的。(项目B7)一种在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中产生造血组织的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；B)根据容器大小，以下腹壁动静脉分支部为中心，分切该哺乳动物的腹部皮下脂肪组织，制作以下腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上配置包含约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-I的骨胶原或去端肽胶原骨胶原，插入该带蒂组织片；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该肌肉内维持该哺乳动物容器至少大约2周。(项目B8)
一种在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中产生造血组织的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；B)根据容器大小，以下腹壁动静脉分支部为中心，分切该哺乳动物的腹部皮下脂肪组织，制作以下腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上插入该带蒂组织片，添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-1。D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该肌肉内维持该容器至少大约 2周，其中，在该维持期间，在该带蒂组织片上每隔一周添加约NELL-I (5 μ g/ml-约50 μ g/ ml) ο(步骤 B9)如上述项目所述的方法，其特征在于，所述NELL-I在50 μ g/ml的浓度下，每隔一周添加0. Iml,四周共添加20 μ g/ml。(项目BIO)一种在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生造血组织的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；B)根据容器大小，以维持肌肉组织的血管分支部为中心，分切该哺乳动物的肌肉组织，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；C)在该容器上配置含约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-I的骨胶原海绵或去端肽胶原骨胶原，插入该带蒂组织片；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该肌肉内维持该容器的时间为至少大约2周。(项目Bll)一种在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生造血组织的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；B)根据容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；C)在该容器上插入该带蒂组织片，添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-1。D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该肌肉内维持该容器至少大约2周，其中，在该维持期间，在该带蒂组织片上定期添加(NELL-1约5 μ g/ml-约50 μ g/ml)。(项目B12)如上述项目所述的在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生造血组织的方法， 其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)是在该大鼠的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以下腹壁动静脉的分支部为中心分切该哺乳动物腹部皮下脂肪组织，制作以腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml，所述缓释支架为骨胶原海绵或去端肽胶原；以及在所述步骤E)中，充分产生所述造血组织的时间为至少大约2周。(项目B13)如上述项目所述的在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生造血组织的方法， 其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml，所述缓释支架为骨胶原海绵或去端肽胶原；以及在所述步骤E)中，充分产生所述造血组织的时间为至少大约2周。(项目B14)如上述项目所述的在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中产生造血组织的方法， 其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以下腹部动静脉分支部为中心，分切该哺乳动物的腹部皮下脂肪组织，制作以下腹部动静脉为血管蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml ；所述步骤D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；在所述步骤E)中，充分产生所述造血组织的时间为至少大约2周，在所述维持造血组织，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-1。(项目B15)如上述项目所述的在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生造血组织的方法， 其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进
2行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片； 在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml ；所述步骤D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；在所述步骤E)中，充分产生所述造血组织的时间为至少大约2周，在维持该组织的期间，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-I。(项目Cl)一种在移植到活体内的大腿部的脂肪组织或肌肉组织中产生毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该活体内制作可移植容器的空间；B)根据容器大小，活体的脂肪组织或肌肉组织与维持该脂肪组织或肌肉组织的血管一同分切，制作含血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上配置含NELL-I的缓释支架；D)在该缓释支架上配置毛根所含细胞；E)在该容器上插入该带蒂组织片；F)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该空间内移植该容器；G)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在充分产生该毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的期间内，在该活体内维持该容器。(项目C2)一种在移植到活体内的大腿部的脂肪组织或肌肉组织中产生毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该活体内制作可移植容器的空间；B)根据容器大小，活体的脂肪组织或肌肉组织与维持该脂肪组织或肌肉组织的血管一同分切，制作含血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上插入该带蒂组织片，添加毛根所含的细胞和NELL-I ；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该空间内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在可充分产生该毛、毛球、毛根、 以及附在毛根上的腺组织的期间内，在该活体内维持该容器，其中，在该维持期间，在该带蒂组织片上定期添加NELL-I。
(项目C3)如上述项目所述的方法，其中，所述空间为可装入所述容器大小的空间。(项目C4)如上述项目所述的方法，其中，所述空间在大腿部的肌肉内制作。(项目C5)如上述项目所述的方法，其中，包含大约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的上述NELL-1。(项目C6)如上述项目所述的方法，所述缓释支架是从由骨胶原和去端肽胶原构成的组中选择的。(项目C7)
一种在移植到哺乳动物的大腿部的脂肪组织中产生毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；B)根据容器大小，以下腹壁动静脉分支部为中心，分切该哺乳动物的腹部皮下脂肪组织，制作以下腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上配置含约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-I的骨胶原或去端肽胶原；D)在该骨胶原海绵或去端肽胶原上配置毛根所含细胞；E)在该容器内插入带蒂组织片；F)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；以及G)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该肌肉内维持该容器至少约2周。(项目C8)—种在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中产生毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；B)根据容器大小，以下腹壁动静脉分支部为中心，分切该哺乳动物的腹部皮下脂肪组织，制作以下腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上插入该带蒂组织片，添加毛根所含细胞以及约5 μ g/ml-约50 μ g/ ml 的 NELL-I ；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该肌肉内维持该容器至少大约2周时间，在维持期间，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的 NELL-I。(步骤C9)如上述所述方法，其特征在于，所述NELL-I在50 μ g/ml的浓度下，每隔一周添加 0. 1ml，四周共添加20 μ g/ml。(项目 CIO)一种在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；B)根据容器大小，以维持哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；C)在该容器上配置含约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-1的骨胶原海绵或去端肽胶原；
D)在该骨胶原海绵或去端肽胶原上，配置毛根所含细胞；E)在该容器上插入该带蒂组织片；F)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；G)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该肌肉内维持该容器至少大约 2周。(项目Cll)一种在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；B)根据容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；C)在该容器上插入该带蒂组织片，添加毛根所含细胞以及约5 μ g/ml-约50 μ g/ ml 的 NELL-I。D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该肌肉内维持该容器至少大约 2周，在该维持期间，在该带蒂组织片上定期添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-I。(项目Cl2)如上述项目所述的在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中产生毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以下腹壁动静脉的分支部为中心分切该哺乳动物腹部皮下脂肪组织，制作以下腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml ；所述缓释支架为骨胶原海绵或去端肽胶原；所述步骤F)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；并且所述步骤G)充分产生所述毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的时间为至少大约2周。(项目C13)如上述项目所述的在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；
在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml_约50 μ g/ml，该缓释支架为骨胶原海绵或去端肽胶原；所述步骤F)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在大腿部的肌肉内移植该容器，在所述步骤G)中，充分产生所述毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的时间为至少大约2周。(项目C14)如上述项目所述的在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中产生毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以下腹部动静脉分支部为中心，分切该哺乳动物的腹部皮下脂肪组织，制作以下腹部动静脉为血管蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml，所述步骤D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；在所述步骤E)中，充分产生所述毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的时间为至少约2周，在维持所述腺组织期间，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-约 50 μ g/ml 的 NELL-I。(项目Cl5)如上述项目所述的在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以维持该大鼠肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml，所述步骤D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；在所述步骤E)中，充分产生所述毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织时间为至少大约2周，在维持所述腺组织期间，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-约 50 μ g/ml 的 NELL-I。(项目Dl)一种在移植到活体大腿部的脂肪组织或肌肉组织中维持肝脏组织片的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该活体内制作可移植容器的空间；B)根据容器大小，将活体的脂肪组织或肌肉组织与维持该脂肪组织或肌肉组织的血管一同分切，制作含血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上配置含NELL-I的缓释支架；
D)在该缓释支架上配置该肝脏组织片；E)在该容器上插入该带蒂组织片；F)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该空间内移植该容器；以及G)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下放置该容器。(项目D2)—种在移植到活体大腿部的脂肪组织或肌肉组织中维持肝脏组织片的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该活体内制作可移植容器的空间；B)根据容器大小，将活体的脂肪组织或肌肉组织与维持该脂肪组织或肌肉组织的血管一同分切，制作含血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上插入该带蒂组织片，添加该肝脏组织片以及NELL-I ；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该空间内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下放置该容器。(项目D3)如上述项目所述的方法，其中，所述空间为可装入所述容器大小的空间。(项目D4)如上述项目所述的方法，其中，所述空间在大腿部的肌肉内制作。(项目D5)如上述项目所述的方法，其中，包含大约5 μ g/ml-50 μ g/ml的所述NELL-1。(项目 D6)如上述项目所述的方法，其中，所述缓释支架是从由骨胶原和去端肽胶原构成的组中选择的。(项目D7)一种在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中维持肝脏组织片的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；B)根据容器大小，以下腹壁动静脉分支部为中心，分切该哺乳动物的腹部皮下脂肪组织，制作以下腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上放置含约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-1的骨胶原或去端肽胶原；D)在该骨胶原海绵或去端肽胶原上配置该肝脏组织片；E)在该容器内插入带蒂组织片；F)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；以及G)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下放置该容器。(项目D8)一种在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中维持肝脏组织片的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；B)根据容器大小，以下腹壁动静脉分支部为中心，分切该哺乳动物的腹部皮下脂肪组织，制作以下腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上插入该带蒂组织片，添加该肝脏组织片以及约5 μ g/ml-约50 μ g/ ml的NELL-I的基因；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器； E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下放置该容器，这期间，每隔一周在该带蒂组织片上添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-I。(步骤D9)如上述项目所述的方法，其特征在于，所述NELL-I在50 μ g/ml的浓度下，每隔一周添加0. Iml,四周共添加20 μ g/ml。(项目D10)一种在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中维持肝脏组织片的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；B)根据容器大小，以维持哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；C)在该容器上配置含约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-1的骨胶原海绵或去端肽胶原；D)在该骨胶原海绵或去端肽胶原上，配置该肝脏组织片。E)在该容器上插入该带蒂组织片。F)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；G)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下放置该容器。(项目Dll)一种在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中维持肝脏组织片的方法，其中，该方法包含以下步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；B)根据容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行切离，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；C)在该容器上插入该带蒂组织片，添加该肝脏组织片以及约5 μ g/ml-约50 μ g/ ml 的 NELL-I。D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下放置该容器，在该带蒂组织片上定期添加约 5 μ g/ml-约 50 μ g/ml 的 NELL-I。
(项目D12)如上述项目所述的在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中维持肝脏组织片的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以下腹壁动静脉的分支部为中心分切该哺乳动物腹部皮下脂肪组织，制作以下腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml，所述缓释支架为骨胶原海绵或去端肽胶原，所述步骤F)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器。(项目D13)如上述项目所述的在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中维持肝脏组织片的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml_约50 μ g/ml，该缓释支架为骨胶原海绵或去端肽胶原；并且所述步骤F)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在大腿部的肌肉内移植该容器。(项目D14)如上述项目所述的在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中维持肝脏组织片的方法，其中，该方法有以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以下腹部动静脉分支部为中心，分切该哺乳动物的腹部皮下脂肪组织，制作以下腹部动静脉为血管蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml ；所述步骤D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；并且在所述步骤E)中，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的 NELL-I。(项目D15)如上述项目所述的在移植到大鼠大腿部的肌肉组织中维持肝脏组织片的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；
所述步骤B)根据容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml ；所述步骤D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；并且在所述步骤E)中，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的 NELL-I。因此，参照附图，阅读并理解以下详细说明，本领域技术人员应当理解本发明的这些内容和其他优势。根据本发明，提供一种采用NELL-I产生被分化诱导的细胞、组织和器官的技术。 特别地，本发明可在异位产生被分化诱导的细胞、组织和器官。根据本发明，被分化诱导的细胞、组织和器官具有意想不到的显著效果，即，能够发挥它们原有的功能。这种采用NELL-I产生细胞、组织和器官的技术可以应用到近年来采用ES细胞等未分化细胞的细胞移植治疗上。也就是说，通过对ES细胞等的未分化细胞，赋予所需的分化功能，进而作用于NELL-1，从而在活体内可形成发挥作用的器官。同时，通过以自身细胞、 组织和器官为对象，对无法享受器官移植和接受高度医疗的患者，也可提供代用器官。另一方面，根据本发明，提供一种采用NELL-I维持在活体内被移植的细胞、组织和器官的技术。根据本发明的技术，可收到意想不到的效果，即，被移植的细胞、组织和器官可维持原有形态和尺寸，而且还能维持它们原有的功能。 通过本发明，首次获得这种效果。


图IA表示产生人体NELLl质粒构建的示意图。图IB为图IA的接续。图IC为图IB的接续。图ID示出了硅模具下脂肪组织以及在有维持脂肪组织的血管环境中产生的造血组织。其中，照片中的横线为2. 0mm。图2示出了硅模具下脂肪组织以及在维持脂肪组织的血管环境中产生的腺组织。 其中，照片中的横线为200μπι。G 由上皮细胞(单层圆柱表皮)分泌的胶态状分泌物。P: 将被单层立方表皮包围的胶态状分泌物排出的导管。图3表示硅模具下脂肪组织以及在维持脂肪组织的血管环境中产生的腺组织。其中，照片中的横线为200ym。G:被上皮细胞(单层圆柱表皮)包围的内部有颗粒状分泌物。图4为在脂肪组织以及在有维持脂肪组织的血管环境下，移植加有生理盐水的肝脏组织片，示出了移植部分在移植四周后的状态。图5为在脂肪组织以及在有维持脂肪组织的血管环境下移植加有NELL-I (5 μ g) 的肝脏组织片，示出了移植部分在移植4周后的状态。虚线包围部分为移植后的肝脏组织片。其中，横线表示1.0mm。图6A为在脂肪组织以及在有维持脂肪组织的血管环境下移植只添加FGF的活体内培养器，示出了移植部分在移植2周后的组织影像。其中，横线表示250 μ m。
图6B为图6A的放大图。其中，横线表示500 μ m。A 结缔组织B 血管。图6C为在脂肪组织以及在有维系脂肪组织的血管环境下移植加有NELL-I和FGF 的活体内培养器，示出了移植部分在移植2周后的组织影像。其中，横线表示250 μ m。图6D为图6C的放大图。其中，横线表示500 μ mm。A 结缔组织B 分化的腺组织。图6E为在脂肪组织以及在有维系脂肪组织的血管环境下移植只加有NELL-I的活体内培养器，示出了移植部分在移植2周后的组织影像。其中，横线部分为250 μ mm。图6F是图6E的放大图。其中，横线表示500 μ mm。箭头表示腺组织。图6G为在脂肪组织以及在有维持脂肪组织的血管环境下移植只加有生理盐水的活体内培养器，示出了移植部分在移植2周后的组织影像。其中，横线部分为250 μ mm。图6H是图6G的放大图。其中，横线表示500 μ mm。箭头为存在于脂肪组织周边的结缔组织。图7示出了从体外将NELL-I连续投入到模具内的团。图8示出了从体外将NELL-I连续投入到模具内之后，通过从体外注入苏木精 (Haematoxylin)稀释液得到的投入NELL-1后的有效性的试验结果。结果表明，确实投入了 NELL-1。注入苏木精稀释液的地方染成了紫色。图9为在脂肪组织以及在有维持脂肪组织的血管环境下，示出了毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织染成苏木精-曙红的照片。其中，横线表示500ymm。Α:附在毛根上的线组织；B 毛以及毛根(毛球)。序列表中的文字序列编号1 智人NELLl的核酸序列。信号肽的编码区域为碱基135-182 ；成熟肽的编码区域为碱基183-2564。序列编号2 智人NELL-I的氨基酸序列。信号肽为残基1_16 ；成熟肽为残基 17-810。序列编号3 小鼠NELLl的核酸序列。信号肽的编码区域为碱基40-102 ；成熟肽的编码区域为碱基103-M72。序列编号4 小鼠NELLl的氨基酸序列。信号肽的编码区域为残基1_21 ；成熟肽为残基 22-810。序列编号5 大鼠NELLl的核酸序列。信号肽的编码区域为碱基59-121 ；成熟肽的编码区域为碱基122-M91。序列编号6 大鼠NELLl的核酸序列。信号肽为残基1_21 ；成熟肽为残基22-810。序列编号7 实施例中使用的载体序列。序列编号8 :V5标签和组胺酸标签(His标签)的核酸序列。序列编号9 :V5标签和组胺酸标签(His标签)的氨基酸序列。序列编号10 人类NELLl的原信号肽的氨基酸序列。序列编号11 蜜蜂毒肽(Honey Bee Mellitin)的信号肽的氨基酸序列。序列编号12 爪蟾(Xenopus) NELLl的核酸序列。序列编号13 爪蟾NELLl的氨基酸序列。序列编号14 :hHELLl片段的氨基酸序列。序列编号15 :hLAMA3片段的氨基酸序列。
序列编号16序列编号17序列编号18序列编号19序列编号20序列编号21序列编号22序列编号23序列编号24序列编号25序列编号沈序列编号27序列编号28序列编号四序列编号30序列编号3具体实施例方式以下对本发明进行说明。整个本说明书，有关单数形式的表达，在没有特别提示的情况下，应理解为也包含复数形式在内。因此，单数形式的冠词(例如，英语中的“a”、“an”、 “the”等)，在没有特别提及的情况下，应理解也包括复数形式在内。另外，本说明书使用的术语，在没有特别提及的情况下，应当理解为具有上述领域中常用的含义。再者，本说明书中使用的所有专用术语和科学技术术语，本领域技术人员应当理解为具有与一般理解的概念意思相同。在发生冲突时，优先本说明书(含定义)术语的意思。(术语定义)以下列举特别用于本说明书中的术语定义。在本说明书中，“NELL-1”是指Ting，K.等人发现的基因，NELL-I基因最初被鉴定为颅缝早闭症状的原因基因(专利文献1-4等)。同时，直到本发明人采用酵母双杂交(Yeast Two Hybrid)法，对作为蛋白质的 NELL-1 进行了表达(Kuroda, S.，Oyasu, M.， Kawakami, M. , Kanayama, N. , Tanizawa, K. , Saito, N. , Abe, Τ. , Matsuhashi, S. and Ting, K. (1999)Biochem. Biophys. Res. Commun. 265,79-86)。其后，在制作 NELL-1 基因过量表达的小鼠时，确认了颅缝早闭症状患者的表型。同时如果采用腺病毒，将NELL-I基因引入到小鼠骨先质细胞(Osteoprogenitor cell)MC3T3_El内，则可以确认细胞内作为早期骨分化的标记物的碱基磷酸酯酶的活性上升。在进一步分化细胞内，作为中期和后期标记物的骨桥蛋白(Osteopontin)、骨钙蛋白(Osteocalsin)的mRNA(信使核糖核酸)的表达会上升， 最终引了 NELL-I基因的细胞会被诱发产生钙沉淀。(Zhang，X. ,Kuroda, S.，Carpenter，D.， Nishimura, I. , Soo, C. , Moats, R. , Iida, K. , Wisner, Ε. , Hu, F. Y. , Miao, S. , Beanes, S., Dang, C. , Vastardis, H. , Longaker, Μ. , Tanizawa, K. , Kanayama, N. , Saito, N. and Ting, K. (2002) J. Clin. Invest. 18,2126-2134)。本说明书中，“NELL-1 ” 和 “NELL1 ” 可互换。
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:mLAMA3片段的氨基酸序列。 :hC0LAl片段的氨基酸序列。 :hTSPl片段的氨基酸序列。 顺向引物#2的序列。 顺向引物#3的序列。 顺向引物#4的序列。 顺向引物#5的序列。 逆向引物#2的序列。 逆向引物#3的序列。 逆向引物#4的序列。 逆向引物#5的序列。 :V5标签的序列。 组胺酸标签的序列。 实施例中使用的标签部分的序列。 顺向引物#1的序列。 逆向引物#1的序列。
在本说明书中，“能转变成具有NELL-I功能的物质”是指可产生NELL-I的物质。 例如，在本发明组合物等中使用了采用质体、病毒载体等的基因工程技术能够能够表达 NELL-I的物质。在本说明书中，通常“NELL-1”或“NELL1”可以理解为成熟序列的基因。因此，在本发明中，通常当出现“NELL-1”或“NELL1”时，应注意不包括信号序列(前导序列)。NELLl 的核苷酸序列具体如下(1)序列编号2、4、6或13(NELL1的氨基酸序列)示出的氨基酸序列；(2)序列编号2、4、6或13(NELL1的氨基酸序列)示出的氨基酸序列中，包含1或者多个置换、附加以及/或缺失，且表现出天然型NELLl的活性的氨基酸序列；以及(3)序列编号2、4、6或13 (NELL1的氨基酸序列)示出的氨基酸序列中至少有70% 相同性的氨基酸序列；以及(4)由序列编号1、3、5或12 (对NELLl进行编码的核酸序列)中示出的核酸序列或与其互补的核酸序列在严格的条件下杂交的核酸序列编码的氨基酸序列；(5)由序列编号1、3、5或12 (对NELLl进行编码的核酸序列)中示出的核酸序列或与其互补的核酸序列在中等程度的严格条件下杂交的核酸序列编码的氨基酸序列；(6)由序列编号1、3、5或12 (对NELLl进行编码的氨基酸序列)示出的氨基酸序列至少有70%相同性的核酸序列编码的氨基酸序列；(7) (1)-(6)的同源染色体或等位基因变异体。对NELLl进行编码的核酸或NELL基因可表示如下(1)对序列编号2、4、6或13(NELL1的氨基酸序列)中示出的氨基酸序列编码的核酸序列；(2)对序列编号2、4、6或13(NELL1的氨基酸序列)中示出的氨基酸序列中，含1 或者多个置换、附加以及/或缺失，且表现出天然型NELLl的活性的氨基酸序列进行编码的核酸序列；以及(3)对序列编号2、4、6或13(NELL1的氨基酸序列)示出的氨基酸序列中至少有 70%相同性的氨基酸序列进行编码的核酸系列；以及(4)序列编号1、3、5或12(对NELLl进行编码的核酸序列)示出的核酸序列和与其互补的核酸序列在严格的条件下杂交的核酸序列；(5)序列编号1、3、5或12 (对NELLl进行编码的核酸序列)中示出的核酸序列和与其互补的核酸序列在中等程度的严格条件下杂交的核酸序列；(6)序列编号1、3、5或12 (对NELLl进行编码的氨基酸序列)示出的氨基酸序列中至少有70%相同性的核酸系列；(7) (1)-(6)的同源染色体或等位基因变异体。在上述序列编号中，序列编号1是智人NELLl的核酸序列。对信号肽进行编码的区域为碱基135-182，对成熟肽进行编码的区域为碱基183-2564 ；序列编号2为智人NELLl 的氨基酸序列。信号肽为碱基1-16，成熟肽为残基17-810。序列编号3为小鼠NELLl的核酸序列。对信号肽进行编码的区域为碱基40-102 ； 对成熟肽进行编码区域为碱基103-M72 ；序列编号4为小鼠NELLl的氨基酸序列。信号肽为残基1-21，成熟肽为残基22-810。
序列编号5为大鼠NELLl的核酸序列。对信号肽进行编码的区域为碱基59_121， 对成熟信号肽进行编码的区域为碱基122-M91 ；序列编号6为大鼠NELLl的氨基酸序列。 信号肽为残基1-21，成熟肽为残基22-810。因此，在本发明中，本领域技术人员根据上述信号序列和成熟序列的信息，可以理解它们可用于本发明中。序列编号12和13为部分序列，但是，本领域技术人员根据上述信息，确定信号序列和成熟序列(即，是由相当于成熟部分的氨基酸构成的多肽或对多肽进行编码的核酸序列)，可以理解它们可用于本发明中。在本说明书中，“蛋白质”、“多肽”、“寡肽”以及“肽”作为相同词义使用，称为任意长度的氨基酸聚合物。这种聚合物可以为直链、分支或者环状。氨基酸可以是天然氨基酸， 也可以是非天然的氨基酸，还可以是改性的氨基酸。这种术语同时也包含与多个多肽链的复合体的组合，还包含天然或人工的改性氨基酸聚合物。这种改性，例如，产生二硫腱结缔、 糖苷化、脂质化、乙酰化、磷酸化或者任意其他操作的改性(例如与标识成分之间的结缔化)。在这种定义中还包含，例如，含有一个或两个以上氨基酸的类似物的多肽(例如，包含非天然的氨基酸等)、肽化合物(例如，庚糖)以及在该领域中公知的其他改性。在本说明书中，“氨基酸”仅限于满足本发明目的，天然和非天然都可。在本说明书中，“氨基酸诱导物”或者“氨基酸类似物”是指，与天然存在的氨基酸不同，但与原有氨基酸具有同样的功能。这种氨基酸诱导物以及氨基酸类似物在该领域中被众所周知。在本说明书中，氨基酸诱导物和氨基酸类似物可以理解为，只要可提供与氨基酸相同的生物学功能，就可以替代使用。在本说明书中，“天然氨基酸”表示天然氨基酸的L-同分异构体。天然氨基酸为，氨基醋酸、丙氨酸、缬氨酸(Valine(Val))、亮氨酸、异亮氨酸、丝氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸、脯氨酸、组氨酸、天门冬氨酸、天门冬氨、谷氨酸、谷氨、Y-羟基谷氨酸、精氨酸、鸟氨酸以及赖氨酸。在没有特殊明示的情况下，本说明书所称的全部氨基酸为L体，采用D体氨基酸的形式也在本发明的范围内。在本说明书中，“非天然氨基酸”是指，在蛋白质中，通常不能天然发现的氨基酸。 非天然氨基酸有，例如，正亮氨酸(norleucine)、副硝基苯丙氨酸、均质苯丙氨酸、副氟胞苯丙氨酸、3-氨基-2-苯甲丙酸、均质精氨酸的D体或L体以及D-苯丙氨酸。在本说明书中，氨基酸类似物不是氨基酸，而是与氨基酸性质和/或功能类似的分子。氨基酸类似物，例如，乙基硫氨酸(Ethionine)、刀豆氨酸、2-甲谷氨酸等。氨基酸类似物是指具有与一般的氨基酸化学结构不同的结构，与天然存在的氨基酸以同样的方式而发生作用的化合物。在本说明书中，“核酸”与基因、cDNA(互补脱氧核糖核酸)、mRNA、寡核苷酸和多核苷酸可以进行互换。特定的核酸序列同时还包括“剪接改变体”。同样，通过核酸而被编码的特殊蛋白质暗含因其核酸的剪接改变体而被编码的任意蛋白质。“剪接改变体”顾名思义，是基因的二选一式剪接产物。转录后，最初的核酸转录物可被剪接，剪接得到不同(其他)的核酸剪接产物以使对不同的多肽进行编码。剪接改变体的产生结构发生变化，但含有编码顺序的二选一式的剪接。通过读漏转录，来自相同核酸的另外的多肽也包括在定义内。剪接反应的任意产物(包括重组形式的剪接产物)包含在这个定义中，或者等位基因变异体也在此范围内。在本说明书中，“多核苷酸”和“寡核苷酸”以及“核酸”在本说明书中作为相同意思使用，称为任意长度的核苷酸的聚合物。这个术语同时包含“多核苷酸诱导物”或“寡核苷酸诱导物”。“多核苷酸诱导物”或“寡核苷酸诱导物”是指，包括核苷酸的诱导物，或者指核苷酸之间的结合与通常不同的多核苷酸或寡核苷酸适当地相互交换使用。这种寡核苷酸具体有，2’ -0-甲基核酸核苷酸、寡核苷酸中的磷酸二酯键结合因与磷酸酯结合而被变换成寡核苷酸诱导物；寡核苷酸中的磷酸二酯键结合因与N3’ -P5’脲酶抑制剂苯基的结合而被变换成寡核苷酸诱导物；寡核苷酸中的核糖与磷酸二酯键结合因与肽核酸结合而被变换成寡核苷酸诱导物；寡核苷酸中的尿嘧啶被C-5炔尿嘧啶置换的寡核苷酸诱导物；寡核苷酸中的尿嘧啶被C-5噻唑尿嘧啶置换的寡核苷酸诱导物；寡核苷酸中的胞嘧啶被C-5炔胞嘧啶置换的寡核苷酸诱导物；寡核苷酸中的胞核嘧啶被吩恶嗪(phenoxazine-modified cytosine)修饰的胞嘧啶置换的核苷酸诱导物；DNA中的核糖被2’_0_丙基核糖置换的寡核苷酸诱导物，以及寡核苷中的核糖被2’ -甲氧基乙氧基Q-methoxyethoxy)核糖中被变换成寡核苷酸诱导物。如果没有另外说明不是这样，那么特定的核酸序列同时也与明确表示的序列一样，表示包含因保存而改变的改变体(例如，兼并密码替换体)和互补序列。具体而言，兼并密码替换体是，通过作出在被选择的1个或1个以上的密码(或者所有的)的第 3个位置被混合碱基和/或脱氧次黄苷残基置换的序列得以实现。(Batzer等人，Nucleic Acid Res. 19 :5081(1991) ；Ohtsuka 等人，J. Biol. Chem. 260 :2605-2608 (1985) ；Rosslini 等人，Mol. Cell. Probes 8 :91-98 (1994))。在本说明书中，“核苷酸”可以是天然的也可以是非天然的。“核苷酸诱导物”或者 “核苷酸类似物”是指与天然存在的核苷酸不同，但是与原来的核苷酸具有同等功能。这种核苷酸诱导物和核苷酸类似物在该技术领域中被众所周知。这些核苷酸诱导物和核苷酸类似物的例子包括但不限于，磷硫酰(phosphorothioate)、氨基磷酸酯(phosphoramidate)、 膦酸甲酯(methylphosphonate)、手性膦酸甲酯(chiral methylphosphonate)、2，_0_ 甲基核糖核苷酸还原酶、肽核酸(PNA，peptide nucleic acids)。在本说明书中的“检索”是指，通过电子手段或生物学或者其他方法，利用某个核酸碱基序列，发现具有特定功能和/或性质的其他核酸碱基序列。电子检索可以是但不限于 BLAST (Altschul 等人，J. Mol. Biol. 215 :403-410 (1990) )、FASTA (Pearson & Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. ，USA85 :2444-2448 (1988))、Smith_Waterman 法(Smith 禾口 Waterman， J. Mol. Biol. 147 :195-197 (1981))、和 Needleman-Wunsch 法(Needleman 和 Wunsch，J. Μο -β ο . 48 :443-453 (1970)) 等。生物学检索可以是但不限于将严格杂交、染色体组DNA粘贴到尼龙膜等上的宏阵列、或者粘贴到玻璃板上的微阵列(微阵列测定)、PCR和原位杂交等。 在本说明书中，本发明所使用的基因，可以理解为也应包括通过这种电子检索、生物等检索方式而确定的对应基因。在本说明书中，用于杂交的“严格条件”是指，对于靶环状序列具有类似性或相同性的核苷酸链的互补链在靶环状序列中优先杂交，而不具有类似性或相同性的核苷酸链的互补链实际上不进行杂交的条件。某种核酸序列的“互补链”是指，通过与核酸碱基中的氢结合来配对的核酸序列(例如，A对T，G对C)。严格条件是与序列相互依存，同时在各种情况下各为不同。较长序列在更高温度下，发生特异性杂交。一般来说，严格条件是，选择与规定了离子强度以及PH的特定序列相比热溶解温度(Tm)大约要低5°C。Tm是在规定的离子强度、PH以及核酸浓度下，靶环状序列互补的50%核苷酸在平衡状态下与靶环状序列杂交的温度。“严格条件”具有序列依存性，同时因各类环境参数而异。在TijSSen(TijSSen(1993)、 Laboratory Technniques In Biochenistry And MolecularBiology-Hybridization With Nucleic Acid Prebes Part I、第 2 章"Overview of principles of hybridization and the strategy ofnucleic acid probeassay (杂交原则与核酸探测策略概述)”、Elsevier， New York)中发现了核酸杂交的一般原则。代表性地，严格条件是，盐浓度大约低于1. OM Na+，有代表性地，在pH7. 0-8. 3中大约0. 01-1. OM的Na+浓度(或其他盐)，同时，较短的核苷酸(例如，10-50核苷酸)温度至少大约30°C，另外，较长)的核苷酸(例如，长于50的核苷酸至少约60°C。严格条件还通过添加类似甲酰胺等不稳定的药剂而实现。本说明书中的严格条件例如有，50%的甲酰胺、 IM的NaCl、1%的SDS(37°C )缓释溶液中的杂交，以及在0. IXSSC中60°C清洗。在本说明书中，“在严格条件下杂交的多核苷酸”是指在该技术领域中众所周知的惯用的条件。从本发明的多核苷酸中选择的多核苷酸作为探头，通过采用菌落杂交法、斑块杂交法或者南方杂交法(Southern blotmethod)等可以获得这样的多核苷酸。具体是指， 采用对来源于菌落或斑块的DNA进行固定的过滤器，在存在0. 7-1. OM的NaCl的条件下，在 65°C条件下进行杂交后，采用0. 1-2倍浓度的柠檬酸钠(SSC，saline-sodium citrate)溶液(1倍浓度的SSC溶液的组成成分为150mM氯化钠、15mM柠檬酸钠)，在65°C条件下通过清洗过滤器，鉴定多核苷酸。杂交可根据Molecular Cloning 2nd ed. , Current Protocols in Molecular Biology,Supplement 1-38>DNA Cloning 1 :Core Techniques,APractical Approach(DNA 克隆 1 核心技术，一种实用方案)，Second Edition, Oxford University Press (1995)等实验报告记载的方法进行。在这里，在严格条件下杂交的序列中，优选排除只含有A或T的序列。“可杂交的多核苷酸”是指，在上述杂交条件下，可在另外的多核苷酸上进行杂交的多核苷酸。可杂交的多核苷酸例如有以下几种，具体是，与对含有在本发明中具体示出的氨基酸序列的多肽进行编码的DNA具有至少60%以上相同性的多核苷酸，优选地具有80%以上相同性的多核苷酸、具有90%以上相同性的多核苷酸；进一步优选地具有 95%以上相同性的多核苷酸。在本说明书中，“高等程度的严格条件”是指如以下方式设计的条件在核酸序列中具有高互补性的DNA链可进行杂交，同时除去具有非偶然性不匹配的DNA的杂交。杂交的严格程度主要由温度、离子强度以及甲酰胺这样的变性剂的条件决定。这种杂交和清洗相关的“高等程度的严格条件”的实例是0. 0015M氯化钠、0. 0015M柠檬酸钠、65-85°C或者 0. 015M的氯化钠、0. 0015M柠檬酸钠以及50 %的甲酰胺、42°C的条件。这种高等程度的严格条件可参照 Sambrook 等人，Molecular Cloning :A Laboratory Manual (分子克隆实验室手册)，第 2 版，Cold Spring Harbor Laboratory (Cold Spring Harbor, N. Y. 1989(1989 ^■ΨΜ^ )) Anderson ^A>Nucleic Acid Hybridization :a Practical approach ( 酸杂交:一种实用方案)，IV，IRL Press Limited (Oxford，England (英国牛津)).Limited， Oxford,England.必要时，还可以使用更高的严格条件(例如，更高温度、更低的离子强度、 更高的甲酰胺或其他变性剂)。其他药剂是以减少非特异性的杂交和/或背景杂交为目的，含有杂交缓冲液和清洗缓冲液。其他药剂的实例有，0. 牛血清白蛋白、0. 聚乙烯基吡咯烷酮、0. 焦磷酸钠、0. 十二烷基硫酸钠(NaDodSo4或SDQ、Ficoll (聚蔗糖)、 Denhardt溶液、超声波处理的鲑鱼精子DNA(或者另外的非互补性DNA)，以及硫酸葡萄聚糖，但同时也可使用其他适当的药剂。这些添加物浓度以及形式对杂交条件的严格程度没有实质影响而进行变更。杂交试验通常在PH 6. 8-7. 4下进行，但在具有代表性的离子强度下，杂交速度基本是PH保持独立。请参照Anderson等人，Nucleic Acid Hybridization a Practical Approach (核酸杂交一种实用方案)，第 4 章，IRL Press Limited (Oxford, England(英国牛津))。对DNA双重链的稳定性有影响的因素例如有，碱基的构成、长度以及碱基对不一致的程度。杂交条件可由业内人士进行调整，同时还可适用这些变量，产生不同序列相关的 DNA进行杂交。完全一致的DNA双重链的溶解温度，通过以下算式估算出来。Tm(°C ) = 81. 5+16. 6(log[Na+]+0. 41(% G+C)-600/N-0. 72(% 甲酰胺)其中，N为产生的双重链的长度，[Na+]是杂交溶液或清洗溶液中的钠离子摩尔浓度，％G+C是杂交中(鸟嘌呤+胞核嘧啶)碱基中的百分比。有关不完全一致的杂交，溶解温度与各不一致(不匹配)的相比，大约减少1°C。在本说明书中，“中等程度的严格条件”是指，与“高等程度的严格条件”产生得到的具有高等程度的碱基对不一致的DNA双重链形成的条件。具有代表性的“中等程度的严格条件”的实例是，0. 015M氯化钠、0. 0015M柠檬酸钠、50-65°C，或者0. 015M氯化钠、 0. 0015M柠檬酸钠以及20%甲酰胺、37-50°C。例如，在0. 015M钠离子中，50°C的“中等程度的严格条件条件”可容许大约21%的不一致。在本说明书中，本领域技术人员应当理解为，高等程度的严格条件与中等程度的严格条件之间的完全区别并不存在。例如，在0.015M钠离子(无甲酰胺)中，完全一致较长的DNA溶解温度大约为71°C。在65°C (同样离子强度)下清洗，可以容许大约6%不一致。为了获得更远的相关序列，本领域技术人员可以单纯下降温度或者上调离子强度。大约20个核苷酸以下的寡核苷酸探头，在IM NaCl中溶解温度的确切估算为Tm=(每个A-T碱基，2°C) +(每个G-C碱基对，4°C)。值得注意的是，6X柠檬酸钠 (SSC)中的钠离子浓度为 IM(请参照 Suggs 等人Developmental Biology Using Purified Genes (纯基因的发育生物学)，683页，Brown以及Fox编(1981))。序列编号*氨基酸序列的多肽或其改变体或者对片段等进行编码的核酸是与以下内容进行杂交本质上牛血清白蛋白(BSA)、500mM磷酸钠(NaPO4)UmM EDTA、42°C温度下含7% SDS的杂交缓冲液、以及2XSSC(600mMNaCl，60mM柠檬酸钠)、50°C下含0. 1% SDS的清洗缓冲液中定义的低等程度的严格条件；进一步优选在50°C温度下牛血清白蛋白、(BSA)，500mM磷酸钠(NaPO4) ；15%甲酰胺、ImM EDTA、含7% SDS的杂交缓冲液、以及 50°C的lXSSC(300mM NaCl ；30mM柠檬酸钠)、含SDS的清洗缓冲液中定义的低等程度的严格条件，优选50°C的温度下牛血清白蛋白(BSA) ；200mM磷酸钠(NaPO4)、15%的甲酰胺、ImM EDTA、含7% SDS在内的杂交缓冲液、以及65°C下0. 5XSSC(150mM NaCl ；15mM柠檬酸钠)、含SDS在内的清洗缓冲液中定义的低等程度的严格条件下序列表显示的1个序列或其一部分。本说明书中提及的氨基酸书写形式，根据公认的3个文字符号或者IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission (IUPAC-IUB 生物化学命名委员会)推荐的 1 个文字符号中的任意一个。同样，核苷酸也通过通常认知的1个文字符号提及。本说明书中所指基因的“相同性”是指，2个以上的基因序列的、互为同一性的程度。因此，某两个基因的相同性越高，这些序列的同一性或类似性也越高。两种基因是否具有相同性，在对序列直接进行对比，或者在核酸环境的严格条件下，通过杂交法调查可得。 在对2个基因序列进行直接对比、DNA在基因序列之间中代表性地至少有50%为同一时、优选至少有70%为同一时、进一步优选至少80%、90%、95%、96%、97%、98%、或99%同一时，这些基因具有相同性。在本说明书中，采用序列分析用工具BLAST和缺省参数计算出氨基酸序列和碱基序列的类似性、同一性以及相同性的对比。同一性的检索，例如，可采用NCBI的BLAST 2.2.1K2004.5. 12发行)进行。本说明书中同一性的数值，通常采用上述BLAST，是在缺省条件下匹配后的数值。但是，通过参数变更，当出现更高数值时，将最高数值列为同一性的数值。在多个领域中评估同一性时，将其中的最高值作为同一性的数值。在本说明书中，“对应的”氨基酸是指，在某种蛋白质分子或者多肽分子中，与对比标准的蛋白质或多肽中规定的氨基酸具有同等作用，或者预测到具有同等作用的氨基酸。在本说明书中，“进行对应”的基因是指，在某一物种中，与对比标准的物种所规定的基因具有同等作用，或预测到具有同等作用的基因。当存在较多具有同等作用的基因时， 在进化学上称之为具有相同起源的基因。因此，某基因(例如NELL1)对应的基因可以是该基因的邻位异构体。因此，智人基因对应的基因在其他动物(小鼠、大鼠、猪、兔子、豚鼠、 牛、羊等)中也可找到。这种对应基因在该技术领域中采用常用技术认定。因此，例如，某种动物对应的基因是，将对应基因的标准基因的序列作为排除序列，以检索其他动物(例如， 小鼠、、大鼠、猪、兔子、豚鼠、牛、羊等)序列的数据库形式即可找到。在本说明书中，“片段”或者“fragment”是指，相对于全长的多肽或者多核苷酸 (长度为η)，具有1 η-1的序列长度的多肽或者多核苷酸。片段的长度根据其目的可适当进行变更。例如，多肽的长度下限，可列举如下，3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50 及其以上的氨基酸。这里未具体列举的整数表示的长度(例如，11等)也可适当作为长度下限。同时，多核苷酸的长度下限，可列举如下，5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、75、100 及其以上的核苷酸，这里未具体列举的整数表示的长度(例如，11等)也可适当作为长度下限。在本说明书中，多肽或者多核苷酸的长度，如上述，通过各氨基酸或核酸的个数进行表示，但是上述个数不是绝对个数，在具有相同功能的情况下，上述上限或下限个数包含其个数的上下范围，如上下10%。为了体现这种意思，在本说明书中，有时在个数前面加上“大约”。但是，在本说明书中，是否有“大约”字样对数值说明不构成影响的。在本说明书中， 有用的“片段“长度，是在该片段的标准全长蛋白质的功能中，由至少是否可保持一个功能来决定。在本说明书中，“相同性”表示在2个或2个以上的序列对比中，表示这些序列在进化学上共有祖先。2种基因是否具有相同性，通过直接对比序列，就可做出基于类似性的判定，或者在严格的条件下，通过杂交法调查可得。通过直接对比序列，可以做出以下判断在做出基于类似性的判定时，在对其类似性测量过程的调整中，最为单纯的解释是，同一(或者等价)字符串(碱基、氨基酸残基等)中并列的字符串表示这种领域一直都是祖辈序列而没有发生变化；不同一(或不等价)字符串的突然变异是在一方的序列中引发的。调整中的裂缝是在序列一方是因插入或缺失而引发的裂缝。即，这些序列的同一性或类似性较高，可以理解为暗示了这些序列中明显出现相同性。相同性可参照抑制剂的设计。本说明书中的“互补”或“互补体”术语，在本说明书中，表示全体互补区域可直接产生另外特定的多核苷酸和Watson&Crick (沃森&克里克)碱基对的多核苷酸序列。鉴于本发明的目的，当第1多核苷酸的各碱基与其互补碱基呈现一对时，视为这种第1多核苷酸与第2多核苷酸为互补。互补碱基一般为A和T(或A和U)，或C和G。在本说明书中，与 “互补”一词作为同义词使用的有“互补多核苷酸”、“互补核酸”、以及“互补核苷酸序列”。 这些术语仅根据其序列，为适用于多核苷酸的成对，事实上并不适用两个多核苷酸在结缔状态下特定成组。在本说明书中，“改变体”是指相对于原来的多肽或者多核苷酸等物质而已经变更的一部分。这种改变体例如有置换改变体、附加改变体、缺失改变体、缩短改变体 (truncated)、等位基因变异体等。等位基因(allele)是指属于同一基因座，相互区分的遗传性改变体。因此，“等位基因变异体”是指针对某个基因，处于等位基因关系的改变体。 “物属相同体或同源染色体(homolog) ”是指在某个物种中，在与某种基因和氨基酸水准或核苷酸水准中，具有相同性(优选60%以上的相同性；进一步优选60%、80%、85%、90%以上、95%以上的相同性)的相同体或同源染色体。取得这种物属相同体的方法在本说明书中已有明确记载。邻位异构体(ortholog)也称为共祖基因(orthologous gene)，是指从有两个基因的共同祖先进行物种变化的基因。例如，以具有多重基因结构的血红蛋白基因家族为例，智人和小鼠的α血红蛋白基因是邻位异构体，但智人的α血红蛋白基因和β血红蛋白基因是基因重复(基因重复产生的基因)。邻位异构体有利于推定分子系统进化树， 所以也被应用于本发明中。在本说明书中，“保存性(改变)的改变体”适用于氨基酸序列和核酸序列两者。 有关特定的核酸序列，保存性的改变体是指，对同一的或本质上同一的氨基酸序列进行编码的核酸，在当核酸不对氨基酸序列进行编码时，称为本质上同一的序列。这种碱基序列的改变方法例如有特异碱基置换法(特定部位指向突然变异法Mark hller和Michael Smith, Methods in Enzymology，100，468-500 (198 )，但除此之外，还有通常在分子生物学领域中的方法上所做的改变，其中，特异碱基置换法使用通过限制酶等进行的切断、DNA 聚合酶、Klenow片段、DNA连接酶等处理对连接进行的处理、合成寡核苷酸等。因遗传编码缩合，有多种功能的同一核酸对任意规定的蛋白质进行编码。例如，密码子GCA、GCC、GCG以及G⑶全部对氨基酸丙氨酸进行编码。因此，丙氨酸由密码子特定的所有位置上，其密码子对被编码的多肽不进行变更，变更为被记载的任意对应的密码子。这种核酸的变动是保存性改变变异的一种，即，静默变异。本说明书中，对多肽进行编码的所有核酸序列同时记载有其核酸所有可能的静默变异。在该技术领域中，核酸中的各密码子(不包括通常产生蛋氨酸的唯一密码子AUG，以及通常产生色氨酸唯一的密码子TGG)可理解为，功能性地产生同一分子而得到改变。因此，对多肽进行编码的核酸中各隐性变异暗含在被记载的各序列中。优选这种变异通过避免半胱氨酸的置换来实现的，半胱氨酸是对多肽的高级结构造成较大影响的氨基酸。某种氨基酸因相互作用结合能力明显下降或没有消失，例如，在类似配位体分子结合部位的蛋白质结构中，可替换为其他氨基酸。规定某种蛋白质的生物学功能的是蛋白质的相互作用和性质等。因此，特定氨基酸的置换可在氨基酸序列或者在其DNA编码序列中进行，置换后，还同时产生维持原有性质的蛋白质。因此，在没有明显损失生物学的有效性时，在本说明书中公开的肽或对肽进行编码的对应DNA中都可进行各种改变。在对上述的改变进行设计时，需要考虑氨基酸的疏水性指数。疏水性指数赋予蛋白质中相互作用时的生物性功能，其重要性在该技术领域中已经得到公认(Kyte. J以及 Doolittle, R. F. J. Mol. Biol. 157(1) 105-132，1982)。氨基酸的疏水性特性是指首先有助于已生成的蛋白质的二次结构，其次还规定了蛋白质与其他分子(例如，酶、基质、受体、 DNA、抗体、抗原等)的相互作用。各氨基酸根据这些疏水性和电荷性质，被分成各种疏水性指数。这些疏水性指数是异亮氨酸(+4. 5)、缬氨酸(+4. 2)、亮氨酸(+3. 8)、苯丙氨酸 (+2. 8)、半胱氨酸(+2. 5)、蛋氨酸(+1.9)、丙氨酸(+1.8)、甜氨酸(-0. 4)、苏氨酸(-0. 7)、 丝氨酸(-0.8)、色氨酸(-0.9)、酪氨酸(-1.3)、脯氨酸(-1.6)、组氨酸(-3. 2)、谷氨酸 (-3. 5)、谷酰胺(-3. 5)、天冬酰胺酸(-3. 5)、天冬酰胺(-3. 5)、赖氨酸(-3. 9)、以及精氨酸 (-4. 5)。众所周知，在该领域中，由具有同等疏水性指数的其他氨基酸对某种氨基酸进行置换，依然能产生具有同等生物学功能的蛋白质(例如，在配位体结缔能力中具有等价的蛋白质)。在这种氨基酸置换中，优选疏水性指数在士2以内；进一步优选士 1以内；更进一步优选在士0. 5以内。在该技术领域中，可以理解为，这种根据疏水性氨基酸的置换是有效的。据美国专利第4，554，101号记载，亲水性指数在氨基酸中分配如下精氨酸(+3. 0)、萘氨酸(+3.0)、天冬酰胺酸(+3. O 士 1)、谷氨酸(+3. O 士 1)、丝氨酸(+0.幻、天冬酰胺(+0. 2)、 谷酰胺(+0. 2)、甜氨酸(0)、苏氨酸(-0.4)、脯氨酸(_0.5士1)、丙氨酸(-0. 5)、组氨酸 (-0. 5)、半胱氨酸(-1. 0)、蛋氨酸(-1. 3)、缬氨酸(-1. 5)、亮氨酸(-1. 8)、异亮氨酸(-1. 8)、 酪氨酸(-2. 3)、苯丙氨酸(-2. 5)以及色氨酸(-3. 4)。这可以解释为，氨基酸是可置换成具有同样疏水性指数、且依然能赋予生物学等价体的另外一种氨基酸。在这种氨基酸的置换中，优选疏水性指数在士0. 2以内；进一步优选在士0. 1以内；更进一步优选士0. 5以内。在本发明中，“保存性置换”是指，在氨基酸置换中，与被原来的氨基酸置换的氨基酸亲水性指数或/和疏水性指数类似于上述情况的置换。如本领域技术人员所知，保存性置换的实施例例如包括但不限定以下各组置换精氨酸和萘氨酸、谷氨酸和天冬酰胺酸、丝氨酸和苏氨酸、谷氨和天冬酰胺、以及缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸等。在本说明书中，为了制作功能性等价的多肽，除了可以置换氨基酸外，还可以对氨基酸进行附加、缺失、或修饰。氨基酸的置换是指，使用1个以上，如1-10个，优选1-5个、 进一步优选1-3个氨基酸对原来的肽进行替换。氨基酸的附加是指，在原来的肽链上附加一个以上，如1-10个，优选1-5个、进一步优选1-3个氨基酸。氨基酸的缺失是指，从原来的肽中缺失1个以上，例如1-10个，优选1-5个、进一步优选1-3个氨基酸。氨基酸的修饰是指，包含但不限于酰胺化、羧化、硫酸化、卤素化、烷基化、磷酸化、氢氧化、酰化(例如，乙酰化)等。被置换或附加的氨基酸可以是天然氨基酸、也可以是非天然氨基酸或者氨基酸模拟。但是优选天然氨基酸。这种核酸可以通过众所周知的PCR法得到，也可以通过化学合成方式得到。在这些方法中，例如，还可以组合部位特异变法、杂交法等。在本说明书中，多肽或多核苷酸的“置换/附加和/或缺失”是指，对于原来的多肽或者多核苷酸分别用氨基酸或其替代物、核苷酸或其替代物进行替换、附加、或者去除。在该技术领域中，这种替换、附加和/或缺失的技术被众所周知，技术实例例如有部位特异技术。在标准的核酸分子或多肽中的这些变化，只要在保持了原有功能(例如，骨化等)的情况下，可在这种核酸分子的5’末端或3’末端中产生，或者在显示这种多肽的氨基酸序列的氨基酸末端部位之间的任何地方产生，在标准序列中的残基之间也到处分散。替换、附加或缺失，只要在1个或一个以上，可为任意个数，这些数值在具有置换、附加或缺失的改变体中，只要保持原来功能(例如，AGE的识别功能等)的情况下，可为很多。例如，这种个数， 可以是1个或数个，并且优选是全长的20%以内、15%以内、10%以内、5%以内、或者150个以下、100个以下、50个以下、25个以下等。在本说明书中，“细胞”的含义与该领域中常用的最广泛的含义相同，是构成活体形式上和/或功能上的基本单位。在本说明书中，“组织”的含义与该领域中常用的最广泛的含义相同，是实质具有同一形式、功能的细胞集合。在动物上，被区分为上皮组织、结缔组织、肌肉组织、神经组织寸。在本说明书中，“器官”的含义与该领域中常用的最广泛的含义相同，在多细胞生物中，组织集中具有特定形式，是发挥呼吸、排泄、消化等特殊功能的一部分。在本说明书中的“器官”和普通意义上的“器官”可进行替换。在本说明书中，“异位产生”是指，细胞、组织或器官产生在原本不存在的位置上。 异位产生的实施例例如包括但不限于在脂肪组织中产生造血组织、在脂肪组织中产生上皮组织、在肌肉组织中产生造血组织、在肌肉组织中产生上皮组织。在本说明书中，“维持”细胞、组织或器官是指，细胞、组织和器官一直保持其形式以及至少存在部分功能。在本说明书中，“脂肪组织以及有维持脂肪组织的血管环境”是指，存在脂肪组织以及存在用于维持其脂肪组织形式和功能的血管环境。例如有腹部皮下脂肪组织中下腹部动静脉分支部的周边环境。在本说明书中，“肌肉组织以及有维持其肌肉组织的血管环境”是指，维持肌肉组织以及用于维持其肌肉组织形式和功能的血管环境。例如，大腿部肌肉组织中动静脉的环
^Mi ο在本说明书中，“具有一定分化方向的细胞”是指，已确定特定的细胞分化且在分化阶段中存在的细胞。例如，在本说明书中，存在于组织中的成体干细胞以及构成组织细胞的前驱细胞等。在本说明书中，“干细胞”的含义与该领域中常用的最广泛的含义相同，是经过细胞分裂，维持具有相同分化功能的细胞。在本说明书中，“成体干细胞”的含义与该领域中常用的最广泛的含义相同，是所有组织和器官经常进行吸收和再构造，由此产生被发现的组织的原有细胞。在本说明书中， “成体干细胞”和“组织干细胞”以及“成体干细胞”可进行交换使用。成体干细胞包括但不限于存在于例如造血组织、上皮组织、结缔组织、肌肉组织、神经组织的成体干细胞。成体干细胞是在ES细胞和iSP细胞中常见的万能干细胞中，在某种程度上具有分化方向的细胞。因此，用造血干细胞、间质系列干细胞、神经干细胞等主要组织对其进行命名。但是，据预测，成体干细胞也引发去分化(逆行分化)。例如，有报告称，在临床实施的骨髓移植中，“造血干细胞”移植后，在被移植人的肝脏中检测出供体组织(Alison MR, Hepatocytes from non_h印aticadult stem cells.(非肝成体干细胞中的肝细胞)， Nature. 2000Jul 20 ；406 (6793) :257)。因此，不仅是成体干细胞，连成体干细胞或万能干细胞也会分化产生“造血干细胞”，进而分化成血细胞。本发明可以适当使用这些干细胞。存在于这些造血组织中的成体干细胞，例如，有造血干细胞、骨髓干细胞等。存在于上皮组织中的成体干细胞是一种上皮组织中具有分化方向的干细胞，还是一种具有自我修复能力和多分化能力的上皮细胞的母细胞。存在于上皮组织中的成体干细胞例如有包括腺原细胞、毛根所含的细胞。这种存在于上皮组织中的成体干细胞，如，可分化成腺细胞或毛根细胞。本说明书中的“造血干细胞”是指具有自我修复能力和多分化能力的血液细胞的母细胞。例如，在颗粒状菌落刺激因子(G-CSF)等细胞因子上，包含一种由骨髓流到末梢血内的母细胞，以及分化所有血液细胞(具有全能性)的母细胞等。造血干细胞，例如，可用于治疗白血病患者(例如，造血干细胞移植)等。造血干细胞移植始于原来的骨髓移植。60年代后半期，经过大量化疗法之后，从HLA —致的兄弟上移植骨髓，结果发现，患者的血液细胞全部变成了来自供体的血液细胞，由此出现了骨髓移植方案。之后，如果向G-CSF投药，则在末梢血液中明显出现了骨髓。采用G-CSF实施的末梢血干细胞移植是从90年代开始进行的。进而，在同一时期，发现脐带血中含有很多的造血细胞，主要针对儿童实施了脐带血移植。本发明可以适当利用这些干细胞的相关技术。在本说明书中，“造血组织”的含义与常用的最广泛的含义相同，是产生并发展各种血细胞和有形成分的组织。在本说明书中，“造血系统”的细胞、组织或器官的含义与该领域中常用的最广泛的含义相同，为构成造血组织的各类细胞、组织或器官的总称。在本说明书中，“上皮组织”的含义与该领域中常用的最广泛的含义相同，为覆盖动物体表面以及体内器官表面等的细胞层。在本说明书中，“上皮系统”的细胞、组织或器官的含义与该领域中常用的最广泛的含义相同，是为产生上皮的细胞、组织或器官的总称。在本说明书中，“腺原细胞”是指存在于担负分泌作用的细胞集合体中，在上皮组织具有一定分化方向的干细胞。在本说明书中，“毛根所含细胞”是指毛发埋在毛囊内的部分所含细胞。这种毛根所含细胞是在毛根上含有分化方向的细胞。在本说明书中，“外分泌腺”的含义与该领域中常用的最广泛的含义相同，是指分泌物从导管排出到体表的腺。外分泌腺例如有汗腺、脂腺、胃腺、肠腺、唾液腺等。所有的腺组织从具有分泌能力的圆柱、立方形的上皮构成，分泌物因各组织(器官)的差异而有所不同。因此，从期望的器官摘除分泌腺，放置在本发明的活体内培养器上，就可得到期望的外分泌腺。在本说明书上，“结缔组织”是指在该技术领域中，被同样采用最为广泛的意思，由支撑动物身体、构成骨头的组织以及各种细胞纤维和基质组成的组织。结缔组织来源于中胚层产生的间质。结缔组织包括例如淋巴组织、软骨、骨头等。
在本说明书中，“肌肉组织”的含义与该领域中常用的最广泛的含义相同，是对于外来刺激可进行收缩的组织。肌肉组织与骨骼肌、心筋、平滑肌组织等相区别。在本说明书中，“神经组织”的含义与该领域中常用的最广泛的含义相同，为构成神经系统的组织。神经组织由传达兴奋(信号)的神经组织和传达兴奋信号的神经胶质等构成。在本说明书中，“支架”是指为了目标物做基础而存在的物体。例如，空间性支架或者因发挥某种作用而做支撑的支架。在本说明书中，支架具有适应活体的特性，为生化物质或天然供给物质、天然存在的物质或组合物所制造。在本说明书中，“支架”区分为“功能支架”和“缓释支架”。在本说明书中，“功能支架”是指作为细胞、组织等支架的物体。在一种实施方式中，用于本发明的功能支架，例如，可以是活体内的组织(例如，脂肪组织等)，也可为结构支架。在本说明书中，“缓释支架”是指用于支撑NELL-I的缓释材料。在一种实施方式中，用于本发明的缓释支架，例如，包括但不限于细胞外基质(如，骨胶原海绵、去端肽胶原等)。因为细胞在产生进一步被分化诱导的细胞、组织、器官之际，能够保持NELL-1，并在细胞内提供。在本说明书中，“细胞外基质(ECM) ”的含义与该领域中常用的最广泛的含义相同， 是一种填充细胞外空间的超分子结构。细胞外基质包括但不限于骨胶原、去端肽胶原、粘蛋白(例如，软骨素硫酸粘蛋白、乙酰硫酸粘蛋白、角蛋白硫酸粘蛋白、软骨素硫酸粘蛋白)、 透明质酸、粘连蛋白、昆布氨酸、肌腱蛋白、巢蛋白、弹性蛋白、纤维蛋白等。本说明书中的 “细胞外基质”可用于交换。本说明书中的“骨胶原”的含义与该领域中常用的最广泛的含义相同，为动物细胞外基质的主要成分。在本发明中，骨胶原可使用株式会社白鹏、销售商白水贸易株式会社 (大阪市)等处提供的骨胶原海绵、胶原和去端肽胶原，其他地方提供的骨胶原也可用于本发明。在本说明书上，“医疗器具”是指以改善身体功能或以医疗处置为目的，用于治疗 (如治疗、手术等)方面的器具。本发明所使用的医疗器具，能维持NELL-1，且使之在细胞、 组织、器官上发生作用的器具即可。本发明所使用的医疗器具由活体适应性材料制作，且可移植到活体内的形状优选为大尺寸，以期不产生免疫排异反应。在本说明书中，“活体培养器”是指含模具(如硅模具)、NELL-1，以及带蒂组织片的器具。在本说明书中，“带蒂组织片”是指含组织片以及维持该组织片的血管在血流不受阻碍状态下的结构。带蒂组织片例如有脂肪组织以及维持脂肪组织的血管、肌肉组织以及维持肌肉组织的血管等。如果能满足以上特征，那么也可用于除上述以外的组织机构。从理论上并没有限制，但如果满足上述特点，那么可通过血流向组织提供酶，并被抑制坏死， 同时提供已有特定分化方向的细胞。在这种活体培养器中，可含有缓释性排放NELL-I的功能支架(如，骨胶原海绵、去端肽胶原等)。这是因为，活体培养器在需要进一步对细胞(例如，成体干细胞)进行分化诱导的期间，只要在向该细胞提供NELL-1，那么就可产生进一步被分化诱导的细胞。S卩，如果持续为细胞提供NELL-I的话，那么任何提供方式都可以。在一种实施方式中，通过直接添加(如注入)带蒂组织片的一部分(如，脂肪组织)，就可提供NELL-I。本发明中使用的活体培养器为活体适应材料制作，且为可移植到活体内的形状， 优选是大尺寸，以期不引起免疫排异反应。在本说明书中，“模具”是指可移植到活体内的容器。在本说明书中，为硅制作的模具。模具可制成与移植处器官形态相符。例如，可制作并利用大鼠骨尖形状的物体以及用黏土制成的松子状模具。这是因为模具只要保持NELL-I并使之在细胞、组织、器官上发生作用即可。在本发明中使用的模具为活体适应材料制作，且为可移植到活体内的形状，优选是大尺寸，以期不引起免疫排异反应。(较佳的实施方式)以下对本发明较佳的实施方式进行说明。以下提供的实施方式是为方便理解而提供的，本发明范围不应只限于以下说明的内容。因此，本领域技术人员可对本说明书的内容进行斟酌，并在本发明范围内进行适当改变。(用于分化诱导的组合物)在一种场合中，本发明提供对具有一定分化方向的细胞进行分化诱导，并产生在该分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官的组合物。这种组合物包含NELL-I或分化时能转变成具有NELL-I功能的物质。根据本发明的组合物，可产生任何器官。据Ogawa K, Living donor liver transplantation with reduced monosegments for neonates and small infants, transplantation(新生儿和小婴儿的降低单片段的活体供体肝脏移植).2007May 27；83(10) :1337-40记载，在临床进行的小儿肝脏移植后，供体肝脏或受血者肝脏中，可能存在已在肝脏中分化的成体干细胞。因此，本发明中异位组织分化或肝脏组织片的维持、增殖不受理论限制，可以考虑与NELL-I接触的组织(含移植片)中存在的细胞不断重建，自身细胞反复增殖的可能性，或者包含在组织片中的未分化细胞会增殖。本说明书中具有一定分化方向的细胞可以是任何细胞。这不受理论限制，但用于本发明的NELL-I对于已确定有分化方向的细胞要产生作用，对其细胞进一步分化诱导，所以针对的细胞只要是确定有分化方向的细胞，无论什么样的细胞都可以。在一种实施方式中，NELL-I或在分化时能转变成具有NELL-I功能的物质，包含但不限于，如，采用质体、病毒载体等基因工程学技术来表达NELL-I的物质。对于已有特定分化方向的细胞，如果只要NELL-I产生作用，就可进一步对其细胞进行分化诱导。在一种实施方式中，本发明的组合物可以是一种在脂肪组织以及在有维持脂肪组织的血管环境下，异位产生在分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官的组合物。在较好的实施方式中，脂肪组织以及在维持有脂肪组织的血管环境包括但不限于，如，类似腹部皮下脂肪组织的下腹部壁动静脉分支部周边环境的环境。yg在本发明中，优选有脂肪组织环境的理由是，虽然在理论上不受限制，但是来源于脂肪组织的干细胞(Zuk PA, Multilineage cells from human adipose tissue ；implications for cell-based therapies (人脂肪组织中的多能细胞；用于基于细胞的治疗).Tissue Eng. 200IApr ；7 (2) :211-28)可能通过NELL-I有可能被分化诱导。脂肪组织内常见的成体干细胞有可能分化为中胚叶性组织(生成脂肪、产生软骨的肌原细胞和骨生成细胞)。这份资料是对本发明的异位性组织分化和肝脏组织片的维持、 增殖可能性进行补正。但是，在这篇论文中，可分化脂肪细胞的范围极为有限，所以不可能通过本发明预见上皮组织的产生。回避论点，并不是最好要有脂肪组织的环境。例如，带血管的肌肉组织(口腔外科临床多使用)也可注入到硅模具内，此时，在肌肉组织中存在具有将要分化方向的成体干细胞，这些也是中胚叶(肌肉组织)，因此有可能向中胚叶的细胞分化。但是，在以下Alison MR的论文中，通过被营养化的组织(存在于脂肪或肌肉组织内)的体液循环经常从血管送入另外成体干细胞的可能性极高，在硅模具内产生异位组织可以得到验证。本发明主要是考虑完全并有效地将血管和组织(例如，脂肪、肌肉)放置在密封容器内，所以上述论文并不是本发明所需要的内容，只是为了考察通过本发明产生的试验结论(组织影像)所带来的“新成果”而赋予的必要信息。优选有血管的环境其理由是，有报告(Alison MR,Hepatocytes from non-hepatic adultstem cells.(非肝成体干细胞中的肝细胞)，Nature. 2000Jul 20 :406(6793) :257) 称，不受理论限制，但在骨髓移植后的患者肝细胞内来自供体的细胞，随着体液循环，存在于另外场所的成体干细胞有可能通过NELL-I而被分化诱导。在另外的实施方式中，本发明所使用的上述有一定分化方向的细胞，可以是成体干细胞，例如，造血组织、上皮组织、结缔组织、肌肉组织、神经组织等组织内的成体干细胞。 优选是造血组织、上皮组织、结缔组织。本发明所使用的成体干细胞，根据众所周知的文献和公开资料，由本领域技术人员进行适当选择并给予调制。在较好的实施方式中，本发明的活体培养器的脂肪组织中存活的组织(器官)可按以下方法进行制作1.对自己或他人的器官(如，肝脏片等)进行播种的方法。在这些器官中，包含已成熟的细胞和成体干细胞两者。2.通过与脂肪组织存在的成体干细胞接续的血管提供造血干细胞(末梢血也有分布)的方法。通过这些，可产生造血组织、腺组织等。3.播种具有分化方向的培养细胞等的方法。(这种培养细胞应从类似细胞库的组织购买，或者通过调制获得)。4.播种干细胞，通过在干细胞上混合具有分化方向的物质，从干细胞中产生器官。在本发明中，通过在活体培养器内添加纤维母细胞增殖因子(FGF)，以及添加FGF 和NELL-I两者进行对比试验，发现NELL-I可与其他增殖因子进行协调或比较利用。因此， 用于本发明的具有一定分化方向的细胞，与上述列举的1-4例子无关。通过添加NELL-1， A)通过已经具有分化方向或将具有分化方向，对该细胞进行分化诱导、分化促进，以及B) 促进分化程度较高细胞的植入。在另外的实施方式中，本发明组合物所使用的上述造血组织中存在的干细胞可以是具有自我修复能力和多分化能力的血液细胞的母细胞。这种造血细胞内存在的干细胞通过，例如颗粒状菌落刺激因子(G-CSF)等细胞因子，分化诱导血细胞(如，红细胞、白细胞、 巨噬细胞等)得到。在另外的实施方式中，本发明中使用的上述上皮组织内存在的成体干细胞，可以但不限于是腺原细胞、毛根细胞。在另外的实施方式中，本发明中使用的上述被分化诱导的细胞、组织或器官可以但不限于是造系统血、上皮系统等的细胞、组织或器官等。
在另外的实施方式中，本发明中使用的上述被分化、诱导的细胞、组织或器官可以但不限于是，中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴细胞等白细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞，以及它们的组合等构成的血细胞。从理论上不受限制，但也可以考虑是， NELL-I对已经成熟的细胞进行逆行分化，使造血细胞再次分化。本发明的组合物作用于造血干细胞，并根据其具有的分化方向，进一步对造血干细胞进行分化诱导，有可能产生造血干细胞。本发明的组合物可在异位产生造血细胞、组织和器官。通过本发明，已经被分化诱导的造血细胞、组织和器官就可发挥它们原有的作用，这是意想不到的显著效果。在其他的实施方式中，本发明提及的上述上皮中被分化诱导的细胞、组织或器官可以但不限于是，外分泌腺及其导管。这些外分泌腺包括但不限于汗腺、脂腺、肠腺、胃腺、 唾液腺等。从理论上不受限制，但可以考虑是，NELL-I对已经成熟的细胞进行逆行分化，使上皮系统细胞再次分化。本发明的组合物在上皮内的成体干细胞上发生作用，并根据其已有的分化方向，进一步对上皮干细胞进行分化诱导，有可能产生腺组织。在优选实施方式中，上述具有一定分化方向的细胞为腺原细胞，上述被分化诱导的细胞、组织或器官为外分泌腺及其导管。本发明的组合物，可在异位产生腺组织。通过本发明被分化、诱导的腺组织具有意想不到的显著效果，即，能够发挥它们原有的功能。在其他实施方式中，本发明中的上述上皮系统组织包括但不限于毛、毛球、毛根、 附于毛根上的腺组织。从理论上不受限制，但可以考虑是，NELL-I对已经成熟的细胞进行逆行分化，使上皮系统细胞再次分化。本发明的组合物在毛根内的成体干细胞(毛根细胞)上发生作用，并根据其已有的分化方向，进一步对毛细胞进行分化诱导，有可能产生毛、毛球、 毛根、附于毛根上的腺组织。在优选实施方式中，上述具有一定分化方向的细胞为毛根所含细胞，上述被分化诱导的细胞、组织或器官可以是毛、毛球、毛根、附于毛根上的腺组织。本发明的组合物可在异位上产生毛、毛球、毛根、附于毛根上的腺组织。通过本发明而被分化诱导的这些组织可发挥它们原有的作用，这是意想不到的显著效果。在另外的实施方式中，本发明组合物所含的NELL-I量大约为0.01 μ g/ml以上、 约 0. 01 μ g/ml-1000 μ g/ml、约 0. 1 μ g/ml-100 μ g/ml ；优选约 5 μ g/ml-50 μ g/ml>5 μ g/ ml-10 μ g/ml ；进一步优选约5 μ g/ml。这种NELL-I量的下限如约0. 01 μ g/ml、约0. 1 μ g/ ml、约 0. 2 μ g/ml、约 0. 3 μ g/ml、约 0. 4 μ g/ml、约 0. 5 μ g/ml、约 0. 6 μ g/ml、约 0. 7 μ g/ ml、约 0. 8 μ g/ml、约 0. 9 μ g/ml、约 1. 0 μ g/ml、约 1. 5 μ g/ml、约 2. 0 μ g/ml、约 2. 5 μ g/ml、 约 3· 0 μ g/ml、约 3· 5 μ g/ml、约 4· 0 μ g/ml、约 4· 5 μ g/ml、约 5· 0 μ g/ml、约 5· 5 μ g/ml、 约 6. 0 μ g/ml、约 6. 5 μ g/ml、约 7. 5 μ g/ml、约 8. 0 μ g/ml、约 8. 5 μ g/ml、约 9. 0 μ g/ml、约 9· 5 μ g/ml、约10. 0 μ g/ml等、约0. 01 μ g/ml-1000ml中的任意数值。这种NELL-1量的上限如约 10. 0 μ g/ml、约 9. 5 μ g/ml、约 9. 0 μ g/ml、约 8. 5 μ g/ml、约 8. 0 μ g/ml、约 7. 5 μ g/ ml、约 6· 5 μ g/ml、约 6. 0 μ g/ml、约 5. 5 μ g/ml、约 5. 0 μ g/ml、约 4· 5 μ g/ml、约 4. 0 μ g/ml、 约 3. 5 μ g/ml、约 3. 0 μ g/ml、约 2. 5 μ g/ml、约 2. 0 μ g/ml、约 1. 5 μ g/ml、约 1. 0 μ g/ml、 约 0. 9 μ g/ml、约 0. 8 μ g/ml、约 0. 7 μ g/ml、约 0. 6 μ g/ml、约 0. 5 μ g/ml、约 0. 4 μ g/ml、约 0· 3 μ g/ml、约 0. 2 μ g/ml、约 0. 1 μ g/ml、约 0. 01 μ g/ml 等、约 0. 01 μ g/ml-1000 μ g/ml 中的任意数值。这种量在造血细胞(例如，中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴细胞等白细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞)、上皮的外分泌腺(如，汗腺、脂腺、肠腺、胃腺、 唾液腺等)、毛、毛根、附在毛根上的腺细胞等情况中也是同样。对于本发明组合物含有的 NELL-I量，本领域技术人员可根据其用途进行决定，其浓度也能明确做出规定。在另外的实施方式中，上述被分化诱导的细胞、组织或器官具有天然存在的应对功能。这种功能可列举如下，且这些功能可按以下方式进行确认。造血组织应通过免役化学染色和流式细胞仪对造血系统的细胞的标记物表达进行确认。外分泌腺及其导管通过组织染色(苏木精-曙红染色等)确认组织影像，同时确认以下列举的分泌物。汗腺确认钠等分泌物以及顶浆分泌腺(泌离)的分泌；脂腺确认脂质等分泌物；肠腺确认离子肽酶、麦芽糖酶等分泌物；胃腺确认消化酶等胃蛋白原酶或氢离子或者氯离子；唾液腺确认淀粉酶、涎淀粉酶或过氧化物酶的分泌；毛、毛球、毛根或附在毛根上的腺组织通过肉眼观察、组织染色(苏木精-曙红染色等)确认组织影像。本发明的组合物、材料等，根据需要，可包含适当的处方材料或药学上可受容的载体。适当的处方材料或药学上可受容的载体包括但不限于抗氧化剂、保存剂、着色料、荧光色素、调味料、稀释剂、乳化剂、悬浮剂、溶媒、填充物、增量剂、缓冲剂、传送媒介、以及/或药学上的辅药等。代表性的是，本发明的组合物等以至少与1个生理性可受容载体、赋形剂或稀释剂同时包含NELL-I和根据需要的其他有效成分在内的组合物，或者材料形式进行投药。例如，赋形剂(Vehicle)可为微胶粒、注射溶液、生理性溶液或者人工脑脊髓液，在这些材料中，可以对非口服的组合物中使用的其他物质进行补充。本发明书使用可受容的载体、赋形剂或安定剂，优选对于受血者没有毒性，并且优选在使用的投药量和浓度中为不活性，如，磷酸盐、柠檬酸盐、或其他有机酸、抗坏血酸、 α -生育酚、低分子量球蛋白、蛋白质(如，血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白)、亲水性聚合物 (如，聚烯吡酮)、氨基酸(如甜氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、精氨酸或萘氨酸)、单糖、二糖以及其他碳水化合物(葡萄糖、甜露糖或者糊精)、螯合剂(如，EDTA)；糖醇(如，甜露醇或山梨甲酸)碱基形成对离子(如，钠)以及/或非离子性表面活性化剂(如，吐温(Tween)，普朗尼克(pluronic)或者聚乙烯甜氨酸(PEG))等。适当的载体例如有，中性缓释生理盐水或与血清白蛋白混合的生理盐水。优选其生成物采用适当的赋形剂(如，蔗糖)以冻结干燥剂的形式作为处方使用。根据需要可将其他标准的载体、稀释剂和赋形剂包括在内。其他列举的组合物还包括PH约7. 0-8. 5的Tris 缓冲剂或PH约4. 0-5. 5的醋酸缓冲剂，这些都含有山梨甲酸或其适当的替代物。以下为本发明组合物的一般调剂法。值得注意的是，动物药类的组合物、医药部外品、水产药组合物、食品组合物以及化妆品组合物，可按照公认的调制方法制造。本发明的组合物，根据药学上可受容的载体和需要进行配合，以非口服的方式投药。药学上可受容的载体例如有可采用赋形剂、润滑剂、结合剂、分解剂、分解阻碍剂、促进吸收剂、吸收剂、湿润剂、溶解剂、辅助溶解剂、悬浮剂、等渗剂、缓冲剂、去痛剂等。同时，根据需要，还可使用防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂等制剂添加物。另外，本发明的组合物还可以配有NELL-I以外的物质。非口服的投药途径包括但不限于静脉内、肌肉内、皮下投药、皮内投药、黏膜投药、直肠内投药、阴道内投药、局部投药、皮肤用药等。这种药学上的可受容组合物的调制中，考虑PH、等渗性、稳定性等，属于本领域技术人员的技术范围。本发明的组合物也可以包括着色料、保存剂、香料、矫味矫臭剂、甜味料等以及其他药剂。(材料)在一种场合中，本发明提供一种材料，它对已有特定分化方向的细胞进行分化诱导，并产生在分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官。这种材料包含A)缓释支架，以及B) NELL-I或该分化时能转变成具有NELL-I功能的物质。在一个实施方式中，本发明所使用的缓释支架，可以是细胞外基质。细胞外基质例如，包括但不限于骨胶原、去端肽胶原。这是因为在本发明中，缓释支架是可持续的在靶环状的细胞上提供NELL-I。骨胶原可由株式会社白鹏、销售商白水贸易株式会社(大阪市) 等提供，在本发明中也可采用其他供给商提供的骨胶原。可以理解，在其他较好的实施方式中，可采用与本说明书中所述组合物的形式都相同的任何较好的形式。(试剂盒)在其他场合中，本发明提供一种试剂盒，它对具有一定分化方向的细胞进行分化、诱导，并产生在分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官。该试剂盒可具有 NELL-I，或者在分化时能转变成具有NELL-I功能的物质。可以理解，在其他较好的实施方式中，可采用与本说明书中所述组合物、材料、方法的形式都相同的任何较好的形式。(医疗器具)在其他场合中，本发明提供一种医疗器具，它对具有一定分化方向的细胞进行分化诱导，产生在分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官。这种医疗器具具有以下物质A) NELL-I，或在分化时能转变成具有NELL-I功能的物质；B)缓释支架；以及C)容器。可以理解，在其他较好的实施方式中，可采用与本说明书中所述组合物、材料、试剂盒的形式都相同的任何较好的形式。(生产方法)在另外的场合中，本发明提供生产细胞、组织或器官的方法。该方法包含以下步骤 提供具有一定分化方向的细胞；将具有一定分化方向的该细胞与NELL-I或在维持时能转变成具有NELL-1功能的物质进行接触。在一种实施方式中，本发明的生产方法中，在脂肪组织以及在维持该组织血管的环境中提供所述具有一定分化方向的细胞。在另外的实施方式中，本发明的分化诱导方法中，具有一定分化方向的细胞与上述NELL-I可在缓释支架上进行接触，但不限于缓释支架上。这在理论上不受限制，但 NELL-I与分化诱导的靶环状细胞，在NELL-I作用期间，处于类似接触的状态即可。可以理解，在其他较好的实施方式中，本说明书可采用与上述组合物、材料、试剂盒说明的形式都相同的任何较好的形式。根据本发明的生产方法所产生的生成物也落入本发明的保护范围。(用于维持的组合物)在另外的场合中，本发明提供一种用于维持被分化诱导的细胞、组织或器官的组合物。这种组合物含有NELL-I或在维持时能转变成具有NELL-I功能的物质。用于维持本发明的组合物，维持被移植的细胞、组织或器官的形式和大小、进而还可维持它们原有的功能，这是意想不到的效果。在一种实施方式中，通过维持本发明的组合物而被分化诱导的细胞、组织或器官， 是在不容许被分化诱导的细胞、组织或器官存在的场所下进行维持的。例如，在不容许被分化诱导的细胞、组织或器官存在的情况包括但不限于该细胞、组织或器官的本体不存在的情况(如，针对肝脏组织片的脂肪组织等)。维持本发明的组合物，即使是被移植在活体内的组合物，在活体内被产生或被诱导的组合物，都能抑制对其产生的免疫排异反应，并维持在活体内。在移植到活体内时，被移植的细胞、组织和器官可以天然分化诱导、也可以人工分化诱导。在较好的实施方式中，维持本发明的组合物可以维持但不限于肝脏、肾脏、胰脏、 肾上腺、甲状腺、卵巢、精巢等内。已移植的器官等不容许其在异位存在的原因是被称作为排异反应的异物识别和排除机制。这里，通过本发明可以发现，NELL-I有产生造血细胞的能力和产生异胚叶组织的能力。从理论上不受限制，考虑到这些原因，没有对已移植的器官产生排异是因为根通过 NELL-I重新产生根据免疫机制不会受到排排除的自身组织，或者有可能在途中产生。本发明的组合物所维持的细胞、组织或器官具有天然的应对功能。这些功能可以肝脏为例进行说明1)代谢功能以糖分和脂肪成分作为能量形式可进行储藏而产生蛋白的功能；2)解毒功能对有害物进行代谢并进行无毒化分解功能；3)排泄功能胆汁的分泌功能等。特别是，通过测量白蛋白产生或肝细胞功能标记物的上升，可以确认肝脏功能。胰脏通过测量胰脏β细胞内分泌的胰岛素以及前驱物质等的产量上升等，可以确认胰脏功能。肾上腺通过确认留类激素的分泌，可以确认肾上腺功能。甲状腺通过确认甲状腺荷尔蒙(三碘甲状腺氨酸和甲状腺素等)的分泌，可以确认甲状腺功能。卵巢通过确认雌酮分泌、黄体酮的分泌，可以确认卵巢功能。精巢通过确认睾丸素、二氢睾丸素、脱氢表雄留酮的分泌，可以确认精巢功能。肾脏通过确认促红细胞生成素的分泌，可以确认肾脏功能。在另外的实施方式中，维持本发明的组合物中所含NELL-I的量，大约为0. 01 μ g/ ml 以上、约 0. 01 μ g/ml-约 1000 μ g/ml、约 0. 1 μ g/ml-约 100 μ g/ml、优选，约 5 μ g/ml-约50yg/mU5yg/mU 10 μ g/ml ；进一步优选约5 μ g/ml。这种NELL-I量的下限如， 约 0. 01 μ g/ml、约 0. 1 μ g/ml、约 0. 2 μ g/ml、约 0. 3 μ g/ml、约 0. 4 μ g/ml、约 0. 5 μ g/ml、 约 0. 6 μ g/ml、约 0. 7 μ g/ml、约 0. 8 μ g/ml、约 0. 9 μ g/ml、约 1. 0 μ g/ml、约 1. 5 μ g/ml、 约 2. 0 μ g/ml、约 2. 5 μ g/ml、约 3. 0 μ g/ml、约 3. 5 μ g/ml、约 4. 0 μ g/ml、约 4. 5 μ g/ml、 约 5. 0 μ g/ml、约 5. 5 μ g/ml、约 6. 0 μ g/ml、约 6. 5 μ g/ml、约 7. 5 μ g/ml、约 8. 0 μ g/ml、约 8. 5 μ g/ml、约 9. 0 μ g/ml、约 9. 5 μ g/ml、约 10. 0 μ g/ml 等，为约 0. 01 μ g/ml-约 1000 μ g/ ml中的任意数值。这种NELL-I量的上限如，约10. 0 μ g/ml、约9. 5 μ g/ml、约9. 0 μ g/ml、 约 8· 5 μ g/ml、约 8· 0 μ g/ml、约 7· 5 μ g/ml、约 6· 5 μ g/ml、约 6· 0 μ g/ml、约 5· 5 μ g/ml、 约 5· 0 μ g/ml、约 4· 5 μ g/ml、约 4· 0 μ g/ml、约 3· 5 μ g/ml、约 3· 0 μ g/ml、约 2· 5 μ g/ml、 约 2. 0 μ g/ml、约 1. 5 μ g/ml、约 1. 0 μ g/ml、约 0. 9 μ g/ml、约 0. 8 μ g/ml、约 0. 7 μ g/ml、 约 0. 6 μ g/ml、约 0. 5 μ g/ml、约 0. 4 μ g/ml、约 0. 3 μ g/ml、约 0. 2 μ g/ml、约 0. 1 μ g/ml、约 0. 01 μ g/ml等，为约0. 01 μ g/ml-1000 μ g/ml中的任意数值。在被移植的器官(例如，肝脏、肾脏、胰岛脏、肾上腺、甲状腺、卵巢、精巢)，以及在活体内产生的器官等(造血系统细胞(如，中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴细胞等白细胞、红细胞、血小板、 巨噬细胞)、上皮的外分泌腺(如，汗腺、脂腺、肠腺、胃腺、唾液腺等)、毛、毛球、附在毛根上的腺组织等)的场合下，这些数值也同样。本发明组合物含有的NELL-I的量，本领域技术人员可根据其用途适当做出决定，其浓度也可明确做出规定。在另外较好的实施方式中，可采用与本说明书中所述组合物、材料、方法、试剂盒的形式都相同的任何较好的形式。(维持方法)在另外的场合中，本发明提供可维持被分化诱导的细胞、组织或器官的方法。该方法可包含以下步骤提供被分化诱导的该细胞、组织或器官；在被分化诱导的细胞、组织或器官上，给予NELL-1，或者给予在维持时能转变成具有NELL-I功能的物质。在其他较好的实施方式中，可采用与本说明书所述组合物、材料、、 方法、试剂盒的形式都相同的任何较好的形式。(使用)在另外的场合中，本发明提供在从具有分化方向的细胞中产生被分化诱导的细胞、组织或器官的医药制造中，使用NELL-I物质，或者使用在产生时能转变成具有NELL-I 功能的物质。在另外的场合中，本发明提供在维持被分化诱导的细胞、组织或器官的医药制造中，使用NELL-I物质，或者使用在产生时能转变成具有NELL-I功能的物质。可以理解，在其他较好的实施方式中，本说明书可采用与上述组合物、材料、方法、 试剂盒的形式都相同的任何较好的形式。本说明书引用的科学文献、专利、专利申请等参考文献，总体上于各文献具体记载相同，在本说明书中作为参考而引用。上述是为方便理解对较好的实施方式进行了举例说明。以下根据实施例对本发明进行说明，但上述说明和以下实施例只是用于举例，并不是用于限定本发明。因此，在本发明的范围并不受本说明书上具体提及的实施方式和实施例限制，但均应在本发明保护范围之内。 实施例以下列举实施例是对本发明做进一步的具体说明，本发明并不是受这些实施例限定。在实施例中，使用的试药等在无需事先特殊通知的情况下，使用普通试药厂家的试药， 同时，NELL-I使用的是片山化学工业株式会社制造的试药。动物试验根据昭和大学的伦理规定进行；对人实施试验时，要得到知情同意方可进行。(NELL-1 的调制)通过NELL-I产生并提炼了 hNELL_l蛋白质，并用于以下实施例。产生并提炼hNELL-Ι蛋白质是从以下各公司或部门购进，或使用了可购进的试药。Sigma-Aldrich Japan 株式会社、GE Healthcare bioscience (原 Amersham bioscience株式会社)> Invitrogen株式会社、Funakoshi株式会社、Cosmo Bio株式会社、 日本Bio-Rad、株式会社QIAGEN、Promega株式会社、Takara Bio株式会社、东洋纺织株式会社、第一化学药品株式会社、Greiner J apan株式会社、DS Pharma Biomedical (原大日本制药株式会社、实验室产品部)、日本Becton-Dickinson株式会社、Merck株式会社、HYDRUS 化学株式会社、PerkinElmer life Sciences Japan株式会社、日本Millipore株式会社、日本Waters株式会社、TOSOH株式会社、GL Sciences株式会社、资生堂株式会社、TAITEC株式会社、Affymetrix株式会社、AS ONE株式会社、东京硝子器械株式会社、IKA Japan有限会社、Perkin-Elmer Japan株式会社、Roche Diagnostics株式会社、Oriental酵母株式会社、医学生物研究所株式会社、免疫生物研究所株式会社、P印tid研究所株式会社、东洋纺 ENGINEERING株式会社、三光纯药株式会社、VERITAS株式会社、TEFCO株式会社、SARTORIUS 株式会社、生化学工业株式会社、仓敷纺织株式会社生物药品部。在本实施例中，产生并提炼了 hNELL-1。(hNELL cDNA 的分离)最初，按以下方法，按PCR方法，从人脑cDNA库中分离M48_bp hNELLlcDNA。(质体的构建)图1A-1C表示质体构建的概要。(1)使用逆转录反应，从人脑总体RNA(Human brain whole RNA)中调制了人脑 cDNA。(2)按PCR法对人NELL-lcDNA进行调制，所以从得到的人脑cDNA中使用各引物， 制作了 4个片段。(3)进而根据PCR法，将所得到的4个片段合成2个，制作了 2个片段。(4)进而根据PCR法，将所得到的2个片段合成1个，得到全长。(5)将得到的全长通过TA克隆方法克隆到pGEM-T克隆用的载体上，制作人类 NELLl质体。(详细顺序)从人脑mRNA按照逆转录方法，制作人NELLl cDNA。在1. 5mL软管内注入13. 5 μ L的焦磷酸二乙酯(DEPC)处理超纯水并混入2 μ L的人脑总体 RNA (2. 5mg/mL, Clontech)和 1. 5 μ L 的 Oligo (dT) 12-18 (Invitrogen)，并在室温下静放M分钟。其后，在这个管子内，加入3μ L的10*PCR缓冲剂(GIBC0)、1.5yL&25mM MgC12、3 μ L 的 0. IM DTT、2 μ L 的 25mM dNTP 充分搅拌旋转，加入 1. 5 μ L 的 Superscript II (Invitrogen)，在42 °C下60分钟内进行逆转录反应，再在72°C下加热15分钟后，
在-20°C下保存。
以下是4个片段1-4 (f 1-4)按PCR法进行了放大。
片段 l(fl)527bp
片段 2(f^)624bp
片段 3(f3)612bp
片段 4(f4)841bp
使用的片段和反应液如下
[表1]
引物
编号序列，5’-3’位置F#2GGAAGCTTCGGAGCGATGCCGATGGATTTGATT (序列编号 19)87-120F#3TCAGTTAGCGCCTCTCATCTC (序歹丨J 编号 20)564-584F#4GCGGATTTTAACCAAGAGCTG (序列编号 21 )1139-1159F#5GTGTCTGTCCATCTGGATTCAC (序列编号 22)1705-1726F#2GTAACCGGTTCAATTATTTTGAAGACACTCAAAATCC (序列编号 M ) 2544-2508F#3ATCTTTCTCGCAGTGGCTTCC (序列编号 M )1749-1729FMCTAAAACTCCACCTCGGCATT (序歹 编号 25 )1185-1165F#5ATCCTGTTACAGTCGACATGG (序列编号 26 )610-590质体DNA ( 10倍稀释)IpLIOxThermopol 缓冲液IOmMdNTP ( SIGMA)lμLIOpL .引物(顺向)Ιμ IOmMdNTP (逆向)Ιμ VENT DNApol. (NEB)Ιμ 超纯水(UPW)40pL
总计50μ < 其中，fl采用顺向引物F#2(序列编号19)和逆向引物R#5 (序列编号沈)；f2采用顺向引物F#3(序列编号20)和逆向引物R#4(序列编号25) ；f3采用顺向引物F#4(序列编号21)和逆向引物R#3(序列编号；以及f4采用顺向引物F#5(序列编号22)和逆向引物R#2(序列编号23)的组合。在95°C下处理PCR反应2分钟后，在95°C 30秒、55°C 30秒、以及72°C 1分钟的情况下反复25个轮回，然后在72°C下处理7分钟，在4°C下维持。然后，为了连接f 1和f2、或f3和f4，调制以下反应液，实施了 PCR反应。
权利要求
1.一种组合物，其特征在于，该组合物用于对带有一定分化方向的细胞进行分化诱导， 从而产生在该分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官，该组合物包含NELL-I或分化时能转变成具有NELL-I功能的物质。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物用于在具有脂肪组织以及维持该脂肪组织的血管的环境下，异位产生在上述分化方向上进一步被分化诱导的细胞、 组织或器官。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述具有一定分化方向的细胞是成体干细胞。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述成体干细胞是存在于从由造血组织、上皮组织、结缔组织、肌肉组织和神经组织构成的组中选出的组织内的成体干细胞。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述成体干细胞是在造血组织、上皮组织或结缔组织内具有一定分化方向的干细胞。
6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述成体干细胞存在于所述造血组织内，是一种造血干细胞，并且还是一种具有自我修复能力和多分化功效的血液细胞的母细胞。
7.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述成体干细胞存在于所述上皮组织内，是一种具有向上皮组织的分化方向的干细胞，并且还是一种具有自我修复能力和多分化功效的上皮细胞的母细胞。
8.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述成体干细胞存在于所述上皮组织内，是一种腺原细胞或者毛根所含的细胞。
9.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述被分化诱导的细胞、组织或器官是在造血系统或上皮系统内诱导的。
10.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述从造血系统中被分化诱导的细胞、组织或器官，是从由造血干细胞分化的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴细胞构成的组中选出的白细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞，以及它们的组合构成的组中选出的血细胞。
11.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述从上皮被分化诱导的细胞、组织或器官是一种外分泌腺及其导管。
12.根据权利要求11所述的组合物，其特征在于，所述外分泌腺是从汗腺、脂腺、肠腺、 胃腺和唾液腺构成的组中选出的。
13.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述从上皮中被分化诱导的细胞、组织或器官是毛、毛球、毛根或附在毛根上的腺组织。
14.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述具有一定分化方向的细胞是腺原细胞，所述被分化诱导的细胞、组织或器官是外分泌腺及其导管。
15.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述具有一定分化方向的细胞是含在毛根上的细胞，所述被分化诱导的细胞、组织或器官是毛、毛球、毛根或附在毛根上的腺组
16.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述NELL-I的含量为约0.01yg/ml 以上。
17.根据权利要求16所述的组合物，其特征在于，所述NELL-I的含量为约5μ g/ml-约 50 μ g/mlο
18.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述被分化诱导的细胞、组织或器官具有天然存在的应对作用。
19.一种材料，其特征在于，对具有一定分化方向的细胞进行分化、诱导，并产生在分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官；该材料含有A)缓释支架，以及B)NELL-I或者分化时能转变成具有NELL-I功能的物质。
20.根据权利要求19所述的材料，其特征在于，所述材料用于在具有脂肪组织以及维持该脂肪组织的血管的环境下，异位产生在所述分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官。
21.根据权利要求18所述的材料，其特征在于，所述缓释支架为细胞外基质。
22.根据权利要求21所述的材料，其特征在于，所述缓释支架是从由骨胶原和去端肽胶原去端肽胶原构成的组中选出的。
23.根据权利要求19所述的材料，其特征在于，所述具有一定分化方向的细胞是成体干细胞。
24.根据权利要求23所述的材料，其特征在于，所述成体干细胞是存在于从造血组织、 上皮组织、结缔组织、肌肉组织以及神经组织构成的组中选出的组织的成体干细胞。
25.根据权利要求M所述的材料，其特征在于，所述成体干细胞是存在于造血组织、上皮组织或结缔组织的成体干细胞。
26.根据权利要求25所述的材料，其特征在于，所述成体干细胞存在于所述造血组织内，是一种造血干细胞，还是一种具有自我修复能力和多分化功效的血液细胞的母细胞。
27.根据权利要求25所述的材料，其特征在于，所述成体干细胞存在于所述上皮组织内，是一种具有向上皮组织分化方向的干细胞，还是一种具有自我修复能力和多分化功效的上皮细胞的母细胞。
28.根据权利要求25所述的材料，其特征在于，所述成体干细胞存在于所述上皮组织内，是一种腺原细胞或毛根所含的的细胞。
29.根据权利要求观所述的材料，其特征在于，所述被分化诱导的细胞、组织或器官， 是一种在造血系统或上皮系统中被分化诱导的细胞、组织或器官。
30.根据权利要求四所述的材料，其特征在于，所述在造血系统中被分化诱导的细胞、 组织或器官，是一种从由造血干细胞分化的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴细胞构成的组中选出的白细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞，以及它们组合构成的组中选出的血细胞。
31.根据权利要求四所述的材料，其特征在于，所述在上皮系统中被分化、诱导的细胞、组织或器官，是外分泌腺及其导管。
32.根据权利要求31所述的材料，其特征在于，所述外分泌腺是从汗腺、脂腺、肠腺、胃腺以及唾液腺构成的组中选出的。
33.根据权利要求四所述的材料，其特征在于，所述在上皮系统中被分化、诱导的细胞、组织或器官是毛、毛球、毛根或附在毛根上的腺组织。
34.根据权利要求19所述的材料，其特征在于，所述具有一定分化方向的细胞是腺细胞，所述被分化、诱导的细胞、组织或器官是外分泌腺及其导管，为权利要求19所述的材料。
35.根据权利要求19所述的材料，其特征在于，所述具有一定分化方向的细胞是毛根所含的细胞，所述已被分化、诱导的细胞、组织或器官是毛、毛球、毛根或附在毛根上的腺细胞。
36.根据权利要求19所述的材料，其特征在于，所述NELL-I的含量为约0.01 μ g/ml以上。
37.根据权利要求36所述的材料，其特征在于，所述NELL-I的含量为约5μ g/ml_约 50 μ g/mlο
38.根据权利要求19所述的材料，其特征在于，所述被分化诱导的细胞、组织或器官具有天然存在的应对作用。
39.一种试剂盒，其特征在于，该试剂盒对具有一定分化方向的细胞进行分化诱导，并产生在分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官；该试剂盒具有NELL-I或在该分化时能转变成具有NELL-I功能的物质。
40.根据权利要求39所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于在具有脂肪组织以及维持该脂肪组织的血管的环境下异位产生在所述分化方向上进一步被分化诱导的细胞、 组织或器官。
41.根据权利要求40所述的试剂盒，其特征在于，所述被分化诱导的细胞、组织或器官，是在造血系统或上皮系统中被分化诱导的细胞、组织或器官。
42.根据权利要求41所述的试剂盒，其特征在于，所述在造血系统中被分化诱导的细胞、组织或器官，是从由造血干细胞分化的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴细胞构成的组中选出的白细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞，以及它们组合构成的组中选出的血细胞。
43.根据权利要求41所述的试剂盒，其特征在于，所述在上皮系统中被分化诱导的细胞、组织或器官是外分泌腺及其导管。
44.根据权利要求43所述的试剂盒，其特征在于，所述外分泌腺是从汗腺、脂腺、肠腺、 胃腺以及唾液腺构成的组中选出的。
45.根据权利要求41所述的试剂盒，其特征在于，所述在上皮系统中被分化诱导的细胞、组织或者器官是毛、毛球、毛根或附在毛根上的腺组织。
46.根据权利要求39所述的试剂盒，其特征在于，所述NELL-I的含量为约0.01 μ g/ml 以上。
47.根据权利要求46所述的试剂盒，其特征在于，所述NELL-I的含量为约5μ g/ml-约 50 μ g/mlο
48.一种医疗器具，其特征在于，该医疗器具用于对具有一定分化方向的细胞进行分化诱导，并产生在分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官；该医疗器具具有A)NELL-I或在该分化时能转变成NELL-I功能的物质；B)缓释支架；以及C)容器。
49.根据权利要求48所述的医疗器具，其特征在于，所述医疗器具用于在有脂肪组织以及维持脂肪组织的血管的环境下，异位产生在分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官。
50.根据权利要求48所述的医疗器具，其特征在于，所述缓释支架是从细胞外基质构成的组中选择的。
51.根据权利要求48所述的医疗器具，其特征在于，所述缓释支架是骨胶原和去端肽胶原。
52.根据权利要求48所述的医疗器具，其特征在于，所述被分化诱导的细胞、组织或器官，是在造血系统或上皮系统上被分化诱导的细胞、组织或器官。
53.根据权利要求51所述的医疗器具，其特征在于，所述在造血系统中被分化、诱导的细胞、组织或器官，是从造血干细胞中分化的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴细胞构成的组中选出的白细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞，以及它们组合构成的组中选出的血细胞。
54.根据权利要求52所述的医疗器具，其特征在于，所述在上皮系统中被分化、诱导的细胞、组织或器官为外分泌腺及其导管。
55.根据权利要求M所述的医疗器具，其特征在于，所述外分泌腺是从由汗腺、脂腺、 肠腺、胃腺以及唾液腺构成的组中选出的。
56.根据权利要求52所述的医疗器具，其特征在于，所述在上皮系统中被分化诱导的细胞、组织或器官是毛、毛球或附在毛根上的腺组织。
57.根据权利要求48所述的医疗器具，其特征在于，所述NELL-I的含量为约0.01 μ g/ ml以上。
58.根据权利要求55所述的医疗器具，其特征在于，所述NELL-I的含量为约5μ g/ ml-约 50 μ g/ml。
59.一种生产细胞、组织或器官的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤提供具有一定分化方向的细胞；将具有一定分化方向的细胞与NELL-I或与在维持NELL-I时候能转变成具有NELL-I 功能的物质进行接触。
60.根据权利要求59所述的方法，其特征在于，用于在有脂肪组织以及维持脂肪组织的血管的环境下，提供所述具有一定分化方向的细胞。
61.根据权利要求59所述的方法，其特征在于，所述具有一定分化方向的细胞和所述 NELL-I在缓释支架上接触。
62.根据权利要求61所述的方法，其特征在于，所述缓释支架是从细胞外基质构成的组中所选择。
63.根据权利要求62所述的方法，其特征在于，所述缓释支架是骨胶原和去端肽胶原。
64.根据权利要求59所述的方法，其特征在于，所述具有一定分化方向的细胞为成体干细胞。
65.根据权利要求62所述的方法，其特征在于，所述成体干细胞是从存在于造血组织、 上皮组织、结缔组织、肌肉组织以及神经组织构成的组中选出的组织内的成体干细胞。
66.根据权利要求65所述的方法，其特征在于，所述成体干细胞是存在于造血组织、上皮组织或结缔组织内的成体干细胞。
67.根据权利要求66所述的方法，其特征在于，所述成体干细胞存在于所述造血组织内，是一种造血干细胞，还是一种具有自我修复能力和多分化能力的血液细胞的母细胞。
68.根据权利要求66所述的方法，其特征在于，所述成体干细胞存在于所述上皮组织内，是一种具有向上皮组织的分化方向的干细胞，还是一种具有自我修复能力和多分化能力的上皮细胞的母细胞。
69.根据权利要求66所述的方法，其特征在于，所述成体干细胞存在于所述上皮组织内，是一种腺原细胞或毛根所含的细胞。
70.一种组合物，其特征在于，该组合物用于维持被分化诱导的细胞、组织或器官，该组合物含有NELL-I或在该维持时能转变成具有NELL-I功能的物质。
71.根据权利要求70所述的组合物，其特征在于，所述维持是在不容许存在所述被分化诱导的细胞、组织或器官的场所中进行的。
72.根据权利要求70所述的组合物，其特征在于，所述被分化诱导的细胞、组织或器官具有天然存在的应对功能。
73.根据权利要求70所述的组合物，其特征在于，所述被分化诱导的细胞、组织或器官是从由肝脏、肾脏、胰脏、肾上腺、甲状腺、卵巢和精巢构成的组中选出的。
74.一种用于维持已被分化诱导的细胞、组织或器官的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤提供该已被分化导的细胞、组织或器官；在该已被分化诱导的细胞、组织或器官内，提供NELL-I或在该维持时能转变成具有 NELL-I功能的物质。
75.在用于将具有一定分化方向的细胞产生被分化诱导的细胞、组织或器官的医药制造中，使用NELL-I或在该产生时能转变成具有NELL-I功能的物质。
76.在用于维持被分化诱导的细胞、组织或器官的医药制造中，使用NELL-I或在该维持时能转变成具有NELL-I功能的物质。
77.一种在移植到活体内的脂肪组织或肌肉组织内产生腺组织的方法，其特征在于，该方法包含以下几种步骤A)在该活体内制作用于移植容器的空间；B)根据该容器大小，将活体的脂肪组织或肌肉组织与用于维持该该脂肪组织或肌肉组织的血管一同分切，并制作含血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上配置含NELL-I的缓释支架，并插入该带蒂组织片；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该空间内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在充分产生该腺组织的期间内，在该活体内维持该容器。
78.根据权利要求77所述的方法，其特征在于，所述方法是一种在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中产生腺组织的方法，其中，该方法包括以下步骤所述步骤A)在该大鼠的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以下腹壁动静脉的分支部为中心分切该哺乳动物腹部皮下脂肪组织，并制作以下腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5yg/ml-约50yg/ml，所述缓释支架为骨胶原海绵或去端肽胶原；以及在所述步骤E)中，充分产生所述腺组织的时间为至少大约2周。
79.根据权利要求77所述的方法，其特征在于，是一种在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生腺组织的方法，其中，包括以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，并制作以该血管为蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-50 μ g/ml，所述缓释支架为骨胶原海绵或去端肽胶原；以及在所述步骤E)中，充分产生所述腺组织的时间为至少大约2周。
80.一种在移植到活体内的脂肪组织或肌肉组织内产生腺组织的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤A)在该活体内制作用于移植容器的空间；B)根据该容器大小，将该活体的脂肪组织或肌肉组织与用于维持该脂肪组织或肌肉组织的血管一同分切，并制作含血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上插入该带蒂组织片，添加NELL-I；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该空间内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在充分产生该腺组织的期间内，在该活体内维持该容器，其中，在该维持期间，在该带蒂组织片上定期添加NELL-I。
81.根据权利要求80所述的方法，其特征在于，是一种在将腺组织移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中产生腺组织的方法，其中，该方法包含以下几步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；所述步骤B)根据所述容器大小，以下腹壁动静脉分支部为中心，分切该哺乳动物腹部皮下脂肪组织，并制作以下腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片； 在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-50 μ g/ml ；所述步骤D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；以及在所述步骤E)中，充分产生该腺组织的时间为至少大约2周，其中，在维持所述腺组织期间，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-50 μ g/ml的NELL-1。
82.根据权利要求80所述的方法，其特征在于，所述方法是一种在将腺组织移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生腺组织的方法，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹壁动静脉以及分叉神经；所述步骤B)根据所述容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml ；所述步骤D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；在所述步骤E)中充分产生所述腺组织的时间为至少大约2周，并且在维持该腺组织期间，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-I。
83.一种在移植到活体内的脂肪组织或肌肉组织中产生造血组织的方法，其特征在于， 该方法包含以下步骤A)在该活体内制作可移植容器的空间；B)根据该容器大小，将活体的脂肪组织或肌肉组织与维持该脂肪组织或肌肉组织的血管一同分切，并制作含血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上配置含NELL-I的缓释支架，并插入该带蒂组织片；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该空间内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在充分产生该造血组织的期间内，在该活体内维持该容器。
84.根据权利要求83所述的方法，其特征在于，所述方法是一种在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中产生造血组织的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该大鼠的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据所述容器大小，以下腹壁动静脉的分支部为中心分离该哺乳动物腹部皮下脂肪组织，制作以腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片；在所述C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml，所述缓释支架为骨胶原海绵或去端肽胶原；以及在所述步骤E)中，充分缠身所述造血组织的时间为至少大约2周。
85.根据权利要求83所述的方法，其特征在于，所述方法是一种在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生造血组织的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据所述容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；在所述C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml，所述缓释支架为骨胶原海绵或去端肽胶原；以及在所述步骤E)中，充分产生所述造血组织的时间为至少大约2周。
86.—种在移植到活体内的脂肪组织或肌肉组织中产生造血组织的方法，其特征在于， 该方法包含以下步骤A)在该活体内制作可移植容器的空间；B)根据该容器大小，活体的脂肪组织或肌肉组织与维持该脂肪组织或肌肉组织的血管一同分切，制作含血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上插入该带蒂组织片，添加NELL-I；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该空间内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在充分产生该造血组织的期间内，在该活体内维持该容器，其中，在该维持期间，在该带蒂组织片中定期添加该带蒂组织片。
87.根据权利要求86所述的方法，其特征在于，是一种在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中产生造血组织的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经的步骤；所述步骤B)根据所述容器大小，以下腹部动静脉分支部为中心，分离该哺乳动物的腹部皮下脂肪组织，制作以下腹部动静脉为血管蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml ；所述步骤D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；在所述步骤E)中，充分产生所述造血组织的时间为至少大约2周，其中，在所述维持期间，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-I。
88.根据权利要求86所述的方法，其特征在于，所述方法是一种在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生造血组织的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据所述容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；在所述C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml ；所述步骤D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；在所述步骤E)中，充分产生所述造血组织的时间为至少大约2周，其中，在所述维持期间，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的NELL-I。
89.—种在移植到活体内的大腿部的脂肪组织或肌肉组织中产生毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤A)在该活体内制作可移植容器的空间；B)根据该容器大小，将活体的脂肪组织或肌肉组织与维持该脂肪组织或肌肉组织的血管一同分切，并制作含血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上配置含NELL-I的缓释支架；D)在该缓释支架上配置毛根所含细胞；E)在该容器上，插入该带蒂组织片；F)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该空间内移植该容器；以及G)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在充分产生该毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的期间内，在该活体内维持该容器。
90.根据权利要求89所述的方法，其特征在于，所述方法是一种在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中产生毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据所述容器大小，以下腹壁动静脉的分支部为中心分离该哺乳动物腹部皮下脂肪组织，并制作以下腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5μ g/ml-约50 μ g/ml，该缓释支架为骨胶原海绵或去端肽胶原；所述步骤F)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；以及在所述步骤G)中，充分产生所述毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的时间为至少大约2周。
91.根据权利要求89所述的方法，其特征在于，是一种在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据所述容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml，该缓释支架为骨胶原海绵或去端肽胶原；所述步骤F)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在大腿部的肌肉内移植该容器；在所述步骤G)中，充分产生所述毛、毛球、毛根以及附在附在毛根上的腺组织的时间为至少大约2周。
92.一种在移植到活体内的大腿部的脂肪组织或肌肉组织中产生毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤A)在该活体内制作可移植容器的空间；B)根据该容器大小，将活体的脂肪组织或肌肉组织与维持该脂肪组织或肌肉组织的血管一同分切，制作含血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上插入该带蒂组织片，添加毛根所含的细胞和NELL-I；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该空间内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在充分产生该毛、毛球、毛根、以及附在毛根上的腺组织的期间内，在该活体内维持该容器，其中，在该维持期间，在该带蒂组织片上定期添加NELL-I。
93.根据权利要求92所述的方法，其特征在于，所述方法是一种在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中产生毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据所述容器大小，以下腹部动静脉分支部为中心，毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织该哺乳动物的腹部皮下脂肪组织，制作以下腹部动静脉为血管蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml ；所述步骤D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；在所述步骤E)中，充分产生所述毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的时间为至少大约2周，其中，在所述维持期间，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ ml 的 NELL-I。
94.根据权利要求92所述的方法，其特征在于，所述方法是一种在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中产生毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据所述容器大小，以维持该大鼠肌肉组织的血管分支部为中心进行毛、毛球、毛根以及附在毛根上的腺组织，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml ；所述步骤D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；在所述步骤E)中，充分产生所述毛、毛球、毛根以及附于毛根上的腺组织的时间为至少大约2周，其中，在所述维持期间，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ ml 的 NELL-I。
95.一种在移植到活体大腿部的脂肪组织或肌肉组织中维持肝脏组织片的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤A)在该活体内制作可移植容器的空间；B)根据该容器大小，将活体的脂肪组织或肌肉组织与维持该脂肪组织或肌肉组织的血管一同分切，制作含血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上配置含NELL-I的缓释支架；D)在该缓释支架上放置该肝脏组织片；E)在该容器上插入该带蒂组织片；F)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该空间内移植该容器；以及G)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下放置该容器。
96.根据权利要求95所述的方法，其特征在于，所述方法是一种在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中维持肝脏组织片的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据容器大小，以下腹壁动静脉的分支部为中心分切该哺乳动物腹部皮下脂肪组织，制作以下腹壁动静脉为血管蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml，所述缓释支架为骨胶原海绵或去端肽胶原；并且所述步骤F)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器。
97.根据权利要求95所述的方法，其特征在于，所述方法是一种在移植到哺乳动物大腿部的肌肉组织中维持肝脏组织片的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据所述容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5μ g/ml-约50 μ g/ml，该缓释支架为骨胶原海绵或去端肽胶原；并且所述步骤F)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在大腿部的肌肉内移植该容器。
98.一种在移植到活体大腿部的脂肪组织或肌肉组织中维持肝脏组织片的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤A)在该活体内制作可移植容器的空间；B)根据该容器大小，将活体的脂肪组织或肌肉组织与维持该脂肪组织或肌肉组织的血管一同分切，制作含血管蒂的带蒂组织片；C)在该容器上插入该带蒂组织片，添加该肝脏组织片以及NELL-I；D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该空间内移植该容器；E)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下放置该容器。
99.根据权利要求98所述的方法，其特征在于，所述方法是一种在移植到哺乳动物大腿部的脂肪组织中维持肝脏组织片的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据所述容器大小，以下腹部动静脉分支部为中心，分切该哺乳动物的腹部皮下脂肪组织，制作以下腹部动静脉为血管蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml ；所述D)步骤在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；并且在所述步骤E)中，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-约50 μ g/ml的 NELL-I。
100.根据权利要求98所述的方法，其特征在于，是一种在移植到大鼠大腿部的肌肉组织中维持肝脏组织片的方法，其中，该方法包含以下步骤所述步骤A)在该哺乳动物的大腿部上切开皮肤，从周围组织剥离大腿动静脉分支的下腹部动静脉和分叉神经；所述步骤B)根据所述容器大小，以维持该哺乳动物肌肉组织的血管分支部为中心进行分切，制作以该血管为蒂的带蒂组织片；在所述步骤C)中，所述NELL-I为约5 μ g/ml-约50 μ g/ml ；所述步骤D)在该带蒂组织片内的血流不受阻碍的状态下，在该大腿部的肌肉内移植该容器；并且在所述步骤E)中，在该带蒂组织片上每隔一周添加约5 μ g/ml-约50 μ g/mlNELL-1。
全文摘要
本发明的目的是产生和维持被分化诱导的细胞、组织或器官。本发明提供了一种用于对具有一定分化方向的细胞进行分化诱导，从而产生在该分化方向上进一步被分化诱导的细胞、组织或器官的组合物。该组合物包含NELL-1，或者包含在分化时能够转变成具有NELL-1功能的物质。此外，本发明还提供了一种用于维持被分化诱导的细胞、组织或器官的组合物。
文档编号C12N1/04GK102245759SQ200980139338
公开日2011年11月16日 申请日期2009年8月3日 优先权日2008年8月4日
发明者中村雅典, 五十岚贡一, 剑持幸代, 大家一典, 织田光夫, 马谷原光织, 黑田俊一 申请人:学校法人昭和大学