专利名称：连翘酯苷a在制备防治心脑血管疾病药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及连翘酯苷A，具体是连翘酯苷A在制备防治心脑血管疾病药物中的应用。
背景技术：
连翘酯苷A(Forsythoside A)，可由木犀科连翘属植物连翘(Forsythia Suspensa(Thunb.)Vahl.)植物中提取制得。结构式为
分子式C29H36O15，分子量为624，淡黄色粉末状化合物，易溶于水，乙醇，甲醇等。
据报道，连翘酯苷A具有抗病毒、抑菌、解热镇痛保肝、抗氧化及抗炎抗内毒素活性，但是，从未有关用于制备防治心脑血管疾病药物的报导。
发明内容
本发明的目的在于扩展连翘酯苷A的用途，将其用于制备防治心脑血管疾病的药物。
心脑血管病主要是在血管内形成血栓，从而对人类健康造成严重威胁。研究表明血栓形成的因素有三(1)血管内皮损伤；(2)血小板粘附、聚集和释放反应；(3)凝血活性增高，血液粘度增加，血流缓慢。防止血液凝固或抑制血小板功能可以预防血栓形成。因此，具有溶栓、抗凝、降低血粘度、保护血管内皮细胞、抑制血小板聚集等作用的物质可以防治心肌梗塞和脑梗塞等心脑血管疾病。
本发明研究表明连翘酯苷A具有抑制血小板聚集的功能，同时也具有明显的抗凝血的作用。因此，连翘酯苷A可用于制备防治心脑血管疾病药物。
连翘酯苷A可按常规方法从连翘壳或连翘叶中提取，利用柱层析分离精制。上述得到的连翘酯苷A可进一步与载体混合或包埋，制成含有治疗有效量的连翘酯苷A的药物组合物，其形式可为片剂、注射剂、悬浮液或溶液。所说的载体可以为乳糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、聚乙二醇、明胶、环糊精。组合物中还可加入润滑剂、湿润剂、矫味剂、悬浮剂、防腐剂。组合物中连翘酯苷A含量应大于50％，最好是90％以上。这些组合物可作为药物用于防治心脑血管疾病。
连翘酯苷A也可作为食品添加剂用于制备预防心脑血管疾病的功能性食品。
本发明对已知化合物连翘酯苷A发掘了新的医疗用途，开拓了新的应用领域。连翘酯苷A药理作用较强，可用于制备预防和治疗心脑血管疾病的药物和功能性食品。
具体实施例方式 下面通过药理试验说明连翘酯苷A(纯度大于98％)具有抑制血小板聚集和抗凝血的作用。
实施例1连翘酯苷A对ADP诱导大鼠体外血小板聚集的影响 大鼠(Wistar，清洁II级)腹主动脉取血，3.8％枸橼酸钠1∶9抗凝，500r·min-1离心5min取上清，得到富血小板血浆(PRP)。余下部分2500r·min-1离心10min后取上清，得到贫血小板血浆(PPP)。用PPP稀释PRP使血小板数目至3×1011/L。
取265μL PRP置比浊管中，加入连翘酯苷(含量大于95％)溶液(终浓度为2.1、2.6、3.1、3.6、4.1、6.2、8.2mmol·L-1)20μL，空白对照管加入等体积生理盐水，37℃预温3min，启动血小板聚集凝血因子分析仪，迅速加入2mmol·L-1 ADP15μL，记录血小板聚集曲线，以下式计算药物血小板聚集抑制率。
结果表明连翘酯苷A对ADP诱导大鼠体外血小板聚集具有抑制作用，并具明显的量效关系(表1)。当连翘酯苷终浓度为13.4mmol·L-1时，血小板聚集抑制率为72.4％，其抑制大鼠血小板聚集的IC50值为8.1mmol·L-1，表明连翘酯苷可通过抑制血小板的聚集缓解血栓的形成，且作用较强。
表1.Forsythiaside A对ADP诱导大鼠体外血小板聚集的作用(
n＝6)
**P＜0.01 vs NS，***P＜0.001 vs NS 实施例2连翘酯苷A对大鼠血浆凝血酶原时间(PT)的影响 大鼠腹主动脉取血，3.8％枸橼酸钠1∶9抗凝，2500r·min-1离心10min后取上清得PPP。将PT试剂置37℃的试剂预温孔中预温10min以上，用前摇匀。取50μL PPP置比浊管中，加入连翘酯苷A溶液(终浓度为8.3、12.5、16.6mmol·L-1)30μL，对照管加入等体积生理盐水，37℃准确预温180s后加入100μL37℃的PT试剂，立即启动仪器进行自动测试，记录结果。
结果表明连翘酯苷能明显延长大鼠离体血浆PT，且随着剂量的增加延长作用更加明显(表2)。终浓度为16.6mmol·L-1的连翘酯苷延长PT的作用已大于400s，表明连翘酯苷A的抗凝作用较强。
表2.Forsythiaside A对大鼠离体血浆PT的影响(
n＝6)
***P＜0.001 vs NS 实施例3连翘酯苷A对大鼠血浆凝血酶时间(TT)的影响 PPP制法同上，将TT试剂从冰箱中取出室温下静置10min，温度平衡至室温。取80μL PPP置比浊管中，加入连翘酯苷溶液(终浓度为7.1、10.7、14.2mmol·L-1)30μL，对照管加入等体积生理盐水，37℃准确预温180s后加入TT试剂100μL，立即启动仪器进行自动测试，记录结果。
结果表明连翘酯苷A能明显延长大鼠离体血浆TT，且呈明显的量效关系(表3)。
表3连翘酯苷A对大鼠离体血浆TT的影响(
n＝6)
*P＜0.05 vs NS，***P＜0.001 vs NS 实施例4 90天喂养毒性试验 选取健康Wistar大白鼠80只，体重(85±10)g，随机分为4个组，每组20只，雌雄各半。采用灌胃给药(连翘酯苷A含量大于60％)，每天1次，每次10ml/kg体重。剂量设置分别为1.8g/kg、0.6g/kg、0.18g/kg 3个剂量组和对照组。对照组给同体积的蒸馏水。给药后每周称一次体重，按体重调整给药量。给药期间观察动物进食、活动、粪便等一般表现及毒性反应情况。末次药后禁食过夜(16小时)，处死动物，取血检测血液学和血液生化学指标，用SYSMEX XT-1800i型全自动血细胞分析仪测血液学指标；用玻片法测定凝血时间；用SELECTRA-E型全自动生化分析仪测定血液生化学指标。并取各鼠的心、肝、脾、肺、肾、子宫、卵巢、睾丸称重，计算每100g体重相应脏器系数。同时取各动物的心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、肾上腺、胸腺、卵巢、睾丸作病理组织学检查。各给药组测定值与正常对照组比较，用t值法或校正t值法进行统计学分析，依测定结果综合评价其的安全性。
结果表明(1)在给药期间，连翘酯苷A各给药组与正常对照组大鼠的外观体征、行为活动、进食量及粪便等状况正常，动物无一死亡。实验期间，可见用药组动物饮水量增加，其余无明显异常。(2)连续用药13周，大鼠体重增长正常，给药组与正常对照组之间差异无显著性意义。食物利用率给药组与正常对照组之间比较差异亦无显著性意义。(3)给大鼠连续用药13周，测定给药组与正常对照组的红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HB)、血小板计数(PLT)、白细胞计数(WBC)及其分类淋巴细胞(LYM)、单核细胞(MOV)、粒细胞(Gran)、凝血时间(CT)。给药组与正常对照组比较，各指标无显著性差异。(4)给大鼠连续用药13周，测定给药组与正常对照组的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(cr)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(CHOL)、碱性磷酸酶(ALP)、葡萄糖(GLU)。给药组与正常对照组比较，均未发现有生物学意义的变化。但雄性动物用药组的甘油三脂(TG)有明显的降低，且有量-效关系；雌性动物也有类似的变化，但降低的幅度较小，同对照组比较，差异无显著性意义。(5)给大鼠连续用药13周后，给药组与正常对照组大鼠的肝、脾、肾、睾丸、卵巢、肾上腺、胸腺等主要脏器的湿重及脏器系数比较，差异无显著性意义。(6)大体解剖未见异常。表明在本实验条件下，连翘酯苷给Wistar大鼠连续灌胃90天，与对照组比较，高剂量组未见与受试物有关的毒性病理学改变。
以上实验结果说明连翘酯苷A具有良好的抗凝血作用，而且无毒性，使用安全。因此，连翘酯苷A可用于制备预防和治疗心脑血管疾病的药物。也可作为食品添加剂用于制备防治心脑血管疾病的功能性食品。
权利要求
1.连翘酯苷A在制备防治心脑血管疾病药物中的应用。
2.连翘酯苷A在制备抗凝血药物中的应用。
3.连翘酯苷A在制备预防心脑血管疾病的功能性食品中的应用。
全文摘要
本发明通过研究连翘酯苷A对ADP诱导大鼠体外血小板聚集的影响、对大鼠血浆凝血酶原时间(PT)的影响，以及对大鼠血浆凝血酶时间(TT)的影响，证明连翘酯苷A具有抑制血小板聚集的功能，同时也具有明显的抗凝血的作用。连翘酯苷A可用于制备防治心脑血管疾病药物。也可作为食品添加剂用于制备防治心脑血管疾病的功能性食品。
文档编号A23L1/30GK101816667SQ201010174238
公开日2010年9月1日 申请日期2010年5月11日 优先权日2010年5月11日
发明者张立伟, 柴秋彦 申请人:山西大学