专利名称：一种油田现场硝酸盐还原菌的检测方法
技术领域：
本发明属于油田微生物检测技术领域，特别是涉及一种油田现场硝酸盐还原菌的 检测方法
背景技术：
目前，在油田各项指标监测治理过程中，常常需要对微生物的数量进行检测，对油 田水样中的微生物数量测定可以监测和评价水质及污染情况。传统的微生物检测方法十分 繁琐、费时及受环境条件限制较强，如平板菌落计数法，需要在实验室无菌条件下进行，而 将油田现场水样运送到实验室，微生物数量及类型均会受到一定的影响。油田现场经常会 有大量的水样需要进行微生物的测定，传统的检测方法已不能满足实际的需要。
发明内容
本发明为解决现有技术存在的问题，提供了一种油田现场硝酸盐还原菌的检测方法。本发明目的是提供一种具有操作简单，数据可靠，准确快速，便于携带，检测效率 高，方便油田现场微生物检测等特点的油田现场硝酸盐还原菌的检测方法。为了克服现有技术的不足，本发明油田现场硝酸盐还原菌的检测方法采用如下技 术方案
一种油田现场硝酸盐还原菌的检测方法，其特征是硝酸盐还原菌检测包括检测瓶制 作和油田现场检测；
1)硝酸盐还原菌检测瓶制作
(1)清洗
玻璃瓶清洗，橡胶塞和铝箔盖清洗，然后用清水漂清，再用蒸馏水将玻璃瓶、橡胶塞、铝 箔盖清洗干净，空干残水；
(2)培养基配制
在常温常压下，培养基按硝酸盐还原菌测试瓶要求配制；
(3)封装和灭菌
将配制的培养基用移液器装进玻璃瓶内，盖上橡胶塞和铝箔盖，再用压盖器将其压紧 密封；将经加盖封口的测试瓶用高温蒸汽灭菌锅在100 - 140°C条件下进行高温灭菌10 -30分钟；
2)油田现场硝酸盐还原菌采用绝迹稀释法进行检测
检测油田现场待测水样中的硝酸盐还原菌的菌数时，将待测水样用无菌注射器逐级注 入测试瓶中稀释培养，直到最后一个测试瓶无菌生长为止，根据稀释的倍数计算出待测水 样中细菌的数目。本发明油田现场硝酸盐还原菌的检测方法还可以采用如下技术措施
所述的油田现场硝酸盐还原菌的检测方法，其特点是玻璃瓶清洗是将5 - 20mL玻璃瓶、橡胶塞和铝箔盖清洗是在洗衣粉水中清洗1 一 3次后于清水中漂洗，再用蒸馏水清洗， 空干残水。所述的油田现场硝酸盐还原菌的检测方法，其特点是培养基的重量配方为蛋白 胨0. 5 lg，牛肉粉0. 1 0. 5g,酵母粉0. 1 0. 5g，氯化钠0. 5 lg，硝酸钾0. 05 0. 3g,硝酸钠0. 05 0. 3g,硝酸铵0. 05 0. 2g,矿物质镁0. 0002 0. OOlg,铁0. 0002 0. 0005g，蒸馏水 100mL。所述的油田现场硝酸盐还原菌的检测方法，其特点是封装前，调节培养基溶液的 PH值为7 — 7. 6，将配制的培养基用移液器以4 - ISmL/瓶的量装进洗净的玻璃瓶内。所述的油田现场硝酸盐还原菌的检测方法 ，其特点是待测水样用无菌注射器逐 级注入测试瓶中稀释培养步骤；
1)准备数支已经过灭菌消毒干净的ImL医用注射器；
2)捆绑数个测试瓶，作为一排硝酸盐还原菌测试瓶，依次编上序号；
3)用注射器取ImL待测水样注入第1号测试瓶，充分震荡；另取一支注射器从第1号 测试瓶内取ImL液体注入第2号测试瓶，充分震荡，以此类推到最后一个测试瓶；
4)将注入油田现场水样的硝酸盐还原菌测试瓶进行实验室内培养，定期进行检测读数。本发明具有的优点和积极效果
油田现场硝酸盐还原菌的检测方法，由于采用了本发明全新的技术方案，与现有技术 相比，本发明油田现场硝酸盐还原菌的检测方法具有以下特点
(1)该油田现场硝酸盐还原菌的检测方法，生产过程简单，可靠性强，经济实用。(2)硝 酸盐还原菌测试瓶能够快速准确地测定硝酸盐还原菌的菌数，使用操作简单，便于携带，方 便用于油田微生物的检测。本发明具有操作简单，数据可靠，准确快速，便于携带，检测效率高，方便油田现场 微生物检测等优点。
具体实施例方式为能进一步了解本发明的技术内容、特点及功效，兹列举以下实例，并详细说明如 下
实施例1
一种油田现场硝酸盐还原菌的检测方法，包括检测瓶制作和油田现场检测，具体的操 作方法和检测步骤为
1.硝酸盐还原菌检测瓶制作 (1)材料清洗
将IOmL玻璃瓶在洗衣粉水中清洗两次，橡胶塞和铝箔盖在洗衣粉水中清洗一次，然后 用清水漂清至没有泡沫，再用蒸馏水将玻璃瓶、橡胶塞、铝箔盖清洗干净，空干残水，待用。(2)培养基配制
在常温常压下，按NRB测试培养基配制说明配制培养基。配方为 生长因子(蛋白胨0. 5 lg，牛肉粉0. 1 0. 5g,酵母粉0. 1 0. 5g)，氯化钠0. 5 Ig,硝酸钾0. 05 0. 3g，硝酸钠0. 05 0. 3g，硝酸铵0. 05 0. 2g，微量元素(矿物质镁0. 0002 0. OOlg,铁0. 0002 0. 0005g),蒸馏水IOOmL0调节溶液的pH值，使其达到7.0 7.6。(3)封装和灭菌
将配制的培养基用移液器以9mL/瓶的量装进洗净的玻璃瓶内，盖上橡胶塞和铝箔盖， 再用压盖器将其压紧密封；将经加盖封口的测试瓶用高温蒸汽灭菌锅在121°C条件下进行 高温灭菌20分钟。(4)捆绑
将密封灭菌好的瓶子待温度降至室温后，η个/组用宽胶带捆绑。完成后即可带去油 田现场进行硝酸盐还原菌的检测。
2.硝酸盐还原菌检测瓶油田现场使用
采用硝酸盐还原菌菌数测试瓶测定待测水样中的硝酸盐还原菌的菌数时，按照绝迹稀 释法原理，将待测水样用无菌注射器逐级注入测试瓶中稀释培养，直到最后一个测试瓶无 菌生长为止，根据稀释的倍数计算出待测水样中细菌的数目。具体操作采用以下的方法和 步骤
(1)准备数支已经过灭菌消毒干净的ImL医用注射器，备用；
(2)取上述一捆绑好η个测试瓶为一排的硝酸盐还原菌测试瓶，并依次编上序号1、2、 3......
(3)用上述准备好的注射器取ImL待测水样并注入到1号测试瓶中，充分震荡50下；
(4)另取一支无菌注射器从震荡后的1号测试瓶内取出ImL液体注入到2号测试瓶内， 充分震荡50下，以此类推到最后一个测试瓶中；
(5)将注入现场水样的硝酸盐还原菌测试瓶带回到实验室中进行规定温度的培养，定 期进行检测读数。
权利要求
一种油田现场硝酸盐还原菌的检测方法，其特征是硝酸盐还原菌检测包括检测瓶制作和油田现场检测；1)硝酸盐还原菌检测瓶制作(1)清洗玻璃瓶清洗，橡胶塞和铝箔盖清洗，然后用清水漂清，再用蒸馏水将玻璃瓶、橡胶塞、铝箔盖清洗干净，空干残水；(2)培养基配制在常温常压下，培养基按硝酸盐还原菌测试瓶要求配制； (3)封装和灭菌将配制的培养基用移液器装进玻璃瓶内，盖上橡胶塞和铝箔盖，再用压盖器将其压紧密封；将经加盖封口的测试瓶用高温蒸汽灭菌锅在100－140℃条件下进行高温灭菌10－30分钟；2)油田现场硝酸盐还原菌采用绝迹稀释法进行检测检测油田现场待测水样中的硝酸盐还原菌的菌数时，将待测水样用无菌注射器逐级注入测试瓶中稀释培养，直到最后一个测试瓶无菌生长为止，根据稀释的倍数计算出待测水样中细菌的数目。
2.按照权利要求1所述的的油田现场硝酸盐还原菌的检测方法，其特征是玻璃瓶清 洗是将5 - 20mL玻璃瓶、橡胶塞和铝箔盖清洗是在洗衣粉水中清洗1 一 3次后于清水中漂 洗，再用蒸馏水清洗，空干残水。
3.按照权利要求1所述的的油田现场硝酸盐还原菌的检测方法，其特征是培养基的 重量配方为蛋白胨0.5 lg，牛肉粉0. 1 0. 5g,酵母粉0. 1 0. 5g，氯化钠0. 5 lg，硝 酸钾0. 05 0. 3g，硝酸钠0. 05 0. 3g，硝酸铵0. 05 0. 2g，矿物质镁0. 0002 0. OOlg, 铁 0. 0002 0. 0005g,蒸溜水 100mL。
4.按照权利要求1所述的的油田现场硝酸盐还原菌的检测方法，其特征是封装前，调 节培养基溶液的PH值为7 — 7. 6，将配制的培养基用移液器以4 - ISmL/瓶的量装进洗净 的玻璃瓶内。
5.按照权利要求1所述的的油田现场硝酸盐还原菌的检测方法，其特征是待测水样 用无菌注射器逐级注入测试瓶中稀释培养步骤；(1)准备数支已经过灭菌消毒干净的ImL医用注射器；(2)捆绑数个测试瓶，作为一排硝酸盐还原菌测试瓶，依次编上序号；(3)用注射器取ImL待测水样注入第1号测试瓶，充分震荡；另取一支注射器从第1号 测试瓶内取ImL液体注入第2号测试瓶，充分震荡，以此类推到最后一个测试瓶；(4)将注入油田现场水样的硝酸盐还原菌测试瓶进行实验室内培养，定期进行检测读数。
全文摘要
本发明涉及一种油田现场硝酸盐还原菌的检测方法。本发明属于油田微生物检测技术领域。一种油田现场硝酸盐还原菌的检测方法，1)硝酸盐还原菌检测瓶制作(1)玻璃瓶清洗，橡胶塞和铝箔盖清洗，然后用清水漂清，再用蒸馏水清洗，空干残水；(2)培养基按NRB测试要求配制；(3)封装和灭菌，将培养基装进玻璃瓶，盖上橡胶塞和铝箔盖压紧密封；用高温蒸汽在100－140℃条件下进行高温灭菌10－30分钟；2)油田现场硝酸盐还原菌采用绝迹稀释法检测将待测水样用无菌注射器逐级注入测试瓶中稀释培养，直到最后一个测试瓶无菌生长为止，计算待测水样中细菌的数目。本发明具有操作简单，数据可靠，准确快速，便于携带，检测效率高等优点。
文档编号C12Q1/12GK101948905SQ201010278200
公开日2011年1月19日 申请日期2010年9月10日 优先权日2010年9月10日
发明者张心平, 胡欣 申请人:天津亿利科石油技术发展有限公司