专利名称：应用磁珠捕获去除杀菌后残留消毒剂的方法
技术领域：
本发明涉及一种应用磁珠捕获去除杀菌后残留消毒剂的方法，主要应用于消毒剂 (杀菌剂)杀菌性能的检测、鉴定和评价。
背景技术：
为了准确检测、鉴定和评价消毒剂(杀菌剂)杀菌性能，经过一定的杀菌时间后，都需要有去除残留消毒剂步骤。目前，最常用的去除残留消毒剂方法是中和剂法。常用的中和剂有以下几种5g/L硫代硫酸钠针对氯型消毒剂；3g/L卵磷脂+20g/L吐温80 ； 10g/L 硫代硫酸钠+20g/L吐温80，针对氧化型消毒剂。每次检测，需要去除残留消毒剂方法需鉴定合格后，方可应用。(引用《消毒技术规范》和QB/T2738-2005《日化产品抗菌抑菌效果的评价方法》)
但是中和剂法有如下缺点1.针对复方型消毒剂，上述中和剂成分是不够的，中和剂成分筛选复杂。2.不同的消毒剂有效物浓度不一致，上述常用中和剂成分的浓度不一定合理。3.中和剂成分本身不能对微生物有害。磁珠分离技术用于细菌的定性分离浓集等，包括特异性磁分离(免疫磁分离)和非特异性磁分离两种形式。由于免疫磁分离能特异性地吸附目标细菌，受到微生物学等学术界关注，但该技术的应用受到了包被抗体种类的限制。有研究表明，具有超顺磁性的裸磁珠能非特异性的吸附细菌，能对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、沙门菌、志贺菌、 副溶血性弧菌进行吸附。目前磁珠分离技术中所应用的磁珠对微生物的吸附率不够高，不适合微生物的定量检测。
发明内容
为了克服去除残留消毒剂步骤中，中和剂筛选复杂和困难的不足，本发明提供一种应用磁珠捕获去除杀菌后残留消毒剂的方法。本发明所采取的技术方案是应用磁珠捕获去除杀菌后残留消毒剂的方法是向无菌塑料管中加入含残留消毒剂的杀菌后液体和裸磁珠，轻轻摇勻，后静置5-15min ；再将该无菌塑料管放入磁力架上，静置吸附5-10 min，然后将无菌塑料管中的液体吸干；向无菌塑料管中加入0. 5 ml灭菌生理盐水并与裸磁珠混勻吸入平板；再加入0. 5 ml灭菌生理盐水清洗残留菌液，混勻后吸入平板。杀菌后液体和裸磁珠比例为5 0.2 1。与现有技术相比，本发明的有益效果是本发明使用裸磁珠对杀菌后处理液的残留消毒剂进行微生物吸附，吸附率> 99% ；本发明不仅可以有效去除残留消毒剂，同时避免对杀菌中所用中和剂成分进行筛选和浓度调配，方法更为简单、有效。本发明方法可适用于微生物的定量分离检测，从而能够应用于消毒剂中检测、鉴定和评价消毒剂(杀菌剂)杀菌性能。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明做进一步阐述，但并非对本发明做任何限定。本发明应用磁珠捕获去除杀菌后残留消毒剂的方法如下向无菌塑料管中加入含残留消毒剂的杀菌后液体和裸磁珠，轻轻摇勻，后静置5-15min ；再将该无菌塑料管放入磁力架上，静置吸附5-10 min，然后将无菌塑料管中的液体吸干；向无菌塑料管中加入0.5 ml 灭菌生理盐水并与裸磁珠混勻后吸入平板；再加入0. 5 ml灭菌生理盐水清洗残留菌液，混勻后吸入平板。杀菌后液体和裸磁珠比例为5 0.2 1。以下以具体实施例进一步说明本发明方法及其效果。
实施例1 本实施例针对裸磁珠1111 #加入量的不同对大肠杆菌吸附率的影响进行了比较。1. 1材料和试剂包括裸磁珠1111 #、指示菌和磁力架。其中，裸磁珠1111 #由杭州博日科技有限公司提供。指示菌为大肠杆菌(ATCC 25922)，中国工业菌种保藏中心提供。磁力架由英国MATRIX公司生产。1.2 方法
1. 2. 1菌悬液制备将大肠杆菌经过分离培养，取单个典型菌落接种营养琼脂培养基斜面，经培养后，取对h培养的新鲜斜面培养物，用胰蛋白胨生理盐水洗脱，稀释成含菌量为3X103 3X104 cfu/ml的菌悬液。1. 2. 2磁珠捕获菌数测定在2 ml无菌试管中分别加入20 ul、50 ulUOO ul裸磁珠1111 #，以及1. 2. 1制备的菌悬液体0. 5 ml(液体与裸磁珠比例分别为5:0. 2,5:0. 5、 5:1)，轻轻摇勻，静置10 min,期间间歇取出轻轻摇动。取出试管放入磁力架上，静置吸附 10 min，吸干液体于A空白平板中，A平板培养计数为残留菌数。吸干液体后立即向试管中加入0. 5 ml灭菌生理盐水，混勻磁珠，吸入B空白平板；再加入0. 5 ml灭菌生理盐水清洗残留菌液，混勻后吸入B平板，B平板培养计数为吸附菌数。吸附率(％)=吸附菌数X 100/菌悬液总菌数(菌悬液菌数为吸附菌数+残留菌数)。1.3 结果
结果显示，20 ul,50 ulUOO ul裸磁珠1111 #的残留菌数均小于1，均适用于微生物的定量检测。待处理液与裸磁珠的比例范围在5:0. 2 1之间均可。表1磁珠不同加入量对大肠杆菌吸附率比较
实施例2 本实施例中，对放入磁力架之前静置时间的不同对大肠杆菌吸附率的影响进行比较。 2. 1材料和试剂裸磁珠1111 # 由杭州博日科技有限公司提供。指示菌为大肠杆菌(ATCC 25922)，由中国工业菌种保藏中心提供。磁力架英国MATRIX公司生产。2.2 方法
磁珠捕获菌数测定在2 ml无菌试管中分别加入20 ul裸磁珠1111 #，以及1. 2. 1制备的菌悬液0.5 ml，轻轻摇勻，静置5min、10 min，15min，期间间歇取出轻轻摇动。取出试管放入磁力架上，静置吸附10 min，吸干液体于A空白平板中，培养计数为残留菌数。吸干液体后立即向试管中加入0.5 ml灭菌生理盐水，混勻磁珠，吸入B空白平板；再加入0.5 ml 灭菌生理盐水清洗残留菌液，混勻后吸入B平板，培养计数为吸附菌数。吸附率(％)=吸附菌数X 100/菌悬液总菌数(菌悬液菌数为吸附菌数+残留菌数)。2.3 结果
结果显示，静置5min、10 min，15min后，磁珠对微生物的吸附率均大于99 %。因此，静置 5min、10 min, 15min 均可。表2放入磁力架之前静置时间的不同对大肠杆菌吸附率影响比较
实施例3 本实施例中，对放入磁力架上的静置时间的不同对大肠杆菌吸附率的影响进行比较。
权利要求
1. 一种应用磁珠捕获去除杀菌后残留消毒剂的方法，其特征是向无菌塑料管中加入含残留消毒剂的杀菌后液体和裸磁珠，轻轻摇勻，后静置5-15min ；再将该无菌塑料管放入磁力架上，静置吸附5-10 min，然后将无菌塑料管中的液体吸干；向无菌塑料管中加入0. 5 ml灭菌生理盐水并与裸磁珠1111 #混勻吸入平板；再加入0. 5 ml灭菌生理盐水清洗残留菌液，混勻后吸入平板。
全文摘要
本发明公开一种应用磁珠捕获去除杀菌后残留消毒剂的方法向无菌塑料管中加入含残留消毒剂的杀菌后液体和裸磁珠，轻轻摇匀,后静置5-15min；再将该无菌塑料管放入磁力架上，静置吸附5-10min，然后将无菌塑料管中的液体吸干；向无菌塑料管中加入0.5ml灭菌生理盐水并与裸磁珠1111＃混匀吸入平板；再加入0.5ml灭菌生理盐水清洗残留菌液，混匀后吸入平板。本发明使用裸磁珠对含残留消毒剂的杀菌后处理液进行微生物吸附，吸附率＞99%；本发明不仅可以有效去除残留消毒剂，同时避免对杀菌中所用中和剂成分进行筛选和浓度调配，方法更为简单、有效。本发明方法可适用于微生物的定量分离检测，从而能够应用于消毒剂中检测、鉴定和评价消毒剂(杀菌剂)杀菌性能。
文档编号C12Q1/06GK102154440SQ201110000010
公开日2011年8月17日 申请日期2011年1月1日 优先权日2011年1月1日
发明者厉永刚, 姜侃, 金燕飞 申请人:浙江省质量技术监督检测研究院