专利名称：一种剑麻超氧化物歧化酶的分离方法
技术领域：
本发明涉及ー种从植物中分离超氧化物歧化酶的方法，具体涉及ー种从剑麻分离超氧化物歧化酶的方法。
背景技术：
超氧化物岐化酶广泛存在于生物体的自由基清除剂，其通过催化超氧阴离子自由基歧化为过氧化氢和氧气，减轻或消除超氧阴离子自由基对机体的氧化或过氧化损害，具有抗辐射、抗肿瘤、抗逆境及延缓机体衰老等功能，在药品、食品、保健品和化妆品等使用。如何从丰富的植物资源中分离超氧化物歧化酶，具有重要的现实意义，现有技术中分离提取超氧化物歧化酶的方法有ー些非常复杂、成本较高。
发明内容
本发明的目的是提供一种从剑麻分离超氧化物歧化酶的方法。本发明的目的实现方案是以剑麻叶片为材料，经过清洗、匀浆、过滤、离心、丙酮沉淀、溶解、透析、浓缩、葡聚糖凝胶过滤，分离出超氧化物歧化酶。本发明以剑麻叶片为超氧化物歧化酶分离材料。超氧化物歧化酶存在于正常展开、生长正常的健康叶片中。具体技术方案为ー种剑麻超氧化物歧化酶的分离方法，包括下述步骤(I)取新鲜成熟健康的剑麻叶片，洗浄、晾干，切碎，按质量体积比I : 2 3的比例加入pH为7 8，浓度为O. 01 O. 09mol/L的磷酸盐缓冲溶液，经匀浆、过滤、离心，收集
上清液；(2)取步骤(I)所得上清液加入丙酮，静置3 4小时，离心，收集沉淀；用浓度为O. 001 O. 005mol/L磷酸盐缓冲溶液溶解所得沉淀，离心，得上清液；上清液在浓度为O. 001 O. 005mol/L磷酸盐缓冲溶液中透析得透析液；将透析液离心，收集上清液，经浓缩，收集浓缩液；(3)取步骤(2)所得浓缩液用葡聚糖凝胶过滤，用pH为7 8，浓度为O. 001 O. 005mol/L的磷酸盐缓冲溶液进行洗脱，收集洗脱液，经离心，得上清液，经浓缩，得超氧化物歧化酶液，冷藏或冷冻干燥得超氧化物歧化酶。本发明方法分离所得的ー种剑麻超氧化物歧化酶经氰化钾、过氧化氢和氯仿-乙醇选择性试剂的抑制实验，发现其对氰化钾和过氧化氢敏感。同吋，紫外光吸收光谱特征分析结果表明，其在266nm有较强吸收。此外，原子吸收光谱特征分析结果表明，其铜、锌元素含量较高。该酶是ー种植物天然蛋白，不含有害物质，对人、动物无害、无病毒，可用于药品、食品、保健品和化妆品等。本发明以剑麻叶片为材料，经过清洗、晾干、匀浆、过滤、离心、丙酮沉淀、溶解、透析、浓缩、葡聚糖凝胶过滤，分离超氧化物歧化酶，方法简单快速，所获得的超氧化物歧化酶
3可以直接或经改性后应用于药品、食品、保健品和化妆品等，拓宽超氧化物歧化酶的来源。
图I是本发明エ艺生产流程图。
具体实施例方式实施例I :I、取新鲜成熟健康的剑麻叶片，洗浄、切碎，按质量体积比I : 2 3的比例加入pH为7 8，浓度为O. 01 O. 09mol/L的磷酸盐缓冲溶液，经匀浆、过滤、离心，收集上清液。2、取步骤I所得上清液加入丙酮，静置3 4小时，离心，收集沉淀。用浓度为O. 001 O. 005mol/L磷酸盐缓冲溶液溶解所得沉淀，离心，上清液在对浓度为O. 001
O.005mol/L磷酸盐缓冲溶液中透析过夜。离心，收集上清液，经浓缩，收集浓缩液。3、取步骤2所得浓缩液上葡聚糖凝胶柱，用pH为7 8，浓度为0.001
O.005mol/L的磷酸盐缓冲溶液进行洗脱，收集洗脱液，合并活性峰洗脱液，经离心，得到超氧化物歧化酶液。
权利要求
1.ー种剑麻超氧化物歧化酶的分离方法，其特征在于，包括下述步骤 (1)取新鲜成熟健康的剑麻叶片，洗浄、晾干、切碎，按质量体积比I: 2 3的比例加入pH为7 8，浓度为O. 01 O. 09mol/L的磷酸盐缓冲溶液，经匀浆、过滤、离心，收集上清液； (2)取步骤(I)所得上清液加入丙酮，静置3 4小时，离心，收集沉淀；用浓度为O. 001 O. 005mol/L磷酸盐缓冲溶液溶解所得沉淀，离心，得上清液；上清液在浓度为O. 001 O. 005mol/L磷酸盐缓冲溶液中透析得透析液；将透析液离心，收集上清液，经浓缩，收集浓缩液； (3)取步骤(2)所得浓缩液用葡聚糖凝胶过滤，用pH为7 8，浓度为0.001 O. 005mol/L的磷酸盐缓冲溶液进行洗脱，收集洗脱液，经离心，得上清液，经浓缩，得超氧化物歧化酶液，冷藏或冷冻干燥得超氧化物歧化酶。
全文摘要
一种剑麻超氧化物歧化酶的分离方法，是以剑麻叶片为材料，经过清洗、匀浆、过滤、离心、丙酮沉淀，沉淀用磷酸盐缓冲溶液溶解，离心，所得上清液经透析、浓缩，得到浓缩液。该浓缩液经过葡聚糖凝胶过滤，收集活性峰洗脱液，离心，得到上清液为超氧化物歧化酶液，本发明方法简便快速安全价廉，适合推广。
文档编号C12N9/08GK102911921SQ20111022340
公开日2013年2月6日 申请日期2011年8月5日 优先权日2011年8月5日
发明者陈冰 申请人:湛江师范学院