专利名称：甲鱼低聚肽的制备方法
技术领域：
本发明涉及甲鱼的深加工技术领域，具体涉及一种以甲鱼为原料，利用生物复合酶酶解制备甲鱼低聚肽的方法。
背景技术：
甲鱼又名鳖、团鱼，有补血、强骨、抗疲劳、延年益寿之功效，是我国传统食品，也是开发高级保健食品的良好原料；甲鱼的主要营养成分为蛋白质、脂肪、铁、钙、动物胶、角质白及多种维生素等。甲鱼含有很高的蛋白质，大约每公斤有165克蛋白质，而食物或药物中的蛋白质一般要被消化液酶解为低聚肽或氨基酸而被机体吸收和利用，因此吸收慢，利用率低，所以也达不到应有的药效。利用现代生物酶解技术，超滤和薄膜浓缩，喷雾干燥技术处理得到的小分子甲鱼低聚肽，可以克服上述问题，使甲鱼低聚肽口服能够更完全和直接被消化道吸收，目前，提取甲鱼低聚肽的方法主要有碱液提取法和生物酶解法，前者在提取过程中加入大量的碱处理，既破坏了蛋白质的成分，造成成品苦咸等不良口感，而且对环境造成污染；申请号 201010103157. 9专利文献中公开了甲鱼小分子多肽的制备方法用胰酶在55-60° C酶解 l-4h，在90-95° C保温10h，降温至60° C，加入复合蛋白酶酶解l_4h，再经过去油脂，活性炭脱色，真空浓缩，醇沉，高温灭菌，喷雾干燥得到成品。该方法胰蛋白酶但是成本高，操作流程太长，步骤繁琐，不适合工业化生产。
发明内容
针对现有技术的酶解液存在腥味，咸味和分子量大，分子量分布不集中，成本高的缺陷，本发明的目的在于提供了一种甲鱼低聚肽的提取方法，以甲鱼为原料用碱性蛋白酶和风味蛋白酶酶解，膜截留分子量为0. 5-30万道尔顿的超滤膜进行超滤和薄膜浓缩精制技术和喷雾干燥得到甲鱼低聚肽肽；本方法操作简便，口感好，成本低，环保高效，适合工业化大生产。为了实现上述技术目的，本发明采取以下技术措施 一种甲鱼低聚肽的制备方法，其步骤如下
1.按原料甲鱼的重量的0.2-5%的比率加入碱性蛋白酶，40-70 0C恒温搅拌，酶解 I-IOh,再按原料甲鱼重量的0. 1-2%的比率加入风味蛋白酶，40-70°C恒温酶解0. 2-4h，将得到的酶解液升温至85-120°C，灭酶10-60min;
2.将酶解液离心后过滤，上清液经过中空超滤膜，卷式膜或管式膜精制分离，膜截留分子量为0. 5-30万道尔顿的超滤膜，进口压力为1. 8-3bar,出口压力l_2bar，酶解液温度为 20-30 0C进行超滤分离，超滤液经过薄膜浓缩，喷雾干燥即得到甲鱼低聚肽。本发明也可以先把原料甲鱼搅碎，煎煮l-10h，冷却至45_65°C后再进行酶解。优选的制备方法
1.按原料甲鱼的重量的0. 5-3%的比率加入碱性蛋白酶，50-65°C恒温酶解2_4h，再按原料甲鱼重量的0. 25-1%的风味蛋白酶，50-65°C恒温酶解0. 5_2h，将得到的酶解液升温至 90-110° C，灭酶 20-40min;
2.将酶解液离心后过滤，上清液经过中空超滤膜，卷式膜或管式膜精制分离，膜截留分子量为5-15万道尔顿的超滤膜，进口压力为1.2-2. 5bar，出口压力1_1. 8bar，酶解液温度为20-30° C进行超滤分离，超滤液经过薄膜浓缩，喷雾干燥即得到甲鱼低聚肽成品。上述步骤中也可以先把原料甲鱼搅碎，煎煮2_4h，冷却至50-62° C后再进行酶解。更优的方法
1.按原料甲鱼的重量的2%的比率加入碱性蛋白酶，60°C恒温酶解3h，再分别按原料甲鱼重量的0. 5%的风味蛋白酶，60°C恒温酶解lh，将得到的酶解液升温至100° C，灭酶 30min；
2.3.将酶解液离心后过滤，上清液经过中空超滤膜，卷式膜或管式膜精制分离，膜截留分子量为10万道尔顿的超滤膜，进口压力为1. 5-2bar,出口压力1. 5bar ；酶解液温度为 25° C进行超滤分离，超滤液经过薄膜浓缩，喷雾干燥即得到甲鱼低聚肽成品。上述步骤中也可以先把原料甲鱼搅碎，煎煮4h，冷却至60° C后再进行酶解。本品为鳖科动物鳖Trionyx sinensis Wiegmann的全体。与现有技术相比，本发明方法的优点和有益效果如下
1.本发明方法提取的甲鱼低聚肽纯度高，分子量集中，分子量在1000-140道尔顿占 50%以上。2.本发明生产出来的甲鱼低聚肽的人体容易吸收。3.本方法避免了调节PH，纳滤脱盐工序，减少了工业成本，改善了成品的风味，提高了肽的得率。4.本发明的生产周期短，操作简便，成本低，产品质量可靠，安全无毒副作用，可广泛用于保健品、药品等领域。
具体实施例方式实施例1
一、制备方法，其步骤如下
1.以中华鳖为原料，选用鲜活甲鱼100kg，去除内脏和油脂，搅碎，加入1000L纯水， 100° C 煎煮 2h;
2.冷却至60°C，按原料甲鱼的重量的2%的比率加入碱性蛋白酶2kg，60°C恒温酶解 3h,加入0.5kg风味蛋白酶，60° C恒温酶解lh，然后升温至100° C，灭酶30min;
3.冷却至室温，4000r/min离心20min，收集上清液，上清液经分子量为10万道尔顿的卷式膜超滤，进口压力为1. 8-3bar,出口压力l-2bar，收集超滤液；
4.超滤液经薄膜浓缩到密度1.05-1.1之间，喷雾干燥即得到13. 55g粉末甲鱼低聚肽。二、甲鱼低聚肽含量测定 1.方法提要
低分子量的蛋白质水解物(包含肽类及游离氨基酸)可溶于三氯乙酸溶液；高分子量的蛋白质在三氯乙酸溶液中易沉淀。样品经三氯乙酸溶液溶解后，离心分离出沉淀蛋白质物质，测定出离心清液中的酸溶蛋白质含量，清液中的酸溶蛋白质含量减去游离氨基酸含量即为低聚肽的含量。2.分析步骤
2.1酸溶蛋白质含量的测定
称取2g (精确至Img)样品，加入至IOmL容量瓶中，用15%三氯乙酸溶液定容，混合均勻，静置lOmin。将样品溶液在4000rpm下离心IOmin后，取全部清液，按GB/T 5009. 5规定的方法测定清液中的酸溶蛋白质，蛋白质换算系数为6. 25。检验结果根据样品的干燥失重，折算为干基。2.2游离氨基酸含量的测定
样品前处理称取20 30mg样品，精确到0. OOOlg，用3%磺基水杨酸溶液溶解均勻。 将样品溶液转移至50ml容量瓶中，定容。将样品溶液在转速为4000r/min离心机上离心 5min得清液，再用0. 45 μ m微孔滤膜过滤清液，将滤液转移至50ml容量瓶中，定容后作为仪器检测用样品。其余操作同GB 12292水果、蔬菜汁游离氨基酸含量的测定规定的方法。2. 3结果的表述
肽的含量马按式(1)计算
巧=巧—j............................................................ (1)
式中
B1——样品中肽含量(以干基计)，% ； P1——样品中酸溶蛋白质含量(以干基计)，% ；
』——样品中游离氨基酸含量(以干基计)，％。2. 4测定结果
测定成品中肽的含量，结果见表1。表1肽粉中低聚肽的含量测定结果
权利要求
1.一种甲鱼低聚肽的制备方法，包括原料甲鱼酶解、浓缩、干燥，其特征在于用碱性蛋白酶和风味蛋白酶酶解，酶解液进行超滤。
2.根据权利要求1所述的甲鱼低聚肽的制备方法，其特征在于碱性蛋白酶加入量为原料甲鱼重量的0. 2-5%，恒温酶解l-10h，再加入原料甲鱼重量0. 1-2%的风味蛋白酶，恒温酶解0. 2-4h后，酶解液升温至85-120° C，灭酶10_60min。
3.根据权利要求2所述的甲鱼低聚肽的制备方法，其特征在于碱性蛋白酶加入量为原料甲鱼重量的0. 5-3%，恒温酶解2-4h，再加入原料甲鱼重量0. 25-1%的风味蛋白酶，恒温酶解0. 5-2h后，酶解液升温至90-110° C，灭酶20-40min。
4.根据权利要求3所述的甲鱼低聚肽的制备方法，其特征在于碱性蛋白酶加入量为原料甲鱼重量的2%，恒温酶解3h，再加入原料甲鱼重量0. 5%的风味蛋白酶，酶解lh，酶解液升温至100° C，灭酶30min。
5.根据权利要求1所述的甲鱼低聚肽的制备方法，其特征在于超滤选用膜截留分子量为0. 5-30万道尔顿的中空超滤膜或卷式膜或管式膜。
6.根据权利要求5所述的甲鱼低聚肽的制备方法，其特征在于超滤选用膜截留分子量为5-15万道尔顿的中空超滤膜或卷式膜或管式膜。
7.根据权利要求6所述的甲鱼低聚肽的制备方法，其特征在于超滤选用膜截留分子量为10万道尔顿的中空超滤膜或卷式膜或管式膜。
全文摘要
本发明的目的在于提供一种甲鱼低聚肽的提取方法，以甲鱼为原料用碱性蛋白酶酶解后，再用风味蛋白酶外切和调节风味，酶解液进行超滤，碱性蛋白酶加入量为原料甲鱼重量的0.2-5%，风味蛋白酶加入量为原料甲鱼重量的0.1-2%，膜截留分子量为0.5-30万道尔顿的超滤膜进行超滤，薄膜浓缩喷雾干燥得到甲鱼低聚肽；本方法操作简便，口感好，成本低，环保高效，非常适合工业化大生产。
文档编号C12P21/06GK102286589SQ201110236309
公开日2011年12月21日 申请日期2011年8月18日 优先权日2011年8月18日
发明者刘根云, 卢建中, 易敏之, 钟虹光, 马莉 申请人:江中药业股份有限公司