专利名称：采用芽孢杆菌生产5’-腺苷酸的方法
技术领域：
本发明涉及医药中间体技术领域，尤其是一种采用芽孢杆菌生产5’ -腺苷酸的方法。
背景技术：
现有技术中，常规采用有普通微生物发酵方法，原料利用率低仅有61. 2%，产品的收得率仅为1.05 ；或者，采用化学合成方法，但是，采用化学合成方法所用的部分原料属于有毒有害物质如三卤氧化磷，使得在生产过程中易对人体产生伤害，且产品只能用于生化试剂生产，不能应用于食品行业。传统生产方法生产的5’-腺苷酸产品中葛根素(HPLC)含量为97. 5%左右，紫外含量(UV)为97%左右。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种采用芽孢杆菌生产 5’ _腺苷酸的方法，这种方法生产的5’ -腺苷酸的收得率较高。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是一种采用芽孢杆菌生产5’ -腺苷酸的方法，具体为(1)用芽孢杆菌培养基培养芽孢杆菌，(2)用发酵培养基培养发酵液，(3) 当芽孢杆菌的菌浓达到28% 35%时将腺苷投入发酵液中，发酵液温度控制在25 40 摄氏度，发酵20 25小时后，按照腺苷与酶试剂95 1 105 1的比例加入酶试剂；8 16小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到5’ -腺苷酸。具体地，所述的芽孢杆菌培养基包含蛋白胨20g/L、牛肉浸粉5g/L、氯化钠5g/L。具体地，所述的发酵培养基包含葡萄糖20g/L、酵母抽提物4. Og/L、碳酸钙5g/L、 硫酸铵10g/L、磷酸二氢钾1. Og/L、七水硫酸亚铁0. 01g/L、七水硫酸镁0. 01g/L。具体地，步骤(3)步骤(4)具体为(3)当芽孢杆菌的菌浓达到30%时将腺苷投入发酵液中，发酵液温度控制在28 35摄氏度，发酵22 24小时后，按照腺苷与酶试剂
100 1的比例加入酶试剂；(4) 12小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液， 调节清液PH值为酸性后得到5’ -腺苷酸。具体地，步骤(3)步骤(4)具体为(3)当芽孢杆菌的菌浓达到30. 5%时将腺苷投入发酵液中，发酵液温度控制在27 34摄氏度，发酵21 23小时后，按照腺苷与酶试剂
101 1的比例加入酶试剂；(4) 11 12小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到5’ -腺苷酸。具体地，步骤(3)步骤(4)具体为(3)当芽孢杆菌的菌浓达到30. 5% -32%时，将 500g腺苷投入3L发酵液中；发酵液温度控制在28 35摄氏度，发酵22 24小时后，在 0.4 0.5小时后将乙酰磷酸作为酶试剂加入发酵液中，按照腺苷与酶试剂100 1的比例加入酶试剂；(4) 12小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到5’ -腺苷酸。
一种利用芽孢杆菌生产5’_腺苷酸的方法，(1)用芽孢杆菌培养基培养芽孢杆菌， 所述的芽孢杆菌培养基包含蛋白胨20g/L、牛肉浸粉5g/L、氯化钠5g/L ； (2)用发酵培养基培养发酵液，所述的发酵培养基包含葡萄糖20g/L、酵母抽提物4. Og/L、碳酸钙5g/L、硫酸铵10g/L、磷酸二氢钾1. Og/L、七水硫酸亚铁0. 01g/L、七水硫酸镁0. 01g/L ； (3)当芽孢杆菌的菌浓达到28% 35%时将腺苷投入发酵液中，发酵液温度控制在25 40摄氏度， 发酵20 25小时后，按照腺苷与酶试剂95 1 105 1的比例加入酶试剂；(4) 8 16 小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到5’-腺苷酸。具体地，步骤(3)步骤(4)具体为(3)当芽孢杆菌的菌浓达到30. 5%-32%时，将 500g腺苷投入3L发酵液中；发酵液温度控制在28 35摄氏度，发酵22 24小时后，在 0.4 0.5小时后将乙酰磷酸作为酶试剂加入发酵液中，按照腺苷与酶试剂100 1的比例加入酶试剂；(4) 12小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到5’ -腺苷酸。本发明的有益效果是经上述方法得到的5’ -腺苷酸为5’ -腺苷酸粗品，5’ -腺苷酸粗品按照结晶程序结晶，得5’-腺苷酸成品。经检验5’-腺苷酸产品的葛根素(HPLC) 含量为99%，紫外含量(UV)含量为98.5%，5’ -腺苷酸产品的收得率为1. 25，比现有技术中所采用的普通微生物发酵方法和化学合成方法所的产品的收得率均高出很多。
具体实施例方式实施例一一种采用芽孢杆菌生产5’_腺苷酸的方法，具体为(1)用芽孢杆菌培养基培养芽孢杆菌，(2)用发酵培养基培养发酵液，(3)当芽孢杆菌的菌浓达到28% 35%时将腺苷投入发酵液中，发酵液温度控制在25 40摄氏度，发酵20 25小时后，按照腺苷与酶试剂 95 1 105 1的比例加入酶试剂；(4) 8 16小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱， 经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到5’ -腺苷酸。实施例二一种采用芽孢杆菌生产5’_腺苷酸的方法，具体为(1)用芽孢杆菌培养基培养芽孢杆菌，芽孢杆菌培养基包含蛋白胨20g/L、牛肉浸粉5g/L、氯化钠5g/L，(2)用发酵培养基培养发酵液，(3)当芽孢杆菌的菌浓达到28% 35%时将腺苷投入发酵液中，发酵液温度控制在25 40摄氏度，发酵20 25小时后，按照腺苷与酶试剂95 1 105 1的比例加入酶试剂；(4) 8 16小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到5’ -腺苷酸。实施例三一种采用芽孢杆菌生产5’_腺苷酸的方法，具体为(1)用芽孢杆菌培养基培养芽孢杆菌，(2)用发酵培养基培养发酵液，发酵培养基包含葡萄糖20g/L、酵母抽提物4. Og/ L、碳酸钙5g/L、硫酸铵10g/L、磷酸二氢钾1.0g/L、七水硫酸亚铁0.01g/L、七水硫酸镁 0. 01g/L，(3)当芽孢杆菌的菌浓达到28% 35%时将腺苷投入发酵液中，发酵液温度控制在25 40摄氏度，发酵20 25小时后，按照腺苷与酶试剂95 1 105 1的比例加入酶试剂；(4) 8 16小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到5’ _腺苷酸。实施例四一种采用芽孢杆菌生产5’_腺苷酸的方法，具体为(1)用芽孢杆菌培养基培养芽孢杆菌，(2)用发酵培养基培养发酵液，(3)当芽孢杆菌的菌浓达到30%时将腺苷投入发酵液中，发酵液温度控制在28 35摄氏度，发酵22 24小时后，按照腺苷与酶试剂100 1 的比例加入酶试剂；(4) 12小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到5’ -腺苷酸。实施例五一种采用芽孢杆菌生产5’ -腺苷酸的方法，具体为(1)用芽孢杆菌培养基培养芽孢杆菌，(2)用发酵培养基培养发酵液，(3)当芽孢杆菌的菌浓达到30. 5%时将腺苷投入发酵液中，发酵液温度控制在27 34摄氏度，发酵21 23小时后，按照腺苷与酶试剂 101 1的比例加入酶试剂；(4) 11 12小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到5’ -腺苷酸。实施例六一种采用芽孢杆菌生产5’_腺苷酸的方法，具体为(1)用芽孢杆菌培养基培养芽孢杆菌，(2)用发酵培养基培养发酵液，(3)当芽孢杆菌的菌浓达到30. 5% -32%时，将500g 腺苷投入3L发酵液中；发酵液温度控制在28 35摄氏度，发酵22 24小时后，在0. 4 0.5小时后将乙酰磷酸作为酶试剂加入发酵液中，按照腺苷与酶试剂100 1的比例加入酶试剂；(4) 12小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到5’ -腺苷酸实施例七一种利用芽孢杆菌生产5’_腺苷酸的方法，(1)用芽孢杆菌培养基培养芽孢杆菌， 所述的芽孢杆菌培养基包含蛋白胨20g/L、牛肉浸粉5g/L、氯化钠5g/L ； (2)用发酵培养基培养发酵液，所述的发酵培养基包含葡萄糖20g/L、酵母抽提物4. Og/L、碳酸钙5g/L、硫酸铵10g/L、磷酸二氢钾1. Og/L、七水硫酸亚铁0. 01g/L、七水硫酸镁0. 01g/L ； (3)当芽孢杆菌的菌浓达到28% 35%时将腺苷投入发酵液中，发酵液温度控制在25 40摄氏度， 发酵20 25小时后，按照腺苷与酶试剂95 1 105 1的比例加入酶试剂；(4) 8 16 小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到5’-腺苷酸。实施例八一种利用芽孢杆菌生产5’_腺苷酸的方法，(1)用芽孢杆菌培养基培养芽孢杆菌， 所述的芽孢杆菌培养基包含蛋白胨20g/L、牛肉浸粉5g/L、氯化钠5g/L ； (2)用发酵培养基培养发酵液，所述的发酵培养基包含葡萄糖20g/L、酵母抽提物4. 0g/L、碳酸钙5g/L、硫酸铵10g/L、磷酸二氢钾1. 0g/L、七水硫酸亚铁0. 01g/L、七水硫酸镁0. 01g/L ； (3)当芽孢杆菌的菌浓达到30. 5% -32%时，将500g腺苷投入3L发酵液中；发酵液温度控制在28 35摄氏度，发酵22 24小时后，在0. 4 0. 5小时后将乙酰磷酸作为酶试剂加入发酵液中，按照腺苷与酶试剂100 1的比例加入酶试剂；(4) 12小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到5’ -腺苷酸。经上述方法得到的5’ -腺苷酸为5’ -腺苷酸粗品，5’ -腺苷酸粗品按照结晶程序结晶，得5，-腺苷酸成品625g。经检验5，-腺苷酸产品的葛根素(HPLC)含量为99%，紫外含量(UV)含量为98. 5%，5’_腺苷酸产品的收得率为1. 25，比现有技术中所采用的普通微生物发酵方法和化学合成方法所的产品的收得率均高出很多。使用本发明的方法生产的 5’ _腺苷酸产品可直接运用与食品行业。
权利要求
1.一种采用芽孢杆菌生产5’-腺苷酸的方法，具体为(1)用芽孢杆菌培养基培养芽孢杆菌，(2)用发酵培养基培养发酵液，其特征在于(3)当芽孢杆菌的菌浓达到28% 35% 时将腺苷投入发酵液中，发酵液温度控制在25 40摄氏度，发酵20 25小时后，按照腺苷与酶试剂95 1 105 1的比例加入酶试剂；(4)8 16小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到5’ -腺苷酸。
2.根据权利要求1所述的采用芽孢杆菌生产5’-腺苷酸的方法，其特征在于所述的芽孢杆菌培养基包含蛋白胨20g/L、牛肉浸粉5g/L、氯化钠5g/L。
3.根据权利要求1所述的采用芽孢杆菌生产5’-腺苷酸的方法，其特征在于所述的发酵培养基包含葡萄糖20g/L、酵母抽提物4. Og/L、碳酸钙5g/L、硫酸铵10g/L、磷酸二氢钾1. Og/L、七水硫酸亚铁0. 01g/L、七水硫酸镁0. 01g/L。
4.根据权利要求1所述的采用芽孢杆菌生产5’-腺苷酸的方法，其特征在于步骤(3) 步骤(4)具体为(3)当芽孢杆菌的菌浓达到30%时将腺苷投入发酵液中，发酵液温度控制在28 35摄氏度，发酵22 24小时后，按照腺苷与酶试剂100 1的比例加入酶试剂； (4) 12小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到 5’ -腺苷酸。
5.根据权利要求1所述的采用芽孢杆菌生产5’-腺苷酸的方法，其特征在于步骤(3) 步骤(4)具体为(3)当芽孢杆菌的菌浓达到30. 5%时将腺苷投入发酵液中，发酵液温度控制在27 34摄氏度，发酵21 23小时后，按照腺苷与酶试剂101 1的比例加入酶试剂；(4) 11 12小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到5’ -腺苷酸。
6.根据权利要求1所述的采用芽孢杆菌生产5’-腺苷酸的方法，其特征在于步骤(3) 步骤(4)具体为(3)当芽孢杆菌的菌浓达到30. 5%-32%时，将500g腺苷投入3L发酵液中； 发酵液温度控制在28 35摄氏度，发酵22 24小时后，在0. 4 0. 5小时后将乙酰磷酸作为酶试剂加入发酵液中，按照腺苷与酶试剂100 1的比例加入酶试剂；(4) 12小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液ra值为酸性后得到5’ -腺苷酸。
7.一种利用芽孢杆菌生产5’ -腺苷酸的方法，其特征在于(1)用芽孢杆菌培养基培养芽孢杆菌，所述的芽孢杆菌培养基包含蛋白胨20g/L、牛肉浸粉5g/L、氯化钠5g/L ； (2) 用发酵培养基培养发酵液，所述的发酵培养基包含葡萄糖20g/L、酵母抽提物4. 0g/L、碳酸钙5g/L、硫酸铵10g/L、磷酸二氢钾1. 0g/L、七水硫酸亚铁0. 01g/L、七水硫酸镁0. 01g/L ；(3)当芽孢杆菌的菌浓达到28% 35%时将腺苷投入发酵液中，发酵液温度控制在25 40摄氏度，发酵20 25小时后，按照腺苷与酶试剂95 1 105 1的比例加入酶试剂；(4)8 16小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到5’ -腺苷酸。
8.根据权利要求7所述的利用芽孢杆菌生产5’-腺苷酸的方法，其特征在于步骤(3) 步骤(4)具体为(3)当芽孢杆菌的菌浓达到30. 5% -32%时，将500g腺苷投入3L发酵液中；发酵液温度控制在28 35摄氏度，发酵22 24小时后，在0. 4 0. 5小时后将乙酰磷酸作为酶试剂加入发酵液中，按照腺苷与酶试剂100 1的比例加入酶试剂；(4) 12小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液PH值为酸性后得到5’ -腺苷酸。
全文摘要
本发明涉及一种采用芽孢杆菌生产5’-腺苷酸的方法，具体为(1)用芽孢杆菌培养基培养芽孢杆菌，(2)用发酵培养基培养发酵液，(3)当芽孢杆菌的菌浓达到28％～35％时将腺苷投入发酵液中，发酵液温度控制在25～40摄氏度，发酵20～25小时后，按照腺苷与酶试剂95∶1～105∶1的比例加入酶试剂；(4)8～16小时后压榨发酵液，将发酵液上树脂柱，经洗脱得清液，调节清液pH值为酸性后得到5’-腺苷酸。经上述方法得到5’-腺苷酸产品的收得率较高。
文档编号C12R1/07GK102329836SQ20111027714
公开日2012年1月25日 申请日期2011年9月19日 优先权日2011年9月19日
发明者丁楠, 刘拥军, 张军 申请人:南通香地生物有限公司