专利名称：一种利用海参制备ace抑制肽的方法
技术领域：
本发明涉及一种肽的制备，尤其涉及一种利用海参制备ACE抑制肽的方法。
背景技术：
降血压肽，又称为血管紧张素转化酶(Angiotensin Converting Enzyme, EC3.4. 15. 1，简称ACE)抑制肽，是从食物蛋白中分离出的一类具有显著降低血压功效的肽，通常为小分子肽。在众多降压物质中，降血压肽因其无毒副作用的降压功能成为活性肽研究的热点。现在已经从乳酪蛋白中的干酪素、乳清蛋白等；动植物蛋白中的鸡肉、明胶、猪肉、鸡蛋、荞麦、玉米、椰菜、大蒜等；鱼贝藻类蛋白中的沙丁鱼、金枪鱼、鳝鱼头、牡蛎、裙带菜等分离出ACE抑制肽；国内一些研究者还从中国传统的食品即墨老酒，豆腐乳中发现ACE 抑制肽。目前，许多研究己经通过体内实验验证ACE抑制肽具有较好的降压活性，且对正常血压无影响。海参隶属于棘皮动物门海参纲。在明代《食物本草》中，早已指出海参具有主补元气、滋益五脏六腑和祛虚损等诸多养生功能。现代医学研究证明，海参富含多糖、海参素、 海参皂甙、谷氨酸、甘氨酸、精氨酸、硒、锌、铁、碘、钙、超氧化物歧化酶(SOD)、硫酸软骨素等 50多种对人体有益的营养成分，是一座天然的营养宝库。经实验测定，海参水解肽也具有 ACE抑制活性，是潜在的可开发的降血压活性物质。目前，还未见有利用海参制备ACE抑制肽的研究报道。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种利用海参制备ACE抑制肽的方法。该方法提取所得的海参活性肽具有ACE抑制活性和降压功效。该制备ACE抑制肽的方法工艺合理、操作简便、可操作性强、易实现工业化生产。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其是以包括鲜海参、或干海参、或水发参、或高压参在内的海参为原料，进行脱盐、软化处理，制浆后加入海参重量10 30倍的纯净水，加热灭除微生物，冷却后加入蛋白水解酶进行酶解，酶解液加热灭酶，冷却后离心去除不溶物，上清液通过管膜过滤脱除大分子，管膜滤过液通过孔径为3000DaltOn的有机膜截留分级，3000DaltOn以下的截留液通过纳滤浓缩脱盐，干燥，得海参ACE抑制肽。所述的蛋白水解酶为复合蛋白水解酶或风味蛋白水解酶中的一种，其用量为海参重量的2 10%。。本发明是将海参原料经脱盐、软化处理，制浆后加水，加热灭除微生物，冷却后酶解，加热灭酶，冷却后离心，取上清液通过管滤、超滤、纳滤，干燥，得海参ACE抑制肽。所分离得到的具有ACE抑制活性的短肽保存了完好的结构和有效的生物活性。实验表明，采用此方法分离出的ACE抑制肽经原发性高血压大鼠实验，能有效降低大鼠舒张压。该方法利用可控的酶解条件，并结合膜分离技术将具有ACE抑制功效的短肽片段分离出来，其酶解技术方案实现了最佳优化，经管滤、超滤、纳滤技术进行分离提取，其提取的效率高。分离出的具有降压活性的短肽片段具有较高的利用价值。其制备ACE抑制肽的方法工艺合理、操作简便、可操作性强，易实现工业化生产。
具体实施例方式一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其具体工艺步骤如下
a、原料的选取与处理其是以鲜海参为原料，将鲜海参去肠后，放入沸水浴水煮IOmin 以上，捞出浙干水分去除参嘴，然后利用高压锅或杀菌锅进行软化处理；
或是以干海参为原料，将干海参放入冷水中浸泡Mh以上去除盐分，放入沸水浴水煮 IOmin以上，捞出浙干水分去除参嘴，然后利用高压锅或杀菌锅进行软化处理； 或是以水发海参为原料； 或是以高压海参为原料；
将上述经过脱盐、软化处理的鲜海参、或干海参、或水发海参、或高压海参原料采用打浆机进行打浆处理，然后采用胶体磨将物料进一步细化处理，得浆状物；
b、酶解将步骤(a)得到的浆状物加入海参重量10 30倍的纯净水，加热至溶液中心温度达到95 100°C，持续lOmin，灭除微生物；冷却至50 55°C，加入蛋白水解酶进行酶解，其用量为海参重量的2 10%。，酶解时间为1 池，得酶解液；其中，所述的蛋白水解酶为复合蛋白水解酶或风味蛋白水解酶中的一种；
c、灭酶将步骤(b)酶解所得的酶解液加热至溶液中心温度达到95 100°C，持续 10 30min，进行灭酶处理，得灭酶的酶解液；
d、去除不溶物将步骤(c)所得的灭酶酶解液冷却至4°C，采用离心机离心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜过滤将步骤(d)收集的上清液采用管膜过滤脱除大分子，管膜滤过液通过孔径为3000DaltOn的有机膜截留分级，收集3000DaltOn以下截留液；
f、纳滤将步骤(e)收集的3000DaltOn以下的截留液，通过纳滤浓缩脱盐，收集纳滤截留液；
g、干燥将步骤(f)收集的纳滤截留液进行干燥处理，得ACE抑制肽。下面结合实施例对本发明做进一步说明。实施例1
一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其具体工艺步骤如下
a、原料的选择与处理选取鲜海参IOOkg为原料，去肠后，放入沸水浴水煮20min，捞出浙干水分去除参嘴，然后采用杀菌锅0. IMpa 121°C 30min进行软化处理，软化处理的海参为Ag，将该软化的海参使用打浆机进行打浆处理，然后采用胶体磨将物料进一步细化处理，得到粒度很小的海参浆状物；
b、酶解将所得的海参浆状物加入200L的纯净水，加热至溶液中心温度达到100°C， 持续lOmin，灭除微生物；冷却至50°C，加入复合蛋白水解酶40g，酶解池，得酶解液；其中复合蛋白水解酶可为市购的商品酶，如ftOtamex复合蛋白酶，也可以自行配制，配制的复合蛋白水解酶中含有木瓜蛋白酶、淀粉酶等多种酶；
c、灭酶将酶解液加热至溶液中心温度达到100°C，持续lOmin，进行灭酶处理；d、去除不溶物将灭酶后的酶解液冷却至4°C，采用三足式离心机，控制转速2000 rpm，离心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜过滤将收集的上清液采用管膜过滤进一步脱除大分子，管膜滤过液通过孔径为3000DaltOn的有机膜截留分级，收集3000DaltOn以下截留液；
f、纳滤将收集的3000DaltOn以下的截留液，通过纳滤浓缩脱盐，最终浓液电导达到 300μ s/cm以下时，停止纳滤，收集纳滤截留液；
g、FD冻干将收集的纳滤截留液加到杀过菌的料盘中，厚度在5mm-30mm之间均可，然后放到冻结隧道中，进行冻结，时间在6 — 12个小时左右，冻结后马上进入冻干仓进行冻干处理，冻干后采用粉碎机进行粉碎，所得粉状物即为ACE抑制肽。实施例2
一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其具体工艺步骤如下
a、原料的选择与处理选取干海参5kg为原料，放入冷水中浸泡1天，捞出放入沸水中煮20min，捞出后采用杀菌锅0. IMpa 121°C 20min进行软化处理，软化处理的海参采用打浆机进行打浆处理，然后采用胶体磨将物料进一步细化处理，得到粒度很小的海参浆状物；
b、酶解将所得的海参浆状物加入100L的纯净水，加热至溶液中心温度达到95°C，持续30min，灭除微生物；冷却至55°C，加入风味蛋白水解酶50g，酶解lh，得酶解液；
c、灭酶将酶解液加热至溶液中心温度达到95°C，持续lOmin，进行灭酶处理；
d、去除不溶物将灭酶后的酶解液冷却至4°C，采用管式离心机，控制转速3000rpm, 离心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜过滤将收集的上清液采用管膜过滤进一步脱除大分子，管膜滤过液通过孔径为3000DaltOn的有机膜截留分级，收集3000DaltOn以下的截留液；
f、纳滤将收集的3000DaltOn以下的截留液，通过纳滤浓缩脱盐，最终浓液电导达到 300 μ s/cm以下时，停止纳滤，收集纳滤截留液；
g、喷雾干燥将收集的纳滤截留液进行喷雾干燥，所得粉状物即为ACE抑制肽。实施例3
一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其具体工艺步骤如下
a、原料的选择与处理其是选取水发参20kg为原料，使用打浆机进行打浆处理，再采用胶体磨将物料进一步细化处理，得到粒度很小的海参浆状物；
b、酶解将所得到的海参浆状物加入200L的纯净水，加热至溶液中心温度达到100°C， 持15min，灭除微生物；冷却至50°C，加入复合蛋白水解酶50g，酶解池，得酶解液；复合蛋白水解酶为市购的ftOtamex复合蛋白酶；
c、灭酶将酶解液加热至溶液中心温度达到100°C，持续lOmin，进行灭酶处理；
d、去除不溶物将灭酶后的酶解液冷却至4°C，采用三足式离心机，控制转速2000 rpm，离心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜过滤将收集的上清液采用管膜过滤进一步脱除大分子，管膜滤过液通过孔径为3000DaltOn的有机膜截留分级，收集3000DaltOn以下截留液；
f、纳滤将收集的3000DaltOn以下的截留液，通过纳滤浓缩脱盐，最终浓液电导达到 300 μ s/cm以下时，停止纳滤，收集纳滤截留液；g、冻干将收集的纳滤截留液进行采用冷冻干燥法冻干，冻干后粉碎，所得粉状物即为ACE抑制肽。实施例4
一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其具体工艺步骤如下
a、原料的选择与处理其是选取高压参20kg为原料，采用打浆机进行打浆处理，再采用胶体磨进一步将物料细化处理，得到粒度很小的海参浆状物；
b、酶解将所得的海参浆状物加入300L的纯净水，加热至溶液中心温度达到95°C，持续lOmin，灭除微生物；冷却至53°C，加入风味蛋白水解酶60g，酶解池，得酶解液；
c、灭酶将酶解液加热至溶液中心温度达到95°C，持续lOmin，进行灭酶处理；
d、去除不溶物将灭酶后的酶解液冷却至4°C，采用三足式离心机，控制转速2000 rpm,离心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜过滤将收集的上清液采用管膜过滤进一步脱除大分子，管膜滤过液通过孔径为3000DaltOn的有机膜截留分级，收集3000DaltOn以下截留液；
f、纳滤将收集的3000DaltOn以下的截留液，通过纳滤浓缩脱盐，最终浓液电导达到 300μ s/cm以下时，停止纳滤，收集纳滤截留液；
g、干燥将收集的纳滤截留液进行采用微波干燥法进行干燥，粉碎后所得粉状物即为 ACE抑制肽。实施例5
一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其具体工艺步骤如下
a、原料的选择与处理其是选取盐渍海参IOkg为原料，放入冷水中浸泡12小时去盐处理，捞出放入沸水中煮20min，捞出后采用杀菌锅0. IMpa 121°C 20min进行软化处理，软化处理后的海参采用打浆机进行打浆处理，然后采用胶体磨将物料进一步细化处理，得到粒度很小的海参浆状物；
b、酶解将所得的海参浆状物加入250L的纯净水，加热至溶液中心温度达到97°C，持续20min，灭除微生物；冷却至50°C，加入风味蛋白水解酶50g，酶解池，得酶解液；
c、灭酶将酶解液加热至溶液中心温度达到100°C，持续lOmin，进行灭酶处理；
d、去除不溶物将灭酶后的酶解液冷却至4°C，采用三足式离心机，控制转速2000 rpm，离心去除不溶物，收集上清液；
e、管膜过滤将收集的上清液采用管膜过滤进一步脱除大分子，管膜滤过液通过孔径为3000DaltOn的有机膜截留分级，收集3000DaltOn以下截留液；
f、纳滤将收集的3000DaltOn以下的截留液，通过纳滤浓缩脱盐，最终浓液电导达到 300 μ s/cm以下时，停止纳滤，收集纳滤截留液；
g、干燥将收集的纳滤截留液进行采用微波干燥法进行干燥，粉碎后所得粉状物即为 ACE抑制肽。下面结合动物实验进一步说明本发明所制备的ACE抑制肽的降压效果。本动物实验是将M只SHR随机分为空白对照组8只，阳性对照组8只、ACE抑制肽样品组8只，阳性对照组给予卡托普利0. M mg/kg*d剂量灌胃。ACE抑制肽样品组ACE 抑制肽溶液以0. 48g/kg ·(!剂量灌胃，给药时间均为4周。每周测定尾动脉收缩压一次，数据见附表。
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附表各给药组对SHR尾动脉收缩压的影响(i 士 s，mmHg)
权利要求
1.一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其特征在于其是以包括鲜海参、或干海参、 或水发参、或高压参在内的海参为原料，进行脱盐、软化处理，制浆后加入海参重量10 30 倍的纯净水，加热灭除微生物，冷却后加入蛋白水解酶进行酶解，酶解液加热灭酶，冷却后离心去除不溶物，上清液通过管膜过滤脱除大分子，管膜滤过液通过孔径为3000DaltOn的有机膜截留分级，3000DaltOn以下的截留液通过纳滤浓缩脱盐，干燥，得ACE抑制肽。
2.根据权利要求1所述的一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其特征在于所述的蛋白水解酶为复合蛋白水解酶或风味蛋白水解酶中的一种，其用量为海参重量的2 10%。
3.一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其特征在于其具体工艺步骤如下a、原料的选取与处理其是以鲜海参为原料，将鲜海参去肠后，放入沸水浴水煮IOmin 以上，捞出浙干水分去除参嘴，然后利用高压锅或杀菌锅进行软化处理；或是以干海参为原料，将干海参放入冷水中浸泡Mh以上去除盐分，放入沸水浴水煮 IOmin以上，捞出浙干水分去除参嘴，然后利用高压锅或杀菌锅进行软化处理；或是以水发海参为原料；或是以高压海参为原料；将上述经过脱盐、软化处理的鲜海参、或干海参、或水发海参、或高压海参原料采用打浆机进行打浆处理，然后采用胶体磨将物料进一步细化处理，得浆状物；b、酶解将步骤(a)得到的浆状物加入海参重量10 30倍的纯净水，加热至溶液中心温度达到95 100°C，持续lOmin，灭除微生物；冷却至50 55°C，加入蛋白水解酶进行酶解，其用量为海参重量的2 10%。，酶解时间为1 池，得酶解液；其中，所述的蛋白水解酶为复合蛋白水解酶或风味蛋白水解酶中的一种；c、灭酶将步骤(b)酶解所得的酶解液加热至溶液中心温度达到95 100°C，持续 10 30min，进行灭酶处理，得灭酶的酶解液；d、去除不溶物将步骤(c)所得的灭酶酶解液冷却至4°C，采用离心机离心去除不溶物，收集上清液；e、管膜过滤将步骤(d)收集的上清液采用管膜过滤脱除大分子，管膜滤过液通过孔径为3000DaltOn的有机膜截留分级，收集3000DaltOn以下截留液；f、纳滤将步骤(e)收集的3000DaltOn以下的截留液，通过纳滤浓缩脱盐，收集纳滤截留液；g、干燥将步骤(f)收集的纳滤截留液进行干燥处理，得ACE抑制肽。
全文摘要
本发明涉及一种利用海参制备ACE抑制肽的方法，其是以包括鲜海参、或干海参、或水发参、或高压参在内的海参为原料，脱盐、软化处理，制浆后加水，加热灭除微生物，冷却后加入复合蛋白水解酶或风味蛋白水解酶中的一种进行酶解，灭酶，冷却后离心去除不溶物，上清液管滤，滤过液过3000Dalton的有机膜截留分级，3000Dalton以下的截留液通过纳滤，干燥，得ACE抑制肽。其酶解技术方案实现了最佳优化，经管滤、超滤、纳滤进行分离提取技术，其提取的效率高，所得的ACE抑制肽降压效果好。本发明的方法工艺合理、操作简便、可操作性强，易实现工业化生产。
文档编号C12P21/06GK102517364SQ20111038472
公开日2012年6月27日 申请日期2011年11月29日 优先权日2011年11月29日
发明者刘新, 刘昌衡, 唐聚德, 孙永军, 张绵松, 王志伟, 胡炜, 袁文鹏 申请人:山东好当家海洋发展股份有限公司, 山东省科学院生物研究所