专利名称：一种促进果树组培苗生长的液体培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种可以促进果树试管苗组培快繁生长的液体培养基，属于现代农业生物技术领域。
背景技术：
桃、李、杏、甜樱桃等核果类果树砧木的组培快繁与工厂化育苗在我国研究较少，在核果类果树组培快繁中研究应用液体培养基技术除本单位外还未见有报道，而关于专用液体培养基的组成成分未曾报到。国外在核果类果树砧木组培快繁中有应用液体培养基的报道，但有关液体培养基的组成成分和使用方法未见报道。
发明内容
本研究发明能同时在桃、李、杏、甜樱桃等核果类果树砧木组培快繁阶段起到重要作用，对组培快繁的矮小试管苗簇生芽在7-10天内显著增长和增粗，提高了有效芽的比率，同时为下一步的试管苗生根起到促进作用。桃、李、杏、甜樱桃等核果类果树砧木试管苗在组培快繁中经过继代增殖培养3周左右，绝大多数增殖的丛生芽较矮小，有效芽较少，若继续在原固体培养基中培养则易于老化，繁殖力下降。若直接用于接种生根，一方面生根接种操作困难，另一方面切口面小、生根时间长且生根量少，进而影响温室移栽成活率。由于特定的液体培养基能在短时间内促进植株吸收营养，加速生长。鉴于此，研究出适合核果类果树砧木试管苗快速生长的专用液体培养基，促进继代增殖的丛生芽短时间内快速生长，增加有效芽，为下一步试管苗生根试验奠定基础。具体地，本发明涉及一种可以促进果树砧木试管苗组培快繁生长的液体培养基，所述液体培养基的组成包括(I)大量元素(mg/L) KH2P042600-3000, MgSO4. 7H20700_900，NH4NO31000-1400，KN0330 00-3 3 00, Ca(NO3)2. 4H201800_2200, CaCl2800_1200 ； (2)微量元素(mg/L) :ZnS04. 7H2016-18，MnSO4. H20230-260，H3B037-10，NaMoO4. 2H200. 4-0. 6，CuSO4. 5H200. 4-0. 6 ；(3)铁盐(mg/L) :Fe-Na-EDTA55_70 ；(4)有机成分(mg/L):肌醇 140-180, VB1O. 6-0. 8，动物营养添加剂 O. 05-0. 15 ；(5)生长激素(mg/L) 6-BAl. 0-2. O, IBAO. 01-0. 03 ；(6)液体生物防腐剂(ml/L) :Proclin3J). 02-0. 10 ；(7)活性炭(g/L) :1.5-5.0 ;(8)蔗糖(g/L) :20-40 ；所述液体培养基的pH为酸性溶液，优选为弱酸性液体培养基。更具体地，本发明所述液体培养基的组成配比为(I)大量元素(mg/L) KH2P042800,MgSO4. 7H20800，NH4NO31200，KN033200，Ca (NO3) 2· 4H202000,CaCl2IOOO ；(2)微量元素(mg/L) ZnSO4. 7H2017, MnSO4. Η20250, Η3Β038 · 5，NaMoO4. 2Η200· 5，CuSO4. 5Η200. 5 ；(3)铁盐(mg/L) :Fe-Na_EDTA66 ；(4)有机成分(mg/L):肌醇150，VB1O. 6，动物营养添加剂O. I ；(5)生长激素(mg/L) :6_ΒΑ1· 5，IBAO. 02 ；(6)液体生物防腐剂(ml/L) :Proclin3000 · 05(7)活性炭(g/L) 3.0 ；
(8)蔗糖(g/L) 30 ；所述液体培养基的pH为弱酸性溶液，其pH值为5. 8-6. O,更优选为pH5. 9。本发明中，所述动物营养添加剂的具体组成为(mg/L) Va18000000-22000000U.I.、VD318000-21000U. I.、VE4800_5200mg、VK260_320mg、VB11400_1600mg、VB2600_800mg、VB6400-600mg、VB122_10mg、泛酸 3800_4200mg Vpp4700_5IOOmg、生物素 400_600mg、叶酸 200-400mg、Vc9800-10800mg, L-苏氨酸 3500_4000mg、L-缬氨酸 4800_5200mg、L-谷氨酰胺 12000-13000mg、L-天冬氨酸 6200_6600mg、DL-甲硫氨酸 8000-8400mg、DL-丙氨酸 4600-5000mg、L-精氨酸 3800-4100mg、L-半胱氨酸 1000-1200mg、L-苯丙氨酸3200-3600mg、L-丝氨酸 1300-1600mg、L-亮氨酸 5700-6200mg、L-赖氨酸 5300-5600mg、L-普氨酸 3800-4200mg、L-组氨酸 1500_2000mg。更具体地，所述动物添加剂的组成为(mg/L) Va20000000U. I.、VD320000U. I.、VE5000mg> VK300mg> VB11500mg> VB2700mg> VB6500mg> VB125mg、泛酸 4000mg Vpp5000mg、生物素500mg、叶酸 300mg、Ve10000mg、L-苏氨酸 3900mg、L_ 纟颜氨酸 5000mg、L-谷氨酰胺 12500mg、L-天冬氨酸6500mg、DL-甲硫氨酸8250mg、DL-丙氨酸4800mg、L-精氨酸3950mg、L-半胱氨酸1125mg、L_苯丙氨酸3500mg、L_丝氨酸1500mg、L_亮氨酸6000mg、L-赖氨酸5500mg、L-普氨酸4000mg、L-组氨酸1850mg。本发明所述液体培养基可直接添加应用，使继代增殖培养的丛生芽在短时间内迅速吸收液体培养基中的各种营养成分。7-10天丛生芽高度增长I. 5-2. 5cm，同比高度增长200-300%,粗度增加50-100%，叶色浓绿，无玻璃化和黄化等现象。从而有利于下一步的生根接种操作，以及扩大生根切口面进而缩短生根时间、促进生根量。说明书附I甜樱桃砧木CAB-6P实验图，左边为实验组，右边为对照组。图2甜樱桃砧木Gisela-5实验图，左边为对照组，右边为实验组。图3李、杏砧木Mir. 29C实验图，左边为对照组，右边为实验组。图4桃砧木GF677实验图，左边为对照组，右边为实验组。
具体实施例本发明通过下述实施例进一步阐明，但任何实施例或其组合不应当理解为对本发明的范围或实施方式的限制。本发明的范围由所附权利要求书限定，结合本说明书和本领域一般常识，本领域普通技术人员可以清楚地明白权利要求书所限定的范围。在不偏离本发明的精神和范围的前提下，本领域技术人员可以对本发明的技术方案进行任何修改或改变，这种修改和改变也包含在本发明的范围内。GF677桃专用抗性砧木无性系试管苗在固体培养基上继代增殖培养3周左右，产生的绝大多数丛生芽矮小。若继续在固体培养基上培养，由于固体培养基中的养分几乎被耗尽，易造成丛生芽老化，繁殖力下降；若直接用于接种生根，一方面生根接种操作困难，另一方面切口面小、生根量少、生根时间较长，进而大大影响温室移栽成活率。应用上述专用液体培养基在继代增殖培养3周左右的固体培养基(100ml/瓶)上直接加入20ml/瓶，在同样的温度、光照条件下培养，原本几乎停长的丛生芽快速生长(增长、增粗)。7-10天增长
I.5-2 . 5cm，同比增长200-300%，茎粗增加50-100%，叶色浓绿，无玻璃化和黄化等现象。本专用液体培养基对甜樱桃砧木(Giaela系列、CAB系列、Colt、SL64等)、桃砧木(GF677、GF305、山桃等)、李和杏砧木(Mir. 29C、樱桃李等)的试管苗培养效果显著，详细见附图
对比。
权利要求
1.一种促进果树组培苗生长的液体培养基，其特征在于包括以下组分(1)大量元素(mg/L):KH2P042600-3000，MgSO4. 7H20700-900，NH4N031000-1400，KN0330 00-3 3 00, Ca(NO3)2. 4H201800_2200, CaCl2800_1200 ； (2)微量元素(mg/L):ZnS04. 7H2016-18，MnSO4. H20230-260，H3B037-10，NaMoO4. 2H200. 4-0. 6，CuSO4. 5H200. 4-0. 6 ；(3)铁盐(mg/L)Fe-Na-EDTA55-70 ； (4)有机成分(mg/L):肌醇140-180，VB1O.6-0. 8，动物营养添加剂O. 05-0. 15 ；(5)生长激素(mg/L)6-BAl. 0-2. O, IBAO. 01-0. 03 ；(6)液体生物防腐剂(ml/L)=Proclin300O. 02-0. 10 ；(7)活性炭(g/L)1. 5-5. O ；(8)鹿糖(g/L):20-40 ； 所述液体培养基的PH为酸性溶液。
2.根据权利要求I所述的液体培养基，其特征在于所述培养基具体包括如下组分 (1)大量元素(mg/L):KH2P042800，MgSO4. 7H20800，NH4N031200，KN033200，Ca (NO3) 2. 4H202000, CaCl2IOOO ；(2)微量元素(mg/L)ZnSO4. 7H2017, MnSO4. H20250, H3B038 . 5，NaMoO4. 2H200. 5，CuSO4. 5H200. 5 ；(3)铁盐(mg/L)Fe-Na-EDTA66 ； (4)有机成分(mg/L):肌醇150，VB1O.6，动物营养添加剂O. I ；(5)生长激素(mg/L)6-ΒΑ1. 5，IBAO. 02 ； (6)液体生物防腐剂(ml/L)Proclin3000. 05(7)活性炭(g/L)3. O ；(8)蔗糖(g/L)30 ； 所述液体培养基的PH为酸性溶液，其pH值为5. 8-6. O。
3.根据权利要求I或2所述的液体培养基，其中所述所述动物营养添加剂具体成分包括(每千克含量)Va18000000-22000000U. I.、VD318000-21000U. I.、VE4800_5200mg、VK260-320mg、VB11400-1600mg、VB2600-800mg、VB6400-600mg、VB122_10mg、泛酸 3800-4200mgVpp4700-5IOOmg、生物素 400_600mg、叶酸 200_400mg、Vc9800_10800mg、L-苏氨酸3500-4000mg、L-缬氨酸 4800_5200mg、L-谷氨酰胺 12000_13000mg、L-天冬氨酸6200-6600mg、DL-甲硫氨酸 8000-8400mg、DL-丙氨酸 4600-5000mg、L-精氨酸 3800-4100mg、L-半胱氨酸 1000-1200mg、L-苯丙氨酸 3200_3600mg、L-丝氨酸 1300_1600mg、L-亮氨酸5700-6200mg、L-赖氨酸 5300_5600mg、L-普氨酸 3800_4200mg、L-组氨酸 1500_2000mg。
4.根据权利要求3所述的液体培养基，其中所述所述动物营养添加剂具体成分包括(每千克含量)Va20000000U. I.、VD320000U. I.、VE5000mg、VK300mg、VB11500mg、VB2700mg、VB650Omg> VB125mg、泛酸 4000mg Vpp5000mg、生物素 500mg、叶酸 300mg、VcIOOOOmg> L-苏氨酸3900mg、L_纟颜氨酸5000mg、L-谷氨酰胺12500mg、L_天冬氨酸6500mg、DL_甲硫氨酸8250mg、DL-丙氨酸4800mg、L-精氨酸3950mg、L_半胱氨酸1125mg、L_苯丙氨酸3500mg、L_丝氨酸1500mg、L-亮氨酸 6000mg、L-赖氨酸 5500mg、L-普氨酸 4000mg、L-组氨酸 1850mg。
全文摘要
发明涉及一种促进果树组培苗生长的液体培养基，所述液体培养基包括无机大量元素、无机微量元素、有机成分、生长激素、液体防腐剂、蔗糖等营养成分，能同时在桃、李、杏、甜樱桃等核果类果树砧木组培快繁阶段起到重要作用，对组培快繁的矮小试管苗簇生芽在7-10天内显著增长和增粗，为下一步的试管苗生根起到促进作用。
文档编号C12N5/04GK102936579SQ201210378028
公开日2013年2月20日 申请日期2012年9月23日 优先权日2012年9月23日
发明者李洪雯, 刘建军, 陈克玲, 何建, 王建辉, 关斌 申请人:四川省农业科学院园艺研究所