专利名称：一种雄蜂蛹多肽提取物的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及蜂蛹活性成分功能研究领域，具体涉及一种雄蜂蛹多肽提取物的应用。
背景技术：
我国是世界上养蜂最多的国家之一，蜜蜂在我国有着悠久的养殖历史，丰富的资源。我国对蜜蜂产品的食用价值的研究历史悠久，目前已在多方面形成自己独特的研究体系，并已开发出多种产品，但尚有许多领域待于开发利用。雄蜂蛹是蜂工在雄蜂房产的未受精卵，孵化成幼虫，进入蛹期，在此期采收的蜜蜂躯体为雄蜂蛹，它是以吸食蜂王浆、蜂蜜和花粉等发育而成的，具有很高的营养价值，是一种亟待开发的天然食品。据科学分析，雄蜂蛹中蛋白质的含量高于蜂王浆，是花粉、牛乳的2倍以上，达33. 4%，其中，赖氨酸含量4. 45mg/100g，是鸡蛋的5倍，异亮氨酸含量为2. 7%，超过其他食物。粗脂肪的含量16. 08%，其中必需脂肪酸含量达19. 71%，是花粉的2倍以上，牛肉、鸡蛋的3倍以上，牛乳的10倍以上。维生素的含量超过了牛肉、鸡蛋，比鱼肝油高10倍。此外，雄蜂蛹还含有丰富的矿物元素，其中锌的含量是蜂王浆的2倍，是花粉的10倍以上；硒的含量高达2.4-2.8μ8/10(^。可见，雄蜂蛹是一个营养宝库。雄蜂蛹不仅有很好的营养价值，而且有很好的医药价值。早在《图经本草》、《礼记.内则》等古籍中就有详实的记录，在《神农本草经》中将“蜂仔”视为上品，记载有“蜂仔气味甘平，微寒无毒，主治头痛，除毒，补虚赢”的药效；《名医别录》中记载，蜂仔能主治丹毒、风疹、腹内留热、利大小便、去浮血、下乳汁的作用，对孕妇、产妇有滋补和治疗作用。在亚洲、非洲热带地区、澳大利亚和南美一些民族也早有食用雄蜂蛹的习惯。随着科技的发展，人们对雄蜂蛹的认识有更深的了解。人们发现，雄蜂蛹对生物机体具有多方面的功能，其中在促进机体新陈代谢、生长发育及精力减退、体力虚弱、营养不良、青春发育迟缓、更年期、未老先衰的康复方面较为突出，在调节中枢神经、内分泌紊乱、消化系统、血液系统等疾病方面也显示其独特的疗效。近年来人们发现肽类具有独特的生理功能，如促进钙的吸收、降血压、增强免疫 力、抗肿瘤等；且其在人体内的消化吸收明显优于单个氨基酸，营养学实验也证明肽对人体内蛋白质的合成无任何不良影响。现代科学的许多实验也证明，蛋白质水解成多肽后，具有更强的生物活性。肽还具有良好的理化性质如水合性提高(蛋白质水解物离子基团增加)、溶解度增加(蛋白质水解物体积变小，离子性增强)、粘度降低(蛋白多聚体的解聚和离子基团的增加，使蛋白质的有序性增加，蛋白分子的表现体积减少)、胶凝性降低(蛋白质水解物疏水性下降)、发泡性降低(粘度降低)等。基于以上优点，相信肽在功能性食品领域将会有广阔的应用前景。可用于食品的功能性肽获得的途径有三种，一是从天然生物体中直接提取天然活性肽；二是在消化过程中产生或体外水解蛋白质产生；三是通过化学方法、酶法，重组DNA等技术合成。从天然生物体中提取是可取的，但成本较高；而合成法虽可按人们的意愿合成任意活性肽，但目前因为成本高，副反应多及残留化合物等问题制约着发展。目前常用的方法是体外水解法，而酶水解能在温和的条件下进行，且可通过选择酶的种类，控制反应时间来得到特定的活性肽。雄蜂蛹的蛋白质含量较高，我国是世界养蜂大国，现拥有700万群(箱)蜜蜂，雄蜂蛹资源丰富，随着养蜂业的发展，雄蜂蛹的来源也将更加广泛。因此，通过酶法将雄蜂蛹水解成多肽，开发成相应的保健食品，不仅能促进我国蜂蛹深加工技术的发展，而且能促进养蜂业的发展和农民的增收。雄蜂蛹蛋白质是一种完全蛋白，富含18种氨基酸，其中8种人体所必需氨基酸占总量的17%以上。雄蜂蛹中谷氨酸和天门冬氨酸的含量达到总氨基酸的20%以上，这不但使蜂蛹美味可口，而且提示具有良好的健脑功能，因为这两种氨基酸能通过大脑屏障，起到健脑的作用。所以，雄蜂蛹有望作为营养丰富的高蛋白食品进行深入的开发。将雄蜂蛹蛋白进一步水解成多肽和氨基酸后，将更容易为人体所吸收，在食品、保健品行业具有广阔的应用前景。蛋白质水解时可以采用酸水解、碱水解和酶水解的方式，但是酸水解导致色氨酸全部破坏，丝氨酸、酪氨酸和苏氨酸部分破坏；碱水解引起消旋作用而降低营养价值；酶水解时反应条件温和，营养价值得以保障；因此，现有技术中多采用酶解法提取雄蜂蛹。中国专利申请CN93101793. 9公开了一种蜂蛹系列营养品及其制备方法，以蜂蛹和/或幼虫为原料，应用酶解和乳酸发酵相结合的方式，充分提取蜂蛹及幼虫中的多种营养物质，然后采用不同的工艺，制成营养口服液、营养乳液及颗粒速溶冲剂；可作为缺锌的儿童及老人的天然补锌剂和保健滋补品。中国专利申请CN89101221. 4公开了一种利用酶解反应提取雄蜂营养成分的工艺，并指出所提取的雄蜂营养成分的主要用途。所述的雄蜂营养成分的提取工艺是将雄蜂、雄蜂幼虫、雄蜂蛹等采用蛋白酶经酶解反应提取其各种营养成分。由于所提取的雄蜂营养成分中氨基酸、微量元素、维生素等主要指标均超过蜂王浆、胜过花粉，可用所提取的雄蜂营养成分做保健药品和营养食品的原料，做成各种滋补、保健药品和高级营养食品。
发明内容
本发明提供了一种雄蜂蛹多肽提取物的应用，该雄蜂蛹多肽提取物具有改善记忆和抗氧化功能，可作为具有改善记忆和/或抗氧化功能的产品或者用于制备具有改善记忆和/或抗氧化功能的产品。一种雄蜂蛹多肽提取物的应用，主要是所述的雄蜂蛹多肽提取物在作为具有改善记忆和/或抗氧化功能的食品或制备具有改善记忆和/或抗氧化功能的食品中的应用；所述的雄蜂蛹多肽提取物在作为具有改善记忆和/或抗氧化功能的保健品或制备具有改善记忆和/或抗氧化功能的保健品中的应用；所述的雄蜂蛹多肽提取物在制备具有改善记忆和/或抗氧化功能的药品中的应用。所述的雄蜂蛹多肽提取物的改善记忆功能实验研究结果表明，在跳台实验中，与水对照组比较，服用雄蜂蛹多肽提取物组小鼠跳下平台的潜伏期延长，测试错误次数减少，测验错误反应率降低，且高剂量组改善显著(P〈0. 05);在避暗实验中，与对照组比较，雄蜂蛹多肽提取物小鼠测验潜伏期延长，高剂量组小鼠测验潜伏期显著延长(p〈0. 05);在水迷宫实验中，与对照组比较，雄蜂蛹多肽提取物组小鼠到达终点时间缩短、到达终点前的错误次数较对照组减少且2min内到达终点的动物数增多，高剂量组小鼠到达终点时间显著缩短(P〈0. 01)，到达终点前的错误次数较对照组显著减少(P〈0. 05)，2min内到达终点的动物数显著增多(P〈0. 01)。结论雄蜂蛹多肽提取物具有明显的改善记忆的功能。所述的雄蜂蛹多肽提取物对老龄小鼠抗氧化功能影响的实验研究表明，给予不同剂量的雄蜂蛹多肽提取物30天(d)后，各剂量组血液丙二醛(MDA)水平有降低趋势，其中高剂量组与对照组比较差异有显著性(P〈0. 01);给予不同剂量的雄蜂蛹多肽提取物30d后，各剂量组血清超氧化物歧化酶(SOD)活力有升高趋势，其中高剂量组与对照组比较差异有显著性(P〈0. 05);给予不同剂量的雄蜂蛹多肽提取物30d后，各剂量组血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力与对照组比较均有显著性差异(P〈0. 05)。结论雄蜂蛹多肽提取物具有较好的抗氧化作用。所述的雄蜂蛹多肽提取物的主要成分为雄蜂蛹多肽，雄蜂蛹多肽为其活性成分，可采用市售产品或采用现有制备方法制备，也可采用本发明提供的方法制备。所述的雄蜂蛹多肽提取物的制备方法，包括步骤将雄蜂蛹用水洗净匀浆后溶于丙酮中脱脂，离心所得残渣用水配成悬浊液，将悬浊液在85°C _95°C加热10分钟-15分钟，优选在90°C加热10分钟，冷却后调pH值至7. 5-8. 5，优选调pH值至8，加蛋白酶水解，灭菌后调pH值至4_5，优选调pH值至4. 5，离心或过滤所得上清液为多肽溶液，经真空浓缩和冷冻干燥，得到雄蜂蛹多肽提取物。所述的蛋白酶水解的条件优选为在400C -50°C水解2小时-6小时，进一步优选为在45°C水解6小时。所述的蛋白酶可采用本领域酶解常用的蛋白酶，优选动物蛋白水解效果较好的酶，如可优选胰酶或者胰蛋白酶等酶种；由于胰酶和胰蛋白酶对雄蜂蛹进行水解，通过对水解过程的水解度的测定，发现两者用量接近时，水解度接近，但胰蛋白酶的价格约为胰酶的10倍，因此从降低成本的角度考虑进一步优选胰酶。随着蛋白酶用量的增加，水解度也渐渐增加，但蛋白酶的质量与雄蜂蛹的质量之比超过O. 006:1后，水解度增加很少，因此，所述的蛋白酶的质量与雄蜂蛹的质量之比优选为 O. 001-0. 006:1,进一步优选为 O. 002-0. 006:1,最优选 O. 006:10所述的悬浊液的质量百分浓度以雄蜂蛹计优选为8%_15%，进一步优选为10%。所述的灭菌的条件采用本领域灭菌的常规条件，如可在100°C灭菌15分钟。所述的pH值采用pH调节剂调节，所述的pH调节剂采用本领域常规的酸碱pH调节剂，可采用NaOH水溶液或HCl水溶液。本发明具有如下有益效果本发明发现了雄蜂蛹多肽提取物的新用途，主要是雄蜂蛹多肽提取物具有改善记忆和抗氧化功能，可作为具有改善记忆和/或抗氧化功能的产品或者用于制备具有改善记忆和/或抗氧化功能的产品。
具体实施例方式以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。蛋白质的回收率和肽的回收率的测试方法在加入蛋白酶开始水解时，不断地加入Imol的NaOH水溶液或Imol的HCl水溶液维持溶液的PH值恒定，记录水解时间和所加入的NaOH水溶液或HCl水溶液的体积，反应至设定时间后，煮沸10-15分钟灭酶，冷却后，调溶液pH至7. 0，8000rpm / min离心分离15min,取上清液.沉淀用适量蒸懼水洗漆一次,8000rpm/min_离心分离,合并上清液,并记录体积和凯氏定氮，测定中性水解液中蛋白质的含量，计算蛋白质回收率，并取50ml水解液，调节PH4. 5，离心分离，取上清液，凯氏定氮，测定上清液中氮的含量，以此计算水解液中酸溶性肽的得率。蛋白质回收率=P H 7. O时水解液中蛋白质总量+ (原料中蛋白质总量+酶蛋白质的量)肽的得率=P H 4. 5时水解液中蛋白质总量+ (原料中蛋白质总量+酶蛋白质的量)。实施例1雄蜂蛹多肽提取物的制备将雄蜂蛹(由浙江蜂之语蜂业集团有限公司提供)用蒸馏水洗净匀浆后溶于丙酮中脱脂，匀浆与丙酮的质量比为1:1. 5，离心后倾去上清液，所得残渣用蒸馏水配成悬浊液，悬浊液的质量百分浓度以雄蜂蛹计为10%。将悬浊液在90°C加热10分钟，冷却后用Imol的NaOH水溶液或Imol的HCl水溶液调pH值至8，加胰酶(400000U/g)在45°C水解6小时，胰酶的质量与雄蜂蛹的质量之比为O. 006:1,100°C灭菌15分钟后调pH值至4. 5，离心所得上清液为多肽溶液，经真空浓缩和冷冻干燥，得到雄蜂蛹多肽提取物。蛋白质的回收率为86. 7%，肽的得率为73. 6%。通过对雄蜂蛹水解前和水解液的毛细管电泳图谱进行比较分析发现，水解后蛋白质峰消失，出现很多小峰，对图谱进行峰面积分析可知，多肽含量为9. 44%ο实施例2除了水解时间为4小时，其它操作同实施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。实施例3除了水解时间为2小时，其它操作同实施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。实施例4除了胰酶的质量与雄蜂蛹的质量之比为O. 004:1，其它操作同实施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。实施例5除了胰酶的质量与雄蜂蛹的质量之比为O. 004:1，水解时间为4小时，其它操作同实施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。实施例6除了胰酶的质量与雄蜂蛹的质量之比为O. 004:1，水解时间为2小时，其它操作同实施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。实施例7除了胰酶的质量与雄蜂蛹的质量之比为O. 002:1，其它操作同实施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。实施例8除了胰酶的质量与雄蜂蛹的质量之比为O. 002:1，水解时间为4小时，其它操作同实施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。
实施例9除了胰酶的质量与雄蜂蛹的质量之比为O. 002:1，水解时间为2小时，其它操作同实施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。实施例10除了胰酶的质量与雄蜂蛹的质量之比为O. 001:1，水解时间为3小时，其它操作同实施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。实施例11除了胰酶的质量与雄蜂蛹的质量之比为O. 001:1 (即胰酶4000U/10g雄蜂蛹)，水解时间为6小时，其它操作同实施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。实施例12除了将胰酶替换为胰蛋白酶(1000000U/g)，胰蛋白酶的质量与雄蜂蛹的质量之比为0.001:1 (即胰蛋白酶10000U/10g雄蜂蛹)，水解时间为3小时，其它操作同实施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。实施例13除了将胰酶替换为胰蛋白酶(1000000U/g)，胰蛋白酶的质量与雄蜂蛹的质量之比为0. 001:1 (即胰蛋白酶10000U/10g雄蜂蛹)，水解时间为6小时，其它操作同实施例1，制得雄蜂蛹多肽提取物。各实施例水解度见表1:
权利要求
1.一种雄蜂蛹多肽提取物的应用，其特征在于，所述的雄蜂蛹多肽提取物在作为具有改善记忆和/或抗氧化功能的食品或制备具有改善记忆和/或抗氧化功能的食品中的应用。
2.—种雄蜂蛹多肽提取物的应用，其特征在于，所述的雄蜂蛹多肽提取物在作为具有改善记忆和/或抗氧化功能的保健品或制备具有改善记忆和/或抗氧化功能的保健品中的应用。
3.—种雄蜂蛹多肽提取物的应用，其特征在于，所述的雄蜂蛹多肽提取物在制备具有改善记忆和/或抗氧化功能的药品中的应用。
4.根据权利要求1、2或3所述的雄蜂蛹多肽提取物的应用，其特征在于，所述的雄蜂蛹多肽提取物的活性成分为雄蜂蛹多肽。
5.根据权利要求1、2或3所述的雄蜂蛹多肽提取物的应用，其特征在于，所述的雄蜂蛹多肽提取物的制备方法，包括将雄蜂蛹用水洗净匀浆后溶于丙酮中脱脂，离心所得残渣用水配成悬浊液，将悬浊液在850C -95°C加热10分钟-15分钟，优选在90°C加热10分钟，冷却后调pH值至7. 5-8. 5， 优选调pH值至8,加蛋白酶水解,灭菌后调pH值至4-5,优选调pH值至4. 5,离心或过滤所得上清液为多肽溶液，经真空浓缩和冷冻干燥，得到雄蜂蛹多肽提取物。
6.根据权利要求5所述的雄蜂蛹多肽提取物的应用，其特征在于，所述的蛋白酶水解的条件为在400C -50°C水解2小时-6小时。
7.根据权利要求5所述的雄蜂蛹多肽提取物的应用，其特征在于，所述的蛋白酶为胰酶或者胰蛋白酶。
8.根据权利要求5所述的雄蜂蛹多肽提取物的应用，其特征在于，所述的蛋白酶的质量与雄蜂蛹的质量之比为O. 001-0. 006:1。
9.根据权利要求5所述的雄蜂蛹多肽提取物的应用，其特征在于，所述的悬浊液的质量百分浓度以雄蜂蛹计为8%-15%。
全文摘要
本发明公开了一种雄蜂蛹多肽提取物的应用，包括所述的雄蜂蛹多肽提取物在作为具有改善记忆和/或抗氧化功能的食品或制备具有改善记忆和/或抗氧化功能的食品中的应用；所述的雄蜂蛹多肽提取物在作为具有改善记忆和/或抗氧化功能的保健品或制备具有改善记忆和/或抗氧化功能的保健品中的应用；所述的雄蜂蛹多肽提取物在制备具有改善记忆和/或抗氧化功能的药品中的应用。该雄蜂蛹多肽提取物明显的改善记忆的功能以及较好的抗氧化作用，可用于作为或制备具有改善记忆和/或抗氧化功能的产品。
文档编号A23J3/34GK103005466SQ20121059295
公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月31日 优先权日2012年12月31日
发明者杨锋, 童晔玲, 陈宇, 戴关海, 任泽明, 朱婉萍, 何娟, 陈璇 申请人:浙江省中医药研究院