专利名称：一种毕赤酵母菌及其在饲料发酵中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种菌株，特别涉及一种用于发酵饲料的毕赤酵母菌。
背景技术：
酵母菌是人类利用最早、利用数量最大的一种单细胞微生物，是理想的营养源和食品原料，也是优质蛋白饲料源。酵母菌属于真核微生物，不是人和动物肠道的固有菌，但可以产生多种消化酶类，可以在消化道内代谢。作为益生菌使用的酵母则是以活细胞的形式，通常为酵母培养物。在饲料工业应用中，目前使用的菌种主要是芽孢杆菌和乳酸菌及其混合物。但存在抗生素的使用受到限制的问题，酵母菌既不会干扰抗生素的作用，又可以增加饲料的稳定性，作为消化剂还有助于提高营养物质的利用，因此酵母菌在饲料工业中有很高的应用价值。
发明内容
针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一株用于发酵饲料的毕赤酵母菌。该毕赤酵母(Pichia jadinii)Hzd_pj_003,已于2012年12月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，保藏号为=CGMCC No. 6930，它可以用在发酵饲料以及微生态制剂，是一种极具应用价值的益生菌。本发明通过试验表明毕赤酵母(Pichia jadinii)Hzd-pj_003可产生多种代谢产物，发酵液具有浓郁的苹果香气，从而增加发酵饲料的适口性，提高采食量，其中含多种代谢产物可以促进猪的消化，提高饲料利用率，促进猪的快速生长。本发明的优势是毕赤酵母(Pichia jadinii) Hzd-pj-003有很强的耐酸性,可以在PH值为2的条件下缓慢生长；可以产生高含量的乙酸乙酯，具有独特的苹果香气，用在发酵饲料中可以增加适口性，提高采食量；用于发酵饲料中使发酵饲料的蛋白含量及水解酶类大大增加，促进动物消化吸收，提高饲料利用率，促进动物生长。
本发明有如下附图图1毕赤酵母(Pichia jadinii) Hzd-pj-003菌落形态照片；图2毕赤酵母(Pichia jadinii) Hzd-pj-003显微镜下形态图；图3 毕赤酵母(Pichia jadinii) Hzd-pj-003 生长曲线图；图4 毕赤酵母(Pichia jadinii) Hzd-pj-003 26SrDNA D1/D2 区域序列通过BLAST对比构建的系统进化树；图5 毕赤酵母(Pichia jadinii) Hzd-pj-003 26SrDNA D1/D2 区域电泳图。
具体实施例方式
下述实施例中的方法， 如无特别说明，均为常规方法。
实施例1毕赤酵母(Pichia jadinii) Hzd-pj-003的获得及其培养条件检测毕赤酵母(Pichiajadinii) Hzd-pj-003 的筛选与鉴定I)毕赤酵母(Pichia jadinii) Hzd-pj-003 的筛选从山东平度南村镇农户家堆积的陈年花生壳中，选取表面有些发酵迹象的作为样本，无菌水浸泡，采用梯度稀释涂平板的分离法，将花生壳溶液梯度稀释10' 10_2、10_3、10_4、10_5后，各吸取O.1mL涂于PDA培养基上对菌株进行分离，28°C恒温培养箱中培养2_3d，挑取PDA培养基上菌落形态为乳白色、光滑、菌落直径为3 5mm左右的单菌落反复进行划线分离直至纯化，如图1所示。所述的PDA培养基配方如下马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15 20g，水1000mL。将200g马铃薯去皮切碎，煮烂后过滤得到马铃薯汁，加入20g葡萄糖，加入琼脂15 20g，加水至 lOOOmL，121°C 灭菌 20min。2)菌种的鉴定
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菌株纯化后PDA培养基平板上菌落形态为乳白色、光滑、单菌落直径为3 5_左右的初筛菌株进行鉴定。菌株细胞为真核细胞，单个菌体呈椭球状，从显微镜下清晰可见细胞核和液泡，有的处于分裂期细胞有两个细胞核，有的能看到出芽生殖，如图2所示。培养特征固体培养特征菌株在28°C培养条件下连续培养2 d，在PDA固体培养基表面形成直径3-5_左右的光滑乳白色菌落。所述的PDA固体培养基配方如下马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15 20g，水IOOOmL0将200g马铃薯去皮切碎，煮烂后过滤得到马铃薯汁，加入20g葡萄糖，加入琼脂15-20g，加水至 lOOOmL，121°C灭菌 20min。液体培养特征从PDA培养基上挑取单菌落于澄清的YPD液体培养基中，30°C、220r/min振荡培养。菌株在液体培养基中生长后期出现培养基浑浊现象。所述的Yro培养基配方如下酵母膏5g/L，蛋白胨10.0g/L，葡萄糖20.0g/L，丙酸钠 2. 5g/L, pH 6. 8。115°C灭菌 30min。毕赤酵母菌Hzd-pj-003的26SrDNA D1/D2区域序列如SEQ ID No.1所示。将所测26SrDNA D1/D2区域序列通过BLAST对比，通过Mega软件构建系统进化树如图4所示，鉴定其与毕赤酵母菌同源性最接近，因此认定此酵母菌为毕赤酵母菌。根据图3可看出，毕赤酵母菌Hzd-pj-003在6h后开始进入对数生长期，6_24h为对数生长期，24-48h为稳定期。48h后为衰败期。24h时活菌数为4. 6X IO9个/ml。代谢产物分析酵母菌Hzd-pj-003在发酵培养基中培养24h后，测定各种风味物质含量，结果如表I。试验结果表明风味物质中乙酸乙酯、异戊醇的含量较高，毕赤酵母菌Hzd-pj-003在发酵后能产生独特的苹果香气，有利于提高畜禽的采食量。 表I毕赤酵母菌Hzd-pj-003发酵风味物质含量分析
权利要求
1.一种毕赤酵母(Pichia jadinii),其特征在于所述毕赤酵母(Pichia jadinii)为毕赤酵母(Pichia jadinii) Hzd-pj-003，保藏号为=CGMCC No. 6930。
2.根据权利要求1所述的毕赤酵母(Pichiajadinii)Hzd-pj_003在发酵饲料中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种毕赤酵母菌(Pichia jadinii)Hzd-pj-003，已于2012年12月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.6930，它可以用在发酵饲料以及微生态制剂，是一种极具应用价值的益生菌。本发明的优势是毕赤酵母(Pichia jadinii)Hzd-pj-003有很强的耐酸性，可以在pH值为2的条件下缓慢生长；可以产生高含量的乙酸乙酯，具有独特的苹果香气，用在发酵饲料中可以增加适口性，提高采食量；用于发酵饲料中使发酵饲料的蛋白含量及水解酶类大大增加，促进动物消化吸收，提高饲料利用率，促进动物生长。
文档编号C12N1/16GK103045493SQ20121059465
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月31日 优先权日2012年12月31日
发明者栾锦涛, 陈继伟, 黄玲玲, 张盼盼 申请人:青岛海中大生物科技发展有限公司