专利名称：一种头状葡萄球菌选择性培养基及其制备方法
技术领域：
本发明涉及医学检验领域，具体涉及ー种头状葡萄球菌选择性培养基及其制备方法。
背景技术：
葡萄球菌属是从临床标本检出的革兰阳性球菌中最为常见的一群细菌，其中，头状葡萄球菌(Staphylococcus capitis)则为ー种低毒力条件致病菌,但其检出率和多重耐药性呈逐年增高趋势，已成为医院感染的主要病原菌之一。头状葡萄球菌感染后症状不典型，且呈现多重耐药现象，给临床诊断和治疗带来一定困难，高效可靠的检验方法已是必然
需要。 所谓微生物培养是ー种用人工方法使微生物生长繁殖的技木，而选择性选择性培养基是用来促进或抑制一定类型的生物体(如细胞或细菌等)而设计的选择性培养基，利用这种选择性培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。目前临床上普遍使用的葡萄球菌选择性培养基为甘露醇高盐琼脂(Manitol SaltAgar)，用于金黄色葡萄球菌的选择性分离培养。培养基成分为蛋白胨、鸡蛋蛋白液、D-甘露醇、氯化钠、酚红、琼脂。金黄色葡萄球菌菌落为黄色，大肠杆菌和沙门氏菌菌落为无色。但是，该种培养基并不能选择性培养头状葡萄球菌，其原因在于在目前的选择性培养基中杂菌比头状葡萄球菌生长更快，很快覆盖了培养基，头状葡萄球菌无法生长。
发明内容
本发明的技术任务是针对以上现有技术的不足，提供一种对头状葡萄球菌分离率高的选择性培养基。本发明解决其技术问题的技术方案是一种头状葡萄球菌选择性培养基，其特征在，配制IOOOml选择性培养基的配方中含有
麦芽浸粉15g ；
鸡蛋蛋白液150ml ；
氯化钠5g ；
枸櫞酸镁0. 5g ；
琼脂15g ；
假细锥甲素8 12mg;
阿波酮酸0. 8 g；
磷酸ニ氢钾0. 2g ；
蒸馏水加至1000ml。优化方案中，每IOOOml选择性培养基还含有硫酸铜6mg。优化方案中，每IOOOml选择性培养基还含有L-半胱氨酸0. lg。优化方案中，每IOOOml选择性培养基还含有浓度200g/L的百合水煮液200 300ml。最优化方案中，姆IOOOml选择性培养基还含有硫酸铜6mg ；L-半胱氨酸0.1g ;浓度200g/L的百合水煮液20(T300ml。一种头状葡萄球菌选择性培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤
(1)取百合加水煮沸I小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得百合水煮液；
(2)取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化钠；枸櫞酸镁；琼脂；假细锥甲素；阿波酮酸；磷酸ニ氢钾山-半胱氨酸及硫酸铜溶于步骤I所得百合水煮液中，混匀过滤后，蒸馏水定容，低温灭菌2次，每次45 min,灭菌后分装。其中所述的麦芽浸粉、鸡蛋蛋白液提供碳氮源和能量；枸櫞酸镁和磷酸ニ氢钾为缓冲剂，并可以抑制杂菌生长；阿波酮酸、L-半胱氨酸属氨基酸类，为营养剂，阿波酮酸为 头状葡萄球菌特异性营养剂，可以特异性的促进头状葡萄球菌繁殖。；琼脂是选择性培养基的凝固剂；假细锥甲素对于金葡菌具有特异的抑菌作用，对于头状葡萄球菌无效；鸡蛋蛋白液含有各种多肽、脂肪、生长因子、激素等，这些物质对促进头状葡萄球菌的繁殖和生长都是很重要的因素，此外鸡蛋蛋白液还具有維持选择性培养基PH值恒定的作用。铜离子属于重金属离子，在6mg/L这个浓度剂量下，沉积于金葡菌内部，导致胞壁消失或变薄，核糖体聚集成团块，最终导致细菌变形及破裂，呈现重金属源性损伤，而头状葡萄球菌对重金属的运输能力和滲透能力低于金葡菌，也即重金属的抗性较高，故而加入硫酸铜可以有效地抑制金葡菌生长。百合为百合科植物卷丹Lilium lancifolium Thunb 、百合Liliumbrownii F. E. Brown var. viridulum Baker 或细叶百合Lilium pumilum DC.的干燥肉质鳞叶，含有蛋白质、脂肪、淀粉、还元糖、维生素B1、B2、泛酸、维生素C、P -胡萝卜素等多种成分，可以提供能量代谢、细胞发育、新陈代谢因子，有助于促进头状葡萄球菌生长，尤其是重金属环境下菌落的生长。本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、头状葡萄球菌分离率高的特点。
具体实施例方式以下结合实际情况，对本发明的具体实施方式
作详细说明。实施例1，配制IOOOml选择性培养基的配方中含有麦芽浸粉15g ;鸡蛋蛋白液150ml ;氯化钠5g ;枸橼酸镁0. 5g ;琼脂15g ;假细锥甲素8mg ;阿波酮酸0. 8 g ;磷酸ニ氢钟0. 2g ;蒸懼水加至1000ml。制备方法取麦牙浸粉；鸡蛋蛋白液；氣化纳；构橡Ife续；琼脂；假细锥甲素；阿波酮酸；磷酸ニ氢钾溶于蒸馏水中，混匀过滤后，蒸馏水定容，低温灭菌2次，每次45 min，灭菌后分装。实施例2，配制IOOOml选择性培养基的配方中含有麦芽浸粉15g ;鸡蛋蛋白液150ml ;氯化钠5g ;枸橼酸镁0. 5g ;琼脂15g ;假细锥甲素12mg ;阿波酮酸0. 8 g ;磷酸ニ氢钾0. 2g ;硫酸铜6mg ;蒸懼水加至1000ml。制备方法取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化钠；枸橼酸镁；琼脂；假细锥甲素；阿波酮酸；磷酸ニ氢钾；硫酸铜溶于蒸馏水中，混匀过滤后，蒸馏水定容，低温灭菌2次，每次45 min,灭菌后分装。实施例3，配制IOOOml选择性培养基的配方中含有麦芽浸粉15g ;鸡蛋蛋白液150ml ;氯化钠5g ;枸橼酸镁0. 5g ;琼脂15g ;假细锥甲素IOmg ;阿波酮酸0. 8 g ;磷酸ニ氢钾0. 2g ;L-半胱氨酸0.1g ;蒸懼水加至1000ml。制备方法取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化钠；枸橼酸镁；琼脂；假细锥甲素；阿波酮酸；磷酸ニ氢钾山-半胱氨酸溶于蒸馏水中，混匀过滤后，蒸馏水定容，低温灭菌2次，毎次45 min，灭菌后分装。实施例4，配制IOOOml选择性培养基的配方中含有麦芽浸粉15g ;鸡蛋蛋白液150ml ;氯化钠5g ;枸櫞酸镁0. 5g ;琼脂15g ;假细锥甲素9mg ;阿波酮酸0. 8 g ;磷酸ニ氢钾0. 2g ;浓度200g/L的百合水煮液200ml ;蒸懼水加至1000ml。制备方法· (1)取百合加水煮沸I小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得百合水煮液；
(2)取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化钠；枸櫞酸镁；琼脂；假细锥甲素；阿波酮酸；磷酸ニ氢钾；溶于步骤I所得百合水煮液中，混匀过滤后，蒸馏水定容，低温灭菌2次，毎次45min,灭菌后分装。实施例5，配制IOOOml选择性培养基的配方中含有麦芽浸粉15g ;鸡蛋蛋白液150ml;氯化钠5g;枸櫞酸镁0.5g;琼脂15g;假细锥甲素Ilmg;阿波酮酸0.8 g ;磷酸ニ氢钾0. 2g ;硫酸铜6mg ；L-半胱氨酸0.1g ;浓度200g/L的百合水煮液300ml ;蒸懼水加至1000ml。制备方法为
(1)取百合加水煮沸I小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得百合水煮液；
(2)取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化钠；枸櫞酸镁；琼脂；假细锥甲素；阿波酮酸；磷酸ニ氢钾山-半胱氨酸及硫酸铜溶于步骤I所得百合水煮液中，混匀过滤后，蒸馏水定容，低温灭菌2次，每次45 min，灭菌后分装。所述的百合水煮液浓度为200g/L，指的是每升百合水煮液中含有生药200g。本发明所得头状葡萄球菌选择性培养基具有检出可靠、头状葡萄球菌分离率高的特点，为临床资料充分证明，有关资料如下。I对象与方法。1.1选择性培养基制备共设3组，分别为对照组、实施例1方案组、实施例5方案组。对照组为葡萄球菌选择性琼脂110 (CHAPMAN琼脂)，配方为胰酪蛋白胨、酵母浸粉、明胶、D-甘露醇、乳糖、氯化钠、磷酸氢ニ钾、琼脂。实施例1方案组、实施例5方案组的配方和制备方法见实施例。1. 2方法将20份经由PCR确定头状葡萄球菌阳性的标本中混入金色葡萄球菌，接种于培养基上，在37°C下孵育24小吋。1. 3统计学分析用SPSS 13. 0进行统计分析，Pく 0. 05表示有显著性意义。2結果在20份接种标本中，细菌培养分离并鉴定为头状葡萄球菌的，实施例1方案组为17例，实施例5方案组为19例。对照组CHAPMAN琼脂培养基菌落经鉴定最后被证实均为金葡菌，经统计学处理，本发明各实施例组与对照组比较具有明显差异(P〈0. 001)。结果表明，本发明实施例头状葡萄球菌分离率明显高于现有的选择性培养基。
权利要求
1.一种头状葡萄球菌选择性培养基，其特征在，配制IOOOml选择性培养基的配方中含有 麦芽浸粉15g ； 鸡蛋蛋白液150ml ； 氯化钠5g ； 枸橼酸镁O. 5g ； 琼脂15g ； 假细锥甲素8 12mg; 阿波酮酸O. 8 g ； 磷酸二氢钾O. 2g ； 蒸馏水加至1000ml。
2.根据权利要求1所述的一种头状葡萄球菌选择性培养基，其特征在每IOOOml选择性培养基还含有硫酸铜6mg。
3.根据权利要求1所述的一种头状葡萄球菌选择性培养基，其特征在每IOOOml选择性培养基还含有L-半胱氨酸O. lg。
4.根据权利要求1所述的一种头状葡萄球菌选择性培养基，其特征在每IOOOml选择性培养基还含有浓度200g/L的百合水煮液20(T300ml。
5.根据权利要求1所述的一种头状葡萄球菌选择性培养基，其特征在每IOOOml选择性培养基还含有硫酸铜6mg ；L-半胱氨酸O.1g ;浓度200g/L的百合水煮液20(T300ml。
6.一种头状葡萄球菌选择性培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤 (1)取百合加水煮沸I小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得百合水煮液； (2)取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化钠；枸橼酸镁；琼脂；假细锥甲素；阿波酮酸；磷酸二氢钾；L-半胱氨酸及硫酸铜溶于步骤I所得百合水煮液中，混匀过滤后，蒸馏水定容，低温灭菌2次，每次45 min,灭菌后分装。
全文摘要
本发明公开了一种头状葡萄球菌选择性培养基及其制备方法。其特征在于，配制1000ml选择性培养基的配方中含有麦芽浸粉15g；鸡蛋蛋白液150ml；氯化钠5g；枸橼酸镁0.5g；琼脂15g；假细锥甲素8~12mg；阿波酮酸0.8g；磷酸二氢钾0.2g；蒸馏水加至1000ml。最佳优化配方制备方法为取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化钠；枸橼酸镁；琼脂；假细锥甲素；阿波酮酸；磷酸二氢钾；L-半胱氨酸及硫酸铜溶于百合水煮液中，混匀，定容，灭菌后分装。本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、头状葡萄球菌分离率高的特点。
文档编号C12Q1/14GK103014129SQ20131001075
公开日2013年4月3日 申请日期2013年1月13日 优先权日2013年1月13日
发明者陈淑香 申请人:陈淑香