专利名称：一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法
技术领域：
本发明涉及一种胶原蛋白制备方法，尤其涉及一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法。
背景技术：
弹性蛋白具有网状结构，施加外力时，弹性蛋白变形；当外力消退后，弹性蛋白回复原状，由于此种特性，弹性蛋白被用于护肤化妆品中，但现有的弹性蛋白生产方式存在几种问题一是有杂色，添加到护肤品中直接影响产品的外观；二是蛋白质浓度和氨基酸含量低，不能直接应用到护肤化妆品中，必须经过再加工，这样直接提高了护肤化妆品的价格。发明内容
为了解决现有技术中的问题，本发明的目的是提供一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法。
为达到上述目的，本发明所采用的技术手段是一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法，其步骤包括一、预处理将新鲜骨头去除脂肪、筋膜后，于-15°C冷冻硬化后取出，用手术刀刮去骨头表面的残余筋膜，然后沿着纤维方向切成O. 5mm X0. 5mm的薄片，薄片称重，用O. 5g/L 碳酸钠溶液浸泡Ih后弃液体，薄片用蒸馏水漂洗3次，置于不锈钢丝网上浙去水分，晾干备用；二、提取将晾干的薄片置于容器中，用2 3倍O.5%的乙酸溶液在O 4°C下搅拌提取48-72h，然后用冷冻离心机以3000r/min的速度离心8min ，收集上清液，即为胶原蛋白溶胀提取液；三、除杂在胶原蛋白溶胀提取液中加入其体积O.5%的双氧水，混合均匀后静置5h，接下来用80g/L柠檬酸三钠溶液调节pH值等于5，静置片刻后过滤，弃沉淀物，获得除去部分杂蛋白的溶胀提取液；四、盐析脱盐在搅拌下向该溶胀提取液中加入适量氯化钠，缓慢搅拌，IOmin后在 4°C下静置24h后离心，收集盐析沉淀物，用pH值为7. O的Tris缓冲液在4°C下浸泡24h， 再次离心，收集沉淀物，装入透析袋中，用质量浓度为1. 2%的乙酸溶液透析18h后，再用蒸馏水透析48h，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶胀液，测定其中蛋白质含量后备用；五、酶水解将获得的高纯度胶原蛋白水溶胀液中加入4倍体积的软水，在搅拌下升温至55°C，然后用乙酸调节溶液pH值为5，加入木瓜蛋白酶进行酶水解2 4h，木瓜蛋白酶用量为胶原蛋白水溶胀液蛋白质质量的1% 2%，获得水解胶原蛋白液，也可以用弹性蛋白酶进行水解，弹性蛋白酶用量为O. 05 %，pH值为2 3，温度为40°C ；六、浓缩将水解液进行真空减压浓缩，制备成胶原蛋白液，真空减压浓缩的温度为 60 70°C，真空度为-O. 05 -O. 04MPa。 进一步的，所述步骤六中所得胶原蛋白液为透明无色液体，蛋白质浓度> 6. 95%，氨基酸含量> 2. 32%。
本发明的有益效果在于通过本方法制备的高纯度、能用于保持肌肤弹性的胶原蛋白，为透明无色液体，蛋白质浓度> 6. 95%,氨基酸含量> 2. 32%，可以直接作为化妆品应用，且制备方法简便，利于规模生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以助于理解本发明的内容。
实施例1一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法，其步骤包括一、预处理将新鲜骨头15kg去除脂肪、筋膜后，于-15°C冷冻硬化后取出，用手术刀刮去骨头表面的残余筋膜，然后沿着纤维方向切成O. 5mm Χ0· 5mm的薄片，薄片称重，用 O. 5g/L碳酸钠溶液浸泡Ih后弃液体，薄片用蒸馏水漂洗3次，置于不锈钢丝网上浙去水分， 晾干备用；二、提取将晾干的薄片置于容器中，用2倍O.5%的乙酸溶液在(TC下搅拌提取48h，然后用冷冻离心机以3000r/min的速度离心8min，收集上清液，即为胶原蛋白溶胀提取液；三、除杂在胶原蛋白溶胀提取液中加入其体积O.5%的双氧水，混合均匀后静置5h，接下来用80g/L柠檬酸三钠溶液调节pH值等于5，静置片刻后过滤，弃沉淀物，获得除去部分杂蛋白的溶胀提取液；四、盐析脱盐在搅拌下向该溶胀提取液中加入适量氯化钠，缓慢搅拌，IOmin后在 4°C下静置24h后离心，收集盐析沉淀物，用pH值为7. O的Tris缓冲液在4°C下浸泡24h， 再次离心，收集沉淀物，装入透析袋中，用质量浓度为1. 2%的乙酸溶液透析18h后，再用蒸馏水透析48h，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶胀液，测定其中蛋白质含量后备用；五、酶水解将获得的高纯度胶原蛋白水溶胀液中加入4倍体积的软水，在搅拌下升温至55°C，然后用乙酸调节溶液pH值为5，加入木瓜蛋白酶进行酶水解2h，木瓜蛋白酶用量为胶原蛋白水溶胀液蛋白质质量的1%，获得水解胶原蛋白液，也可以用弹性蛋白酶进行水解，弹性蛋白酶用量为O. 05 %，pH值为2，温度为40°C ；六、浓缩将水解液进行真空减压浓缩，制备成胶原蛋白液，真空减压浓缩的温度为 60°C，真空度为-O. 05MPa。
所得到的胶原蛋白液为透明无色液体，蛋白质浓度为6.98%，氨基酸含量2.37%。
实施例2一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法，其步骤包括一、预处理将新鲜骨头20kg去除脂肪、筋膜后，于_15°C冷冻硬化后取出，用手术刀刮去骨头表面的残余筋膜，然后沿着纤维方向切成O. 5mm Χ0· 5m m的薄片，薄片称重，用 O. 5g/L碳酸钠溶液浸泡Ih后弃液体，薄片用蒸馏水漂洗3次，置于不锈钢丝网上浙去水分， 晾干备用；二、提取将晾干的薄片置于容器中，用3倍O.5%的乙酸溶液在4°C下搅拌提取72h，然后用冷冻离心机以3000r/min的速度离心8min，收集上清液，即为胶原蛋白溶胀提取液；三、除杂在胶原蛋白溶胀提取液中加入其体积O.5%的双氧水，混合均匀后静置5h，接下来用80g/L柠檬酸三钠溶液调节pH值等于5，静置片刻后过滤，弃沉淀物，获得除去部分杂蛋白的溶胀提取液；
四、盐析脱盐在搅拌下向该溶胀提取液中加入适量氯化钠，缓慢搅拌，IOmin后在4°C下静置24h后离心，收集盐析沉淀物，用pH值为7. O的Tris缓冲液在4°C下浸泡24h，再次离心，收集沉淀物，装入透析袋中，用质量浓度为1. 2%的乙酸溶液透析18h后，再用蒸馏水透析48h，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶胀液，测定其中蛋白质含量后备用；
五、酶水解将获得的高纯度胶原蛋白水溶胀液中加入4倍体积的软水，在搅拌下升温至55°C，然后用乙酸调节溶液pH值为5，加入木瓜蛋白酶进行酶水解4h，木瓜蛋白酶用量为胶原蛋白水溶胀液蛋白质质量的2%，获得水解胶原蛋白液，也可以用弹性蛋白酶进行水解，弹性蛋白酶用量为O. 05 %，pH值为3，温度为40°C ；
六、浓缩将水解液进行真空减压浓缩，制备成胶原蛋白液，真空减压浓缩的温度为70°C，真空度为-0.04MPa。所得到的胶原蛋白液为透明无色液体，蛋白质浓度为
7.05%,氨基酸含量为2. 40%。本发明的实施例所表述的，并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围 内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法，其特征在于，步骤包括一、预处理将新鲜骨头去除脂肪、筋膜后，于-15°C冷冻硬化后取出，用手术刀刮去骨头表面的残余筋膜，然后沿着纤维方向切成O. 5mm X0. 5mm的薄片，薄片称重，用O. 5g/L 碳酸钠溶液浸泡Ih后弃液体，薄片用蒸馏水漂洗3次，置于不锈钢丝网上浙去水分，晾干备用；二、提取将晾干的薄片置于容器中，用2 3倍O.5%的乙酸溶液在O 4°C下搅拌提取48-72h，然后用冷冻离心机以3000r/min的速度离心8min，收集上清液，即为胶原蛋白溶胀提取液；三、除杂在胶原蛋白溶胀提取液中加入其体积O.5%的双氧水，混合均匀后静置5h，接下来用80g/L柠檬酸三钠溶液调节pH值等于5，静置片刻后过滤，弃沉淀物，获得除去部分杂蛋白的溶胀提取液；四、盐析脱盐在搅拌下向该溶胀提取液中加入适量氯化钠，缓慢搅拌，IOmin后在 4°C下静置24h后离心，收集盐析沉淀物，用pH值为7. O的Tris缓冲液在4°C下浸泡24h， 再次离心，收集沉淀物，装入透析袋中，用质量浓度为1. 2%的乙酸溶液透析18h后，再用蒸馏水透析48h，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶胀液，测定其中蛋白质含量后备用；五、酶水解将获得的高纯度胶原蛋白水溶胀液中加入4倍体积的软水，在搅拌下升温至55°C，然后用乙酸调节溶液pH值为5，加入木瓜蛋白酶进行酶水解2 4h，木瓜蛋白酶用量为胶原蛋白水溶胀液蛋白质质量的1% 2%，获得水解胶原蛋白液，也可以用弹性蛋白酶进行水解，弹性蛋白酶用量为O. 05 %，pH值为2 3，温度为40°C ；六、浓缩将水解液进行真空减压浓缩，制备成胶原蛋白液，真空减压浓缩的温度为 60 70°C，真空度为-O. 05 -O. 04MPa。
2.根据权力要求I所述的保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法，其特征在于所述步骤六中所得胶原蛋白液为透明无色液体，蛋白质浓度> 6. 95%，氨基酸含量> 2. 32%。
全文摘要
本发明公开了一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法，其步骤包括一、预处理；二、提取；三、除杂；四、盐析脱盐；五、酶水解；六、浓缩。通过本方法制备的高纯度、能用于保持肌肤弹性的胶原蛋白，为透明无色液体，蛋白质浓度≥6.95％，氨基酸含量≥2.32％，可以直接作为化妆品应用，且制备方法简便，利于规模生产。
文档编号C12P21/06GK103060412SQ20131001292
公开日2013年4月24日 申请日期2013年1月15日 优先权日2013年1月15日
发明者曹荣军, 任宪君, 武鑫, 刘少芳, 张秋艳, 金海明, 姚秀芬, 台文静 申请人:青岛贝尔特生物科技有限公司