专利名称：一种混合酶解制备胶原蛋白短肽的方法
技术领域：
本发明涉及一种胶原蛋白短肽的制备方法，尤其涉及一种混合酶解制备胶原蛋白短肽的方法。
背景技术：
胶原蛋白是一种功能性蛋白质，与细胞增生、分化、运动、免疫中、关节润滑、伤口愈合等密切相关，目前已被广泛应用于医药、食品、日用化工、生物合成等工业领域。胶原蛋白具有保护胃黏膜的抗溃疡，抑制血压上升，提高骨骼强度；胶原蛋白分子量小，更容易被人体吸收，在营养品和日用品方面有一定的市场，可将其开发成各种美容护肤品、美容饮料、或者降血压预防骨质疏松等功能的保健品；胶原蛋白属于高蛋白，低热量食物，适合用作减肥食品；胶原蛋白由于其在胃肠道的吸收速度特别快，适合运动后补充能量，可以作为运动保健食品的原料。目前胶原蛋白制备主要以比较原始的水解、酸碱法、单一酶解法为主，其产品无论从颜色、味道，还是实质作用，都与国际标准的产品有较大差距。其中，以酸碱法生产的胶原蛋白因技术与成本限制，最后会使用双氧水、过氯酸钠等强氧化剂进行除色除味，其结果是导致生成大量自由基团，具有非常强的致癌作用，会严重地损害国人的健康，同时酸碱废液的排放也严重污染了环境。以单一的酶解方法制备胶原蛋白，胶原蛋白的得率低，经济效益低。
发明内容
为了解决现有技术中的问题，本发明的目的是提供一种混合酶解制备胶原蛋白短肽的方法。为达到上述目的，本发明所采用的技术手段是一种混合酶解制备胶原蛋白短肽的方法，其步骤包括`
将新鲜畜类动物皮肤刮脂洗净缴碎测定干基含量，取测定后的上述原料加入发酵罐，置于磁力搅拌器上，按照质量比5. 5%的浓度向发酵罐中补充自来水；
连接发酵罐和超级恒温水浴，然后启动磁力搅拌器和超级恒温水浴，将料液加热到96°〇-981保持41^11，降温至55°C后在发酵罐上安装pH计电极，然后在搅拌下依次加入中性蛋白酶、风味蛋白酶进行水解，中性蛋白酶加入量为30 μ Ι/g，风味蛋白酶加入量为总量的3%，保持pH在7-8之间；
水解9h后,水解液经过95°C下加热5min高温灭活，在6000r/min转速下离心，取上清液分析，同时取出全部残渣，经充分干燥后测定降解率。进一步的，所述测定干基含量是指105°C下干燥至恒重。本发明的有益效果在于通过本方法制备胶原蛋白，动物皮肤的降解率可达95. 6%,蛋白质的水解度可达18.5%，水解物中分子量小于1000 (10个氨基酸以下的肽)的短肽选择性达到了 44. 7%。生产过程绿色环保无污染，且制备方法简便，利于规模生产。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以助于理解本发明的内容。实施例1
一种混合酶解制备胶原蛋白短肽的方法，其步骤包括
将新鲜猪皮Ikg刮脂洗净缴碎，在105°C下干燥至恒重，测定干基含量，取测定后的上述原料加入发酵罐，置于磁力搅拌器上，按照质量比5. 5%的浓度向发酵罐中补充自来水；连接发酵罐和超级恒温水浴，然后启动磁力搅拌器和超级恒温水浴，将料液加热到96 0C -98°C 保持 4min ；
降温至55°C后在发酵罐上安装pH计电极，然后在搅拌下依次加入中性蛋白酶、风味蛋白酶进行水解，中性蛋白酶加入量为30 μ 1/g，风味蛋白酶加入量为总量的3%，保持pH在7-8之间，水解9h后，水解液经过95°C下加热5min高温灭活，在6000r/min的条件下离心，取适量上清液供分析用，同时取出全部残渣，经充分干燥后用于测定降解率。所述降解率为底物投料量剩余参渣量和底物投料量的比率。经过分析得到降解率95. 6%,蛋白质的水解度18. 5%,水解物中分子量小于1000(10个氨基酸以下的肽)的短肽选择性达到了 44.7%。实施例2
一种混合酶解制备胶原蛋白短肽的方法，其步骤包括
将新鲜牛皮Ikg刮脂洗净缴碎，在105°C下干燥至恒重，测定干基含量，取测定后的上述原料加入发酵罐，置于磁力搅拌器上，按照质量比5. 5%的浓度向发酵罐中补充自来水；连接发酵罐和超级恒温水浴，然后启动磁力搅拌器和超级恒温水浴，将料液加热到96 0C -98°C 保持 4min ；
降温至55°C后在发酵罐上安装pH计电极，然后在搅拌下依次加入中性蛋白酶、风味蛋白酶进行水解，中性蛋白酶加入量为30 μ 1/g,风味蛋白酶加入量为总量的3%，保持pH在7-8之间，水解9h后，水解液经过95°C下加热5min高温灭活，在6000r/min的条件下离心，取适量上清液供分析用，同时取出全部残渣，经充分干燥后用于测定降解率。经过分析得到降解率95. 6%,蛋白质的水解度18. 5%,水解物中分子量小于1000(10个氨基酸以下的肽)的短肽选择 性达到了 44.7%。本发明的实施例所表述的，并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种混合酶解制备胶原蛋白短肽的方法，其特征在于，步骤包括将新鲜畜类动物皮肤刮脂洗净缴碎测定干基含量，取测定后的上述原料加入发酵罐，置于磁力搅拌器上，按照质量比5. 5%的浓度向发酵罐中补充自来水；连接发酵罐和超级恒温水浴，然后启动磁力搅拌器和超级恒温水浴，将料液加热到96°C_98°C保持4min，降温至55°C后在发酵罐上安装PH计电极，然后在搅拌下依次加入中性蛋白酶、风味蛋白酶进行水解，中性蛋白酶加入量为30 μ Ι/g，风味蛋白酶加入量为总量的3%，保持pH在7-8之间；水解9h后，水解液经过95°C下加热5min高温灭活，在6000r/min转速下离心，取上清液分析，同时取出全部残渣，经充分干燥后测定降解率。
2.根据权利要求1所述的混合酶解制备胶原蛋白短肽的方法，其特征在于所述测定干基含量是指105°C下干燥至恒重。
全文摘要
本发明公开了一种混合酶解制备胶原蛋白短肽的方法，步骤包括将新鲜畜类动物皮肤刮脂洗净缴碎测定干基含量,测定后加入发酵罐，置于磁力搅拌器上补充自来水；将料液加热到96℃-98℃保持4min,降温至55℃后在发酵罐上安装pH计电极,搅拌并依次加入中性蛋白酶、风味蛋白酶进行水解，水解9h后水解液经过95℃下加热5min高温灭活,6000r/min离心,取上清液分析，取出全部残渣,经充分干燥后测定降解率。通过本方法制备胶原蛋白，动物皮肤的降解率可达95.6%,蛋白质的水解度可达18.5%,水解物中分子量小于1000的短肽选择性达到了44.7%，生产过程绿色环保无污染，且制备方法简便，利于规模生产。
文档编号C12P21/06GK103060413SQ201310012998
公开日2013年4月24日 申请日期2013年1月15日 优先权日2013年1月15日
发明者曹荣军, 任宪君, 武鑫, 刘少芳, 张秋艳, 金海明, 姚秀芬, 台文静 申请人:青岛贝尔特生物科技有限公司