一种利用微生物酶提取鱼鳞胶原蛋白的方法
【专利摘要】一种利用微生物酶提取鱼鳞胶原蛋白的方法，包括如下步骤：将预处理之后的风干鱼鳞置入20倍体积的0.5mol/L柠檬酸中，加入鱼鳞质量的2%微生物蛋白酶，搅拌提取24h，提取液加入一定量的NaCl溶液至最终浓度为0.9mol/L过夜，在4℃条件10000×g离心15min，弃去上清，加入10倍体积的0.5mol/L醋酸中溶解，重复盐析和离心操作一次，在10倍体积的0.1mol/L的醋酸溶液中透析12h，每4h换一次溶液，再用蒸馏水透析至中性，冷冻干燥备用，此时得到的是酶溶性胶原蛋白，冷冻干燥备用。
【专利说明】一种利用微生物酶提取鱼鱗胶原蛋白的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种利用微生物酶提取鱼鳞胶原蛋白的方法。
【背景技术】
[0002] 胶原蛋白是结缔组织中极其重要的一种结构蛋白，其提取制品已广泛应用于医 药、保健、食品加工、化妆品等众多领域。鱼鳞含有丰富的蛋白质和钙、磷等矿物质，主要由 蛋白质和羟基磷灰石组成，其中蛋白质占鱼鳞总重的50%?70%，主要为胶原蛋白和角蛋 白，可见鱼鳞是非常好的胶原蛋白生产原料。
[0003] 提取胶原蛋白，目前常用的方法有：碱法、酸法、酶法和热处理。利用酶法提取胶原 蛋白，具有较高的回收率，水解反应速度快，时间短，无环境污染等优点。而且酶法提取的水 解胶原蛋白纯度高，水溶性好，理化性质稳定。目前常用的蛋白酶主要来自于动植物，例如 胃蛋白酶，胰酶，木瓜蛋白酶，菠萝蛋白酶，利用微生物来源的蛋白酶进行胶原蛋白提取还 属鲜见。微生物来源的蛋白酶产量高，价格低，若能达到目前动植物蛋白酶的提取效果，将 有利于工业化生产。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的设计一种利用微生物酶提取鱼鳞胶原蛋白的方法。
[0005] 本发明的目的是通过以下技术方案实现的：将预处理之后的风干鱼鳞置入20倍 体积的〇. 5mol/L柠檬酸中，加入鱼鳞质量的2%微生物蛋白酶，搅拌提取24h，所述微生物蛋 白酶采用自有微生物为主以酵素发酵的下脚料培养基进行发酵获得，具有胰蛋白酶作用， 提取液加入一定量的NaCl溶液至最终浓度为0.9mol/L过夜，在4°C条件lOOOOXg离心 15min，弃去上清，加入10倍体积的0. 5mol/L醋酸中溶解，重复盐析和离心操作一次，在10 倍体积的〇. lmol/L的醋酸溶液中透析12h，每4h换一次溶液，再用蒸馏水透析至中性，冷冻 干燥备用，此时得到的是酶溶性胶原蛋白，冷冻干燥备用。
[0006] 本发明采用自产微生物蛋白酶，提取酶溶性胶原蛋白，及降低了生产成本，同时最 大限度避免了酸提取法可能造成的环境污染。
【具体实施方式】
[0007] 为了使本发明专利保护的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下对本发明进 行进一步详细说明。
[0008] 实施例1 将预处理之后的风干鱼鳞置入20倍体积的0. 5mol/L醋酸中，加入鱼鳞质量的2%微 生物蛋白酶，所述微生物蛋白酶采用自有微生物为主以酵素发酵的下脚料培养基进行发 酵获得，具有胰蛋白酶作用，搅拌提取24h，提取液加入一定量的NaCl溶液至最终浓度为 0. 9mol/L过夜，在4°C条件lOOOOXg离心15min，弃去上清，加入10倍体积的0. 5mol/L醋 酸中溶解，重复盐析和离心操作一次。在10倍体积的0. lmol/L的醋酸溶液中透析12h，每 4h换一次溶液，再用蒸馏水透析至中性，冷冻干燥备用。此时得到的是酶溶性胶原蛋白，冷 冻干燥备用。
[0009] 采用以上方法最终纯化获得胶原蛋白的水平达到0. 26g/10g鱼鳞。
[0010] 实施例2 将预处理之后的风干鱼鳞置入20倍体积的0. 5mol/L盐酸中，加入鱼鳞质量的2%微 生物蛋白酶，所述微生物蛋白酶采用自有微生物为主以酵素发酵的下脚料培养基进行发 酵获得，具有胰蛋白酶作用，搅拌提取24h，提取液加入一定量的NaCl溶液至最终浓度为 0. 9mol/L过夜，在4°C条件lOOOOXg离心15min，弃去上清，加入10倍体积的0. 5mol/L醋 酸中溶解，重复盐析和离心操作一次。在10倍体积的0. lmol/L的醋酸溶液中透析12h，每 4h换一次溶液，再用蒸馏水透析至中性，冷冻干燥备用。此时得到的是酶溶性胶原蛋白，冷 冻干燥备用。
[0011] 采用以上方法最终纯化获得胶原蛋白的水平达到〇. 25g/10g鱼鳞。
[0012] 应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换， 而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
【权利要求】
1. 一种利用微生物酶提取鱼鳞胶原蛋白的方法，包括如下步骤：将预处理之后的风干 鱼鳞置入20倍体积的0. 5mol/L柠檬酸中，加入鱼鳞质量的2%微生物蛋白酶，搅拌提取 24h，所述微生物蛋白酶采用自有微生物为主以酵素发酵的下脚料培养基进行发酵获得，具 有胰蛋白酶作用，提取液加入一定量的NaCl溶液至最终浓度为0. 9mol/L过夜，在4°C条件 10000X g离心15min，弃去上清，加入10倍体积的0. 5mol/L醋酸中溶解，重复盐析和离心 操作一次，在10倍体积的〇. lmol/L的醋酸溶液中透析12h，每4h换一次溶液，再用蒸馏水 透析至中性，冷冻干燥备用，此时得到的是酶溶性胶原蛋白，冷冻干燥备用。
【文档编号】C12P21/06GK104140993SQ201410368834
【公开日】2014年11月12日 申请日期:2014年7月30日 优先权日:2014年7月30日
【发明者】许安邦 申请人:晶叶（青岛）生物科技有限公司