一株提高丹参产量及总酚酸含量的枝孢属真菌的制作方法
【专利摘要】一株提高丹参产量及酚酸类成分含量的真菌，它是保藏编号为CGMCC?No.6608的枝孢(Cladosporium?sp.)，菌株名称：11673-58，简称58#。栽培丹参时在每株丹参幼苗根部分别施予固体培养的58#菌材0.5-1.5g，经与丹参幼苗共生栽培4-6月，能提高收获期时丹参的产量和丹参总酚酸及丹酚酸B的含量。该技术方法简单易行，无污染，用于丹参的人工种植，能有效提高药材的产量和质量，具有良好的应用前景。
【专利说明】一株提高丹参产量及总酚酸含量的枝孢属真菌
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，涉及一株提高丹参产量和有效成分含量的真菌。
【背景技术】
[0002]药用丹参为唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根莖,始载于《神农本草经》，位居上品，具有活血、凉血、清心除烦的功效，临床上广泛用于冠心病的治疗。丹参制剂也是我国心脑血管病的基本治疗药物，因疗效确切，丹参已成为我国用量大，销售额多的中药。
[0003]丹酚酸类成分是丹参的水溶性成分，对心、脑、肝、肾、胃等多个器官具有保护作用。丹酚酸B是其中的主要成分和活性成分，在心脏保护、抗动脉粥样硬化、抗肝纤维化、脑保护等方面都有显著的药理活性，被广泛地用于临床。
[0004]内生真菌指那些在其生活史的全部或某一时期生活在植物组织内，对植物组织没有引起明显病害症状的真菌。研究发现，几乎所有健康植物的组织器官内都有内生真菌的存在。内生真菌与植物共生不仅可以提高植物对高温、干旱、盐化、病原菌等逆境胁迫的适应能力，还可以提高药用植物有效成分的含量，从而提高药材品质。内生真菌的这些作用对药用植物资源的开发与保护，以及对药用植物有效成分的积累等有着重要的意义。 [0005]本发明利用生物技术，从丹参中分离、筛选出能够提高丹参总酚酸含量的内生真菌；将菌株用于丹参的栽培中，实现提高收获期丹参产量，提高丹参总酚酸和丹酚酸B含量的目的。该发明对丹参资源的开发与保护、丹参中酚酸类成分的应用生产等都有着重要的意义。该技术方法操作简单，绿色环保，具有广泛的应用前景，目前国内外尚未见利用真菌与丹参共生栽培，提高丹参药材产量和酚酸类成分含量的研究报道。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于，为丹参的人工栽培提供一株能提高丹参产量及酚酸类成分含量的菌株。菌株名称为11673-58，以下简称58#，经鉴定为枝孢(Cladosporium sp.)。该菌株2012年9月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号，保藏号CGMCC N0.6608。菌株58#是一株丹参的内生真菌，经与丹参幼苗共生栽培4-6月后，与相同栽培环境下未接菌的丹参相比，能提高丹参药材产量和酚酸类成分含量。
[0007]为了实现上述目的，本发明采取如下的技术解决:
[0008](1)58#的固体培养:培养基组成按重量比计算为:麦麸:10% -17%,木屑:15% -17%, KH2PO4:0.2% -0.3%, MgSO4:0.1% -0.2%, CaSO4:0.07% -0.10%，葡萄糖:
1.40% -2.20%，玉米芯:2.00% -4.00%，玉米碎颗粒:3.00% -5.00%，其余成分为水。称取各种组分，混匀后分装，122°C灭菌140min，放凉备用。取在PDA培养基上培养的58#菌片，放置在固体培养基的中部，25°C暗室培养至58#菌长至瓶中培养基的2/3处即可使用。
[0009](2)菌苗共生栽培:春季栽培丹参时,取出芽后20-30天的丹参苗,在每株丹参幼苗根部分别施予固体培养的58#菌材0.5-1.5g，用土覆盖后栽于温室内或大田里，常规方法进行种植管理。
[0010](3)菌株58#经与丹参幼苗共生栽培4-6月后,与相同栽培环境下未接菌的丹参相t匕，丹参干重，以及总酚酸和丹酚酸B的含量均有不同程度的提高。
【具体实施方式】
[0011]实施例1
[0012]58# 的固体培养:麦麸:100g，木屑:150g, KH2PO4:2g, MgSO4:lg, CaSO4:0.7g，葡萄糖:14g,玉米芯:20g,玉米碎颗粒:30g,加水混合均匀，分装于瓶内，122°C灭菌140min,放凉备用。取在PDA培养基上培养的58#菌片，放置在固体培养基的中部，25°C暗室培养至58#菌长至瓶中培养基的2/3处即可使用。
[0013]菌苗共生栽培:用温室盆栽的方法，在春季栽培丹参时，取出芽后20-30天的丹参苗，在每株丹参幼苗根部分别施予固体培养的58#菌材0.5g，每盆I株，用土覆盖后盆栽于温室里，常规方法进行种植管理，6个月后收获。
[0014]称量干重，测总酹酸和丹酹酸B的含量。与58#菌共生栽培的丹参,每株根干重平均为20g,根部总酹酸含量平均为7.2%,丹酹酸B含量平均为2.9%。未接菌的丹参，每株根干重平均为10g，根部总酚酸含量平均为3.6%，丹酚酸B含量平均为2.5%。
[0015]实施例2 [0016]58# 的固体培养:麦麸:170g，木屑:170g, KH2PO4:3g,MgSO4:2g, CaSO4:lg，葡萄糖:22g,玉米芯:40g,玉米碎颗粒:50g,加水混合均匀，分装于瓶内，122°C灭菌140min,放凉备用。取在PDA培养基上纯化后的菌片58#，放置在固体培养基的中部，25°C暗室培养至58#菌长至瓶中培养基的2/3处即可使用。
[0017]菌苗共生栽培:用田间栽培的方法，春季栽培丹参时，取出芽后20-30天的丹参苗，在在每株丹参幼苗根部分别施予固体培养的58#菌材1.0g，用土覆盖后栽于田内，常规方法进行田间种植管理，4个月后收获。
[0018]测总酚酸和丹酚酸B的含量。与58#菌共生栽培的丹参，根部总酚酸含量平均为
11.4%,丹酚酸B含量平均为2.8%。未接菌的丹参，根部总酚酸含量平均为10.5%，丹酚酸B含量平均为2.7%。
[0019]实施例3
[0020]58# 的固体培养:麦麸:135g,木屑:160g, KH2PO4:2.5g，MgSO4:1.5g，CaSO4:
0.85g，葡萄糖:18g，玉米芯:30g，玉米碎颗粒:40g，加水混合均匀，分装于瓶内，122°C灭菌140min，放凉备用。取在PDA培养基上培养的58#菌片，放置在固体培养基的中部，25°C暗室培养至58#菌长至瓶中培养基的2/3处即可使用。
[0021]菌苗共生栽培:用田间栽培的方法，春季栽培丹参时，取出芽后20-30天的丹参种子苗，在每株丹参幼苗根部分别施予固体培养的58#菌材1.5g，用土覆盖后栽于田内，常规方法进行田间种植管理，6个月后收获。
[0022]称量干重，测总酹酸和丹酹酸B的含量。与58#菌共生栽培的丹参,每株根干重平均为26g,根部总酹酸含量平均为6.3%,丹酹酸B含量平均为2.3%。未接菌的丹参，每株根干重平均为15g，根部总酚酸含量平均为4.3%，丹酚酸B含量平均为2.4%。
【权利要求】
1.提高丹参产量及酚酸类成分含量的一株真菌，它是保藏编号为CGMCCN0.6608的枝孢(Cladosporium sp.)，菌株名称:11673-58，简称58# ;该菌株可在栽培丹参时使用。
2.如权利要求1所述的真菌，其固体培养的培养基组分按重量计为:麦麸:.10 % -17 %，木屑:15 % -17 %，KH2PO4:0.2 % -0.3 %, MgSO4:0.1 % -0.2 %, CaSO4:.0.07 % -0.10 %，葡萄糖:L40 % -2.20 %，玉米芯:2.00 % -4.00 %，玉米碎颗粒:.3.00% -5.00%，其余成分为水。
3.如权利要求1所述的真菌，其使用方法为:栽培丹参时，取出芽后20-30天的丹参苗，在每株丹参幼苗根部分别施予固体培养的58#菌材0.5-1.5g，用土覆盖，栽于温室内或大田里，定期施水，常 规方法进行种植管理，4-6个月后收获。
【文档编号】C12R1/645GK103992952SQ201310050802
【公开日】2014年8月20日 申请日期:2013年2月16日 优先权日:2013年2月16日
【发明者】郭顺星, 唐坤, 李标, 陈晓梅, 王春兰, 陈娟 申请人:中国医学科学院药用植物研究所