一种油茶籽多肽的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种油茶籽多肽的制备方法，具体如下：油茶籽蛋白经粉碎，过80~100目筛后按质量体积比3:100~120加水制成悬浮液，所述悬浮液于90~95℃热处理10~20min，降温后调pH值至中性，按4300~4400u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，于53~54℃酶解3.5~4.5h，酶解结束后灭酶，离心得上清液，所述上清液经过脱盐、柱层析后洗脱液再次离心得上清液，所述上清液经过冷冻干燥得油茶籽多肽。本发明的提取工艺条件温和，制得的油茶籽粕蛋白形态、色泽佳，油茶籽蛋白再经过中性蛋白酶的酶解、脱盐和柱层析，柱层析的洗脱液经过冷冻干燥获得油茶籽粕多肽，该多肽杂质含量低，氨基酸含量丰富，可以广泛应用于食品添加剂。
【专利说明】一种油茶籽多肽的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种多肽的制备方法，具体的说是涉及一种油茶籽多肽的制备方法。【背景技术】
[0002]油茶属于常绿小乔木，是茶科山茶属，是我国南方的一种优良的木本油料植物。我国油茶资源十分丰富，仅油茶林的种植面积就达400万hm2，是世界上油茶品种最多、分布最广、油茶籽产量最高的国家，年产油茶籽约54.98万吨、茶油15万吨、油茶籽副产品一油茶籽柏的年平均产量约为39.71万吨。油茶籽柏中蛋白质含量约为12%~15%，其氨基酸组成为17种，其中8种为人体必需氨基酸。油茶籽柏的利用率相当低，造成资源的极大浪费，植物蛋白质在生物酶法条件下，水解生成的多肽及氨基酸等物质，具有很高的营养价值与功能特性，因此该法已成为研究热点。很多种植物蛋白质酶解后产生的多肽除了具有易被人体消化吸收的特性外，还具有很强的抗氧化、降低胆固醇等功能特性。到目前为止，未见国内外有关油茶籽多肽的研究报道，因此，开展对油茶籽多肽保健功能活性的研究具有重要的现实意义。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种一种油茶籽多肽的制备方法。
[0004]本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:
[0005]一种油茶籽多肽的制备方法，所述制备方法具体如下:
[0006]油茶籽蛋白经粉碎，过80~100目筛后按质量体积比3:100~120加水制成悬浮液，所述悬浮液于90~95°C热处理10~20min，降温后调pH值至中性，按4300~4400u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，`于53~54°C酶解3.5~4.5h，酶解结束后灭酶，离心得上清液，所述上清液经过脱盐、柱层析后洗脱液再次离心得上清液，所述上清液经过冷冻干燥得油茶籽多肽。
[0007]作为优选，中性蛋白酶的加酶量为4364u/g底物，酶解温度为53.5°C，酶解时间为4小时。
[0008]作为优选，所述油茶籽蛋白的制备方法如下:
[0009](I)酶解:将粉碎后过80~100目筛的油茶籽柏粉按料液比1:6~7与水混合均匀，调pH值至7.25~7.30，加入油茶籽柏粉质量0.04~0.05%的复合植物水解酶，于65~70°C酶解3~3.5h，酶解结束后灭酶，然后离心获得油茶籽柏残渣；
[0010](2)超声辅助碱提:将步骤(1)获得的油茶籽柏残渣与适量水混合均匀，调pH值至
10.0~10.5，于40~45°C碱提80~90min，碱提过程中采用超声波辅助，超声波的功率为300~1000W，超声时间为20min，碱提结束后离心分离得上清液；
[0011](3)酸沉:将步骤(2)获得的上清液调pH值至4.6,于室温静置I~1.5h,然后离心得沉淀，所述沉淀经过冷冻干燥得油茶籽柏蛋白。
[0012]本发明通过复合植物水解酶先将油茶籽柏粉中的非蛋白质如糖类分解掉，然后再通过碱提、酸沉来获得油茶籽柏蛋白，其中碱提通过超声波强化，提取效果好，碱提的提取率高，由于本发明的提取工艺条件温和，制得的油茶籽柏蛋白形态、色泽佳，油茶籽蛋白再经过中性蛋白酶的酶解、脱盐和柱层析，柱层析的洗脱液经过冷冻干燥获得油茶籽柏多肽，该多肽氨基酸含量丰富，可以广泛应用于食品添加剂。
[0013]作为优选，步骤(1)中油茶籽柏粉的粒径为80目，料液比为1: 6，pH值为7.28，复合植物水解酶的添加量为0.048%,酶解温度为68°C，酶解时间为3.25h。此工艺参数系复合植物水解酶酶解的最佳工艺条件，非蛋白类杂质去除率高，后续碱提过程中可以节省碱的用量，碱的用量减少，对油茶籽柏蛋白的破坏减少，避免了碱性太强引起脱氨、脱羧、肽键断裂，引起“胱赖反应”，将氨基酸转变为有毒化合物。
[0014]作为优选，步骤(2)中油茶籽柏残渣(以干基计)与水的质量比为1:25。
[0015]作为优选，步骤(2)中碱提的pH值为10.0，浸提温度为40°C，浸提时间为80min。
[0016]作为优选，所述离心的转速为3000~3200rpm,离心时间为10~20min。
[0017]本发明的有益效果是:
[0018](I)本发明通过复合植物水解酶先将油茶籽柏粉中的非蛋白质如糖类分解掉，然后再通过碱提、酸沉来获得油茶籽柏蛋白，其中碱提通过超声波强化，提取效果好，碱提的提取率高，由于本发明的提取工艺条件温和，制得的油茶籽柏蛋白形态、色泽佳，油茶籽蛋白再经过中性蛋白酶的酶解、脱盐和柱层析，柱层析的洗脱液经过冷冻干燥获得油茶籽柏多肽，该多肽杂质含量低，氨基酸含量丰富，可以广泛应用于食品添加剂。
[0019](2)本发明将利用率相当低的油茶籽柏制成油茶籽多肽，具有很高的营养价值，提高了资源的利用率，将油茶籽柏变废为宝，增加了其经济价值。
【具体实施方式】
[0020]下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明，各实施例使用的仪器设备均系市购常规设备，各实施例所使用的试剂均系市购常规试剂。
[0021]复合植物水解酶:诺维信公司生产，酶活100FBG/g。
[0022]本发明制备的油茶籽多肽的氨基酸含量由中国农业科学院油料作物研究所测试中心检测。
[0023]实施例1
[0024]一种油茶籽多肽的制备方法，所述制备方法具体如下:
[0025](I)酶解:将粉碎后过80目筛的油茶籽柏粉按料液比1:6与水混合均匀，调pH值至7.25，加入油茶籽柏粉质量0.04%的复合植物水解酶，于65°C酶解3.5h，酶解结束后于85°C灭酶lOmin，然后于3000rpm离心15min获得油茶籽柏残渣；
[0026](2)超声辅助碱提:将步骤(1)获得的油茶籽柏残渣(以干基计)按质量比1:25与水混合均匀，调pH值至10.0，于40°C碱提90min，碱提过程中采用超声波辅助，超声波的功率为300W，超声时间为20min，碱提结束后于3000rpm离心15min分离得上清液；
`[0027](3)酸沉:将步骤(2)获得的上清液调pH值至4.6，于室温静置lh，然后于3000rpm离心15min得沉淀，所述沉淀经过冷冻干燥得油茶籽柏蛋白。
[0028](4)将步骤(3)获得的油茶籽蛋白过80目筛后按质量体积比3:100 (g/ml)加水制成悬浮液，所述悬浮液于90°C热处理20min，降温后调pH值至7.0，按4300u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，于53°C酶解4.5h，酶解结束后于90°C灭酶lOmin，再在3000rpm转速条件下离心20min得上清液，所述上清液经过脱盐、SephadexG-25柱层析后洗脱液再次在3000rpm转速条件下离心20min得上清液，所述上清液经过冷冻干燥得油茶籽多肽。
[0029]实施例2:
[0030]一种油茶籽多肽的制备方法，所述制备方法具体如下:
[0031](I)酶解:将粉碎后过100目筛的油茶籽柏粉按料液比1:7与水混合均匀，调pH值至7.30，加入油茶籽柏粉质量0.05%的复合植物水解酶，于70°C酶解3h，酶解结束后于85°C灭酶15min，然后于3200rpm离心IOmin获得油茶籽柏残渣；
[0032](2)超声辅助碱提:将步骤(1)获得的油茶籽柏残渣(以干基计)按质量比1:25与水混合均匀，调pH值至10.5，于45°C碱提80min，碱提过程中采用超声波辅助，超声波的功率为1000W,超声时间为20min,碱提结束后于3200rpm离心IOmin分离得上清液；
[0033](3)酸沉:将步骤(2)获得的上清液调pH值至4.6，于室温静置1.5h，然后于3200rpm离心IOmin得沉淀,所述沉淀经过冷冻干燥得油茶籽柏蛋白。
[0034](4)将步骤(3)获得的油茶籽蛋白过100目筛后按质量体积比3:120 (g/ml)加水制成悬浮液，所述悬浮液于95°C热处理lOmin，降温后调pH值至7.0，按4400u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，于54°C酶解3.5h，酶解结束后于95°C灭酶8min，再在3200rpm转速条件下离心15min得上清液，所述上清液经过脱盐、SephadexG-25柱层析后洗脱液再次在3200rpm转速条件下离心15min得上清液,所述上清液经过冷冻干燥得油茶籽多肽。
[0035]实施例3:
[0036]一种油茶籽多肽的制备方法，所述制备方法具体如下:
[0037](I)酶解:将粉碎后过100目筛的油茶籽柏粉按料液比1:6与水混合均匀，调pH值至7.28，加入油茶籽柏粉质量0.048%的复合植物水解酶，于68°C酶解3.25h，酶解结束后于90°C灭酶5min，然后于3000rpm离心20min获得油茶籽柏残渣；
[0038](2)超声辅助碱提:将步骤(1)获得的油茶籽柏残渣(以干基计)按质量比1:25与水混合均匀，调pH值至10.0，于40°C碱提80min，碱提过程中采用超声波辅助，超声波的功率为800W,超声时间为20min,碱提结束后于3000rpm离心20min分离得上清液；
[0039](3)酸沉:将步骤(2)获得的上清液调pH值至4.6，于室温静置1.5h，然后于3000rpm离心20min得沉淀,所述沉淀经过冷冻干燥得油茶籽柏蛋白。
[0040](4)将步骤(3)获得的油茶籽蛋白过80目筛后按质量体积比3:100 (g/ml)加水制成悬浮液，所述悬浮液于95°C热处理lOmin，降温后调pH值至7.0，按4364u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，于53.5°C酶解4h，酶解结束后于95°C灭酶8min，再在3200rpm转速条件下离心15min得上清液，所述上清液经过脱盐、SephadexG-25柱层析后洗脱液再次在3200rpm转速条件下离心15min得上清液,所述上清液经过冷冻干燥得油茶籽多肽。
[0041]实施例1~3获得的油茶籽多肽的感官特性指标见表1，油茶籽多肽的质量指标见表2所示:
[0042]表1油茶籽柏多肽的感官特性指标
[0043]
【权利要求】
1.一种油茶籽多肽的制备方法，其特征在于:所述制备方法具体如下: 油茶籽蛋白经粉碎，过80~100目筛后按质量体积比3:100~120加水制成悬浮液，所述悬浮液于90~95°C热处理10~20min,降温后调pH值至中性,按4300~4400u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，于53~54°C酶解3.5~4.5h，酶解结束后灭酶，离心得上清液，所述上清液经过脱盐、柱层析后洗脱液再次离心得上清液，所述上清液经过冷冻干燥得油茶籽多肽。
2.一种油茶籽多肽的制备方法，其特征在于:所述中性蛋白酶的加酶量为4364u/g底物，酶解温度为53.5°C，酶解时间为4小时。
3.根据权利要求1或2所述的一种油茶籽多肽的制备方法，其特征在于:所述油茶籽蛋白的制备方法如下: (O酶解:将粉碎后过80~100目筛的油茶籽柏粉按料液比1:6~7与水混合均匀，调PH值至7.25~7.30，加入油茶籽柏粉质量0.04~0.05%的复合植物水解酶，于65~70°C酶解3~3.5h，酶解结束后灭酶，然后离心获得油茶籽柏残渣； (2)超声辅助碱提:将步骤(1)获得的油茶籽柏残渣与适量水混合均匀，调pH值至10.0~10.5，于40~45°C碱提80~90min，碱提过程中采用超声波辅助，超声波的功率为300~1000W，超声时间为20min，碱提结束后离心分离得上清液； (3)酸沉:将步骤(2)获得的上清液调pH值至4.6，于室温静置I~1.5h，然后离心得沉淀，所述沉淀经过冷冻干燥得油茶籽柏蛋白。
4.根据权利要求3所述的一种油茶籽多肽的制备方法，其特征在于:步骤(1)中油茶籽柏粉的粒径为80目，料液比为1: 6，pH值为7.28，复合植物水解酶的添加量为0.048%，酶解温度为68°C，酶解时间为3.25h。
5.根据权利要求3所述的一种油茶籽多肽的制备方法，其特征在于:步骤(2)中油茶籽柏残渣(以干基计)与水的质量比为1:25。
6.根据权利要求3所述的一种油茶籽多肽的制备方法，其特征在于:步骤(2)中碱提的pH值为10.0，浸提温度为40°C，浸提时间为80min。
7.根据权利要求3所述的一种油茶籽多肽的制备方法，其特征在于:所述离心的转速为3000~3200rpm，离心时间为10~20min。
【文档编号】C12P21/06GK103627765SQ201310631391
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2013年11月29日 优先权日:2013年11月29日
【发明者】何东平, 胡传荣, 双杨, 刘京伟 申请人:衢州刘家香食品有限公司