一种秸秆腐熟剂及其制作方法
【专利摘要】本发明涉及生物【技术领域】，具体而言，涉及一种秸秆腐熟剂及其制作方法。该秸秆腐熟剂，包括草炭和含有菌体活性成分的微生物菌群，所述菌体活性成分为芽孢、营养体或孢子；其中，微生物菌群包括哈茨木霉、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和绿僵菌；且微生物菌群的含量为：0.5-5亿个/克草炭。因此，该秸秆腐熟剂具备除了能够起到分解秸秆的作用之外，其还具有抑制病虫害的生长和繁殖的效果。
【专利说明】一种秸秆腐熟剂及其制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物【技术领域】，具体而言，涉及一种秸杆腐熟剂及其制作方法。
【背景技术】
[0002]秸杆还田是秸杆利用的一种重要方式；其一般都需要利用秸杆腐熟剂加速秸杆分解。秸杆腐熟剂中含有大量的酵母菌、霉菌和芽孢杆菌等，其大量繁殖能快速有效地将作物秸杆分解成作物生长所需要的氮、磷、钾等大量元素和钙、镁、锰、钥等中微量元素，能够有效改良土壤团粒结构，提高土壤通气和保肥保水功能，并且能产生热量和一定量的二氧化碳，从而改善植物的生长环境并促进秸杆循环的有效利用。
[0003]但是，秸杆直接还田为某些病虫害的发生创造了适宜的环境条件，可使玉米螟安全过冬以及蛴螬、地老虎、金针虫等地下害虫增多；秸杆中的病原菌难以移出大田，从而增加了病原菌的数量。因此，提供一种能够抑制田间病虫害的生长和繁殖的秸杆腐熟剂是本领域亟待解决的一个技术问题。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种秸杆腐熟剂，以解决上述的问题；
[0005]本发明的另一个目的在于提供一 种秸杆腐熟剂制作方法。
[0006]在本发明的实施例中提供了一种秸杆腐熟剂，包括草炭和含有菌体活性成分的微生物菌群，所述菌体活性成分为芽孢、营养体或孢子；
[0007]其中，所述微生物菌群包括哈茨木霉、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和绿僵菌；所述微生物菌群的含量为:0.5-5亿个/克草炭。
[0008]本发明提供的这种秸杆腐熟剂，其包括含有菌体活性成分的微生物菌群和草炭，并且微生物菌群的含量控制在0.5-5亿个/克草炭之间；含有菌体活性成分的微生物菌群作为秸杆腐熟剂的重要组份，其具有很好的抗逆性，能够在恶略的环境下存活；当使用该秸杆腐熟剂分解秸杆时，由于哈茨木霉、枯草芽孢杆菌具有抑制有害病原菌生长繁殖效果，酿酒酵母和绿僵菌具有抑制害虫生长繁殖效果，因此，长期存活的微生物菌群还可以很好的作为杀虫、杀菌剂，其能够杀死病虫害或者抑制病虫害的生长和繁殖；因此，该秸杆腐熟剂具备除了能够起到分解秸杆的作用之外，其还具有抑制病虫害的生长和繁殖的效果。
[0009]本发明还提供了一种腐熟剂的制作方法，包括以下步骤:
[0010]将哈茨木霉原菌进行菌种活化、摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐培养，得到哈茨木霉发酵液；
[0011]将枯草芽孢杆菌原菌进行菌种活化、摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐培养，得到枯草芽孢杆菌发酵液；
[0012]将酿酒酵母原菌进行菌种活化、摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐培养，得到酿酒酵母发酵液；
[0013]将绿僵菌原菌种进行菌种活化、摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐培养，得到绿僵菌发酵液；
[0014]将所述哈茨木霉发酵液、所述枯草芽孢杆菌发酵液、所述酿酒酵母发酵液和所述绿僵菌发酵液混合，得到混合菌液；
[0015]将所述混合菌液与既定重量的草炭吸附混拌，得到含量为0.5-5亿个/克草炭的混合物；
[0016]将所述混合物粉碎后制剂，得到秸杆腐熟剂。
[0017]通过上述方法可以实现将草炭和微生物菌群制成秸杆腐熟剂。
【专利附图】
【附图说明】
[0018]图1示出了本发明实施例二提供的秸杆腐熟剂的制作流程图。
【具体实施方式】
[0019]下面通过具体的实施例子并结合附图对本发明做进一步的详细描述。
[0020]实施例一
[0021]在本发明的实施例中提供了一种秸杆腐熟剂，包括草炭和含有菌体活性成分的微生物菌群，所述菌体活性成分为芽孢、营养体或孢子；
`[0022]其中，所述微生物菌群包括哈茨木霉、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和绿僵菌；所述微生物菌群的含量为:0.5-5亿个/克草炭。
[0023]本发明提供的这种秸杆腐熟剂，其包括含有菌体活性成分的微生物菌群和草炭，并且微生物菌群的含量控制在0.5亿-5亿个/克草炭之间；含有菌体活性成分的微生物菌群作为秸杆腐熟剂的重要组份，其具有很好的抗逆性，能够在恶略的环境下存活；当使用该秸杆腐熟剂分解秸杆时，由于哈茨木霉、枯草芽孢杆菌具有抑制有害病原菌生长繁殖效果，酿酒酵母和绿僵菌具有抑制害虫生长繁殖效果，因此，长期存活的微生物菌群还可以很好的作为杀虫、杀菌剂，其能够杀死病虫害或者抑制病虫害的生长和繁殖；因此，该秸杆腐熟剂具备除了能够起到分解秸杆的作用之外，其还具有抑制病虫害的生长和繁殖的效果。
[0024]此外，本发明实施例提供的这种秸杆腐熟剂，其微生物菌群为含有菌体活性成分(芽孢、孢子或者营养体)的菌群，含有菌体活性成分的微生物菌群，其被吸附剂(草炭)吸附后，当期施加至秸杆后，微生物菌群的生长和繁殖非常迅速，因此，其分解秸杆的效率也大大提闻。
[0025]秸杆腐熟剂分解秸杆的能力很大程度上决定于微生物菌群所含菌的比例，因此，在本实施例中，为了使得秸杆腐熟剂具有更好的分解能力以及抗病虫害的效果，优选的，哈茨木霉、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和绿僵菌的个数比为7:30:5:8。
[0026]此外，草炭作为吸附剂，其用于使微生物菌群吸附在其表面和内部。在本实施例中，草炭的粒度为0.08-0.1毫米。
[0027]另外，在本实施例中，哈茨木霉、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和绿僵菌均保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号依次为=CGMCC N0.7861、CGMCCN0.7850、CGMCCN0.7849和CGMCC N0.7848 ;其保藏命名依次为:哈茨木霉、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和绿僵菌；其分类命名依次为:Trichoderma harzianum、Baciilus subtilis、Saccharomyces cerevisiae、Metarhizium anisopliae ;保藏日期均为 2013 年 7 月 03 日。[0028]为了使得本发明实施例一的秸杆腐熟剂得到更好的应用，更加有效应用到分解秸杆以及病虫害防治中，本发明还在上述实施例一的基础之上提供了实施例二，实施例二是实施例一的腐熟剂的具体制作方法，现做详细的阐述和解释:
[0029]实施例二
[0030]本实施例的秸杆腐熟剂的制作方法包括以下步骤，请参考图1:
[0031]步骤101:将哈茨木霉原菌进行菌种活化、摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐培养，得到哈茨木霉发酵液；
[0032]步骤102:将枯草芽孢杆菌原菌进行菌种活化、摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐培养，得到枯草芽孢杆菌发酵液；
[0033]步骤103:将酿酒酵母原菌进行菌种活化、摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐培养，得到酿酒酵母发酵液；
[0034]步骤104:将绿僵菌原菌种进行菌种活化、摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐培养，得到绿僵菌发酵液； [0035]其中，步骤101-步骤104为分别将哈茨木霉原菌、枯草芽孢杆菌原菌、酿酒酵母原菌和绿僵菌原菌种通过一系列的扩培操作，得到发酵液的过程，其制备顺序随意，可以分步操作，也可以同时进行。
[0036]此外，在具体的操作过程中，4种菌均需要通过菌种活化、摇瓶培养、种子罐培养以及发酵罐培养的过程，而为了简化操作过程，在进行每一步操作的过程中，优选的，可以对4种菌都进行处理，例如同时将4种菌进行活化处理，然后同时再进行摇瓶培养，待所有的菌摇瓶培养都完成之后再进入下一个环节，直到完成发酵罐培养的过程，进而得到4种菌的发酵液。
[0037]步骤105:将哈茨木霉发酵液、枯草芽孢杆菌发酵液、酿酒酵母发酵液和绿僵菌发酵液混合，得到混合菌液；
[0038]在步骤105中，得到多种发酵液之后，需要将多种发酵液混合，得到混合菌液。
[0039]步骤106:将混合菌液与既定重量的草炭吸附混拌，得到含菌量为0.5亿个/克草炭的混合物；
[0040]步骤107:将混合物粉碎后制剂，得到秸杆腐熟剂。
[0041]步骤106和步骤107分别为将混合菌液与草炭混合得到混合物、将得到的混合物粉碎制剂的过程，优选的，在制剂的过程中，制成粉剂。
[0042]在本实施例中，步骤101-104均包含菌种活化-摇瓶培养-种子罐培养和发酵罐培养的操作，具体的，为了更好的实现扩大培养的效果，提高各菌的存活率，各步骤可以优选按照以下操作得以实现:
[0043]步骤101可以通过以下操作得以实现:
[0044]将哈茨木霉原菌接种至菌种活化培养基中，在28_30°C的温度下培养70-74小时，得到活化后哈茨木霉菌种；其中，按照重量计，菌种活化培养基包括土豆20%、葡萄糖2%和琼脂2%，且其pH值为7.0-7.5 ；
[0045]具体的，上述将哈茨木霉原菌活化的操作可以为用接种针在无菌条件下从原菌种斜面上挑取少许菌苔，在倒有菌种活化培养基的培养皿内进行划线，然后置28-30°C温箱内培养72h，肉眼观察，菌苔丰满，涂片、染色检查无杂菌，孢子整齐时，可得到活化后哈茨木霉菌种。
[0046]将活化后哈茨木霉菌种至第一液体培养基中，在温度为26_30°C，转速为110-130转/分钟的条件下培养12_16h，得到哈茨木霉一级种子液，其中，第一液体培养基含有重量份数为5%的麦麸；
[0047]在培养的过程中，优选将活化后的哈茨木霉菌种于28°C，转速120转/分钟的全温振荡培养箱中培养12-16小时，镜检观察哈茨木霉菌丝较多呈团簇状，即可得到哈茨木霉一级种子液。
[0048]将哈茨木霉一级种子液接种在装有第二液体培养基种子发酵罐中，在温度为26-30°C、转速为110-130转/分钟的条件下发酵培养16-20小时，得到哈茨木霉二级种子液；其中，按照重量计，第二液体培养基包括玉米粉5%、硫酸铵0.05%、泡敌0.02%、注射青霉素钾0.0005%、注射硫酸链霉素0.0003%,且其pH值为4.0-4.5 ；
[0049]其中，在上述种子发酵罐的操作中，优选将哈茨木霉一级种子液于温度为28°C、转速120转/分钟的条件下培养16-20小时，镜检观察菌丝较多呈团簇状，即可得到哈茨木霉二级种子液，以进行后续的发酵罐培养。
[0050]将哈茨木霉二级种子液接种至装有第二液体培养基的发酵罐中，在转速为150-170转/分钟、压力为0.04-0.06兆帕的条件下发酵培养84-90小时，得到哈茨木霉发酵液。
[0051]其中，在上述操作中，优选 的，搅拌速度(即转速)为160转/分钟，罐压为0.05兆帕；通气量:发酵前期1:0.5 (ν/ν.π?η)，后期逐渐调至1:1 (V/V.min)，检测含杂菌率(0.3%，含菌量> 5亿个孢子/ml，即可放罐，得到哈茨木霉发酵液。
[0052]具体的，在本实施例中，步骤102可以通过以下操作得以完成:
[0053]将枯草芽孢杆菌原菌接种至菌种活化培养基中，在28_30°C的温度下培养22-26小时，得到活化后枯草芽孢杆菌菌种；其中，按照重量计，菌种活化培养基包括牛肉膏0.3%、蛋白胨 0.5%、NaCl0.5%、琼脂 2%,且其 pH 值为 7.0-7.5 ；
[0054]具体的，上述操作可以为用接种针在无菌条件下从原菌种斜面上挑取少许菌苔，在倒有菌种活化培养基的培养皿内进行划线，然后置28-30°C温箱内培养24小时，肉眼观察，菌苔丰满，涂片、染色检查无杂菌，孢子整齐时，可得到活化后枯草芽孢杆菌菌种。
[0055]将活化后枯草芽孢杆菌菌种接种至第一液体培养基的摇瓶中，在温度为30_34°C、转速为170-190转/分钟的条件下培养8-10h，得到枯草芽孢杆菌一级种子液，其中，第一液体培养基包括牛肉膏0.3%、氯化钠0.5%、蛋白胨0.7%，且其pH值为7.0 ;优选的，具体的操作可以为:从活化后的枯草芽孢杆菌的平板上刮取少许菌苔放入摇瓶中，于32°C、转速为180转/分钟的全温振荡培养箱中培养8-10小时，镜检观察枯草芽孢杆菌生长状态达到对数期，得到枯草芽孢杆菌一级种子液，即可上种子罐进行培养。
[0056]将枯草芽孢杆菌一级种子液接种到装有第二液体培养基的种子发酵罐中，在温度为30-34°C、转速为210-230转/分钟的条件下发酵培养8_10小时，得到枯草芽孢杆菌二级种子液；其中，第二液体培养基包括:豆柏粉2%、鱼粉0.5%、玉米粉1.8%、淀粉0.4%、硫酸镁0.06%、磷酸氢二钾0.5%、泡敌0.025%,且其pH值为7.0-7.5 ;在培养的过程中，同样，需要进行检测，待枯草芽孢杆菌生长至对数期时，即可得到枯草芽孢杆菌二级种子液，并用于后续的发酵培养。[0057]将枯草芽孢杆菌二级种子液接种至含有第三液体培养基的发酵罐中，在转速为210-230转/分钟、压力为0.04-0.06兆帕的条件下发酵培养28-32小时，得到枯草芽孢杆菌发酵液。
[0058]优选的，将枯草芽孢杆菌发酵培养的操作可具体设置为以下参数:将枯草芽孢杆菌二级种子液在搅拌速度220转/分钟、罐压0.05兆帕；通气量:发酵前期1:0.5 (V/V.min)，后期逐渐调至1:1.5 (V/V - min),培养周期为28-32小时，在芽孢形成率达到90%以上，杂菌率< 0.3%，含菌量> 100亿个芽孢/ml，即可放罐，进而得到枯草芽孢杆菌发酵液。
[0059]具体的，在本实施例中，步骤103可以通过以下操作得以完成:
[0060]将酿酒酵母原菌接种至菌种活化培养基中，在28_30°C的温度下培养70-74小时，得到活化后酿酒酵母菌种；其中，按照重量计，菌种活化培养基包括酵母膏1%、蛋白胨2%、葡萄糖2%、琼脂2%，且其pH值为7.0-7.5 ；
[0061]具体的，上述将酿酒酵母活化的操作可以为用接种针在无菌条件下从原菌种斜面上挑取少许菌苔，在倒有菌种活化培养基的培养皿内进行划线，然后置28-30°C温箱内培养72小时，肉眼观察 ，菌苔丰满，涂片、染色检查无杂菌，孢子整齐时，可得到活化后酿酒酵母菌种。
[0062]将活化后酿酒酵母菌种接种至第一液体培养基中，在温度为26_30°C、转速为170-190转/分钟的条件下摇瓶培养8-10小时，得到酿酒酵母一级种子液，其中，按照重量计，第一液体培养基包括酵母膏1%、蛋白胨2%、葡萄糖2%，且其pH值7.0 ;优选的，可通过将活化后的酿酒酵母于28°C，转速180转/分钟的全温振荡培养箱中培养8-10小时，镜检观察酵母菌呈芽殖状态，即可得到一级种子液，可进行种子罐培养。
[0063]将酿酒酵母一级种子液接种在装有第二液体培养基种子发酵罐中，在温度为26-30°C、转速为210-230转/分钟的条件下发酵培养8_10小时，得到酿酒酵母二级种子液；其中，按照重量计，第二液体培养基包括:葡萄糖5%、蛋白胨0.5%、酵母膏0.5%、硫酸镁
0.1%、磷酸二氢钾0.1%、泡敌0.05% ;优选的，酿酒酵母一级种子液在温度为28°C、转速为220转/分钟的搅拌条件下，培养8-10小时，镜检观察酿酒酵母呈芽殖状态，即可得到酿酒酵母二级种子液，待转入发酵罐进行发酵培养。
[0064]将酿酒酵母二级种子液接种至装有第二液体培养基的发酵罐中，在转速为210-230转/分钟、压力为0.04-0.06兆帕的条件下发酵培养16-20小时，得到酿酒酵母发酵液。
[0065]优选的，在得到酿酒酵母发酵液的操作过程中的具体工艺参数为:搅拌速度220转/分钟、罐压0.05兆帕；通气量:1:0.5(ν/ν.π?η)。发酵培养周期为16-20小时，在90%菌体不再芽殖，杂菌率< 0.3%，含菌量> 10亿个菌体/ml即可放罐，得到酿酒酵母发酵液。
[0066]具体的，在本实施例中，步骤104可以通过以下操作得以完成:
[0067]将绿僵菌原菌种接种至菌种活化培养基中，在28_30°C的温度下培养70-74小时，得到活化后绿僵菌菌种；其中，按照重量计，菌种活化培养基包括土豆20%、葡萄糖2%、琼脂2%，且其 pH 值为 7.0-7.5 ；
[0068]具体的，上述将绿僵菌原菌种活化的操作可以为:用接种针在无菌条件下从原菌种斜面上挑取少许菌苔，在倒有菌种活化培养基的培养皿内进行划线，然后置28-30°C温箱内培养72h，肉眼观察，菌苔丰满，涂片、染色检查无杂菌，孢子整齐时，可得到活化后绿僵菌菌种。
[0069]将活化后绿僵菌菌种接种至第一液体培养基中，在温度为26_30°C、转速为110-130转/分钟的条件下摇瓶培养12-16小时，得到绿僵菌一级种子液，其中，按照重量计，第一液体培养基包括细麦麸5% ；
[0070]在培养的过程中，优选将活化后的绿僵菌菌种于28°C、转速120转/分钟的全温振荡培养箱中培养12_16h，镜检观察绿僵菌较多的菌丝呈团簇状，即可得到绿僵菌一级种子液。
[0071]将绿僵菌一级种子液接种在装有第二液体培养基种子发酵罐中，在温度为26-30°C、转速为110-130转/分钟的条件下发酵培养16-20小时，得到绿僵菌二级种子液；其中，按照重量计，第二液体培养基包括玉米粉5%、硫酸铵0.05%、泡敌0.02%、注射青霉素钾0.0005%、注射硫酸链霉素0.0003%,且其pH值为4.0-4.5 ；
[0072]其中，在上述将绿僵菌进行种子罐发酵培养的操作中，优选将绿僵菌一级种子液于温度为28°C、转速120转/分钟的条件下培养16-20h，镜检观察菌丝较多呈团簇状，即可得到绿僵菌二级种子液，以进行后续的发酵罐培养。
[0073]将绿僵菌二级种子液接种至装有第二液体培养基的发酵罐中，在转速为150-170转/分钟、压力为0.04-0.06兆帕的条件下发酵培养84-90小时，得到绿僵菌发酵液；
[0074]其中，在得到绿僵菌发酵液操作中，优选的，搅拌速度(即转速)为160转/分钟、罐压为0.05兆帕；通气量:发酵前期1:0.5 (ν/ν.π?η)，后期逐渐调至1:1 (V/V*min)，检测含杂菌率< 0.3%，含量> 5亿个孢子/ml，即`可放罐，得到绿僵菌发酵液。
[0075]此外，在上述所有的操作中，所使用的培养基以及培养液(液体培养基)均优选在
0.1lMPa压力下灭菌30分钟，以防止杂菌生长。而且，种子发酵罐以及发酵罐在使用之前也需要灭菌。
[0076]在得到混合菌液之后，再将混合菌液和草炭混合的过程中，优选的，机械搅拌3-6分钟，使芽孢、孢子或者营养体全部被吸附，混合均匀之后，得到混合物。
[0077]在直接的过程中，优选的，将得到的混合物优选利用皮带机传送到链条粉碎机粉碎，使其几乎达到100%能够通过0.09毫米的孔径筛，即可得到粉剂成品。
[0078]另外，本实施例的这种秸杆腐熟剂可以包括:枯草芽孢杆菌0.3亿个芽孢/克、哈茨木霉0.07亿个孢子/克、绿僵菌0.08亿个孢子/克和酿酒酵母菌0.05亿个菌体/克混合制备含菌量为0.5亿/克的具有腐熟稻杆以及防治病虫害的防病虫稻杆腐熟剂。
[0079]通过实验证明，收割后将作物秸杆均匀平铺在田面上，秸杆粉碎后还田效果更好。每亩地均匀撒施按照上述比例制成的腐熟剂2公斤，并根据当地施肥习惯补施适量N、P、K。采用机械或人工拍打压杆，使秸杆沉降到地表，与泥土相粘，防止秸杆泡水后浮起。保持土壤含水量50%_60%，堆腐大约15天，秸杆即可腐解。
[0080]该秸杆腐熟菌剂在田间的应用试验研究表明，秸杆还田加施防病虫秸杆腐熟剂，能加快多种作物秸杆的腐熟分解，秸杆可提早5-10天腐熟。秸杆腐解后提高了土壤的基本肥力，改善了土壤的理化性质，进而有效的促进作物生长、增加作物产量、改善作物品质、提高作物抗逆性等。它具有广泛的适应性，在多种作物秸杆上均表现较为稳定的效果。
[0081 ] 防病虫秸杆腐熟剂应用于玉米秸杆还田种植小麦、水稻秸杆还田种植水稻、玉米秸杆还田种植玉米等田间试验，作用效果显著可以有效控制秸杆还田后引发的病虫害。对作物纹枯病防治效果达到42.3%-53.9%，对地下害虫的防治效果达到39.4%-40.7% ;同时，具有促长增产的效果，可使作物亩增产5%-10%，作物品质明显得到改善，作物的抗倒伏、抗旱性、抗寒性都明显提高；此外，该秸杆腐熟剂与其它农业措施兼容性好，可与杀虫剂、除草剂、化肥、微量元素、生长调节类物质等混合使用；不受环境因子影响，适应性广，在各地作物秸杆上均可推广使用。
[0082] 以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种秸杆腐熟剂，其特征在于，包括草炭和含有菌体活性成分的微生物菌群，所述菌体活性成分为芽孢、营养体或孢子； 其中，所述微生物菌群包括哈茨木霉、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和绿僵菌；且所述微生物菌群的含量为:0.5-5亿个/克草炭。
2.根据权利要求1所述的秸杆腐熟剂，其特征在于，所述哈茨木霉、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和绿僵菌的个数比为7:30:5:8。
3.根据权利要求1所述的秸杆腐熟剂，其特征在于，所述草炭的粒度为:0.08-0.1毫米。
4.根据权利要求1-3任一项所述的秸杆腐熟剂，其特征在于，所述哈茨木霉、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和绿僵菌均保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号依次为 CGMCC N0.7861、CGMCC N0.7850、CGMCC N0.7849 和 CGMCCN0.7848 ;其保藏命名依次为:哈茨木霉、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和绿僵菌。
5.一种根据权利要 求1所述的秸杆腐熟剂的制作方法，其特征在于，包括以下步骤: 将哈茨木霉原菌进行菌种活化、摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐培养，得到哈茨木霉发酵液； 将枯草芽孢杆菌原菌进行菌种活化、摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐培养，得到枯草芽孢杆菌发酵液； 将酿酒酵母原菌进行菌种活化、摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐培养，得到酿酒酵母发酵液； 将绿僵菌原菌种进行菌种活化、摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐培养，得到绿僵菌发酵液； 将所述哈茨木霉发酵液、所述枯草芽孢杆菌发酵液、所述酿酒酵母发酵液和所述绿僵菌发酵液混合，得到混合菌液； 将所述混合菌液与既定重量的草炭吸附混拌，得到含菌量为0.5-5亿个/克草炭的混合物； 将所述混合物粉碎后制剂，得到秸杆腐熟剂。
6.根据权利要求5所述的秸杆腐熟剂的制作方法，其特征在于，在所述将哈茨木霉原菌进行菌种活化、摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐培养，得到哈茨木霉发酵液的步骤中，具体包括: 将哈茨木霉原菌接种至菌种活化培养基中，在28-30°C的温度下培养70-74小时，得到活化后哈茨木霉菌种；其中，按照重量计，所述菌种活化培养基包括土豆20%、葡萄糖2%和琼脂2%，且其pH值为7.0-7.5 ； 将所述活化后哈茨木霉菌种接种至第一液体培养基中，在温度为26-30°C，转速为110-130转/分钟的条件下摇瓶培养12-16h，得到哈茨木霉一级种子液，其中，所述第一液体培养基含有重量份数为5%的麦麸； 将所述哈茨木霉一级种子液接种在装有第二液体培养基种子发酵罐中，在温度为26-30°C、转速为110-130转/分钟的条件下发酵培养16-20小时，得到哈茨木霉二级种子液；其中，按照重量计，所述第二液体培养基包括玉米粉5%、硫酸铵0.05%、泡敌0.02%、注射青霉素钾0.0005%、注射硫酸链霉素0.0003%,且其pH值为4.0-4.5 ；将所述哈茨木霉二级种子液接种至装有所述第二液体培养基的发酵罐中，在转速为150-170转/分钟、压力为0.04-0.06兆帕的条件下发酵培养84-90小时，得到所述哈茨木霉发酵液。
7.根据权利要求5所述的秸杆腐熟剂的制作方法，其特征在于，在所述将枯草芽孢杆菌原菌进行菌种活化、摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐培养，得到枯草芽孢杆菌发酵液的步骤中，具体包括: 将枯草芽孢杆菌原菌接种至菌种活化培养基中，在28-30°C的温度下培养22-26小时，得到活化后枯草芽孢杆菌菌种；其中，按照重量计，所述菌种活化培养基包括牛肉膏0.3%、蛋白胨0.5%、NaCl0.5%、琼脂2%，且其pH值为7.0-7.5 ； 将所述活化后枯草芽孢杆菌菌种接种至第一液体培养基中，在温度为30-34°C、转速为170-190转/分钟的条件下摇瓶培养8-10h，得到枯草芽孢杆菌一级种子液，其中，所述第一液体培养基包括牛肉膏0.3%、氯化钠0.5%、蛋白胨0.7%，且其pH值为7.0 ; 将所述枯草芽孢杆菌一级种子液接种在装有第二液体培养基的种子发酵罐中，在温度为30-34°C、转速为210-230转/分钟的条件下发酵培养8_10小时，得到枯草芽孢杆菌二级种子液；其中，所述第二液体培养基包括:豆柏粉2%、鱼粉0.5%、玉米粉1.8%、淀粉0.4%、硫酸镁0.06%、磷酸氢二钾0.5%、泡敌0.025%,且其pH值为7.0-7.5 ； 将所述枯草芽孢杆菌二级种子液接种至含有第三液体培养基的发酵罐中，在转速为210-230转/分钟、压力为0.04-0.06兆帕的条件下发酵培养28-32小时，得到所述枯草芽孢杆菌发酵液。
8.根据权利要求5所述的秸杆腐熟剂的制作方法，其特征在于，在所述将酿酒酵母原菌进行菌种活化、摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐培养，得到酿酒酵母发酵液的步骤中，具体包括: 将酿酒酵母原菌接种至菌种活化培养基中，在28-30°C的温度下培养70-74小时，得到活化后酿酒酵母菌种；其中，按照重量计，所述菌种活化培养基包括酵母膏1%、蛋白胨2%、葡萄糖2%、琼脂2%，且其pH值为7.0-7.5 ； 将所述活化后酿酒酵母菌种接种至第一液体培养基中，在温度为26-30°C、转速为170-190转/分钟的条件下摇瓶培养8-10h，得到酿酒酵母一级种子液；其中，按照重量计，所述第一液体培养基包括酵母膏1%、蛋白胨2%、葡萄糖2%，且其pH值7.0 ; 将所述酿酒酵母一级种子液接种在装有第二液体培养基的种子发酵罐中，在温度为26-30°C、转速为210-230转/分钟的条件下发酵培养8-10小时，得到酿酒酵母二级种子液；其中，按照重量计，所述第二液体培养基包括:葡萄糖5%、蛋白胨0.5%、酵母膏0.5%、硫酸镁0.1%、磷酸二氢钾0.1%、泡敌0.05% ； 将所述酿酒酵母二级种子液接种至装有所述第二液体培养基的发酵罐中，在转速为210-230转/分钟、压力为0.04-0.06兆帕的条件下发酵培养16-20小时，得到所述酿酒酵母发酵液。
9.根据权利要求5所述的秸杆腐熟剂的制作方法，其特征在于，在所述将绿僵菌原菌种进行菌种活化、摇瓶培养、种子罐培养和发酵罐培养，得到绿僵菌发酵液的步骤中，具体包括: 将绿僵菌原菌种接种至菌种活化培养基中，在28-30°C的温度下培养70-74小时，得到活化后绿僵菌菌种；其中，按照重量计，所述菌种活化培养基包括土豆20%、葡萄糖2%、琼脂2%，且其 pH 值为 7.0-7.5 ； 将所述活化后绿僵菌菌种接种至第一液体培养基中，在温度为26-30°C、转速为110-130转/分钟的条件下摇瓶培养12-16小时，得到绿僵菌一级种子液，其中，按照重量计，所述第一液体培养基包括细麦麸5% ； 将所述绿僵菌一级种子液接种在装有第二液体培养基的种子发酵罐中，在温度为26-30°C、转速为110-130转/分钟的条件下发酵培养16-20小时，得到绿僵菌二级种子液；其中，按照重量计，所述第二液体培养基包括玉米粉5%、硫酸铵0.05%、泡敌0.02%、注射青霉素钾0.0005%、注射硫酸链霉素0.0003%,且其pH值为4.0-4.5 ； 将所述绿僵菌二级种子液接种至装有所述第二液体培养基的发酵罐中，在转速为150-170转/分钟、压力为0.04-0.06兆帕的条件下发酵培养84-90小时，得到所述绿僵菌发酵液。
10.根据权利要求5所述的秸杆腐熟剂的制作方法，其特征在于，在所述将所述混合物粉碎后制剂，得到秸杆腐熟剂的步骤中， 所述制剂包括制成粉剂。
【文档编号】C12R1/885GK103740693SQ201310642456
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2013年12月3日 优先权日:2013年12月3日
【发明者】张丽霞, 王树雪, 李芳
申请人:中农绿康（北京）生物技术有限公司