发酵合成谷胱甘肽的方法
【专利摘要】本发明提供一种发酵合成谷胱甘肽的方法，属于谷胱甘肽的生产领域。本发明提供的发酵合成谷胱甘肽的方法中，对菌种种子液浓度、接种量、发酵培养基pH等参数进行优化，维持酵母的生长活性和发酵活性，提高谷胱甘肽的生产量；在发酵过程中，向发酵培养基中添加半胱氨酸，并对其添加时间和添加量进行优化，可以提高谷胱甘肽的抑制浓度，进一步提高谷胱甘肽的合成产量。
【专利说明】发酵合成谷胱甘肽的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于谷胱甘肽的生产领域，具体涉及一种发酵合成谷胱甘肽的方法。
【背景技术】
[0002]谷胱甘肽(Glutathione, GSH)是由谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸缩合而成的一种含Y -谷氨酰基和巯基的生物活性三肽类化合物，在蛋白质和DNA的合成、氨基酸的转运、细胞的保护等重要的生物学现象中起着直接或间接作用。它主要分布于动物、植物、微生物细胞中，被广泛应用于临床医学、运动保健、食品加工等很多领域。因此，GSH已成为各国科学家研究和探索的热点。
[0003]目前国内外生产谷胱甘肽的方法主要有萃取法、化学合成法、发酵法、酶法。由于发酵法生产GSH具有菌种易于培养、原料来源方便廉价、反应步骤简单、成本低、转化效率高、生产速率快等优点，已成为当前生产谷胱甘肽的主要方法。
[0004]发酵法合成谷胱甘肽时，由于微生物代谢过程中的反馈抑制作用，当发酵产生的谷胱甘肽达到一定浓度时，就会抑制谷胱甘肽的进一步合成，使得发酵法生产的谷胱甘肽的浓度不高。
【发明内容】
[0005]为解决上述问题，本发明提供一种发酵合成谷胱甘肽的方法，可以在达到谷胱甘肽抑制浓度时，进一步提高谷胱甘肽的合成产量。本发明采用如下技术方案:
一种发酵合成谷胱甘肽的方法，其特征在于包括以下内容:
a.培养酵母种子液；
b.接种:将步骤a中得到的种子液接种到富含硫酸盐的发酵培养基中，接种量为10%;
c.发酵培养:将步骤b中得到的接种后的培养基进行培养和发酵，发酵培养温度为25 ~30? ；
d.补加半胱氨酸:当发酵培养20h以后，向发酵液中流加半胱氨酸，保持发酵液中半胱氨酸的浓度为0.1~2mmol/L ；
e.发酵结束并分离:当发酵培养48~120h以后，结束发酵，将得到的发酵液进行提取分离，即得所述的谷胱甘肽。
[0006]优选地，步骤a中所述的酵母为酿酒酵母、面包酵母、假丝酵母和毕赤酵母中的一种。 [0007]优选地，步骤a中所述的酵母种子液的浓度为在波长为600nm的紫外光测得的OD值为 1.(Tl.5。
[0008]优选地，步骤b中所述的发酵培养基的pH=5.9~6.0。
[0009]本发明具有如下有益效果:
本发明提供的发酵合成谷胱甘肽的方法中，对菌种种子液浓度、接种量、发酵培养基PH等参数进行优化，维持酵母的生长活性和发酵活性，提高谷胱甘肽的生产量；在发酵过程中，向发酵培养基中添加半胱氨酸，并对其添加时间和添加量进行优化，可以提高谷胱甘肽的抑制浓度，进一步提高谷胱甘肽的合成产量。
【具体实施方式】
[0010]下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
[0011]实施例1
一种发酵合成谷胱甘肽的方法，包括以下内容:
a.培养酵母种子液；所述的酵母为酿酒酵母、面包酵母、假丝酵母和毕赤酵母中的一
种；
b.接种:将步骤a中得到的种子液接种到富含硫酸盐的发酵培养基中，接种量为10%;
c.发酵培养:将步骤b中得到的接种后的培养基进行培养和发酵，发酵培养温度为25 ~30? ；
d.补加半胱氨酸:当发酵培养20h以后，向发酵液中流加半胱氨酸，保持发酵液中半胱氨酸的浓度为0.1~2mmol/L ；
e.发酵结束并分离:当发 酵培养48~120h以后，结束发酵，将得到的发酵液进行提取分离，即得所述的谷胱甘肽。
[0012]实施例2
一种发酵合成谷胱甘肽的方法，包括以下内容:
a.培养酵母种子液；所述的酵母为酿酒酵母、面包酵母、假丝酵母和毕赤酵母中的一种；所述的酵母种子液的浓度为在波长为600nm的紫外光测得的OD值为1.(Tl.5 ；
b.接种:将步骤a中得到的种子液接种到富含硫酸盐的发酵培养基中(发酵培养基的pH=5.9~6.0)，接种量为10% ；
c.发酵培养:将步骤b中得到的接种后的培养基进行培养和发酵，发酵培养温度为25 ~30? ；
d.补加半胱氨酸:当发酵培养20h以后，向发酵液中流加半胱氨酸，保持发酵液中半胱氨酸的浓度为0.1~2mmol/L ；
e.发酵结束并分离:当发酵培养48~120h以后，结束发酵，将得到的发酵液进行提取分离，即得所述的谷胱甘肽。
[0013]实施例3
一种发酵合成谷胱甘肽的方法，包括以下内容:
a.培养酵母种子液:先将酵母菌种在固体培养基中复苏，挑取单菌落，加入培养基中进行培养，直到其浓度为在波长为600nm的紫外光测得的OD值为1.(Tl.5时，即得所述的酵母种子液；所述的酵母为酿酒酵母、面包酵母、假丝酵母和毕赤酵母中的一种；
b.接种:将步骤a中得到的种 子液接种到富含硫酸盐的发酵培养基中(发酵培养基的pH=5.9~6.0)，接种量为10% ；
c.发酵培养:将步骤b中得到的接种后的培养基进行培养和发酵，发酵培养温度为25 ~30? ；
d.补加半胱氨酸:当发酵培养20h以后，向发酵液中流加半胱氨酸，保持发酵液中半胱氨酸的浓度为0.1~2mmol/L ；
e.发酵结束并分离:当发酵培养48~120h以后，结束发酵，将得到的发酵液进行提取分离，即得所述的谷胱 甘肽。
【权利要求】
1.一种发酵合成谷胱甘肽的方法，其特征在于包括以下内容: 培养酵母种子液； 接种:将步骤a中得到的种子液接种到富含硫酸盐的发酵培养基中，接种量为10% ； 发酵培养:将步骤b中得到的接种后的培养基进行培养和发酵，发酵培养温度为25~30 0C ； 补加半胱氨酸:当发酵培养20h以后，向发酵液中流加半胱氨酸，保持发酵液中半胱氨酸的浓度为0.1~2mmol/L ； e.发酵结束并分离:当发酵培养48~120h以后，结束发酵，将得到的发酵液进行提取分离，即得所述的谷胱甘肽。
2.根据权利要求1所述的发酵合成谷胱甘肽的方法，其特征在于步骤a中所述的酵母为酿酒酵母、面包酵母、假丝酵母和毕赤酵母中的一种。
3.根据权利要求1所述的发酵合成谷胱甘肽的方法，其特征在于步骤a中所述的酵母种子液的浓度为在波长为600nm的紫外光测得的OD值为1.0-l.5。
4.根据权利要求1所述的发酵合成谷胱甘肽的方法，其特征在于步骤b中所述的发酵培养基的pH=5.9~6.0。
【文档编号】C12R1/72GK103695506SQ201310644859
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月5日 优先权日:2013年12月5日
【发明者】朱辉, 黄运昌 申请人:成都雅途生物技术有限公司