一种利用尿素厂废水培养莱茵衣藻的培养基及培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种利用尿素厂废水培养莱茵衣藻方法，既能低成本处理尿素厂废水，又能获得有重要经济价值的莱茵衣藻，变废为宝，化害为利，一举多得。莱茵衣藻传统培养方法是采用TAP培养基并使用开放水泥跑道池培养，生长慢、产量低、投资大、易污染、效益低，现在我采用家庭用的矿泉水桶培养，成本低，不易污染，洗刷方便，可重复利用，易于操作，而且我在培养基中增加了尿素厂废水、酵母浸粉、脱氧胆酸钠、山梨醇、甘露醇、硫代乙醇酸钠、土壤抽出液、羊粪浸出液、鸡粪浸出液、L-精氨酸、磷酸二氢钾、酵母膏、硅藻土粉等营养成分，有机肥和无机肥混合使用，营养更全面、均衡，莱茵衣藻生长速度和产量大幅提高，产量提高280％。
【专利说明】一种利用尿素厂废水培养莱茵衣藻的培养基及培养方法
【技术领域】
[0001]本发明属于水产养殖领域，尤其涉及一种利用尿素厂废水培养莱茵衣藻方法。
【背景技术】
[0002]目前，水污染和水资源短缺问题日益严重，成为制约经济和社会发展的重要因素，由氮、磷污染引起的水体富营养化更给水环境带来了严重威胁，对含氮废水的治理引起人们极大关注。化肥废水是氨氮污染主要来源，其中尿素生产过程中产生的含尿素高氨废水尚无成熟治理技术。从20世纪50年代始，我国陆续建设了近200套尿素生产装置，其中90%的装置对尿素废水采取的是直接排放，其中40%的装置排放废水达不到国家环保标准，仅10%装置能够做到回收利用。2013年我国生产尿素约6000万t，废水排放量约4000万m3。大量废水直接排放污染了环境，浪费了资源。
[0003]尿素工艺废液主要是指在尿素装置的蒸发工段产生的工艺冷凝液和开停车检修设备时的清洗排放液。工艺冷凝液含水、氨、二氧化碳、尿素和缩二脲。水的来源主要是液氨和二氧化碳合成尿素反应生成水、蒸汽喷射器的驱动蒸汽进入蒸发冷凝系统产生的水以及原料液氨和二氧化碳气带入系统的水。一般每生产I吨尿素就会产生380-530kg工艺冷凝液，其组成大致为:尿素0.4-2%，氨3.5-5.5%，二氧化碳2-3%，其余是水。停车检修设备时产生的少量清洗排放液中含氨、二氧化碳、尿素和缩二脲等，这部分废液中各组分含量及排放量因生产情况而不同。目前，在我国应用的尿素工艺技术有:荷兰Stamicarbon公司二氧化碳气提技术、意大利Snamprogetti公司氨气提技术、日本东洋工程公司ACES技术和我国开发的水溶液全循环法尿素技术。这些技术对尿素工艺废液的处理效果有较大差异。二氧化碳气提技术、氨气提技术和ACES技术配有解吸塔和水解塔，处理效果较好。水溶液全循环法技术只设计了解吸系统而没考虑尿素水解系统，处理效果较差。我国尿素工业经过几十年的发展，目前已形成大、中、小型尿素装置并存的格局。在27套大型尿素装置中，采用CO2气提法技术的有15套，氨气提技术的10套，ACES技术的2套。大型尿素装置基本上都配套了解吸和水解系统，，以处理自身产生的工艺废液。在20世纪60-80年代建成投产的52家中型氮肥企业中，有44套尿素装置全部采用水溶液全循环法尿素工艺。80年代以后国内新上的十几套中型尿素装置，基本上都采用CO2气提法和NH3气提法尿素工艺。
[0004]从技术上讲，尿素工艺废液经过深度处理后是能够做到回收利用的。废液中的尿素、NH3和CO2在解吸和水解系统被精懼浓缩后重新返回尿素合成系统作为原料,剩余的废水中尿素和氨含量约为0.5-0.6%,可作为工业用水,甚至可作为锅炉给水。目前国内尿素废液处理情况很不平衡，大型企业处理水平较高，中小型企业较低，深度处理后回收利用的企业少，仅满足达标排放的企业多，还有100多套中小型尿素装置没有配套建设水解系统，无法达到对尿素废水的深度处理要求，甚至一排了之。 [0005]从技术上看，无论是国外的专利技术还是国内自主开发的解吸和水解技术，都能使尿素废水经过深度处理后达到国家排放标准。但是，目前我国尿素生产企业对尿素废水的回收利用比例极低，甚至连达标排放都难以做到，其问题和原因如下:[0006]1、企业不按照设计要求进行操作和管理。尿素工艺废液处理效果的好坏与废液在水解塔内的停留时间和加热所用蒸汽的压力等级密切相关。我国现有的尿素装置在进行解吸和水解系统设计时通常选用3.9MPa或2.5MPa的蒸汽作热源,处理后的尿素废水中氨和尿素含量的指标控制在0.5-0.6%。而在实际运行过程中，控制指标往往没有达到。究其原因，一些企业蒸汽的输送距离比较长，管道保温效果差，进入水解系统的蒸汽压力和温度已逐渐降低，达不到设计要求，有些企业自行降低蒸汽等级标准。由于企业没有按照设计要求进行操作和管理，导致尿素工艺废液的处理效果明显下降，处理后的尿素废水中氨和尿素含量往往高于设计控制指标0.5-0.6%，通常在0.6-1.0%。这样的废水如果作为工业水回收利用还须作进一步处理，而企业不愿意增加处理费用，只有一排了之，这是导致水体富营养化的根本原因之一。
[0007]2、尿素装置设计上存在缺陷。采用水溶液全循环法尿素工艺建设的中小型尿素装置，在设计时只有解吸系统而没有配套水解系统，这样的装置即使在生产过程中达到了很高的操作管理水平，受解吸系统技术水平的限制，处理后的尿素废水也无法达到回用的要求，只能作为废水排放，对环境造成较大污染。
[0008]3、尿素装置增产改造与解吸水解系统的改造不配套。对于设计时已设置有解吸和水解系统或后来新增加水解系统的尿素装置，企业在每次进行增产改造时，往往没有对解吸和水解系统进行同步改造，使原来的解吸和水解系统不能适应尿素装置增产后工艺废液处理量也随之增加的需求，造成解吸和水解深度不够，处理后的尿素废水中氨和尿素含量增加，无法回收利用。这种现象在各尿素生产厂家普遍存在。
[0009]为了解决目前技术的不足，我发明了一种利用尿素厂废水培养莱茵衣藻方法，既能低成本处理尿素厂废水，又能获得有重要经济价值的生物产品-莱茵衣藻，变废为宝，化害为利，综合利用效益好，可大幅度减少废水处理设备投资及运转费用，一举多得，是尿素厂废水处理的最佳选择。
[0010]世界范围内的石油、天然气、煤炭等不可再生资源的迅速减少，迫使人类不得不寻找可再生清洁能源。莱茵衣藻(Chamydomonas reinhardtii)因可以将太阳能直接转化为氢能而成为生物制氢研究的模式物种。莱茵衣藻属绿藻门、团藻目、衣藻科，是一种单细胞真核鞭毛藻类，是研究多种生命活动(如光合作用、鞭毛组装、趋光性和生理节律等)的模式生物，与酵母细胞有许多共同的特征，素有“光合酵母”之称。莱茵衣藻结构简单，原生质膜紧贴着细胞壁，顶端长有2根鞭毛，侧面具有I个眼点，多数细胞还有I或多个液泡，I个占细胞总体积近40%的大型杯状叶绿体。其遗传背景清楚，基因组学研究已近完成，是目前唯一建立细胞核、叶绿体和线粒体三套遗传转化系统的生物材料。单细胞个体，细胞呈球形、近球形、椭圆形或长圆形，具I层较薄的由纤维素和糖蛋白构成的细胞壁。有I对顶生、等长、能动的茸鞭型鞭毛，鞭毛的运动有赖于基体的发动，使细胞得以向前或向后运动。细胞内充满细胞质，有I个细胞核；1个色素体，侧位，较大，常占细胞很大部分，杯状或瓶状；叶绿体内，埋藏有I个至数个外有淀粉鞘、内为蛋白质的蛋白核和I个眼点；眼点因有类胡萝卜素而呈红色，有感光能力、使衣藻具正趋光性；还有I到几个伸缩泡来排泄胞内废物。分
布世界各地，极地也有，是常见藻类。大多生活于各类淡水水体，包括某些被污染水体；少数生活于盐水和海水，还有一些生于潮湿土壤、水池或井口壁上。无性生殖为细胞纵裂，形成
2、4或8团各具I核的原生质后从母细胞内逸出，产生新壁，长成新个体。特殊条件下，这些细胞包被在I共同胶被内，呈胶体群，待环境转变，再长出鞭毛，自母细胞逸出成为新个体。子细胞在环境不利时形成厚壁孢子。有性生殖有同配、异配和卵配之分。环境适合时，每个细胞都可成为同形配子，进行交配。合子均经过休眠，萌发时经过减数分裂，产生4-8个游泳细胞，每个细胞可发育成为新个体。衣藻只有合子是二倍体，配子不经受精，也可进行单性生殖。最适温度17-28°C，最适光照强度1800-7000Lux，最适pH值7-8.5。
[0011]莱茵衣藻传统培养方法是采用Tris-Acetate-Phosphate (TAP)培养基并使用开放水泥跑道池培养，生长慢、产量低、投资大、易污染、效益低，现在我采用家庭用的矿泉水桶培养，成本低，不易污染，洗刷方便，可重复利用，易于操作，而且我在培养基中增加了尿素厂废水、酵母浸粉、脱氧胆酸钠、山梨醇、甘露醇、硫代乙醇酸钠、土壤抽出液、羊粪浸出液、鸡粪浸出液、L-精氨酸、磷酸二氢钾、麦饭石粉、柠檬酸铁、S3维生素溶液、酪蛋白胨、甘油、麦芽糖、乳糖、可溶性淀粉、酵母膏、硅藻土粉等营养成分，有机肥和无机肥混合使用，营养更加全面、均衡，莱茵衣藻生长速度和产量大幅提高，培养周期缩短，产量提高280%。
【发明内容】
[0012]为了克服目前技术的不足，本发明提供了一种利用尿素厂废水培养莱茵衣藻的培养基，配方如下:
[0013]尿素厂废水85毫升，酵母浸粉10毫克，脱氧胆酸钠5毫克，山梨醇12毫克，甘露醇8毫克，硫代乙醇酸钠4毫克，土壤抽出液1.8毫升，羊粪浸出液2.5毫升，鸡粪浸出液1.2毫升，L-精氨酸3毫克，磷酸二氢钾6毫克，麦饭石粉10毫克，柠檬酸铁7毫克，S3维生素溶液1.5毫升，酪蛋白胨8毫克，甘油15毫克，麦芽糖20毫克，乳糖16毫克，可溶性淀粉25毫克，酵母膏15毫克，硅藻土粉12毫克，次氯酸钠消毒后的纯净淡水1000毫升； [0014]其中S3维生素溶液配方:硫胺素盐酸盐50毫克，尼古丁酸10毫克，泛酸钙10毫克，对氨安息香酸1.0克，维生素H0.1克，肌醇0.5克，叶酸0.2微克，胸间氮苯0.3克，蒸馏水1000毫升；
[0015]其中S3维生素溶液配方还可以是:硫胺素盐酸盐50毫克，钙镁磷肥20毫克，过磷酸钙10毫克，尼古丁酸10毫克，泛酸钙10毫克，对氨安息香酸1.0克，维生素H0.1克，肌醇0.5克，叶酸0.2微克，胸间氮苯0.3克，蒸馏水1000毫升；
[0016]一种利用尿素厂废水培养莱茵衣藻方法，具体步骤如下:
[0017]培养容器为家庭用的矿泉水桶，容积20升，靠近底部有一水龙头，无色透明或带浅天蓝色(市场有售)，洗刷干净，后用蒸馏水润洗3遍，用漏斗装入所述的培养基12升，充分摇匀5分钟，选择生命力旺盛、无污染的莱茵衣藻进行接种，接种密度4X IO4Cell/mL，接种后轻轻摇动矿泉水桶5分钟，使藻细胞均匀分布；瓶口插入两根干净玻璃管，一根较长，顶端露出瓶口 10厘米，下端插入较深，离瓶底5厘米，用以充气；另一根较短，16厘米，两端露出瓶口即可，用以排气；两根玻璃管同样粗细，直径6毫米；最后用酒精棉球擦拭瓶口，用干净的透明胶带封口并将两根玻璃管固定；长的玻璃管上端用料管与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气:氨气:臭氧:一氧化氮=97%: 1%: 1%: I充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可；室内培养，空调控温，最佳温度25±2°C，日光灯照射，光照强度4000-100001UX，光/暗周期为16L/8D，即光照16小时，黑暗8小时；培养至第6天，停止充气，揭开透明胶带，用漏斗从瓶口加入3升新鲜培养基，胶带重新封口，充气，继续培养，至第9天，莱茵衣藻密度增加至600X 104cell/mL,停止培养，从底部的水龙头放出藻液，将培养容器洗刷干净后，加入0.2%过氧乙酸消毒溶液浸泡消毒2小时，再用蒸馏水润洗2遍，后进入下一轮培养。
[0018]优选的，将培养容器洗刷干净后，不采用“加入0.2%过氧乙酸消毒溶液浸泡消毒2小时，再用蒸馏水润洗2遍，后进入下一轮培养；”的消毒方式，而采用“，加入中药消毒液消毒30分钟，后进入下一轮培养；所述中药消毒液由以下重量比的物质组成:每100份85%乙醇中加入以下重量份的中药材:板蓝根30~50份、柴胡15~25份、薄荷15~25份、桅子5~15份、艾叶5~15份，中药消毒液制作方法:将新鲜板蓝根、柴胡、薄荷叶、艾叶、山桅果切碎，于60-70°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用，用托盘天平分别称取烘干并粉碎的板蓝根120克，柴胡60克，薄荷叶60克，艾叶30克，山桅果30克，置于三角烧瓶中充分混合后，加入1000毫升85%乙醇，浸泡48小时，200筛絹过滤，将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液，即为复方中药消毒液，密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。”。
[0019]优选地，对选用的所述的反应器，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒10-20分钟。
[0020]优选地，对选用的所述的反应器，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒5-10分钟；
[0021]优选地，对选用的所述的反应器，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒5-6分钟；
[0022]优选地，对选用的所述的反应器，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消毒，消毒2-3分钟；使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2-3分钟；消毒完毕后再进行藻类培养。
[0023]有益结果:
[0024]为了解决目前技术的不足，发明了一种利用尿素厂废水培养莱茵衣藻方法，既能低成本处理尿素厂废水，又能获得有重要经济价值的生物产品-莱茵衣藻，变废为宝，化害为利，综合利用效益好，可大幅度减少废水处理设备投资及运转费用，一举多得，是尿素厂废水废水处理的最佳选择。莱茵衣藻传统培养方法是采用Tris-Acetate-Phosphate (TAP)培养基并使用开放水泥跑道池培养，生长慢、产量低、投资大、易污染、效益低，现在我采用家庭用的矿泉水桶培养，成本低，不易污染，洗刷方便，可重复利用，易于操作，而且我在培养基中增加了尿素厂废水、酵母浸粉、脱氧胆酸钠、山梨醇、甘露醇、硫代乙醇酸钠、土壤抽出液、羊粪浸出液、鸡粪浸出液、L-精氨酸、磷酸二氢钾、麦饭石粉、柠檬酸铁、S3维生素溶液、酪蛋白胨、甘油、麦芽糖、乳糖、可溶性淀粉、酵母膏、硅藻土粉等营养成分，有机肥和无机肥混合使用，营养更加全面、均衡，莱茵衣藻生长速度和产量大幅提高，培养周期缩短，产量提闻280%。
【专利附图】
【附图说明】 [0025]图1为莱茵衣藻形态结构图；
[0026]其中附图标记为:1伸缩泡2红色眼点3色素体4蛋白核5细胞核6细胞壁7鞭毛；[0027]图2为一种利用尿素厂废水养殖莱茵衣藻方法图；
[0028]其中附图标记为:8矿泉水桶，9充气管，10排气管，11藻液，12水龙头。
【具体实施方式】
[0029]尿素厂废水废水预处理方法:尿素厂废水用于养藻前需要进行预处理，方法是:先用60目的筛絹过滤废水，除去漂浮物、玻璃渣子、毛发、泥沙、树叶、塑料袋等体积较大固形物，后将污水引入长30米、宽20米、深0.7米的水泥曝气池中，池子呈东西走向，以接受更多的阳光照射；水深保持在55厘米；按每立方米污水加入50克生石灰的量均匀泼洒生石灰(生石灰最好预先按I公斤加入5升纯水的量在塑料桶中溶解、稀释、搅拌均匀，再全池泼洒)，隔60分钟，再按每立方米污水加入80克的量全池泼洒明矾(明矾最好预先按100克加4升纯水的量在塑料桶中溶解、稀释并搅拌均匀，再全池泼洒)，然后用耙子搅动或充气搅拌60分钟，使石灰和明矾充分溶解、混合并与污水中有机物充分发生化学反应，然后自然沉淀、发酵、曝光72小时，撇去水面泡沫等漂浮物，勿搅动池底，取中上层的污水，煮沸6分钟，冷却，装入不透光的黑色塑料桶中，密封，4°C冰箱或冷库，保存，备用； [0030]I)因柠檬酸铁(FeC6H5O7.5H20)较难溶解，可加少量自来水在火炉上微热至80-90°C，并不断搅拌至全部融化；
[0031]2)羊粪浸出液制备方法:取新鲜羊粪10公斤，加入麸皮I公斤，玉米面0.5公斤，自来水I升，充分搅拌，装入塑料袋发酵10天，后取2公斤放入盆中，加入6升蒸馏水，充分搅拌15分钟，静置，7天后100目筛絹过滤，取滤液加热煮沸30分钟，以杀死其中的微生物，冷却，静置72小时，取上清液，即为羊粪浸出液，装入磨口塞试剂瓶，密封，置于4°C冰箱备用；
[0032]3)次氯酸钠消毒淡水方法:取淡水，脱脂棉过滤，按I立方米淡水中加入漂白粉50-100克的量加入漂白粉，使淡水中有效氯含量达到10-20mg/L，充气10-12小时后，用硫代硫酸钠中和余氯。硫代硫酸钠量由余氯的多少来确定，直到滴入淀粉碘化钾液不变色为止;
[0033]4)过氧乙酸消毒液制备方法和使用注意事项:市售过氧乙酸原液含量35% (以重量计)，无色液体，有强烈刺激性气味。使用时应用洁净自来水稀释成0.2%溶液，浸泡水塔内壁2小时。该品对眼睛、皮肤、粘膜和上呼吸道有强烈刺激作用，头痛、恶心且易燃，具爆炸性、强腐蚀性、强刺激性，可致人体灼伤，加热至100°C即猛烈分解，遇火或受热、受震都可起爆。与还原剂、促进剂、有机物、可燃物等接触会发生剧烈反应；腐蚀性强，不可直接用手接触，操作时应带胶皮手套、口罩和眼镜，对金属有腐蚀性，不可用于金属器械的消毒；原液长期放置可分解，注意保质期，应贮于塑料桶内凉暗处保存，远离可燃性物质。
[0034]5)接种用的莱茵衣藻预先进行提纯(本领域常规方法，只要可实现提纯即可，例如凯氏提取法)，以确保接种时藻种处于生长旺盛的指数生长期；
[0035]6)各种营养盐要按配方中提供的顺序加入，以免发生化学反应；
[0036]7)各种无机物营养盐和维生素需预先配成母液且置于4°C冰箱冷藏保存备用，放置时间不要超过45天；
[0037]8)全部营养盐加完后要充气混合10分钟，使营养盐混合均匀后再接种；
[0038]9)鸡粪浸出液制备方法:把干鸡粪、青草、豆饼、米糠、颖壳(五谷杂粮的外壳)和腐殖土按60: 10: 12: 15: 2: I的重量比例混合，搅拌均匀，装入缸内密闭进行发酵，30天后，倒出，在干净水泥地上，摊成薄层，晾干48小时，后取2公斤，置于塑料水桶，加自来水10公斤，搅拌均匀，用80目筛絹过滤，将清液煮沸5分钟，冷却，静置24小时，取上清液，装入试剂瓶，贴上标签，置于4°C冰箱，备用；
[0039]10) 土壤抽出液制备方法:到树林中取松散、富含有机质的上层土壤I公斤，加自来水5升，煮沸20分钟，将泥浆倒入烧杯中，静置24小时，后吸取上清液，倒入三角烧瓶中，加棉花塞，煮沸15分钟，冷却，静置沉淀12小时，取上清液即得土壤抽出液，装入磨口塞试剂瓶，密封，贴上标签，置于4°C冰箱备用；
[0040]11)麦饭石粉是麦饭石的粉制品，由麦饭石原矿经过筛选，粉碎，加工成面粉状，颗粒大小可以通过200目筛絹即可；
[0041]12)所用化学药品纯度均需化学纯级别；
[0042]13)为了克服目前技术的不足，本发明提供了一种利用尿素厂废水培养莱茵衣藻的培养基，配方如下:
[0043]14)尿素厂废水85毫升，酵母浸粉10毫克，脱氧胆酸钠5毫克，山梨醇12毫克，甘露醇8晕克,硫代乙醇酸钠4晕克,土壤抽出液1.8毫升,羊粪浸出液2.5毫升,鸡粪浸出液
1.2毫升，L-精氨酸3毫克，磷酸二氢钾6毫克，麦饭石粉10毫克，柠檬酸铁7毫克，S3维生素溶液1.5毫升，酪蛋白胨8毫克，甘油15毫克，麦芽糖20毫克，乳糖16毫克，可溶性淀粉25毫克，酵母膏15毫 克，硅藻土粉12毫克，次氯酸钠消毒后的纯净淡水1000毫升；
[0044]其中S3维生素溶液配方:硫胺素盐酸盐50毫克，尼古丁酸10毫克，泛酸钙10毫克，对氨安息香酸1.0克，维生素H0.1克，肌醇0.5克，叶酸0.2微克，胸间氮苯0.3克，蒸馏水1000毫升；
[0045]其中S3维生素溶液配方还可以是:硫胺素盐酸盐50毫克，钙镁磷肥20毫克，过磷酸钙10毫克，尼古丁酸10毫克，泛酸钙10毫克，对氨安息香酸1.0克，维生素H0.1克，肌醇0.5克，叶酸0.2微克，胸间氮苯0.3克，蒸馏水1000毫升；
[0046]15) 一种利用尿素厂废水培养莱茵衣藻方法，具体步骤如下:
[0047]养容器为家庭用的矿泉水桶，容积20升，靠近底部有一水龙头，无色透明或带浅天蓝色(市场有售)，洗刷干净，后用蒸馏水润洗3遍，用漏斗装入所述的培养基12升，充分摇匀5分钟，选择生命力旺盛、无污染的莱茵衣藻进行接种，接种密度4X IO4Cell/mL，接种后轻轻摇动矿泉水桶5分钟，使藻细胞均匀分布；瓶口插入两根干净玻璃管，一根较长，顶端露出瓶口 10厘米，下端插入较深，离瓶底5厘米，用以充气；另一根较短，16厘米，两端露出瓶口即可，用以排气；两根玻璃管同样粗细，直径6毫米；最后用酒精棉球擦拭瓶口，用干净的透明胶带封口并将两根玻璃管固定；长的玻璃管上端用料管与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气:氨气:臭氧:一氧化氮=97%: 1%: 1%: I充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可；室内培养，空调控温，最佳温度25±2°C，日光灯照射，光照强度4000-100001UX，光/暗周期为16L/8D，即光照16小时，黑暗8小时；培养至第6天，停止充气，揭开透明胶带，用漏斗从瓶口加入3升新鲜培养基，胶带重新封口，充气，继续培养，至第9天，莱茵衣藻密度增加至600X 104cell/mL,停止培养，从底部的水龙头放出藻液，将培养容器洗刷干净后，加入0.2%过氧乙酸消毒溶液浸泡消毒2小时，再用蒸馏水润洗2遍，后进入下一轮培养；[0048]优选的，将培养容器洗刷干净后，不采用“加入0.2%过氧乙酸消毒溶液浸泡消毒2小时，再用蒸馏水润洗2遍，后进入下一轮培养；”的消毒方式，而采用“，加入中药消毒液消毒30分钟，后进入下一轮培养；所述中药消毒液由以下重量比的物质组成:每100份85%乙醇中加入以下重量份的中药材:板蓝根30~50份、柴胡15~25份、薄荷15~25份、桅子5~15份、艾叶5~15份，中药消毒液制作方法:将新鲜板蓝根、柴胡、薄荷叶、艾叶、山桅果切碎，于60-70°C下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用，用托盘天平分别称取烘干并粉碎的板蓝根120克，柴胡60克，薄荷叶60克，艾叶30克，山桅果30克，置于三角烧瓶中充分混合后，加入1000毫升85%乙醇，浸泡48小时，200筛絹过滤，将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液，即为复方中药消毒液，密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4°C冰箱备用。”
[0049]16)优选地，对选用的所述的反应器，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒10-20分钟。
[0050]优选地，对选用的所述的反应器，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒5-10分钟；
[0051]优选地，对选用的所述的反应器，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒5-6分钟；
[0052]优选地，对选用的所述的反应器，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消毒，消毒2-3分钟；使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2-3分钟；消毒完毕后再进行藻类培养。
[0053]最后应说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本 发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。
【权利要求】
1.一种利用尿素厂废水培养莱茵衣藻的培养基，其特征在于配方如下: 尿素厂废水85毫升，酵母浸粉10毫克，脱氧胆酸钠5毫克，山梨醇12毫克，甘露醇8晕克，硫代乙醇酸钠4晕克,土壤抽出液1.8毫升,羊粪浸出液2.5毫升,鸡粪浸出液1.2晕升，L-精氨酸3毫克，磷酸二氢钾6毫克，麦饭石粉10毫克，柠檬酸铁7毫克，S3维生素溶液1.5毫升，酪蛋白胨8毫克，甘油15毫克，麦芽糖20毫克，乳糖16毫克，可溶性淀粉25毫克，酵母膏15毫克，硅藻土粉12毫克，次氯酸钠消毒后的纯净淡水1000毫升， 其中S3维生素溶液配方:硫胺素盐酸盐50毫克，尼古丁酸10毫克，泛酸钙10毫克，对氨安息香酸1.0克，维生素H0.1克，肌醇0.5克，叶酸0.2微克，胸间氮苯0.3克，蒸馏水1000毫升。
2.一种利用尿素厂废水培养莱茵衣藻方法，具体步骤如下: 培养容器为家庭用的矿泉水桶，容积20升，靠近底部有一水龙头，无色透明或带浅天蓝色，洗刷干净，后用蒸馏水润洗3遍，用漏斗装入权利要求1所述的培养基12升，充分摇匀5分钟，选择生命力旺盛、无污染的莱茵衣藻进行接种，接种密度4X 104cell/mL，接种后轻轻摇动矿泉水桶5分钟，使藻细胞均匀分布，瓶口插入两根干净玻璃管，一根较长，顶端露出瓶口 10厘米，下端插入较深，离瓶底5厘米，用以充气，另一根较短，16厘米，两端露出瓶口即可，用以排气，两根玻璃管同样粗细，直径6毫米，最后用酒精棉球擦拭瓶口，用干净的透明胶带封口并将两根玻璃管固定，长的玻璃管上端用料管与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气:氨气:臭氧:一氧化氮=97%: 1%: 1%: 1% ；充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可，室内培养，空调控温，最佳温度25±2°C，日光灯照射，光照强度4000-10000LUX，光/暗周期为16L/8D，即光照16小时，黑暗8小时，培养至第6天，停止充气，揭开透明胶带，用漏斗从瓶口加入3升新鲜培养基，胶带重新封口，充气，继续培养，至第9天， 莱茵衣藻密度增加至600 X 104cell/mL,停止培养，从底部的水龙头放出藻液，将培养容器洗刷干净后，加入0.2%过氧乙酸消毒溶液浸泡消毒2小时，再用蒸馏水润洗2遍，后进入下一轮培养。
【文档编号】C12N1/12GK103966102SQ201410222838
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2014年5月26日 优先权日:2014年5月26日
【发明者】王培磊 申请人:临沂大学