一种肠球菌琼脂培养基及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明为微生物领域，特别涉及一种肠球菌琼脂培养基，所述培养基的组分包括肉浸液肉汤、4.0g/L酵母浸粉、12g/L牛胆汁物、0.88g/L柠檬酸钠、0.45g/L柠檬酸铁铵、2g/L磷酸二氢钾0.17g/L叠氮化钠、0.9g/L七叶苷、15.0g/L琼脂，pH值为6.9-7.3。所述的肉浸液肉汤为每升肉浸液肉汤中含有牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、胰酪蛋白胨12.0g、磷酸氢二钾2.0g。本发明培养基组方简单，制备操作方便，成本低，利于推广应用；菌生长迅速，变异率低；便于观察，分析。
【专利说明】一种肠球菌琼脂培养基及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明为微生物领域，特别涉及一种肠球菌琼脂培养基及其应用。
【背景技术】
[0002] 微生物培养（microculture)是生物培养的中的一种。所培养的微生物主要有病 毒、细菌、放线菌、真菌等。微生物培养需要用到培养基，根据微生物的不同种类和生活习性 来配制特定的培养基。微生物培养成功的关键在于无菌操作，如果培养器具和培养基不能 彻底灭菌、培养的过程中有杂菌污染是很容易失败的。
[0003] 肠球菌（Enterococcus)属肠球菌属，是人类和动物肠道正常菌群的一部分，通常 在引起腹腔和盆腔感染所分离的混合菌丝中发现，既往认为肠球菌是对人类无害的共栖 菌，但近年研究已证实了肠球菌的致病力。在需氧革兰阳性球菌中，它是仅次于葡萄球菌的 重要院内感染致病菌，肠球菌亦可引起院外感染。肠球菌不仅可引起尿路感染、皮肤软组织 感染，还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等。
[0004] 溶血性链球菌，需氧或兼性厌氧菌，营养要求较高，普通培养基上生长不良，需补 充血清、血液、腹水，大多数菌株需核黄素、维生素 B6、烟酸等生长因子。最适生长温度为 37°C，在20-42°C能生长，最适pH为7. 4-7. 6。在血清肉汤中易成长链，管底呈絮状或颗粒 状沉淀生长。在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐、直径0. 5-0. 75mm的细 小菌落，不同菌株溶血不一。
[0005] 粪肠球菌，根据最新分类原则，粪链球菌又叫粪肠球菌。应用C多糖抗原，根据兰 氏（Lancefield)血清学分类，可将链球菌分成许多群。粪链球菌属于D群。D群链球菌分肠 球菌和非肠球菌两类。前者包括粪链球菌（S. faecalis)、屎链球菌（S. faecium)和坚忍链 球菌（S. durans),后者有牛链球菌（S. bovis)和马肠链球菌（S. equinus)。
[0006] 其营养要求低，在普通营养琼脂上也可生长。能在10°C或45°CpH9. 6或含6. 5% NaCl肉汤培养基中生长，并能耐65°C 30分钟。它可利用精氨酸为能源，发酵山梨醇，不发 酵阿拉伯糖。在简单的培养基上生长不需叶酸。DNA-DNA杂交结果显示，肠球菌与链球菌属 同源程度低，故有学者建议另立肠球菌属，与人类有关者为粪肠球菌（E.faecalis)和屎肠 球菌（E. faecium) 〇
[0007] 培养基（Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料， 一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。有的培养 基还含有抗菌素和色素，用于单种微生物培养和鉴定。培养基由于配制的原料不同，使用要 求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变 质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基（如组织培 养基），较长时间的贮存，必须放在3?6°C的冰箱内。由于液体培养基不易长期保管，现在 均改制成粉末。
[0008] 培养基根据化学分类为天然培养基、组合培养基和半组合培养基；根据物理分类 为液体培养基、固定培养基和脱水培养基；根据微生物分类为选择性培养基、鉴别培养基。
【发明内容】
[0009] 本发明克服现有技术中的不足，提供一种肠球菌琼脂培养基及其应用。
[0010] 本发明运用生物化学，微生物学及无机、有机、分析化学和荧光技术的原理，对不 同的碳源、氮源、无机盐类、维生素、生长促进剂等诸类营养组分的组合进行筛选，对培养基 的pH值、离子强度、氧化-还原电势、表面张力、气体环境等物化因子进行了比较，研究出了 本发明的培养基。
[0011] 本发明所采用的技术方案为：
[0012] -种肠球菌琼脂培养基，所述培养基的组分包括肉浸液肉汤、4. Og/L酵母浸粉、 12g/L牛胆汁物、0. 88g/L柠檬酸钠、0. 45g/L柠檬酸铁铵、2g/L磷酸二氢钾0. 17g/L叠氮化 钠、0· 9g/L 七叶苷、15. Og/L 琼脂，pH 值为 6. 9-7. 3。
[0013] 在以上方案的基础上，所述的肉浸液肉汤为每升肉浸液肉汤中含有牛肉粉3. 0g、 氯化钠5. 0g、胰酪蛋白胨12. 0g、磷酸氢二钾2. 0g。
[0014] 本发明还公开了一种肠球菌琼脂培养基的应用，用于食品和水中肠球菌的计数。
[0015] 胰酪蛋白胨和牛肉浸粉、酵母粉提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的 渗透压；细菌水解七叶苷与柠檬酸铁铵中铁离子反应形成黑色的6, 7-二羟基香豆素；柠檬 酸钠、牛胆粉和叠氮化钠为选择性抑菌剂，抑制非链球菌的细菌；琼脂是培养基的凝固剂。
[0016] 称取本品56. 3g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，121 °C高压灭菌15分钟，冷至 45土1°C，倾入含lml样品液平皿中约15ml培养基，混匀，凝固。35±2°C倒置培养基培养 24±2h。
[0017] 注：从保温开始至做成平板时间不要超过4h。
[0018] 本发明的有益效果：
[0019] 1、培养基组方简单，制备操作方便，成本低，利于推广应用；
[0020] 2、菌生长迅速，变异率低；
[0021] 3、便于观察，分析。
【具体实施方式】
[0022] 实施例1 :
[0023] -种肠球菌琼脂培养基，所述培养基的组分包括肉浸液肉汤、4. 0g/L酵母浸粉、 12g/L牛胆汁物、0. 88g/L柠檬酸钠、0. 45g/L柠檬酸铁铵、2g/L磷酸二氢钾0. 17g/L叠氮化 钠、0· 9g/L 七叶苷、15. 0g/L 琼脂，pH 值为 6. 9-7. 3。
[0024] 所述的肉浸液肉汤为每升肉浸液肉汤中含有牛肉粉3. 0g、氯化钠 5. 0g、胰酪蛋白 胨12. 0g、磷酸氢二钾2. 0g。
[0025] 称取本品56. 3g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，121 °C高压灭菌15分钟，冷至 45土1°C，倾入含lml样品液平皿中约15ml培养基，混匀，凝固。35±2°C倒置培养基培养 24±2h。
[0026] 注：从保温开始至做成平板时间不要超过4h。
[0027] 在 36±0· 5°C培养 24 小时
[0028]
【权利要求】
1. 一种肠球菌琼脂培养基，其特征在于所述培养基的组分包括肉浸液肉汤、4. Og/L酵 母浸粉、12g/L牛胆汁物、0. 88g/L柠檬酸钠、0. 45g/L柠檬酸铁铵、2g/L磷酸二氢钾0. 17g/ L叠氮化钠、0. 9g/L七叶苷、15. Og/L琼脂，pH值为6. 9-7. 3。
2. 根据权利要求1所述的种肠球菌琼脂培养基，其特征在于所述的肉浸液肉汤为每升 肉浸液肉汤中含有牛肉粉3. 0g、氯化钠5. 0g、胰酪蛋白胨12. 0g、磷酸氢二钾2. 0g。
3. -种根据权利要求1所述的种肠球菌琼脂培养基的应用，其特征在于用于食品和水 中肠球菌的计数。
【文档编号】C12R1/01GK104195215SQ201410459280
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年9月9日 优先权日:2014年9月9日
【发明者】王雪梅, 孟宪斌 申请人:青岛润鑫伟业科贸有限公司