一种甲苯胺蓝-dna酶琼脂培养基及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明为微生物领域，特别涉及一种甲苯胺蓝-DNA酶琼脂培养基，所述培养基的组分包括15.5g/L7.5％氯化钠肉汤、0.5g/LDNA、1.5g/L氯化钙、6.3g/L三羟甲基氨基甲烷、0.088g/L甲苯胺蓝，pH值为8.9-9.1。所述的甲苯胺蓝-DNA酶琼脂培养基，所述7.5％氯化钠肉汤为每升7.5％氯化钠肉汤中含有胰蛋白胨10.0g、牛肉粉5.0g、氯化钠75.0g、磷酸氢二钾2.0g。本发明培养基组方简单，制备操作方便，成本低，利于推广应用；菌生长迅速，变异率低；便于观察，分析。
【专利说明】-种甲苯胺蓝-DNA酶琼脂培养基及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明为微生物领域，特别涉及一种甲苯胺蓝-DNA酶琼脂培养基及其应用。
【背景技术】
[0002] 金黄色葡萄球菌，也称"金葡菌"，细胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽 聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密，染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色， 相反，阴性菌的细胞壁肽聚糖层薄、交联度差，脂类含量高，所以紫色复合物被酒精冲掉然 后附着了沙黄的红色。金黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的渊源。当年弗莱明就是在 他的金黄色葡萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了，于是发现了青霉素。而研究也表 明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌作用明显。这也是由肽聚糖层的厚 度和结构造成的。新出现的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，被称作超级细菌，几乎能抵抗人类 所有的药物，但是万古霉素可以对付它。典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 μ m左右， 显微镜下排列成葡萄串状。
[0003] 金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌 营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°c，最适生长 pH7. 4,干燥环境下可存活数周。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径0. 5?I. 0mm。血平 板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10?15% NaCl肉 汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳 性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强 的抵抗力，对磺胺类药物、青霉素、红霉素、土霉素、新霉素等抗生素敏感，但易产生耐药性， 原因是由于这些菌株产生青霉素酶等。对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制 生长。
[0004] 培养基（Medium)是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制的 养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。有 的培养基还含有抗菌素和色素，用于单种微生物培养和鉴定。
[0005] 培养基（Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料， 一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及生长素和水等。有的培养 基还含有抗菌素、色素、激素和血清。
[0006] 培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培 养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保 存。对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在3?6°C的 冰箱内。由于液体培养基不易长期保管，均改制成粉末。
[0007] 目前还不能完全从生化反应的基本原理来推断和计算出适合某一菌种的培养基 配方，只能用生物化学、细胞生物学、微生物学等的基本理论，参照前人所使用的较适合某 一类菌种的经验配方，再结合所用菌种和产品的特性，采用摇瓶、玻璃罐等小型发酵设备， 按照一定的实验设计和实验方法选择出较为适合的培养基。
[0008] 培养基设计的基本步骤是：
[0009] 根据前人的经验和培养基成分确定时一些必须考虑的问题，初步确定可能的培养 基成分通过单因子实验最终确定出最为适宜的培养基成分当培养基成分确定后，剩下的问 题就是各成分最适的浓度，由于培养基成分很多，为减少实验次数常采用一些合理的实验 设计方法。这些实验往往基于多因子实验，包含均匀设计、正交实验设计、响应面分析等。
【发明内容】
[0010] 本发明克服现有技术中的不足，提供一种甲苯胺蓝-DNA酶琼脂培养基及其应用。
[0011] 本发明运用生物化学，微生物学及无机、有机、分析化学和荧光技术的原理，对不 同的碳源、氮源、无机盐类、维生素、生长促进剂等诸类营养组分的组合进行筛选，对培养基 的PH值、离子强度、氧化-还原电势、表面张力、气体环境等物化因子进行了比较，研究出了 本发明的培养基。
[0012] 本发明所采用的技术方案为：
[0013] 一种甲苯胺蓝-DNA酶琼脂培养基，所述培养基的组分包括15. 5g/L7. 5 %氯化钠 肉汤、0· 5g/LDNA、l. 5g/L氯化钙、6. 3g/L三羟甲基氨基甲烧、0.088g/L甲苯胺蓝，pH值为 8. 9-9. 1 〇
[0014] 在以上方案的基础上，所述的甲苯胺蓝-DNA酶琼脂培养基，所述7. 5%氯化钠肉 汤为每升7. 5%氯化钠肉汤中含有胰蛋白胨10. 0g、牛肉粉5. 0g、氯化钠75. 0g、磷酸氢二钾 2. Og0
[0015] 本发明还公开了所述的甲苯胺蓝-DNA酶琼脂培养基的应用，用于核糖核酸酶检 测。
[0016] 具有脱氧核糖核酸酶的细菌分解培养基中的脱氧核糖核酸（DNA)，使DNA长链水 解成数个单核苷酸的寡核苷酸短链，使指示剂甲苯胺蓝作用变成粉红色；氯化钙提供阳离 子作为激活剂；氯化钠维持均衡的渗透压；三羟甲基氨基甲烷为缓冲剂；琼脂为培养基的 凝固剂。
[0017] 称取本品27. 58g，加热溶解于IOOOml蒸馏水中，分装三角瓶。
[0018] 如立即使用可不需灭菌。如不立即使用，121°C高压灭菌15分钟。
[0019] 已灭菌的培养基在室温可存放4个月无变化，并经数次熔化后仍可用。
[0020] 本发明的有益效果：
[0021] 1、培养基组方简单，制备操作方便，成本低，利于推广应用；
[0022] 2、菌生长迅速，变异率低；
[0023] 3、便于观察，分析。
【具体实施方式】
[0024] 实施例1 :
[0025] -种甲苯胺蓝-DNA酶琼脂培养基，所述培养基的组分包括15. 5g/L7. 5 %氯化钠 肉汤、0· 5g/LDNA、l. 5g/L氯化钙、6. 3g/L三羟甲基氨基甲烧、0.088g/L甲苯胺蓝，pH值为 8. 9-9. 1 〇
[0026] 所述的甲苯胺蓝-DNA酶琼脂培养基，所述7. 5%氯化钠肉汤为每升7. 5%氯化钠 肉汤中含有胰蛋白胨10. 〇g、牛肉粉5. Og、氯化钠75. Og、磷酸氢二钾2. Og。
[0027] 具有脱氧核糖核酸酶的细菌分解培养基中的脱氧核糖核酸（DNA)，使DNA长链水 解成数个单核苷酸的寡核苷酸短链，使指示剂甲苯胺蓝作用变成粉红色；氯化钙提供阳离 子作为激活剂；氯化钠维持均衡的渗透压；三羟甲基氨基甲烷为缓冲剂；琼脂为培养基的 凝固剂。
[0028] 称取本品27. 58g，加热溶解于IOOOml蒸馏水中，分装三角瓶。
[0029] 如立即使用可不需灭菌。如不立即使用，121°C高压灭菌15分钟。
[0030] 已灭菌的培养基在室温可存放4个月无变化，并经数次熔化后仍可用。
[0031] 35°C培养4h结果如下：
[0032]
【权利要求】
1. 一种甲苯胺蓝-DNA酶琼脂培养基，其特征在于所述培养基的组分包括15. 5g/ 17.5%氯化钠肉汤、0.58/0)嫩、1.58/1氯化钙、6.3 8/1三羟甲基氨基甲烷、0.0888/1甲苯 胺蓝，pH值为8. 9-9. 1。
2. 根据权利要求1所述的甲苯胺蓝-DNA酶琼脂培养基，其特征在于所述7. 5 %氯化钠 肉汤为每升7. 5%氯化钠肉汤中含有胰蛋白胨10. Og、牛肉粉5. Og、氯化钠75. Og、磷酸氢二 钾 2. 0g。
3. -种根据权利要求1所述的甲苯胺蓝-DNA酶琼脂培养基的应用，其特征在于用于核 糖核酸酶检测。
【文档编号】C12Q1/14GK104313122SQ201410505132
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年9月28日 优先权日:2014年9月28日
【发明者】高玉成, 刘永祥 申请人:青岛康合伟业商贸有限公司