用于hek293细胞悬浮生长的全化学成分培养基及培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种用于HEK293细胞悬浮生长的全化学成分培养基及培养方法，培养基组成包括氨基酸、无机盐、维生素、微量元素、碳水化合物和其他有机分子；在36.5-37℃，pH7.2-7.4，溶氧浓度45-65％条件下悬浮培养。本发明的培养基由于无任何生长因子及蛋白，能够支持高密度HEK293细胞生长，维持活力时间长。
【专利说明】用于HEK293细胞悬淳生长的全化学成分培养基及培养方 法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及细胞培养【技术领域】，特别涉及一种用于J1EK293细胞高密度悬浮生长 的全化学成分培养基，以及使用此培养基培养HEK293细胞的方法。
【背景技术】
[0002] 目前HEK293细胞的培养方式多采用带血清的培养基进行培养，血清存在来源复 杂，价格昂贵，成分复杂，易污染等缺点，对重组蛋白的纯化与使用不利。通常的无血清培养 基为了解决无血清添加的问题，通过向培养基中添加血清细胞因子替代物，如胰岛素，转铁 蛋白，植物蛋白水解物等成分，这些蛋白成分在后期从培养基中纯化蛋白产品起到杂质的 作用，不利于蛋白的纯化。为了更好的纯化培养基的蛋白产品，获得高质量的蛋白产品，所 以需要组分限定的无血清无蛋白培养基来培养哺乳动物细胞例如J1EK293细胞，以获得较 商的广品质量。
【发明内容】
[0003] 本发明针对现有技术的不足，提供一种用于HEK293细胞悬浮生长的全化学成分 培养基及培养方法。
[0004] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
[0005] 用于HEK293细胞悬浮生长的全化学成分培养基，包括氨基酸、无机盐、维生素、微 量元素、碳水化合物和其他有机分子；
[0006] 所述氨基酸的组分和用量为：
[0007]
[0008]
【权利要求】
1.用于HEK293细胞悬浮生长的全化学成分培养基，其特征在于：包括氨基酸、无机盐、 维生素、微量元素、碳水化合物和其他有机分子； 所述氨基酸的组分和用量为： L-丙氨酸 20-75mg/L L-精氨酸 60-100mg./L L-天门冬酰胺 15-50mg/L L-天门冬氨酸 22-59mg/L L-胱氨酸 50-300mg/L L-谷氨酸 20-150mg/L L-谷氨酰胺 100-1100mg/L 甘氨酸 10-100mg/L L-组氨酸 25-79mg/L L-异亮氨酸 50-220mg/L L-亮氨酸 50-230mg/L L-赖氨酸 50-320mg/L L-曱硫氨酸 20-60mg/L L-苯丙氨酸 60-400mg/L L-脯氨酸 20-450mg/L L-丝氨酸 30-500mg/L L-苏氨酸 100-330mg/L L-色氨酸 5-60mg/L L-酪氨酸 30-300mg/L L-缬氨酸 55-550mg/L 所述无机盐的组分和用量为： 四水硝酸钙 100-150mg/L 无水硫酸镁 55-70mg/L 氯化钾 100-600nig/L 碳酸氢钠 1000-1700mg/L 氯化钠 6000-8000mg/L 磷酸氢二钠 800-丨200mg/L 所述维生素的组分和用量为： 生物素 0.025-0.lmg/L 维生素D2 0.25-2mg/L 氯化胆碱 1.25-5.25mg/L 叶酸 0.025-0.9mg/L 肌醇 0.125-0.8mg/L 维生素K 0.04-0.7mg/L 烟酰胺 0.0625-0.9mg/L 维生素PP 0.0625-0.9mg/L 对氨基苯曱酸 0.125-0.8mg/L 维生素B5 0.025 -0.8mg/L 吡哆醛 0.0625-0.5mg/L 维生嗉B6 0.0625-0.5mg/L 维生素A 0.25-0.75mg/L 维生素B2 0.025 -0.lmg/L 维生素BI 0.025-0.lmg/L 维生素E 0.025 -0.1mg/L 维生素B12 10-50mg/L 维生素C 3.52 -12.3mg/L 所述微量元素的组分和用量为： 柠檬酸铁 12.25-122.5mg/L 亚硒酸钠 1.73-丨0.3 8pg/L 二水氯化铜 2-5pg/L 四水钼酸铵 5-15pg/L 四水氯化锰 0.丨-0.9μ§/1 偏飢酸按 0.2-0.4pg/L 七水硫酸锌 100-30(^g/L 氯化铷 0.05-0.2pg/L 八水氯化氧锆 l-6i.ig/L 六水氯化铬 0.1-0.9μ§/1 氯化镉 5-17pg/L 六水氯化钻 l-9pg/L 六水氯化镍 0.05-0.4μβ/? 氯化锡 0.01-0.6pg/L 二氧化锗 0.2-5μ§/? 硅酸钠 0.05-0.5pg/L 所述碳水化合物和其他有机分子的组分和用量为： β-巯基乙醇 3.9-10mg/'L 氢化可的松 18-50丨咕/1. γ-氨基丁酸 5.51-10.3mg/L 焦嶙酸硫胺素 I-13mg/L 辅酶A 2.5-62mg/L 脱氧腺嘌呤核苷 10-52mg/L 脱氧胞苷 10-65mg/L 脱氧鸟苷 10-92mg/L 黄素腺嘌呤二核苷酸MOmg/L D-氨基葡萄糖 3.85 -6.25mg/L D-葡萄糖 1000-3000mg/L 葡糖酪酸 1.8-9mg/L 葡糖醛酸内酯 1.8-9mg/L 谷胱甘肽 20-30mg/L 5-曱基胞嘧啶 O.l-lmg/L β-NAD 7 -12mg/L β-NADPl-9mg/L 牛磺酸 4,18-29.5mg/L 胸(腺嘧啶脱氧核)苷 10-102mg/L TWEEN80 12.5-52.3mg/L 尿苷f三磷酸 l-lOmg/'L 乙醇胺 0,61-1,21mg/L 氯化胆碱 3.00 -3.25mg/L。
2. 如权利要求1所述的用于HEK293细胞悬浮生长的全化学成分培养基，其特征在于： 所述培养基中还包括酚红指示剂，用量为：2. 0-7.Omg/L。
3. 如权利要求1所述的用于HEK293细胞悬浮生长的全化学成分培养基，其特征在于： 所述培养基中还包括表面活性剂F-68,用量为：100-1000mg/L。
4. 如权利要求1所述的用于HEK293细胞悬浮生长的全化学成分培养基，其特征在于： 培养基的组成和用量为： 其中，氨基酸的组分和用量为： L-丙氨酸 50mg/L L-精氨酸 70mg/L L-天门冬酰胺 35mg/L L-天门冬氨酸 45mg/L L-胱氨酸 120mg/L L-谷氨酸 80mg/L L-谷氨酰胺 1000mg/L 甘氨酸 50mg/L L-组氨酸 65mg/L L-异亮氨酸 130mg/L L-亮氨酸 220mg/L L-赖氨酸 235mg/L L-曱硫氨酸 50mg/L L-苯丙氨酸 350mg/L L-脯氨酸 225mg/L L-丝氨酸 400mg/L L-苏氨酸 220mg/L L-色氨酸 55mg/L L-酪氨酸 140mg/L L-缬氨酸 95mg/L 无机盐的组分和用量为： 四水硝酸钙 135mg/L 无水硫酸镁 63mg./'L 氯化钾 500mg/L 碳酸氢钠 1200mg/L 氯化钠 8000mg/L 磷酸氢二钠 800mg/L 微量元素的组分和用量为： 柠檬酸铁 122.5mg/L 亚硒酸钠 5.38gg/L 二水氯化铜 3.5pg/L 四水钼酸铵 丨0.25卜疼几 四水氯化锰 0.5pg/L 偏飢酸铵 0.33pg/L 七水硫酸锌 丨25pg/L 氯化铷 0.12.ug/L 八水氯化氧锆 5[ig/L 六水氯化铬 0.5p.g/L 氯化锅 lO^ig/L 六水氯化钻 6pg/L 六水氯化镍 0.05pg/L 氯化锡 0.06,ug/L 二氧化锗 Q.2^ig/L 娃酸納 O.lOpg/L 维生素的组分和用量为： 生物素 0.085mg/L 维生素D2 0.75mg/L 氯化胆碱 3.25mg/L 叶酸 0.625mg/L 肌醇 0.575mg/L 维生素K 0.6mg/L 烟酰胺 0.125mg/L 维生素PP 0.5mg/L 对氨基苯曱酸 0.525mg/L 维生素B5 0.25mg/L 吡哆醛 0.375mg/L 维生素B6 0.35mg/L 维生素A 0.5mg/L 维生素B2 0.075mg/L 维生素BI 0.065rng/L 维生素E 0.035mg/L 维生素B12 40mg/L 维生素C 10.5mg/L 碳水化合物和其他有机分子的组分和用量为： β-疏基乙醇 5mg/L 氢化可的松 36pg/L γ-氣基丁酸 7.5mg/L 焦嶙酸硫胺素 5mg/L 辅酶A 32mg/L 脱氧腺嘌呤核苷 23mg/L 脱氧胞苷 50mg/L 脱氧鸟苷 65mg/L 黄素腺嘌呤二核苷酸9mg/L D-氨基葡萄糖 5.25mg/L D-葡萄糖 3000mg/L 葡糖醛酸 5.9mg/L 葡糖醛酸内酯 5.5mg/L 谷胱甘肽 21mg/L 5-曱基胞嘧啶 0.8mg/L β-NAD 10.5mg/L β-NADP 7.5mg/L 酉分红 7.Omg/L 牛磺酸 4.18mg/L 胸(腺嘧啶脱氧核)苷55mg/L TWEEN80 12.5mg/L 尿苷5'-三磷酸 8mg/L 乙醇胺 0.61mg/L 氯化胆碱 3.00mg/L F-68 1000mg/L〇
5. 权利要求1-4任一项所述的培养基的配制方法，其特征在于：按照加入量称取各组 分，加入三蒸水水溶解，完全溶解后，加三蒸水定容到1L，0. 22μm滤膜过滤即可。
6. 权利要求1-4任一项所述的培养基培养HEK293细胞的方法，其特征在于：在装 有HEK293细胞培养基的生物反应器中悬浮培养HEK293细胞，悬浮培养的条件为：温度 36. 5-37°C，pH7. 2-7. 4,溶氧浓度45-65%，接种的起始细胞浓度为0. 5*106个细胞/mL。
【文档编号】C12N5/073GK104450607SQ201410648061
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月14日 优先权日:2014年11月14日
【发明者】沈鹤霄, 华权高, 肖颖, 徐春雷 申请人:武汉金开瑞生物工程有限公司