抗生素产生菌Lnu-13的发酵条件的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种抗生素产生菌Lnu-13的发酵条件。本发明针对抗生素产生菌Lnu-13的发酵条件进行了研究，比较在不同的营养条件和培养条件下，菌株Lnu-13抗生素的产生情况。确定最佳发酵培养基配方为：玉米粉3.0％、花生饼粉2.0％、MgSO40.03％、NaCl0.01％，CaCO30.2％。最佳发酵条件为：发酵培养基的初始pH7.0，培养温度28℃，摇床速度180r/min，培养时间为5天。本发明的Lnu-13菌株，对多种植物病原菌和金黄葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等革兰氏阳性细菌有较强的抗性，具有很好的开发应用前景。CCTCC NO：M201455520141106
【专利说明】抗生素产生菌Lnu-13的发酵条件
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物发酵【技术领域】。具体地涉及抗生素产生菌Lnu-13的最佳发酵 培养基及发酵条件。
[0002] 本发明所称的抗生素产生菌Lnu-13,命名为链霉菌Lnu-13 (Streptomyces sp. lnu-13)，已于2014年11月6日，在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏单位地址，中 国，武汉大学，保藏编号为CCTCC N0:M2014555。
【背景技术】
[0003] 放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，广泛应用的抗生素约70%是各种放线 菌所产生。一些种类的放线菌还能产生各种酶制剂、维生素和有机酸等。此外，放线菌还可 用于留体转化、烃类发酵、石油脱蜡和污水处理等方面。因此，开发新的抗生素生产菌种在 医药工业及农业生物防治上有重要意义。
【发明内容】
[0004] 抗生素是微生物的次级代谢产物，其生产水平不仅取决于菌种本身的性能，而且 还受营养条件、PH值大小、温度高低、甚至发酵时间等多种因素的影响和调控，这些因素相 互作用又相互制约。
[0005] 本发明的目的是提供一种新的抗生素生产菌种，本发明所述的抗生素产生菌，命 名为链霉菌Lnu-13 (Streptomyces sp. lnu-13)，已于2014年11月6日，在中国典型培养物 保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO :M2014555。
[0006] 本发明的另一目的是提供优化的抗生素产生菌Lnu-13的发酵条件，为Lnu-13的 工业化生产和应用提供理论基础。
[0007] 本发明的链霉菌Lnu-13 (Streptomyces sp. lnu-13)，是从辽宁省仙人洞国家自然 保护区土壤中分离得到。将土壤样品用无菌水稀释IO5浓度，利用高氏一号培养基，采用常 规的平板划线分离法进行分离培养，挑取放线菌单菌落，编号备用，筛选而得。
[0008] 1、链霉菌Lnu-13的显微形态特征
[0009] 图1为Lnu-13在光学显微镜100X下的孢子丝和气生菌丝形态，形态特征：基内菌 丝无横膜，不断裂；气生菌丝多分枝，孢子丝大部分为直、波曲状、钩形、小螺旋和松散的螺 旋状（一般1?2圈），孢子呈圆形、椭圆形和梭形；图2为Lnu-13在高氏一号培养基上培 养特征
[0010] (正面），图中显不Lnu-13在高氏一号培养基上生长良好，表面形状为棉絮状；图 3为Lnu-13在高氏一号培养基上培养特征（反面），图中显示菌落与培养基着生紧密，有黄 色色素生成，均符合链霉菌属的特征。
[0011] 2、Lnu-13生理生化特性：
[0012] 纤维素水解实验、明胶液化实验、硫化氢实验、牛奶凝固与胨化实验均呈阳性；淀 粉水解实验、MR实验、VP实验、色氨酸分解实验、柠檬酸盐实验、卵磷脂酶、硝酸盐还原实验 均呈阴性；可利用葡萄糖、果糖、木糖、乳糖、淀粉、蔗糖、半乳糖、纤维二糖作为碳源生长，在 含有葡萄糖、半乳糖和蔗糖的培养基上生长旺盛，对淀粉和纤维二糖的利用能力较差。
[0013] 3、链霉菌Lnu-13的16S rDNA序列分析方法：
[0014] (1)链霉菌Lnu-13的DNA提取采用反复冻融法，以此为模板进行PCR扩增。
[0015] (2) PCR 引物：正向引物 BSF8/27 :5 ' -AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'
[0016] 反向引物 BSR1541/1522 :5，-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3，
[0017] (3) PCR引物由上海生物工程有限公司合成。
[0018]
【权利要求】
1. 抗生素产生菌Lnu-13的发酵培养基，其特征在于：发酵培养基的碳源为玉米粉，氮 源为花生饼粉。
2. 如权利要求1所述的抗生素产生菌Lnu-13的发酵培养基，其特征在于：所述的 发酵培养基的组成如下：按重量百分比，玉米粉2.0-4. 0%，花生饼粉1.0-3. 0%，MgS04 0.01-0. 03%，NaCl 0.01-0. 03%，CaC03 0.1-0. 3%，余量为水。
3. 如权利要求2所述的抗生素产生菌Lnu-13的发酵培养基，其特征在于：所述的 发酵培养基的组成如下：按重量百分比，玉米粉3.0%，花生饼粉2.0%，MgS040 . 03%， NaC10.01%，CaC03 0.2%，余量为水。
4. 如权利要求1、2或3所述的抗生素产生菌Lnu-13的发酵培养基，其特征在于：所述 的抗生素产生菌Lnu-13为链霉菌Lnu-13 (Streptomyces sp. lnu-13)，在中国典型培养物 保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO :M2014555。
5. 抗生素产生菌Lnu-13的发酵条件，其特征在于：将抗生素产生菌Lnu-13用种子培 养基活化，活化后的菌株制备成菌悬液，置于权利要求3所述的发酵培养基中，调节初始 pH7. 0,培养温度30°C，装液量60ml/250ml，三角瓶摇床速度180rpm/min，发酵5天。
6. 如权利要求5所述的抗生素产生菌Lnu-13的发酵条件，其特征在于：所述的种子培 养基配方：可溶性淀粉 20g，KN03 lg，NaCl 0? 5g，K2HP04 0? 5g，蒸馏水 1000ml，pH7. 3。
7. 如权利要求5或6所述的抗生素产生菌Lnu-13的发酵条件，其特征在于：所述的抗 生素产生菌Lnu-13为链霉菌Lnu-13 (Streptomyces sp. lnu-13)，在中国典型培养物保藏 中心保藏，保藏编号为CCTCC NO :M2014555。
【文档编号】C12R1/465GK104404085SQ201410691651
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月25日 优先权日:2014年11月25日
【发明者】郑方亮, 朱春玉, 潘思明, 郑甜甜, 佘晓双, 刘宏生 申请人:辽宁大学