本发明涉及植菌素及其用途。具体来说，本发明涉及是一种包含活菌的复合果蔬发酵组合物及其用于预防或消除肾结石的用途。
背景技术：
肾结石指发生于肾盏、肾盂及肾盂与输尿管连接部的结石。多数位于肾盂肾盏内，肾实质结石少见。平片显示肾区有单个或多个圆形、卵圆形或钝三角形致密影，密度高而均匀。边缘多光滑，但也有不光滑呈桑椹状。肾是泌尿系形成结石的主要部位，其他任何部位的结石都可以原发于肾脏，输尿管结石几乎均来自肾脏，而且肾结石比其他任何部位结石更易直接损伤肾脏，因此早期诊断和治疗非常重要。其形成多是由于机体内胶体和晶体代谢平衡失调所致，与感染、营养代谢紊乱、泌尿系统异物、尿郁积以及地理气候等因素有关，可出现同侧腰痛、肾绞痛、尿内带血等症状，易引发痛风及糖尿病、高血压、急性肾盂肾炎、慢性肾衰竭、尿毒症等多种严重影响健康和生活的疾病，近年临床发病率增高趋势。
手术是目前最有效的治疗方法，但结石经常无法一次取净，且费用较高，还加重了机体的损伤，手术的疤痕、缝合线头也易生成结石。
另外，现有疗法的治疗效果不够满意。一个问题是肾结石的复发率比较高。就现有治疗方法而言，据报道结石病患在接受治疗后，若没有做好预防工作，七年内复发率可高达60％，甚至有些长时间且反复结石阻塞输尿管者，出现输尿管积水扩张，导致对疼痛的感觉缓解，而无法及时处理，面临肾脏毁损终身洗肾之悲剧。
有多种药物用于治疗患有复发性肾结石的患者，例如氢氯噻嗪、柠檬酸钾及别嘌呤醇。别嘌呤醇作为非选择性黄嘌呤氧化酶抑制剂，通常为用于治疗痛风之处方。然而，已知别嘌呤醇抑制嘌呤/嘧啶代谢中涉及的数种酶，诸如嘌呤核苷磷酸化酶及乳清酸核苷-5'-单磷酸脱羧酶，因此不可避免的引起不期望的副作用。选择用于治疗的药物类型视结石之组成及视引起结石形成的潜在病症而定。然而，这些药物多数会引起数种副作用。举例而言，与氢氯噻嗪相关的主要副作用为低钾血症，其导致尿中柠檬酸之排泄之减少；接受柠檬酸钾疗法的某些患者、尤其老年患者及患有消化不良的患者经受肠胃不耐症；由别嘌呤醇引起的副作用包括但不限于皮疹、高血压、血液病症、肠胃病症等。
此外，虽然还有若干中药用于治疗结石，但其效果仍不够理想。
因此，现有技术中存迫切需要一种可用于治疗或预防肾结石的改良的治疗剂。
技术实现要素：
本发明人经过长期研究，在大量试验的基础上，出乎意料地发现，本发明的植菌素(phytobacterin)产品对于肾结石的预防和治疗具有非常好的效果。
酵素，一般是指使用天然落菌法加糖发酵蔬菜水果得到的产品。由于其含有较多的益生菌和活性酶而表现出一些较弱的生物学活性，主要是针对肠胃病症。
来自蔬菜和水果的酵素可调整体内均衡、发挥抗菌作用、清除毒素，使体内机能得到健全运转，以保持人的身体健康。为此，复合果蔬酵素产品成为近年来研究的热点。复合果蔬酵素含有丰富的超氧化物歧化酶(SOD酶)等抗自由基物质，所以，通过不断补充酵素可以使人体的总抗氧化能力大幅提高，达到延缓衰老、美容养颜之目的。
本发明人在长期研究酵素产品的过程中，摒弃了传统的酵素天然落菌发酵方法，采用了全新的配方，并采用了新颖的纯菌种多阶段发酵工艺，获得了本发明的产品植菌素。本发明的植菌素是一种新型复合果蔬酵素组合物，其包含选自多种果蔬和藻类的原料，并且包含活的乳酸菌、醋酸菌和酵母。通过临床观察意外地发现：本发明的复合果蔬酵素组合物对于肾结石的预防和治疗具有非常好的效果。
在第一方面，本发明提供了一种复合果蔬酵素组合物。本发明的复合果蔬酵素组合物是由以下重量份的原料经发酵制成的：
(1)水果：其包含石榴、山楂、葡萄、柚子、荔枝和龙眼，比例为3至13份：1至11份：20至28份：20至28份：1至10份：1至10份；
(2)蔬菜：其包含芹菜和至少一种十字花科蔬菜，其比例为6至16份：4至14份；
(3)藻类：其包含海带和螺旋藻，其比例为1至10份：1至10份；
其中所述原料(1)：(2)：(3)的比例为50至90份：2至40份：1至20份；
并且所述酵素组合物还包含各自占组合物总重量0.1％至5％的活的乳酸菌、醋酸菌以及酵母。
在一个优选的方面，本发明的所述复合果蔬酵素组合物还另外包含谷物和/或食用真菌。
在另一方优选的方面，本发明的所述复合果蔬酵素组合物中的所述十字花科蔬菜选自西兰花和芥菜。
特别优选地，本发明的所述复合果蔬酵素组合物由以下重量份的原料经发酵制成：
(1)水果：其包含石榴、山楂、葡萄、柚子、荔枝和龙眼，比例为8：6：23：23：5：5；
(2)蔬菜：其包含芹菜和至少一种十字花科蔬菜，其比例为11：9；
(3)藻类：其包含海带和螺旋藻，其比例为5：5；
其中所述原料(1)：(2)：(3)的比例为70：20：10；
并且所述酵素组合物还包含各自占组合物总重量0.1％至5％的活的乳酸菌、醋酸菌以及酵母。
在又一个优选的方面，本发明的所述复合果蔬酵素组合物由选自以下的原料发酵制成：石榴、山楂、葡萄、柚子、荔枝、龙眼、芹菜、西兰花、海带、螺旋藻，并且所述发酵组合物包含活的乳酸菌。
在另一个优选的方面，本发明的所述复合果蔬酵素组合物由选自以下的原料发酵制成：石榴、山楂、葡萄、柚子、荔枝、龙眼、芹菜、西兰花、海带、螺旋藻，并且所述发酵组合物包含活的乳酸菌，其中所述原料的比例按质量百分比为：石榴：山楂：葡萄：柚子：荔枝：龙眼：芹菜：西兰花：海带：螺旋藻＝8％：6％：28％：28％：5％：5％：6％：4％：5％：5％。
优选地，在本发明的复合果蔬酵素组合物中，所述活的乳酸菌、醋酸菌以及酵母的含量为按重量计的3％。
在本发明的另一方面，提供了制备本发明所述的复合果蔬酵素组合物的方法，其包括以下步骤：
a.将原料(1)、(2)和(3)粉碎，搅拌，任选地添加红糖；
b.酵母发酵：向料液中加入3％的酵母菌，发酵；
c.醋酸菌发酵：向料液中加入3％的醋酸菌，发酵；
d.乳酸菌发酵：向料液中加入3％的乳酸菌，发酵；
e.过滤，向所得发酵液中通入无菌二氧化碳，密封静置。
在本发明的又一方面，提供了本发明所述的复合果蔬酵素组合物用于预防或消除肾结石的用途。具体来说，提供了本发明所述的复合果蔬酵素组合物在制备用于预防或消除肾结石的药物或保健品中的用途。优选地，所述药物或保健品采用溶液剂、混悬剂、糖浆剂、蜜膏、露剂、软胶囊、散剂、硬胶囊、片剂或颗粒的剂型。
优选地，在所述药物或保健品中，还可以包含另外一种或多种用于预防或消除肾结石的药物活性成分。
本发明的复合果蔬酵素组合物不仅含有有益的乳酸菌，而且不含乙醇和丁醇等通常发酵产品中的杂质。
另一方面，本发明的复合果蔬组合物，所用的原料都是来自于食材，且发酵参与菌更是人体微生态系统的组成部分。因此，酵素的副作用几乎为零。
因此，本发明提供了一种复合益生菌纯种接种酵素发酵技术，得到的酵素产品质量可控，富含活性益生菌特别是乳酸菌、消化酶、抗氧化物质，不含甲醇、甲醛和丁酸，可以实现工业化生产。特别地，本发明的复合果蔬酵素组合物的蛋白含量大于0.48mg/g，植物总酚含量大于1.1mg/g)。
此外，本发明的复合果蔬组合物含有活菌，酵母菌、醋酸菌处于休眠状态，因此不会产气，乳酸菌处于活跃状态，这是现有技术中其他同类产品所不具备的。
具体实施方式
术语“治疗”定义为为了对抵抗疾病、病症或障碍(例如统称为“癌症”的多种类型病症中的一种)而对患者进行的处理和护理，其包括施用本发明的组合物以预防症状或并发症的发作、或者减轻症状或并发症、或者治愈或消除疾病、病症或障碍。
术语“预防”指通过施用药物来阻止、减缓或逆转疾病的发生，它可以被应用于疾病发生之前的任何阶段。
在本发明上下文中的“治疗”意指减轻与病症或疾病相关的症状，或者抑制这些症状的进一步发展或恶化，或者防止或预防所述疾病或病症。类似地，本文中使用的本发明化合物的“有效量”或“治疗有效量”指完全或部分减轻与所述病症或状况相关的症状、或者停止或减缓这些症状的进一步发展或恶化，或者预防或提供对所述病症或状况之预防的化合物的量。
本发明中的乳酸菌、醋酸菌和酵母具有本领域的通常含义。
本发明中的乳酸菌(lactic acid bacteria，LAB)是一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的通称，其属于乳酸菌属(Lactobacillus)。
本发明中的醋酸菌(acetobacter)是指醋酸单胞菌属的杆菌，包括醋酸杆菌和葡萄糖氧化杆菌。
本发明中的酵母是单细胞真菌，是子囊菌、担子菌等几科单细胞真菌的通称。
本发明的药物或保健品可以通过常规技术制备，例如在Remington：The Science and Practice of Pharmacy,第19版，1995中所描述的方法，其通过引用并入本文。本发明的复合果蔬酵素组合物可以以常规的制剂形式出现，例如胶溶液剂、混悬剂等形式。
本发明的复合果蔬酵素组合物可以与载体混合，或者被载体稀释，或者被密封在可以为安瓿、瓶、袋或其它容器内。所述载体可以是半固体或液体材料。合适的载体的一些实例为水、盐溶液、果汁、蔬菜汁、食用油、含水饮品等。
所述制剂可以与不和活性成分发生有害反应的辅助剂混合。这些添加剂可以包括润湿剂、乳化剂和助悬剂、影响渗透压的盐、缓冲剂和/或着色物质、防腐剂、甜味剂或调味剂。如果需要，还可以对所述组合物进行灭菌。
施用途径可以是将本发明活性化合物有效地转运到适当的或期望的作用部位的任何途径，例如口服、经鼻、肺部、口含、皮下、皮内、透皮或肠胃外途径，例如直肠、贮库、皮下、静脉内、尿道内、肌内、鼻内、眼用溶液或软膏剂的途径，口服途径是优选的。
如果使用液体载体，则所述制剂可以是糖浆剂、乳剂、软明胶胶囊或无菌可注射液体的形式，例如水性或非水性液体混悬剂或溶液剂。
本发明的复合果蔬酵素组合物在宽的剂量范围都是有效的。取决于所用用途(例如预防或治疗)，本发明的复合果蔬酵素组合物可以在宽泛的范围内进行调整，例如每日60g至150g发酵液。
通常，可以将本发明的复合果蔬酵素组合物分配在单位剂型中，其每单位剂量包含有效量的本发明的复合果蔬酵素组合物和载体和/或稀释剂。
本发明的复合果蔬酵素组合物可以是每日一次、或每日一次以上例如每日两次或每日三次施用。或者，剂型可以根据需要以少于每日一次的频率施用，例如每隔一天或每周一次施用。
本发明药物组合物中活性物质的百分比是可变的，因为必须使药物调剂制成一定合适比例的剂量，以获得理想的疗效。总之，本发明的药物制剂经口服或注射给药应按每70kg体重每天1至15毫克活性物质。以下说明性的而不是限制性的给出一些实施实施例。
本发明的复合果蔬酵素组合物可以用于消除肾结石，用于预防和/或治疗肾结石疾病或相关疾病或并发症。所述相关疾病或并发症包括但不限于肾脏局部损伤、肾绞痛、尿路梗阻、肾积水、尿路感染、肾盂积水、肾功能不全、肾小球硬化、肾小管萎缩。
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，下述实施例中所用原料如无特殊说明，即为普通市售，所述百分比无特殊说明，即为重量百分比。
制备实施例1：
原料：
石榴、山楂、葡萄、柚子、荔枝、龙眼、芹菜、西兰花、海带、螺旋藻，其比例为8：6：23：23：5：5：6：4：5：5。
制法：
原料分拣，去除坏果，按上述比例洗净，用臭氧水消毒处理后，用无菌水漂洗，以去除材料上残留的臭氧，在洁净的条件下，消毒的粉碎机打碎，转入发酵桶，搅拌器60转/分钟处理2小时，按照原料总重加15％的红糖，搅拌均匀。
酵母发酵：加入3％的酵母菌，搅匀后，盖好透气膜，在常温下发酵2周，期间每天观察发酵情况，3天搅拌一次，每次30分钟。
醋酸菌发酵：酵母菌发酵2周后，加入3％的醋酸菌，搅匀，常温发酵2周，期间每天观察发酵情况，3天搅拌一次，每次30分钟。
乳酸菌发酵：醋酸菌菌发酵2周后，加入3％的乳酸菌，搅匀，通入无菌氮气，流速50L/分钟，时间30分钟，密封，常温发酵2周，期间每天观察发酵情况。
乳酸菌发酵两周后，用400目滤网，过滤得到发酵液，发酵液中加入15％蜂蜜，密封静置；灌装即为成品。
制备实施例2：
原料：
石榴：山楂：葡萄：柚子：荔枝：龙眼：芹菜：西兰花：海带：螺
旋藻＝8：6：23：23：5：5：6：4：5：5。
制法：
原料分拣，去除坏果，按上述比例洗净，用臭氧水消毒处理后，用无菌水漂洗，以去除材料上残留的臭氧，在洁净的条件下，消毒的粉碎机打碎，转入发酵桶，搅拌器60转/分钟处理2小时，按照原料总重加15％的红糖，搅拌均匀。
酵母发酵：加入3％的酵母菌，搅匀后，盖好透气膜，在常温下发酵2周，期间每天观察发酵情况，3天搅拌一次，每次30分钟。
醋酸菌发酵：酵母菌发酵2周后，加入3％的醋酸菌，搅匀，常温发酵2周，期间每天观察发酵情况，3天搅拌一次，每次30分钟。
乳酸菌发酵：醋酸菌菌发酵2周后，加入3％的乳酸菌，搅匀，通入无菌氮气，流速50L/分钟，时间30分钟，密封，常温发酵2周，期间每天观察发酵情况。
乳酸菌发酵两周后，用400目滤网，过滤得到发酵液，发酵液中加入15％蜂蜜，密封静置；灌装即为成品。
制备实施例3：
原料：
石榴：山楂：葡萄：柚子：荔枝：龙眼：芹菜：芥菜：海带：螺旋
藻＝8：6：23：23：5：5：6：4：5：5；
制法：
原料分拣，去除坏果，按上述比例洗净，用臭氧水消毒处理后，用无菌水漂洗，以去除材料上残留的臭氧，在洁净的条件下，消毒的粉碎机打碎，转入发酵桶，搅拌器60转/分钟处理2小时，按照原料总重加15％的红糖，搅拌均匀。
酵母发酵：加入3％的酵母菌，搅匀后，盖好透气膜，在常温下发酵2周，期间每天观察发酵情况，3天搅拌一次，每次30分钟。
醋酸菌发酵：酵母菌发酵2周后，加入3％的醋酸菌，搅匀，常温发酵2周，期间每天观察发酵情况，3天搅拌一次，每次30分钟。
乳酸菌发酵：醋酸菌菌发酵2周后，加入3％的乳酸菌，搅匀，通入无菌氮气，流速50L/分钟，时间30分钟，密封，常温发酵2周，期间每天观察发酵情况。
乳酸菌发酵两周后，用400目滤网，过滤得到发酵液，发酵液中加入15％蜂蜜，密封静置；灌装即为成品。
制备实施例4：
原料：
石榴：山楂：葡萄：柚子：荔枝：龙眼：芹菜：西兰花：海带：螺旋藻：猴头菇：银耳＝4：2：23：23：5：5：6：4：5：5：4：4。
制法：
原料分拣，去除坏果，按上述比例洗净，用臭氧水消毒处理后，用无菌水漂洗，以去除材料上残留的臭氧，在洁净的条件下，消毒的粉碎机打碎，转入发酵桶，搅拌器60转/分钟处理2小时，按照原料总重加15％的红糖，搅拌均匀。
酵母发酵：加入3％的酵母菌，搅匀后，盖好透气膜，在常温下发酵2周，期间每天观察发酵情况，3天搅拌一次，每次30分钟。
醋酸菌发酵：酵母菌发酵2周后，加入3％的醋酸菌，搅匀，常温发酵2周，期间每天观察发酵情况，3天搅拌一次，每次30分钟。
乳酸菌发酵：醋酸菌菌发酵2周后，加入3％的乳酸菌，搅匀，通入无菌氮气，流速50L/分钟，时间30分钟，密封，常温发酵2周，期间每天观察发酵情况。
乳酸菌发酵两周后，用400目滤网，过滤得到发酵液，发酵液中加入15％蜂蜜，密封静置；灌装即为成品。
制备实施例5：
原料：
石榴：山楂：葡萄：柚子：荔枝：龙眼：芹菜：西兰花：海带：螺旋藻：猴头菇：银耳：谷物＝4：2：27：27：5：5：6：4：4：4：4：4:4。
谷物种类：燕麦，黑米，红高粱，黄豆，绿豆，粘玉米，花生，薏仁米，红小豆，黑豆。其比例为：0.2:0.2:0.2:0.2:0.2:0.2:0.2:0.2:0.2:0.2。
制法：
原料分拣，去除坏果，按上述比例洗净，用臭氧水消毒处理后，用无菌水漂洗，以去除材料上残留的臭氧，在洁净的条件下，消毒的粉碎机打碎，转入发酵桶，搅拌器60转/分钟处理2小时，十种谷物：总量占比2％，每种0.2％，磨成粉，加等量的水煮沸30分钟，冷却至室温，混合到发酵桶中，照原料总重加15％的红糖，搅拌均匀。
酵母发酵：加入3％的酵母菌，搅匀后，盖好透气膜，在常温下发酵2周，期间每天观察发酵情况，3天搅拌一次，每次30分钟。
醋酸菌发酵：酵母菌发酵2周后，加入3％的醋酸菌，搅匀，常温发酵2周，期间每天观察发酵情况，3天搅拌一次，每次30分钟。
乳酸菌发酵：醋酸菌菌发酵2周后，加入3％的乳酸菌，搅匀，通入无菌氮气，流速50L/分钟，时间30分钟，密封，常温发酵2周，期间每天观察发酵情况。
乳酸菌发酵两周后，用400目滤网，过滤得到发酵液，发酵液中加入15％蜂蜜，密封静置；灌装即为成品。
生物活性实施例
1.体外溶石实验
实验方法：
1、取适量本发明的复合果蔬酵素组合物(实施例3所得产品)通过滤纸过滤，得到其溶液；
2、分别取100ml上述溶液(样品溶液)和超纯水(对照)，置于两个烧杯中；
3、从两个烧杯中各取5ml液体称重；
4、分别向所取液体中加过量的草酸钙粉末(15g)，37℃震荡溶解；
5、经过12h震荡溶解后，分别取一定量的浊液(样品和对照)进行离心，取5ml上清溶液称重，记录数据；
6、称完后，将其倒入各自烧杯中继续37℃震荡溶解，48h，72h后重复步骤5，记录数据。
实验结果：
实验结果见表1。
表1
由实验结果可见，通过数据分析，本发明的复合果蔬酵素组合物能明显地溶解草酸钙，并且随着时间的延长，溶解草酸钙的量增加，72小时后溶解草酸钙的量是12小时溶解量的9倍。体外试验表明本发明的复合果蔬酵素组合物可以有效消除肾结石。
2.临床观察
病例1肾结石
患者1名，男，41岁，在服用本发明产品(实施例5的产品)之前血尿酸为595μmol/L，服用本发明实施例5的产品三天后，血尿酸为637μmol/L，同时尿中检出肾结石溶解出的大量草酸钙。继续服用该产品10天之后，血尿酸逐渐下降至正常水平(385μmol/L)。
病例2双肾多发结石
1名患者，男，49岁。
服用产品：制备实施例5的产品；
服用剂量/方案：前4天断食或全素食，断食期间每天服用3次实施例5产品，每次50ml；断食4天之后每天服用2次实施例5产品，每次30ml。
在服用本发明的复合果蔬组合物之前，通过超声波检测，发现患者双肾多发结石；在服用本发明的复合果蔬组合物后第一次断食后，通过超声波检测，结果显示有左肾多发结石；继续服用本发明的复合果蔬组合物一个月之后，通过超声波检测，得出双肾轮廓清，形态大小正常，并未检测出肾结石。