一种增强犬抗病能力和调节胃肠菌群的宠物主粮的制作方法

本发明涉及一种增强犬抗病能力和调节胃肠菌群的宠物主粮，属于宠物食品
技术领域：
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背景技术：
：随着当今社会生活水平的不断提高以及宠物饲料的迅速发展，人们对于其宠物犬的膳食要求越来越高，宠物犬粮不仅要满足犬的营养需求，蛋白质、脂肪、能量等，还要满足犬适口性、机体和骨骼健康、毛发亮丽、肠道健康等条件。本发明在宠物犬饲料基本配方的基础上，添加了乳铁蛋白、溶菌酶、乳清蛋白、低聚果糖、酵母提取物、凹凸棒石（粉）等功能性成分，增强了宠物犬抗病力、帮助滋养肌肤、改善皮毛的光泽度、减少了宠物皮肤瘙痒、大大降低了皮肤病的发病几率、改善犬毛发、改善肠道的微生物环境、提高了消化和吸收能力。长久以来，抗生素作为抗菌促生长添加剂被添加到饲料中，但其广泛和大量使用，导致动物性食品中药物残留等问题愈来愈令人担忧。因此，寻找一种安全、环保的新型饲料添加剂已成为当务之急。近年来，乳铁蛋白(lactoferrin,简称LF)成为当今乳品界最为关注的“热点”之一。因其具有抗菌、抑菌、抗病毒、抗氧化和调节机体免疫等作用，可用于开发新型的饲料添加剂。乳铁蛋白能加强动物肠道中双歧杆菌和乳酸杆菌等有益菌群的生长，抑制有害菌群的繁殖，对肠道菌群有较大影响。LF具有调节巨噬细胞活性和刺激淋巴细胞合成的能力。另外，LF对抗体生成、T细胞成熟、淋巴细胞中自然杀伤细胞比例都具有调节作用。溶菌酶本身是一种天然蛋白质，无毒性，是一种安全性高的饲料酶。作为自然来源的抗菌剂，在动物机体内具有抗菌、抗病毒和加快组织恢复，减少腹泻，增强机体非特异性免疫力等功能。本发明中乳铁蛋白协同溶菌酶，不仅能促进动物肠道微生物菌群的稳定，在饲料中替代抗生素，还能增强机体抗病力和免疫功能。低聚果糖，是一种新型的绿色饲料添加剂，具有多种生物化学功能，是近年才应用于饲料工业中的。大量研究表明，在饲养动物日粮中应用低聚果糖，可以促进生长发育，提高饲料报酬，增强机体抗病能力，提高动物繁殖力，增强机体免疫性能。同时低聚果糖在大肠中被机体肠道内的益生菌选择性的利用，促进其生长，提高活性；有益菌排斥和抑制有害菌的生长繁殖，双向调节肠道菌群至平衡状态。酵母提取物（Epicor）含有丰富的蛋白、B族维生素、氨基酸等物质，广泛用于动物饲料的蛋白质补充物。它能促进动物的生长发育，改善皮毛的光泽度，并能增加机体的抗病能力。凹凸棒石（粉）作为混合饲料的添加剂，以其特有的物理性能，在促进动物机体的新陈代谢，提高饲料的转化率，使动物食欲旺盛，皮毛丰润；同时还具有优良的吸附性能，能有效地吸除动物大肠杆菌、肠道毒素，起到防疫治病、除虫杀菌的作用，并能提供生长必须的微量元素。技术实现要素：本发明的目的是提供一种增强宠物犬抗病力和调节胃肠菌群的宠物饲料，其配方合理，功能显著。本发明的技术方案：本发明在基础饲料配方的基础上添加了乳铁蛋白、溶菌酶、乳清蛋白、低聚果糖、酵母提取物、凹凸棒石（粉）等功能性成分，该宠物饲料不仅能增强宠物犬抗病力、帮助滋养肌肤、改善皮毛的光泽度；还能改善肠道的微生物环境、提高了消化和吸收能力。一种增强犬抗病能力和调节胃肠菌群的宠物主粮，配方比例按重量份计如下：脱水鸡肉粉15-25份，脱水鱼粉10-20份，精米10-20份，豆粕5-15份，小麦粉10-20份，玉米粉10-20份，磷酸二氢钙1-3份，食盐0.5-1.0份，维生素0.5-1.0份，矿物质0.5-1.0份，山梨酸钾0.1-0.5份，乳铁蛋白0.1-1.0份，溶菌酶0.05-0.10份，乳清蛋白0.05-0.10份，低聚果糖0.5-1.0份，酵母提取物1.0-5.0份，氨基葡萄糖0.1-0.5份，凹凸棒石粉0.1-0.5份。所述维生素具体为维生素A，维生素B1，维生素B2，维生素B6，维生素B12，维生素C，维生素D，维生素E或维生素K中的一种或几种。所述矿物质以游离或者结合物形式存在，具体包括铁，铜，锌，锰，钴，硒或碘中的一种或几种。所述增强犬抗病能力和调节胃肠菌群的宠物主粮，配方比例按重量份计如下：脱水鸡肉粉20份，脱水鱼粉15份，精米12份，豆粕12份，小麦粉15份，玉米粉15份，磷酸二氢钙2份，食盐0.8份，维生素0.6份，矿物质0.5份，山梨酸钾0.2份，乳铁蛋白0.1份，溶菌酶0.05份，乳清蛋白0.05份，低聚果糖1.0份，酵母提取物5.0份，氨基葡萄糖0.3份，凹凸棒石粉0.4份。所述增强犬抗病能力和调节胃肠菌群的宠物主粮，配方比例按重量份计如下：脱水鸡肉粉18份，脱水鱼粉15份，精米10份，豆粕10份，小麦粉20份，玉米粉15份，磷酸二氢钙3份，食盐1.0份，维生素0.8份，矿物质0.7份，山梨酸钾0.3份，乳铁蛋白0.25份，溶菌酶0.075份，乳清蛋白0.10份，低聚果糖0.8份，酵母提取物4.5份，氨基葡萄糖0.4份，凹凸棒石粉0.3份。本发明的有益效果：本发明所述的具有多种保健功能的宠物饲料不仅营养充分，而且还添加了功能性饲料添加剂：乳铁蛋白、溶菌酶、低聚果糖、酵母提取物和凹凸棒石（粉），能显著提高宠物的免疫力，增加机体的抗病能力，同时改善肠道微生物环境，保持其生态平衡，促进毛发光滑丰润，具有非常显著的保健功能。附图说明图1乳铁蛋白对环磷酰胺致免疫低下小鼠T淋巴细胞增殖的影响；`x（T细胞增值率均值）±s（标准差），每组老鼠只数n=10，注:*P<0.05,**P<0.01,vs模型组；##P<0.01，vs空白组。图2乳铁蛋白对环磷酰胺致免疫低下小鼠血清溶血素的影响`x（评分均值）±s（标准差），每组老鼠只数n=10，注:**P<0.01,vs模型组；###P<0.01，vs空白组。图3乳铁蛋白对环磷酰胺致免疫低下小鼠巨噬细胞吞噬实验的影响`x（OD值均值）±s（标准差），每组老鼠只数n=10，注:**P<0.01,vs模型组；##P<0.01，vs空白组）。具体实施方式实施例1宠物饲料的配方组成：按重量份计：脱水鸡肉粉18，脱水鱼粉15，精米10，豆粕10，小麦粉20，玉米粉15，磷酸二氢钙3，食盐1.0，维生素预混物0.8，矿物质预混物0.7，山梨酸钾0.3，乳铁蛋白0.25，溶菌酶0.075，乳清蛋白0.10，低聚果糖0.8，酵母提取物4.5，氨基葡萄糖0.4，凹凸棒石（粉）0.3。实施例2按重量份计：脱水鸡肉粉20，脱水鱼粉15，精米12，豆粕12，小麦粉15，玉米粉15，磷酸二氢钙2，食盐0.8，维生素预混物0.6，矿物质预混物0.5，山梨酸钾0.2，乳铁蛋白0.1，溶菌酶0.05，乳清蛋白0.05，低聚果糖1.0，酵母提取物5.0，氨基葡萄糖0.3，凹凸棒石（粉）0.4。实施例3制备过程：以制备约100g量的宠物主粮为例，将实施例1或2的原料按照重量份计经超微粉碎机粉碎过60目筛，将粉碎好的物料经螺带混合机将物料混合均匀后加水调制成含水量20%；挤压膨化：三段机筒温度为80℃、100℃、120℃，螺杆转速为190r/min；将混合好的物料放入喂料器，经由喂料器进入挤压机内挤压膨化，完成熟化，60℃干燥6h；干燥后的加工颗粒在其未完全冷却时用油脂喷涂机喷涂8%的（w/w）大豆油；最后将加工好的颗粒犬粮密封包装。应用实施例1调节胃肠菌群的研究：选用SPF级昆明种雌性小白鼠48只，体重18~22g。实验参照人体每日推荐量(推荐量为0.025g/kg·bw)的5倍、10倍和30倍分成低、中、高剂量组和对照组共四组，每组12只。分别供低（0.125g/kg•bw）、中（0.250g/kg•bw）、高（0.750g/kg•bw）三个剂量组动物灌胃使用，每日给予受试物灌胃，给样量根据每周体重增减调整，连续灌胃14d。对照组灌服无菌纯净水。在给予受试物之前和末次给予受试物后24h，每组无菌采取其中10只小鼠粪便。置已称重的装有玻璃珠的干燥灭菌小试验管中，再称重，计算出小鼠粪便重量，以灭菌稀释液稀释10倍，制成均匀悬液，再依次进行10倍系列稀释，选择合适的稀释度，分别接种在各培养基上，按要求进行培养。培养后，计算每克湿便中的菌数，取对数后进行统计处理。比较实验前后自身及组间双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、肠杆菌、产气荚膜梭菌的变化情况。由表1可以发现，与对照组小鼠相比，0.250g/kg•bw剂量组与0.750g/kg•bw剂量组的实验组小鼠双歧杆菌数量有显著性差异（p＜0.05），且给样后与给样前相比，差异也有统计学意义（p＜0.05）。与对照组小鼠相比，0.750g/kg•bw剂量组的实验组小鼠乳杆菌数量有显著性差异（p＜0.05），且给样后与给样前相比，差异也有统计学意义（p＜0.05）。与对照组小鼠相比，各剂量实验组小鼠肠道内肠杆菌、肠球菌和产气荚膜梭菌数量无显著性差异（p＞0.05）。研究结果表明小鼠摄入含量不小于0.250g/kg•bw剂量的乳铁蛋白对肠道菌群调节结果呈阳性，更加有利于改善小鼠肠道乳酸杆菌和双歧杆菌的菌群环境。表1乳铁蛋白对小鼠肠道菌群的影响（logcfu/g）应用实施例2增强免疫力的研究试验动物：SPF级BALB/c小鼠，18~22g，全雌性小鼠，上海杰思捷实验动物有限公司提供。建立小鼠免疫低下模型。分组：18~22gSPF级雌性BALB/c小鼠60只，动物经适应性饲养3d后按体重分层随机分为6组，每组10只，按组分笼饲养，自由进食和饮水。分别分为空白对照组，模型对照组，阳性对照（汤臣倍健蛋白粉）组，乳铁蛋白低剂量组，乳铁蛋白中剂量组，乳铁蛋白高剂量组。各组每日灌胃给药，给药浓度分别为阳性药167mg/kg，乳铁蛋白低、中、高浓度分别为10，20，60mg/kg，空白组和模型组给予同等体积的生理盐水，连续灌胃给药30d，每日一次。实验总周期为30天。1、T淋巴细胞增殖试验：给药30天后，于超净台中无菌取脾脏，称重，记录，D-Hank’s液冲洗3次，剪碎，过300目筛，1200r/m，离心5min，弃上清液，加入Tris-NH4Cl(0.83%)溶解红细胞，D-Hank’s清洗2遍，1200r/m，离心5min，用RPMI1640(含10%犊牛血清)调整细胞1×106个/ml。37℃，5%CO2，孵育。细胞调整计数后，将细胞悬液分两孔加入96孔板中，每孔加100μl的细胞悬液，一孔加ConA50μl，另一孔作为对照。37℃、5%CO2培养72h。每孔加MTT10μl，孵育4h，离心2400rpm×10min，弃去上清，每孔加DMSO150μl，振摇10min，在570nm处用酶标仪测吸光度。由图1可见，环磷酰胺造模之后模型组与空白组相比T细胞增殖率显著降低（P<0.01），表明模型组细胞免疫功能受到显著抑制。阳性药物组及乳铁蛋白高剂量组与模型组比较T细胞增殖率显著升高（P<0.05，P<0.01），其余组与模型对照组相比未见显著性差异（P>0.05）。s空白组）2、血清溶血素实验：免疫低下模型造模及给药方法同1，造模后，每鼠腹腔注射2%压积SRBC0.2ml致敏。4天后，小鼠眼球后静脉丛取血，取血于离心管内，放置约1h，2000r/min离心10min，收集血清。用生理盐水将血清倍比稀释，将不同稀释度的血清分别置于微量血凝试验板内，每孔100μl，再加入100μl0.5％(v/v)的SRBC悬液，混匀，装入湿润的平盘内加盖，于37℃温箱孵育3h，观察血球凝集水平。由图2可见，环磷酰胺造模之后模型组与空白组相比血清溶血素评分显著降低（P<0.01），表明模型组体液免疫功能受到显著抑制。阳性药组与乳铁蛋白低剂量、中剂量组和模型组相比显著升高（P<0.01）。其余组与模型对照组相比未见显著性差异（P>0.05）。3、巨噬细胞吞噬实验：小鼠末次给药1h后，摘眼球取血后脱颈椎处死，置于超净台中75%酒精中浸泡5min，于腹腔注射含肝素的无菌PBS液4mL，轻揉腹部2min，开腹，滴管收集腹腔内液，10mL离心管中，1500rpm离心10min，弃上清，用冷PBS液洗细胞3次后，完全1640培养基悬浮细胞，调细胞浓度为1×106/mL，加到96孔板中，100μL/孔。置37℃、5%CO2培养箱中培养2h后取出板，弃去培养基，温PBS液冲洗，贴壁得到巨噬细胞备用。将上述含巨噬细胞的细胞悬液均匀加入96孔板中，每孔巨噬细胞的个数控制在4～6×105个/mL，后每孔加入0.1%中性红生理盐水100μL置37℃、5%CO2培养箱培养1h，倾去上清液，温PBS洗细胞2次，每孔加入细胞溶解液100μL(为体积分数50%的乙酸和体积分数50%的无水乙醇)，4℃过夜，待细胞溶解中性红释放后，在酶标仪上550nm处测量吸光度值，以A值表示巨噬细胞功能的强弱。由图3可见，环磷酰胺造模之后模型组与空白组相比巨噬细胞吞噬实验吸光度显著性低（P<0.01），表明模型组单核—巨噬细胞功能受到显著抑制。乳铁蛋白中剂量组和高剂量组与模型组相比巨噬细胞吞噬实验吸光度显著升高（P<0.01），其余组与模型对照组相比未见显著性差异（P>0.05）。综合上述结果，本实验中细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能实验均为阳性，因此判定添加乳铁蛋白的宠物饲料对免疫功能低下者具有增强免疫力作用。应用实施例3整体动物实验实验动物与饲喂条件：8只健康比格犬，犬龄均为4个月，体重6kg左右/只，每只犬单独喂养，自由饮水，饲喂时间为每天的早八点和晚八点，共分2个实验组，每组随机4只，实验周期共30天。实验开始前各实验组犬统一饲喂未添加乳铁蛋白、溶菌酶、低聚果糖、酵母提取物等功能性成分的基础犬粮，实验开始后分别饲喂各实验犬粮。实验犬粮制备与分组：（1）对照组：未添加低聚果糖和乳铁蛋白的基础犬粮；（2）实验组：实施例2配方(基础犬粮的基础上添加了乳铁蛋白0.1%，溶菌酶0.05%，乳清蛋白0.05%，低聚果糖1.0%，酵母提取物5.0%，氨基葡萄糖0.3%，凹凸棒石（粉）0.4%）。动物实验指标收集：在实验开始之前各组均饲喂未添加功能性成分的基础犬粮，在此期间观察犬的采食量与粪便质量直至稳定为止。粪便微生物检测方法：在实验前第一天和实验结束最后一天，早晨空腹取2.5g新鲜幼犬粪便于灭菌后的装有玻璃珠的锥形瓶中，加入50mL无菌生理盐水摇匀，5000r/min离心10min取上清液。取1mL粪便稀释液进行梯度稀释，取合适的稀释梯度于BBL（双歧杆菌）、LBS（乳杆菌）和EMB(肠杆菌）培养基中进行接种培养，测定其中的双歧杆菌、乳酸杆菌和大肠杆菌数目，结果见表2。表2配方饲料对宠物犬粪便中菌群数量的影响单位(logCFU/g)时间实验组对照组双歧杆菌第0天7.98±0.548.04±0.64第30天8.43±0.378.11±0.56乳酸杆菌第0天8.27±0.488.53±0.35第30天8.86±0.678.66±0.52大肠杆菌第0天7.34±0.427.65±0.23第30天6.73±0.367.78±0.45从结果来看，实验组犬与对照组犬比较，实验组犬肠道有益菌双歧杆菌和乳酸杆菌的数量有了明显增加，对照组基本没变化；饲喂了实验组饲料的犬大肠杆菌数量明显降低，对照组犬大肠杆菌数量实验前后有小幅地增加。因此证实将乳铁蛋白、溶菌酶、低聚果糖、酵母提取物等功能性成分添加到基础配方饲料中，能明显改善犬肠道菌群，有益于犬肠道健康，增加了犬抗病能力。当前第1页1 2 3