本发明属于食品加工领域，涉及一种功能性食品，具体为一种富含功能因子的风味酸奶及其制备方法。
背景技术：
黄酮类化合物是一类由两个苯环通过中央三碳连接(c6-c3-c6)作为基本分子结构的化合物，广泛存在于高等植物及羊齿植物的根、茎、叶、花、果实等中，是植物多酚的一个亚群。其种类繁多，目前发现的黄酮类化合物已经有9000多种，根据c环结构的不同，可将黄酮类化合物分为黄酮类、黄酮醇类、黄烷酮类、黄烷醇类、儿茶酸类、花色素类、异黄酮类、查儿酮等。现代医学研究表明，黄酮类化合物具有抗炎、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化等多种生物活性，在肿瘤治疗、延缓衰老等方面具有重要的应用价值。黄酮类化合物广泛分布在自然界，主要存在于植物体内，并且大多以黄酮糖苷的形式存在。黄酮糖苷作为一类大分子物质，不易渗入肠上皮细胞，从而难以被人体吸收，生物利用率低，降低了其实际应用价值。通过技术手段将黄酮糖苷转化为相应的黄酮苷元，可大大提高其生物利用率。然而，传统的化学转化方法环境友好度低，不利于大规模的工业应用。一些微生物在发酵过程中能产生β-葡萄糖苷酶，可以把黄酮糖苷水解成相应的苷元。因此，近年来研究人员致力于研究新型黄酮糖苷转化方法。利用乳酸菌、灵芝等微生物发酵对黄酮类化合物进行生物转化是一种非常安全、高效和低成本的方法。
银杏叶含有20多种黄酮类化合物，包括银杏双黄酮、异银杏双黄酮、7-去甲基银杏双黄酮等；山楂叶中黄酮类化合物含量高达1.8～2％，为果实含量的20～120倍；荷叶含有丰富的槲皮素、异槲皮素、莲甙等黄酮类化合物；灵芝含有多糖、多肽、三萜类、16种氨基酸(其中含有7种人体必需氨基酸)、蛋白质、甾类、甘露醇、香豆精苷、生物碱、有机酸，以及微量元素ge、fe、ca、mn、zn等。灵芝菌丝体发酵液富含多糖、氨基酸、微量元素，具有抗疲劳、强化人体免疫、抗氧化、延缓衰老、抗肿瘤等功能，一些灵芝菌丝体在发酵过程中产生β-葡萄糖苷酶，能把黄酮苷转化为黄酮苷元，提高其利用率。
红豆含蛋白质、纤维素、异黄酮、矿物质及维生素。研究发现大豆、红豆等发芽后，其γ-氨基丁酸(gaba)、vc和、异黄酮等功能性因子含量都有明显提高，在发芽过程中添加谷氨酸钠，能提高gaba的产量。γ-氨基丁酸具有镇静、降低血压、抗癫痫、调节激素、增加胃黏膜屏障机能等作用。除此之外，gaba还有修复皮肤、预防肥胖、改善更年期综合症等功能。
目前，市售酸奶大多是以牛奶或奶粉为原料经乳酸菌发酵制成，种类和功能比较单一，未见利用生物转化法生产富含黄酮苷元、活性多糖、γ-氨基丁酸及膳食纤维等功能因子的特色风味酸奶研究报道。
技术实现要素：
解决的技术问题：为了克服现有技术的缺陷，获得一种功能多样化的酸奶制品，本发明提供了一种富含功能因子的风味酸奶及其制备方法。
技术方案：一种富含功能因子的风味酸奶的制备方法，所述方法包括两次发酵：第一次发酵，以酶解后的山楂叶、荷叶、银杏叶和红豆渣为底物，接种灵芝发酵剂发酵；第二次发酵，在第一次发酵产物的基础上加入红豆芽浆、脱脂奶粉、蔗糖作为发酵底物，接种德氏乳杆菌保加利亚亚种、嗜热链球菌、植物乳杆菌和短乳杆菌发酵。
优选的，所述方法具体步骤如下：
(1)菌株活化：在无菌条件下，将德氏乳杆菌保加利亚亚种(bncc336436或bncc186626或bncc138500或bncc187941)、植物乳杆菌(bncc337796或bncc191046或bncc192556)、短乳杆菌(bncc337373或bncc189074或bncc181703)、嗜热链球菌(bncc187932或bncc186629或bncc175966或bncc175937)分别接种于mrs液体培养基中，分别在35～43℃的培养箱中培养20～36小时；
(2)发酵剂制备：无菌条件下，将步骤(1)活化后的菌种分别接种在37～40℃脱脂乳培养基中，37～43℃保温箱中培养3～8小时，至活菌数达到107～108cfu/ml；
(3)灵芝菌种培养：将灵芝菌株(bncc190549或bncc143287或bncc185311或bncc143288)在28℃活化30min，接种至pda斜面培养基上，生化培养箱中28℃培养8～9天至斜面长满菌丝；将活化后的斜面菌种接种到装有pdb培养基的摇瓶中，28℃、180rpm培养8天；
(4)红豆芽浆制备：将红豆于23～28℃水中浸泡5～8小时，然后调节ph至5.1～6.0，加入0.08～0.15％谷氨酸钠，0.2～0.6mmol/lvb6，转入方形筛中，在23～29℃恒温培养箱中避光培养，芽茎长至3～4cm后收集发芽红豆，置于60～70℃烘箱中处理2～5小时，加入5～7倍质量的水进行热磨浆，分离后得红豆芽浆和红豆渣；
(5)山楂叶、荷叶和银杏叶的粉末制备：将山楂叶、荷叶和银杏叶洗净、晾干，分别置于60～70℃干燥箱中处理6～9小时后常温冷却，粉碎过60～100目筛，再超微粉碎至细度为300～500目；
(6)超声处理及酶解：将山楂叶、荷叶和银杏叶的粉末按质量比1～3:1～2:1混合，分散于8～12倍质量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中，缓冲液的ph为3.5～4.6，向缓冲液中加入15～25％的红豆渣，250～300w超声处理15～30min；向上述溶液中加入0.01～0.05％、活力10000～100000u/g的纤维素酶和0.005～0.01％、活力为20000～100000u/g的果胶酶，35～50℃酶解3～10小时，酶解过程中以90～100rpm速度搅拌，酶解反应结束后将ph调至5.5～6.5，制得富含黄酮类物质的混合酶解液；
(7)深层发酵培养液配制：将步骤(6)制得的酶解液装于发酵罐中，装液量为发酵罐体积的40～60％，按质量比添加蔗糖2.0～3.0％、葡萄糖1.0～2.0％、硫酸锌0.001％、大豆肽粉0.1～0.5％、玉米粉1.0～3.0％、的谷胺酸钠0.10～0.15％，混合均匀，加热至75～85℃，保温20～30min杀菌；
(8)灵芝菌丝种子液接种、发酵：将步骤(7)的发酵液冷却至29℃后，按质量比或体积比加入灵芝菌丝种子液10～15％，27～29℃通气搅拌培养36～48h，再25～26℃下通气搅拌培养48～96h，搅拌速度为200～250rpm，通气速度为10～25l/min；
(9)配料、杀菌：将步骤(8)制得的灵芝菌丝发酵液的ph调至6.8～7.0，按质量比2～3:1与红豆芽浆混合，再按混合液的总质量加入10～13％的脱脂奶粉、6.0～8.0％的蔗糖，混合均匀后，先用胶体磨磨3～4次，加热至50～65℃，再用高压均质机，在20～25mpa的压力下均质，均质结束后，加热至75～90℃，保温杀菌15～25min；
(10)接种乳酸菌、发酵：将步骤(9)制得的发酵液冷却至38～43℃后，按质量比加入2.0～3.0％的植物乳杆菌发酵剂、2.0～3.0％的短乳杆菌发酵剂、1.5～3.0％的保加利亚乳杆菌发酵剂、2.5～3.5％的嗜热链球菌发酵剂，混合均匀后，分装至经杀菌的200～250ml玻璃瓶或塑料杯中、封口，置于37～42℃发酵箱或发酵室内，保温培养3～5小时后，移入4～8℃冰箱或冷藏室内，经6～12小时发酵成熟，制得富含功能因子的风味酸奶。
进一步的，步骤(1)中所述mrs液体培养基由以下配方制得：蛋白胨l0g，牛肉膏l0g，酵母提取物5g，k2hpo42g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖20g，吐温-80ml，mgso4·7h2o0.5g，mnso40.25g，溶于1l蒸馏水，调ph至6.2～6.4，121℃灭菌20min。
进一步的，步骤(3)中所述pda斜面培养基由以下方法制得：马铃薯200～250g去皮、切片、加水1000ml，煮沸15～20分钟，取滤汁加琼脂20～25g继续煮，待琼脂全部溶解加入葡萄糖20～25g，搅拌至全部溶解，补水至1000ml，装入试管，装量为试管高度的1/5～1/4，塞上棉塞，1.05kg蒸气压保持20～25分钟灭菌摆成斜面。
进一步的，步骤(3)中所述的pdb培养基的配方如下：去皮马铃薯200g，葡萄糖25g，蒸馏水1000ml。
任一所述方法制得的富含功能因子的风味酸奶。
优选的，所述功能因子包括活性多糖、黄酮、γ-氨基丁酸和膳食纤维。
本发明的原理在于：(1)先将山楂叶、荷叶和银杏叶超微粉碎、配成液体，再加入红豆渣，并经超声波处理和纤维素酶解，能够促进植物叶片细胞壁的纤维素骨架降解，破坏细胞壁骨架结构，加速细胞内黄酮类物质等功能性成分释放；(2)通过灵芝菌丝孢子发酵产生β-葡萄糖苷酶，把黄酮苷类物质分解为易被肠道吸收的黄酮苷元，同时产生多糖等功能因子；(3)灵芝菌丝发酵培养结束后，再加入脱脂奶粉、蔗糖及富含γ-氨基丁酸的红豆芽浆，混合均匀后，经胶体磨匀浆、高压均质机均质、杀菌、冷却后，接种乳酸菌发酵剂，混匀、发酵培养，在发酵过程中，植物乳杆菌分泌出β-葡萄糖苷酶，促进黄酮苷类物质转化为黄酮苷元，短乳杆菌能够把配料中的谷氨酸钠转化为γ-氨基丁酸；(4)通过灵芝与乳酸菌分步发酵转化，显著提高了植物源黄酮类物质的生物活性，利用红豆发芽与短乳杆菌发酵等生物转化法，促进了γ-氨基丁酸的产生，制得富含活性多糖、黄酮、γ-氨基丁酸及膳食纤维等功能因子，具有抗氧化、抗疲劳及免疫调节等功能的灵芝风味酸奶制品。
有益效果：(1)本发明所述风味酸奶富含活性多糖、黄酮、γ-氨基丁酸和膳食纤维等功能因子；(2)本发明所述风味酸奶具有抗氧化、抗疲劳和免疫调节等功能；(3)本发明所述风味酸奶的制备方法通过超声处理、酶解及分步发酵等步骤实现有效成分的生物转化，提高植物源黄酮类物质的生物活性；(4)本发明所述方法为特色风味功能性酸奶的开发提供了思路，也为山楂叶、荷叶和银杏叶的深度加工、利用探索了一条经济实用的途径。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改和替换，均属于本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
一、实验测定方法
1、总黄酮类化合物及苷元含量的测定
(1)标准曲线的绘制：精密称取芦丁对照品200mg，加70％(v/v)乙醇溶解后，定容至100ml。精密吸取10ml，用蒸馏水定容至100ml，得到0.2mg/ml的标准溶液。精密吸取标准溶液0ml、0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml、2.0ml、2.4ml，分别置于10ml量瓶中，加蒸馏水至2.4ml，加入5％亚硝酸钠溶液0.4ml，混匀，放置6min，加入10％硝酸铝0.40ml，摇匀，放置6min，加入4.3％氢氧化钠4.0ml，再加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15min，以试剂空白为对照。在500nm波长处测定吸收度a，以吸光度a为纵坐标、浓度c为横坐标，绘制芦丁浓度-吸收度标准曲线，作线性回归，得方程：c＝78.52a-0.7302(r＝0.9991)。
(2)黄酮类化合物含量测定：准确称取一定量的酸奶冷冻干燥后,放入烧杯中，加入一定量70％的乙醇，用玻璃棒搅成浆糊状，放入500ml带塞的烧杯中,用70％乙醇清洗烧杯和玻璃棒，洗液也倒入烧杯中，再加70％乙醇至250ml，然后用超声处理20分钟，过滤，然后用移液管吸取10ml滤液,用70％乙醇定容到100ml，按上述方法测定吸光度值,用标注曲线计算出黄酮类化合物的含量。
(3)黄酮苷元含量测定采用双波长光度法(依据钱丽丽等，双波长光度法测定染料木黄酮和黄豆苷元含量，中国粮油学报，2010年第7期)
2、多糖、γ-氨基丁酸及膳食纤维含量测定
(1)多糖含量测定：采用苯酚-硫酸法(依据丁钢强等,食品多糖含量不同测定方法的研究,实用预防医学，2000年，第7卷第5期，325-327页).
(2)γ-氨基丁酸(gaba)含量测定可采用以下二种方法：
(3)膳食纤维含量的测定(酶重量法)：样品经α-淀粉酶、蛋白酶和葡萄糖苷酶酶解、消化以去除蛋白质和淀粉，酶解液用乙醇沉淀、过滤，残渣用乙醇和丙酮洗涤，干燥后的物质即为总膳食纤维残渣，蛋白质、灰分和空白后即可计算出样品中的总膳食纤维含量(依据林赛君等，食品中总膳食纤维测定方法的改进,中国卫生检验杂志2013年10月第23卷第14期，2877-2879；胡彩霞等，乳及乳制品中膳食纤维测定方法的研究，中国食品工业，2010年第4期)。
3、抗氧化能力指标测定
(1)总抗氧化能力的测定：在氧化反应体系中添加酸奶粗提物，利用fenton反应体系产生羟自由基，以抗坏血酸作为阳性对照，反应结束后于510nm处测定吸光值；总抗氧化能力按下面的公式计算：
(2)超氧阴离子自由基的测定：在反应系统中，每升样品在37℃反应40min所抑制的超氧阴离子自由基相当于1mg的维生素c所抑制的超氧阴离子自由基的变化值为一个活力单位。
od1：对照管的吸光度；od2：测定管的吸光度；od3：标准管的吸光度。
(3)羟自由基的测定：fenton反应是最常见的产生羟自由基的化学反应，h2o2的量和fenton反应产生羟自由基成正比，当给予电子受体后，用gress试剂显色，形成红色物质，其呈色与羟自由基的多少成正比关系。
标准管浓度为8.824mmol/l；取样量为1ml；od1：对照管的吸光度；od2：测定管的吸光度；od3：标准管的吸光度；od4：空白管的吸光度。
4、免疫指标测定
(1)实验动物分组及灌胃
60只小鼠随机分成3组，每组20只。分别为正常对照组、环磷酰胺(cy)对照组、cy+酸奶组(实验组)。在小鼠适应一周后，开始灌胃，正常对照组和cy对照组每天灌胃生理盐水0.10ml/10g体重，实验组每天灌胃酸奶粗提物0.10ml/10g体重，连续30天。在灌胃的前5天，除正常对照组外，环磷酰胺(cy)对照组每日腹腔注射等容积的环磷酰胺100mg/kg体重。
(2)脏器指数计算公式
各组小鼠在末次给药24h后称重，尾静脉取血，脱颈椎处死小鼠后，剖取肝脏、脾脏和胸腺。用滤纸吸干在电子天平上称重计算脾指数和胸腺指数。
(3)吞噬指数测定
k：未经校正吞噬的指数；od1：2分钟时血标本od值；od2：20分钟时血标本od值。
5、抗疲劳实验
以市售酸奶对照组及本发明开发的酸奶低、中、高三个不同浓度剂量组灌胃小鼠25天后对其血清与肝脏的超氧化歧化酶(superoxidedismutasesod)活性、丙二醛(maleicdialdehydemda)含量及肌糖原、肝糖原、血清尿素氮、血乳酸水平等进行测试，并进行负重游泳实验，具体方法参考付云宝等方法[付云宝等，和田茴香籽总黄酮体内抗氧化抗疲劳试验研究，新疆师范大学学报(自然科学版，2013年12月，第32卷，第4期，33-38页]。
实施例1
一种富含功能因子的风味酸奶的制备方法，所述方法包括两次发酵：第一次发酵，以酶解后的山楂叶、荷叶、银杏叶和红豆渣为底物，接种灵芝发酵剂发酵；第二次发酵，在第一次发酵产物的基础上加入红豆芽浆、脱脂奶粉、蔗糖作为发酵底物，接种德氏乳杆菌保加利亚亚种、嗜热链球菌、植物乳杆菌和短乳杆菌发酵。
所述方法具体步骤如下：
(1)菌株活化：在无菌条件下，将德氏乳杆菌保加利亚亚种(bncc336436)、植物乳杆菌(bncc337796)、短乳杆菌(bncc337373)、嗜热链球菌(bncc187932)分别接种于mrs液体培养基中，分别在37℃的培养箱中培养30小时；
(2)发酵剂制备：无菌条件下，将步骤(1)活化后的菌种分别接种在37℃脱脂乳培养基中，37℃保温箱中培养6小时，至活菌数达到107cfu/ml；
(3)灵芝菌种培养：将灵芝菌株(bncc190549)在28℃活化30min，接种至pda斜面培养基上，生化培养箱中28℃培养8天至斜面长满菌丝；将活化后的斜面菌种接种到装有pdb培养基的摇瓶中，28℃、180rpm培养8天；
(4)红豆芽浆制备：将红豆于23℃水中浸泡7小时，然后调节ph至6.0，加入0.10％谷氨酸钠，0.2mmol/lvb6，转入方形筛中，在23℃恒温培养箱中避光培养，芽茎长至3～4cm后收集发芽红豆，置于60℃烘箱中处理4小时，加入5倍质量的水进行热磨浆，分离后得红豆芽浆和红豆渣；
(5)山楂叶、荷叶和银杏叶的粉末制备：将山楂叶、荷叶和银杏叶洗净、晾干，分别置于60℃干燥箱中处理8小时后常温冷却，粉碎过60目筛，再超微粉碎至细度为300目；
(6)超声处理及酶解：将山楂叶、荷叶和银杏叶的粉末按质量比1:1:1混合，分散于8倍质量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中，缓冲液的ph为3.5，向缓冲液中加入15％的红豆渣，250w超声处理30min；向上述溶液中加入0.04％、活力10000～20000u/g的纤维素酶和0.01％、活力为20000u/g的果胶酶，48℃酶解9小时，酶解过程中以90rpm速度搅拌，酶解反应结束后将ph调至6.5，制得富含黄酮类物质的混合酶解液；
(7)深层发酵培养液配制：将步骤(6)制得的酶解液装于发酵罐中，装液量为发酵罐体积的45％，按质量比添加蔗糖2.0％、葡萄糖2.0％、硫酸锌0.001％、大豆肽粉0.1％、玉米粉1.0％、的谷胺酸钠0.10％，混合均匀，加热至75℃，保温30min杀菌；
(8)灵芝菌丝种子液接种、发酵：将步骤(7)的发酵液冷却至29℃后，按质量比或体积比加入灵芝菌丝种子液10％，28℃通气搅拌培养42h，再26℃下通气搅拌培养48h，搅拌速度为200rpm，通气速度为15l/min；
(9)配料、杀菌：将步骤(8)制得的灵芝菌丝发酵液的ph调至6.8，按质量比2:1与红豆芽浆混合，再按混合液的总质量加入10％的脱脂奶粉、6.0％的蔗糖，混合均匀后，先用胶体磨磨3次，加热至50℃，再用高压均质机，在20mpa的压力下均质，均质结束后，加热至75℃，保温杀菌25min；
(10)接种乳酸菌、发酵：将步骤(9)制得的发酵液冷却至43℃后，按质量比加入2.0％的植物乳杆菌发酵剂、2.0％的短乳杆菌发酵剂、1.5％的保加利亚乳杆菌发酵剂、2.5％的嗜热链球菌发酵剂，混合均匀后，分装至经杀菌的200ml玻璃瓶或塑料杯中、封口，置于42℃发酵箱或发酵室内，保温培养3小时后，移入4℃冰箱或冷藏室内，经6小时发酵成熟，制得富含功能因子的风味酸奶。
步骤(1)中所述mrs液体培养基由以下配方制得：蛋白胨l0g，牛肉膏l0g，酵母提取物5g，k2hpo42g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖20g，吐温-80ml，mgso4·7h2o0.5g，mnso40.25g，溶于1l蒸馏水，调ph至6.2，121℃灭菌20min。
步骤(3)中所述pda斜面培养基由以下方法制得：马铃薯200g去皮、切片、加水1000ml，煮沸15分钟，取滤汁加琼脂20g继续煮，待琼脂全部溶解加入葡萄糖20g，搅拌至全部溶解，补水至1000ml，装入试管，装量为试管高度的1/5，塞上棉塞，1.05kg蒸气压保持20分钟灭菌摆成斜面。
步骤(3)中所述的pdb培养基的配方如下：去皮马铃薯200g，葡萄糖25g，蒸馏水1000ml。
任一所述方法制得的富含功能因子的风味酸奶。所述功能因子包括活性多糖、黄酮、γ-氨基丁酸和膳食纤维。
实施例2
与实施例1的区别在于：
步骤(1)菌株活化：在无菌条件下，将德氏乳杆菌保加利亚亚种(bncc187941)、植物乳杆菌(bncc192556)、短乳杆菌(bncc181703)、嗜热链球菌(bncc186629或bncc175937)分别接种于mrs液体培养基中，分别在38℃的培养箱中培养24小时；
步骤(2)发酵剂制备：无菌条件下，将步骤(1)活化后的菌种分别接种在37℃脱脂乳培养基中，39℃保温箱中培养4小时，至活菌数达到107cfu/ml。
实施例3
与实施例1的区别在于：
步骤(3)灵芝菌种培养：将灵芝菌株(bncc185311)在28℃活化30min，接种至pda斜面培养基上，生化培养箱中28℃培养9天至斜面长满菌丝；将活化后的斜面菌种接种到装有pdb培养基的摇瓶中，28℃、180rpm培养8天；
步骤(4)红豆芽浆制备：将红豆于26℃水中浸泡5小时，然后调节ph至5.7，加入0.12％谷氨酸钠，0.4mmol/lvb6，转入方形筛中，在26℃恒温培养箱中避光培养，芽茎长至3～4cm后收集发芽红豆，置于60℃烘箱中处理4小时，加入6倍质量的水进行热磨浆，分离后得红豆芽浆和红豆渣。
实施例4
与实施例1的区别在于：
步骤(5)山楂叶、荷叶和银杏叶的粉末制备：将山楂叶、荷叶和银杏叶洗净、晾干，分别置于65℃干燥箱中处理7小时后常温冷却，粉碎过100目筛，再超微粉碎至细度为400目；
步骤(6)超声处理及酶解：将山楂叶、荷叶和银杏叶的粉末按质量比2:1:1混合，分散于9～10倍质量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中，缓冲液的ph为4.0，向缓冲液中加入20％的红豆渣，300w超声处理30min；向上述溶液中加入0.03％、活力30000u/g的纤维素酶和0.006％、活力为50000u/g的果胶酶，37℃酶解8小时，酶解过程中以95rpm速度搅拌，酶解反应结束后将ph调至6.0，制得富含黄酮类物质的混合酶解液。
实施例5
与实施例1的区别在于：
步骤(7)深层发酵培养液配制：将步骤(6)制得的酶解液装于发酵罐中，装液量为发酵罐体积的50％，按质量比添加蔗糖3.0％、葡萄糖1.0％、硫酸锌0.001％、大豆肽粉0.3％、玉米粉2.0％、的谷胺酸钠0.12％，混合均匀，加热至80℃，保温20min杀菌；
步骤(8)灵芝菌丝种子液接种、发酵：将步骤(7)的发酵液冷却至29℃后，按质量比或体积比加入灵芝菌丝种子液12％，29℃通气搅拌培养40h，再25℃下通气搅拌培养72h，搅拌速度为230rpm，通气速度为20l/min。
实施例6
与实施例1的区别在于：
步骤(9)配料、杀菌：将步骤(8)制得的灵芝菌丝发酵液的ph调至7.0，按质量比3:1与红豆芽浆混合，再按混合液的总质量加入13％的脱脂奶粉、7.0％的蔗糖，混合均匀后，先用胶体磨磨4次，加热至65℃，再用高压均质机，在25mpa的压力下均质，均质结束后，加热至85℃，保温杀菌15min；
步骤(10)接种乳酸菌、发酵：将步骤(9)制得的发酵液冷却至38～40℃后，按质量比加入3.0％的植物乳杆菌发酵剂、3.0％的短乳杆菌发酵剂、3.0％的保加利亚乳杆菌发酵剂、3.0％的嗜热链球菌发酵剂，混合均匀后，分装至经杀菌的250ml玻璃瓶或塑料杯中、封口，置于37℃发酵箱或发酵室内，保温培养5小时后，移入8℃冰箱或冷藏室内，经12小时发酵成熟，制得富含功能因子的风味酸奶。
检测实施例1～6制备获得的富含功能因子的风味酸奶中各功能因子的含量，结果如下表所示：