本发明属于酵素制备技术领域，尤其涉及一种覆盆子酵素的制备方法。
背景技术：
覆盆子，中药名。别称：覆盆、乌藨子、小托盘、树莓。夏初果实由绿变绿黄时采收。入药部位：干燥果实；性味：味甘、酸，性温；归经：归肝、肾、膀胱经；功效：益肾固精缩尿，养肝明目；主治：用于遗精滑精，遗尿尿频，阳痿早泄，目暗昏花。用法用量：6～12g。具有益肾固精缩尿，养肝明目之功效。常用于遗精滑精，遗尿尿频，阳痿早泄，目暗昏花。《本草通玄》：“覆盆子，甘平入肾，起阳治痿，固精摄溺，强肾而无燥热之偏，固精而无疑涩之害，金玉之品也。”覆盆子能有效缓解心绞痛等心血管疾病，但有时会造成轻微的腹泻。果实酸甜，有“黄金水果”的美誉，含有丰富的水杨酸、酚酸等物质，长期食用能有效地保护心脏，预防高血压、血管壁粥样硬化、心脑血管脆化等心脑血管疾病。
酵素又称为“酶”，酵素是比细胞单位更小的一种蛋白质，是一种带有生物催化作用的特殊蛋白质。它承担人体内新陈代谢中各种生化变化的媒介体，凡细胞的代谢、新生、分解、消化等等，都少不了它。有酵素才有生命；没有酵素则意味着生命即将步向死亡。酶在酵素产品中没有直接作用，首先微生物的酶催化效率不具有人体内同类酶的独特性和高效性；第二人体内的酶具有特定的器官定位，组织定位和亚细胞定位，这些定位是遗传决定的，外来酶不能特异定位；第三，外来酶容易被消化系统水解，也易被免疫系统识别而降解；第四，酶的稳定性差，长时间和高温，高压，过酸过碱性等易失活。
酵素是指以一种或多种植物、蔬果、种子、草药、海藻等纯植物为原料，经多种有益菌发酵而产生的，含有丰富的维生素、酶、矿物质和次生代谢产物等营养成分的功能性微生物发酵产品。酵素产品是生物原料经微生物发酵或生物转化形成的，具有一定生物学功能的生物制剂。但是，选用的原料不相同，具体的制备方法因厂家不同而各异，其主要成分也有差异。酵素的具体作用和配方有关，都是通过形成的生理活性成分刺激细胞基因表达，产生一些酶，抑制基因表达，降低一些酶活性，从而调节代谢。
其实，做酵素产品有四个主要目的：(1)为了更有效的利用食材，由于环境污染、农药残留、抗生素、工作压力，人体的益生菌群已经受到较大破坏，难于有效转化食材合成代谢调节物质，而体外益生菌发酵提供了这样一个平台；(2)有利于物质提取，溶于水；(3)有利于有害物质的清除转化，降低毒性；(4)有利于保鲜，延缓有效成分的失活。
酵素制作的过程，就是把消化道的转化体系放到体外，利用好的益生菌体系，更有效的完成物质的转化。酵素的制作主要有三种方法：(1)经典制作法，原材料加红糖和水制作，最早出现于中国晋代，公元453年的红茶菌就是最早的。乐素坤就是参考这个做的。(2)水果蔬菜等等原材料加糖的制作法，由日本人参考红茶菌而推出的方法，目前台湾、日本多用这种方法。(3)原材料加糖和益生菌发酵制作法，这是酵素制作新方法。尤其是加蜂蜜和植物源乳杆菌发酵的方法，比较有利于益生菌生长和功能物质的合成与转化。
新方法酵素制作的特点：(1)配方，根据自古以来食药用配方传承、古代现代食药用材料组成和功能特点，设计了在功能上有针对性的酵素主材配方，在微生物发酵过程中，为功能物质的转化和合成提供了有利基础；(2)益生菌，根据主材原料使用有利于功能物质提取、转化和合成的益生菌体系，为功能物质的形成提供了催化剂；(3)工艺，根据现代发酵技术，选用了适应于益生菌生长和物质转化的发酵体系和发酵工艺，使功能物质的形成和有害物质的清除达到最优的发酵条件和发酵时间。
发酵赋予了酵素四大类功能：(1)由原料配方本身决定的功能，这部分功能一般不易被益生菌转化；(2)由原料经益生菌转化而形成的新的物质而决定的功能，没有特定的原材料、特定的益生菌难于形成这样的物质；(3)由益生菌合成的物质所决定的功能，这样的功能物质只与益生菌有关；(4)益生菌本身的细胞结构物质决定的功能。果汁只有第一种功能，而益生菌制剂只有后两种功能。所以，酵素可以让消费者最有效的利用主材原料提供的营养成分，激活人体细胞相应的酶的基因表达，提高代谢活力。
酵素的功能主要取决于以下几个方面：(1)科学的主材配方，不是种类越多越好，种类少了，单个成分达不到需求阈值，等于没有功能，而种类多了互克的风险增加，产生毒素的风险增大；(2)合适的菌种，不接菌种的话有害菌容易生长，不能提供确定的菌的功能，接益生菌可以有利于物质转化为对人体有益的东西，改善机体或环境菌群，赋予预定功能；(3)科学的发酵技术，有利于功能物质合成，有害物质转化，减少有害菌滋生风险，微生物生长迅速，代谢旺盛，短期内就可以完成物质转化；(4)高品质的原料。
酵素的活性因年龄而异，由出生的婴儿到幼儿期之间，酵素的活性是增加并不断增进；进入中年之后，由于生活方式和环境污染等问题，酵素的活性下降、代谢功能也因年龄不断衰退。本来人体中所需的酵素是完全可以从日常的果蔬植物食物中摄取到，然而酵素是非常脆弱的，它在60度以上就会完全失去活性。喜欢加热烹调的中国人，之所以严重缺乏酵素主要是这个原因。
技术实现要素：
本发明的目的在于：针对上述存在的问题，提供一种覆盆子酵素的制备方法。本发明覆盆子酵素蛋白酶酶活力较高，营养价值丰富，服用更方便，胞外多糖、乳酸菌等有益成分显著增加；还加入了葡萄汁：哈密瓜汁：金银花粉，增加了覆盆子酵素产品的口感，使得形成的产品口味容易被消费者接受。本发明很好的利用了覆盆子的营养价值，拓展了覆盆子的潜在价值，为人们提供了一种口感俱佳、营养价值极高的覆盆子酵素产品，且对心脏病、肝病等慢性病有一定的预防作用，有疏肝醒脾、补血之功效，长期食用亦可嫩滑皮肤，起到美白养颜的作用。
为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：
一种覆盆子酵素的制备方法，包括以下步骤：
(1)筛选：选择新鲜、大个、成熟的覆盆子，经过筛选，去掉覆盆子梗、叶及其他异物，洗净放置筛网上沥干；
(2)护色：将覆盆子倒入护色溶液中进行护色处理，浸泡3～5h后取出，放置筛网上沥干；
(3)粉碎过筛：将步骤(2)的覆盆子与饮用水按照重量比为1：1混合后进行高速匀浆处理，过100～200目后将未过筛的覆盆子与饮用水以2：1混合后再进行高速匀浆处理，得到均匀覆盆子糊；
(4)发酵前处理：向覆盆子糊中加入已经酶解处理及酶灭活处理的果胶酶，果胶酶加入量为1500u/g，果胶酶多糖含量是2.5％，混合均匀后经灭菌处理，得到无菌覆盆子酶解液；
(5)第一次植菌：向步骤(4)的无菌覆盆子酶解液加入其重量3～5％的酿酒酵母，置于30～35℃条件下发酵6～10d，每天搅拌两次，发酵结束后过100～200目筛即得一次滤液；
(6)第二次植菌：向步骤(5)的一次滤液中加入其重量7～10％的山楂酱、黄皮酱、葡萄汁、哈密瓜汁、金银花粉，混合均匀，搅拌状态下加入液酱混合物重量1.2～2％的醋酸菌培养液，发酵12～16d得到发酵液；
(7)第三次植菌：向步骤(6)的发酵液接入乳酸菌，置于32～36℃的发酵房中进行发酵，得到酵素液；
(8)上述酵素液再经过滤、检验合格、灌装，即得覆盆子酵素。
进一步地，在步骤(2)中，所述护色溶液由柠檬酸和水按照重量比3～7：100混合制得。
进一步地，在步骤(4)中，所述酶解处理的时间为2.5h，酶解温度为45℃，ph值为4.5。
进一步地，在步骤(5)中，所述酿酒酵母先在20～35℃条件下培养1.5～3d。
进一步地，在步骤(6)中，所述山楂酱：黄皮酱：葡萄汁：哈密瓜汁：金银花粉：枸杞粉：龙眼粉：红枣粉＝1：1：1：1：1：1：1：1；所述醋酸菌培养液为醋酸菌在培养液中培养2～4d所得，培养温度为20～35℃，活菌数为108～109个/ml。
进一步地，在步骤(7)中，所述乳酸菌接种量为4.5～5.5％；所述酵素液ph＝5.5～6.5，蛋白酶酶活力值为945u/g。
进一步地，在步骤(7)中，所述发酵条件为：避光发酵6～8d。
本发明重用甘温的覆盆子为主要原料，具有补肝益肾、固精缩尿、明目的作用，含有丰富的水杨酸、酚酸等物质，长期食用能有效地保护心脏，预防高血压、血管壁粥样硬化、心脑血管脆化等心脑血管疾病；以山楂酱、黄皮酱、葡萄汁、哈密瓜汁、金银花粉、枸杞粉、龙眼粉、红枣粉作为辅料，采用本发明的制备方法得到的覆盆子酵素含有蛋白质、碳水化合物、多种天然维生素、矿物质、氨基酸和微量元素等。
覆盆子酵素可快速进入人体细胞中，改善细胞功能，并修复人体内受伤的细胞，加强全身代谢功能，对全身状态进行调整；分解血液中脂肪，帮助人体清除各器官组织中废物，改善各器官功能，对人体的多种慢性病，如：高血压、高血脂、糖尿病、风湿等有改善病情作用；有净化血液，分解血液中毒素，改善血液粘稠度，帮助人体抗氧化，清除自由基，改善人体免疫功能，消除疲劳，并能帮助人体皮肤除斑、消痘。改善皮肤弹性；酵素对人体细胞有激活作用，排除死亡细胞，促进健康细胞再生的分裂，使全身内分泌协调，使人体健康达到一个新水平。特别适用于(1)体弱多病者；(2)工作繁忙，压力大者；(3)睡眠不足者；(4)肠胃功能欠佳，面色偏黑或暗疮斑点者；(5)血粘度高，血脂高或血糖高者；(6)脑血栓，脑中风者等。营养专家指出，人们在补充维生素和补钙的同时，还应该补充一些酵素，虽然它不是营养素，但酵素中含有各种各样的酶，营养素需要在它的帮助下，才能被身体分解、吸收和利用。所以，补充酵素是人类营养的新概念，是辅助治疗疾病的新方法，可以增强抵抗力，起到养生保健的作用。
本发明实验设备：粉碎机；搅拌机；温度控制器；双列四孔恒温水浴锅：常州市国立试验设备研究所hh-s4；高温高压灭菌机：杭州科晓化工仪器设备有限公司yxq-ls；无菌操作台：苏州亿达净化实验室设备有限公司；酶标仪：美国伯腾仪器有限公司(biotek)cytation3。
本发明覆盆子多糖的测定方法：采用苯酚-硫酸法，多糖的百分含量＝通过标准曲线测得的葡萄糖含量/(多糖浓度×用于测吸光度所取的多糖体积)×％；蛋白酶酶活力测定方法：采用国标sb/t10317-1999测定发酵液中的蛋白酶的酶活力值。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
(1)本发明选用对人体肠道有益的益生菌株，严格控制发酵温度，有效降低了覆盆子中有效成分的损失，最大限度的保留了覆盆子酵素活性；利用三次植入优势菌，有效抑制了其它杂菌的滋生，保证产品质量的稳定，并选择嗜酸、嗜热、植物乳杆菌，这些菌株已被证实具有共生性能，混合发酵可在肠道中定植，同时有利于提升酵素产品的综合活性。制备得到的覆盆子酵素对心脏病、肝病等慢性病有一定的预防作用，有疏肝醒脾、补血之功效，长期食用亦可嫩滑皮肤，起到美白养颜的作用。
(2)本发明制备条件模拟酵素的自然生成条件，原理科学，设备简单适于大规模生产，得到的覆盆子酵素绝不含人工色素、化学香料及防腐剂，是无毒副作用的保健食品，具有纯天然特点。酵素的主要成分除多种食用酵素外，还有微量元素、矿物质、多种天然维生素、氨基酸、蛋白质、碳水化合物等；具有减轻肠道负荷，激活健康循环体系，调节微生态平衡，增强人体细胞活力，净化血液，促进新陈代谢，启发人体细胞活力，增强新陈代谢功能，提升机体年轻化的作用。可以广泛用于保健品或化妆及美容产品。
(3)本发明覆盆子酵素蛋白酶酶活力较高，营养价值丰富，服用更方便，胞外多糖、乳酸菌等有益成分显著增加；还加入了葡萄汁：哈密瓜汁：金银花粉，增加了覆盆子酵素产品的口感，使得形成的产品口味容易被消费者接受。本发明很好的利用了覆盆子的营养价值，拓展了覆盆子的潜在价值，为人们提供了一种口感俱佳、营养价值极高的覆盆子酵素产品。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下举出优选实施例，对本发明进一步详细说明。然而，需要说明的是，说明书中列出的许多细节仅仅是为了使读者对本发明的一个或多个方面有一个透彻的理解，即便没有这些特定的细节也可以实现本发明的这些方面。
实施例1
一种覆盆子酵素的制备方法，包括以下步骤：
(1)筛选：选择新鲜、大个、成熟的覆盆子，经过筛选，去掉覆盆子梗、叶及其他异物，洗净放置筛网上沥干；
(2)护色：将覆盆子倒入护色溶液中进行护色处理，浸泡5h后取出，放置筛网上沥干；所述护色溶液由柠檬酸和水按照重量比7：100混合制得；
(3)粉碎过筛：将步骤(2)的覆盆子与饮用水按照重量比为1：1混合后进行高速匀浆处理，过200目后将未过筛的覆盆子与饮用水以2：1混合后再进行高速匀浆处理，得到均匀覆盆子糊；
(4)发酵前处理：向覆盆子糊中加入已经酶解处理及酶灭活处理的果胶酶，果胶酶加入量为1500u/g，果胶酶多糖含量是2.5％，混合均匀后经灭菌处理，得到无菌覆盆子酶解液；所述酶解处理的时间为2.5h，酶解温度为45℃，ph值为4.5；
(5)第一次植菌：向步骤(4)的无菌覆盆子酶解液加入其重量5％的酿酒酵母，置于35℃条件下发酵10d，每天搅拌两次，发酵结束后过200目筛即得一次滤液；所述酿酒酵母先在35℃条件下培养3d；
(6)第二次植菌：向步骤(5)的一次滤液中加入其重量10％的山楂酱、黄皮酱、葡萄汁、哈密瓜汁、金银花粉，混合均匀，搅拌状态下加入液酱混合物重量2％的醋酸菌培养液，发酵16d得到发酵液；所述山楂酱：黄皮酱：葡萄汁：哈密瓜汁：金银花粉：枸杞粉：龙眼粉：红枣粉＝1：1：1：1：1：1：1：1；所述醋酸菌培养液为醋酸菌在培养液中培养4d所得，培养温度为35℃，活菌数为108～109个/ml；
(7)第三次植菌：向步骤(6)的发酵液接入乳酸菌，置于36℃的发酵房中进行发酵，得到酵素液；所述乳酸菌接种量为5.5％；所述酵素液ph＝5.5～6.5，蛋白酶酶活力值为945u/g；所述发酵条件为：避光发酵8d；
(8)上述酵素液再经过滤、检验合格、灌装，即得覆盆子酵素。
实施例2
一种覆盆子酵素的制备方法，包括以下步骤：
(1)筛选：选择新鲜、大个、成熟的覆盆子，经过筛选，去掉覆盆子梗、叶及其他异物，洗净放置筛网上沥干；
(2)护色：将覆盆子倒入护色溶液中进行护色处理，浸泡3h后取出，放置筛网上沥干；所述护色溶液由柠檬酸和水按照重量比3：100混合制得；
(3)粉碎过筛：将步骤(2)的覆盆子与饮用水按照重量比为1：1混合后进行高速匀浆处理，过100目后将未过筛的覆盆子与饮用水以2：1混合后再进行高速匀浆处理，得到均匀覆盆子糊；
(4)发酵前处理：向覆盆子糊中加入已经酶解处理及酶灭活处理的果胶酶，果胶酶加入量为1500u/g，果胶酶多糖含量是2.5％，混合均匀后经灭菌处理，得到无菌覆盆子酶解液；所述酶解处理的时间为2.5h，酶解温度为45℃，ph值为4.5；
(5)第一次植菌：向步骤(4)的无菌覆盆子酶解液加入其重量3％的酿酒酵母，置于30℃条件下发酵6d，每天搅拌两次，发酵结束后过100目筛即得一次滤液；所述酿酒酵母先在20℃条件下培养1.5d；
(6)第二次植菌：向步骤(5)的一次滤液中加入其重量7％的山楂酱、黄皮酱、葡萄汁、哈密瓜汁、金银花粉，混合均匀，搅拌状态下加入液酱混合物重量1.2％的醋酸菌培养液，发酵12d得到发酵液；所述山楂酱：黄皮酱：葡萄汁：哈密瓜汁：金银花粉：枸杞粉：龙眼粉：红枣粉＝1：1：1：1：1：1：1：1；所述醋酸菌培养液为醋酸菌在培养液中培养2d所得，培养温度为20℃，活菌数为108～109个/ml；
(7)第三次植菌：向步骤(6)的发酵液接入乳酸菌，置于32℃的发酵房中进行发酵，得到酵素液；所述乳酸菌接种量为4.5％；所述酵素液ph＝5.5～6.5，蛋白酶酶活力值为945u/g；所述发酵条件为：避光发酵6d；
(8)上述酵素液再经过滤、检验合格、灌装，即得覆盆子酵素。
实施例3
一种覆盆子酵素的制备方法，包括以下步骤：
(1)筛选：选择新鲜、大个、成熟的覆盆子，经过筛选，去掉覆盆子梗、叶及其他异物，洗净放置筛网上沥干；
(2)护色：将覆盆子倒入护色溶液中进行护色处理，浸泡4h后取出，放置筛网上沥干；所述护色溶液由柠檬酸和水按照重量比5：100混合制得；
(3)粉碎过筛：将步骤(2)的覆盆子与饮用水按照重量比为1：1混合后进行高速匀浆处理，过150目后将未过筛的覆盆子与饮用水以2：1混合后再进行高速匀浆处理，得到均匀覆盆子糊；
(4)发酵前处理：向覆盆子糊中加入已经酶解处理及酶灭活处理的果胶酶，果胶酶加入量为1500u/g，果胶酶多糖含量是2.5％，混合均匀后经灭菌处理，得到无菌覆盆子酶解液；所述酶解处理的时间为2.5h，酶解温度为45℃，ph值为4.5；
(5)第一次植菌：向步骤(4)的无菌覆盆子酶解液加入其重量4％的酿酒酵母，置于32℃条件下发酵8d，每天搅拌两次，发酵结束后过150目筛即得一次滤液；所述酿酒酵母先在29℃条件下培养2.3d；
(6)第二次植菌：向步骤(5)的一次滤液中加入其重量8％的山楂酱、黄皮酱、葡萄汁、哈密瓜汁、金银花粉，混合均匀，搅拌状态下加入液酱混合物重量1.6％的醋酸菌培养液，发酵14d得到发酵液；所述山楂酱：黄皮酱：葡萄汁：哈密瓜汁：金银花粉：枸杞粉：龙眼粉：红枣粉＝1：1：1：1：1：1：1：1；所述醋酸菌培养液为醋酸菌在培养液中培养3d所得，培养温度为28℃，活菌数为108～109个/ml；
(7)第三次植菌：向步骤(6)的发酵液接入乳酸菌，置于34℃的发酵房中进行发酵，得到酵素液；所述乳酸菌接种量为5.0％；所述酵素液ph＝5.5～6.5，蛋白酶酶活力值为945u/g；所述发酵条件为：避光发酵7d；
(8)上述酵素液再经过滤、检验合格、灌装，即得覆盆子酵素。
综上所述，本发明选用对人体肠道有益的益生菌株，严格控制发酵温度，有效降低了覆盆子中有效成分的损失，最大限度的保留了覆盆子酵素活性；利用三次植入优势菌，有效抑制了其它杂菌的滋生，保证产品质量的稳定，并选择嗜酸、嗜热、植物乳杆菌，这些菌株已被证实具有共生性能，混合发酵可在肠道中定植，同时有利于提升酵素产品的综合活性。本发明制备条件模拟酵素的自然生成条件，原理科学，设备简单适于大规模生产，得到的覆盆子酵素绝不含人工色素、化学香料及防腐剂，是无毒副作用的保健食品，具有纯天然特点。酵素的主要成分除多种食用酵素外，还有微量元素、矿物质、多种天然维生素、氨基酸、蛋白质、碳水化合物等。本发明覆盆子酵素蛋白酶酶活力较高，营养价值丰富，服用更方便，胞外多糖、乳酸菌等有益成分显著增加；还加入了葡萄汁：哈密瓜汁：金银花粉，增加了覆盆子酵素产品的口感，使得形成的产品口味容易被消费者接受。本发明很好的利用了覆盆子的营养价值，拓展了覆盆子的潜在价值，为人们提供了一种口感俱佳、营养价值极高的覆盆子酵素产品，具有减轻肠道负荷，激活健康循环体系，调节微生态平衡，增强人体细胞活力，净化血液，促进新陈代谢，启发人体细胞活力，增强新陈代谢功能，提升机体年轻化的作用，心脏病、肝病等慢性病有一定的预防作用，有疏肝醒脾、补血之功效，长期食用亦可嫩滑皮肤，起到美白养颜的作用，可以广泛用于保健品或化妆及美容产品。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。