一种母源性添加植物甾醇酯促进子代鸡生长的方法与流程

本发明属于饲料添加剂技术领域。更具体地，涉及一种母源性添加植物甾醇酯促进子代鸡生长的方法。

背景技术：

饲料添加剂是为了某些特殊需要，人为地在各种配合饲料或混合饲料中加入的具有不同用途的物质，其作用是完善和强化饲料的营养，促进动物生长发育、预防疾病、提高饲料的利用率和肉、蛋产品的质量等。家禽能够在较短生产周期内以较低的成本生产出营养丰富的肉产品，为人类主要的动物蛋白食品来源。因此，通过饲料添加剂途径，提高禽类肌肉生长潜力一直都是养禽业追求的重要目标。

植物甾醇酯一般是由植物甾醇与脂肪酸通过酯化反应或转酯化反应制得。目前主要的三种植物甾醇酯为β－谷甾醇酯，豆甾醇酯，菜油甾醇酯。近年来研究表明，甾醇酯能够在生物体内转化成甾醇和脂肪酸，它不仅能够改善植物甾醇的脂溶性，同时降胆固醇的作用优于植物甾醇(左春山等，2013)。植物甾醇酯复方产品能够显著降低sd雄性高脂大鼠血清胆固醇水平(何芳等，2007)。脂肪酸形式甾烷醇酯比游离的植物甾醇更有效降低血清胆固醇水平(malmstrometal.,2000)。这些研究提示，在促进胆固醇分解和降低胆固醇合成方面，植物甾醇酯可能发挥着重要作用。基于植物甾醇酯诸多的生理功能以及无毒无害性能，因此其作为降血脂功能因子可广泛应用于食品中，同时可减少乳化剂的使用。大多食品中均可添加植物甾醇酯以改善营养价值，并且已经作为一种新型添加剂在饲料生产上运用。

但是，目前尚未见有植物甾醇酯作为一种产蛋鸡饲料添加剂促进子代肌肉生长方面的报道，因此有一定的研究价值，以对生产实践提供可靠依据。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是克服现有植物甾醇酯在产蛋鸡饲料上应用的限制和不足，提供植物甾醇酯的一种新应用，即应用于提高子代鸡的活体体重和肌肉生长潜力，提高肌纤维的密度，也能起到改善肉品品质的作用，使得鸡肉产品在市场上具有更高的市场价值。

本发明的目的是提供植物甾醇酯在制备鸡饲料添加剂方面的应用。

本发明另一目的是提供一种包含有植物甾醇酯的鸡饲料添加剂。

本发明的再一目的是提供一种包含有植物甾醇酯的鸡饲料。

本发明的再一目的是提供一种母源性添加植物甾醇酯促进子代鸡生长的方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明通过动物饲养试验和屠宰试验，发现在产蛋鸡的无油脂日粮中添加植物甾醇酯，能够显著促进子代鸡活体体重和肌肉生长，如提高子代鸡的肌纤维密度和血清胰岛素生长因子的含量，提高子代公鸡血清甘油三酯的含量等等。

因此，植物甾醇酯在制备鸡饲料添加剂方面的应用，应在本发明的保护范围之内。

其中优选地，所述鸡为产蛋鸡。

优选地，所述饲料添加剂是能够促进子代鸡生长的饲料添加剂。

具体地，所述促进子代鸡生长具体是指提高子代鸡的体重、提高肌肉生长潜力、促进肌肉生长，提高子代鸡血清中生长相关激素的水平。

另外，更具体优选地，所述饲料添加剂是提高子代鸡体重和平均日增重、提高子代鸡的肌纤维密度(优选是提高子代母鸡腓肠肌肌纤维密度)、提高子代鸡肌肉生长因子蛋白表达、提高子代母鸡血清igf-1和胰岛素(insulin)含量、提高子代公鸡血清中tg和glu的含量和/或抑制子代母鸡血清中tg的含量的饲料添加剂。

其中，所述提高子代鸡的肌纤维密度是提高子代母鸡腓肠肌肌纤维密度。

所述提高子代鸡肌肉生长因子蛋白表达是提高子代母鸡decorin、fxr、myod、myogenin和tgr5的蛋白表达量。

另外，所述饲料添加剂是提高种鸡血清胆汁酸含量、促进肝脏中合成胆汁酸关键因子cyp7a1mrna的表达量、增加蛋内胆汁酸含量的饲料添加剂。

另外，更优选地，所述饲料是指无油脂饲料。即在鸡常规饲料中，以植物甾醇酯替换油脂添加。

具体地，所述植物甾醇酯可以为β－谷甾醇酯、豆甾醇酯或菜油甾醇酯中的一种或几种的混合物。

更具体地，可以为市购的植物甾醇酯产品，其中主要的成分包括：40％β－谷甾醇酯、20％豆甾醇酯、10％菜油甾醇酯。

另外，一种包含有植物甾醇酯的鸡饲料添加剂和鸡饲料，也都在本发明的保护范围之内。

具体优选地，所述鸡饲料添加剂和鸡饲料均为产蛋鸡的饲料添加剂和鸡饲料。

优选地，所述饲料添加剂是能够促进子代鸡生长的饲料添加剂。

所述鸡饲料还包含有常规的饲料原料。

所述常规的饲料原料可以为豆粕、玉米、鱼粉或其他杂粕型日粮。

优选地，所述植物甾醇酯占总饲料的质量比为1～10％。

更优选地，所述植物甾醇酯占总饲料的质量比为3～7％

最优选地，所述植物甾醇酯占总饲料的质量比为5％。

本发明同时提供了所述鸡饲料的制备方法，包括以下步骤：

s1.称量植物甾醇酯；

s2.制备无油脂饲料，

s3.步骤s1和s2中的植物甾醇酯与无油脂日粮混合，制得含有植物甾醇酯的全价鸡饲料。

其中，优选地，步骤s2所述无油脂饲料为产蛋期全价料中去除配方中油脂后得到的饲料。具体是将产蛋鸡饲料配方中去除油脂部分的其他饲料原料进行混合得到。

所述全价料参照常规，可优选豆粕、玉米、鱼粉或其他杂粕型日粮。

另外，本发明还提供一种母源性添加植物甾醇酯促进子代鸡生长的方法，具体是将植物甾醇酯代替油脂添加到产蛋鸡的日粮饲料中。

优选地，植物甾醇酯的添加比例为：占总饲料的质量比为1～10％。

优选地，植物甾醇酯的添加比例为：占总饲料的质量比为3～7％

更优选地，植物甾醇酯的添加比例为：占总饲料的质量比为5％。

本发明具有以下有益效果：

(1)本发明提供了植物甾醇酯一种重要的新应用。本发明首次公开植物甾醇酯能够增加子代鸡活体体重，增加子代母鸡肌纤维数量，促进子代鸡的生长性能，对优质鸡肉的饲养和发展具有重要意义。

(2)本发明提供了一种新的鸡饲料，添加了植物甾醇酯的鸡饲料是一种安全的饲料，它不含有对产蛋鸡群生长和健康有毒有害的物质。通常情况下，植物甾醇酯通过小肠后，90％转化为植物甾醇和脂肪酸，不会对人和周围环境产生有害影响，与一般的饲料添加剂相比，它能够显著提高子代生长及肌肉的发育，提高肌纤维的密度，也能起到改善肉品品质的作用，使得鸡肉产品在市场上具有更高的市场价值。

(3)本发明植物甾醇酯可以直接加入无油脂饲料中，添加过程方便快捷，制备方法简单，没有特殊设备要求，具有很好的推广应用前景。

附图说明

图1为植物甾醇酯对子代血清生长指标的影响图。

图2为植物甾醇酯对子代腓肠肌纤维密度的影响图。

图3为植物甾醇酯对子代腓肠肌肌肉生长因子蛋白表达的影响图。

图4为植物甾醇酯对蛋内胆汁酸和血清胆汁酸含量，种鸡肝脏胆汁酸合成关键酶cyp7a1mrna表达量的影响图。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。

除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

实施例1产蛋鸡鸡饲料

1、产蛋鸡鸡饲料的制备

(1)称量植物甾醇酯；

(2)制备无油脂日粮：产蛋鸡饲料配方中去除油脂部分的饲料，可采用常规的小型混合设备；无油脂饲料原料参照常规，可选粉碎的玉米、豆粕、鱼粉或其它杂粕型日粮；

(3)将步骤(2)得到的无油脂日粮与植物甾醇酯进行混合制得全价饲料，其中植物甾醇酯占全价饲料的5％。植物甾醇酯与无油脂饲料原料进行混合可采用常规的大型混合粉碎设备。

2、本实施例中，饲料各配方百分比组成如表1所示：

表1无油脂日粮配方和营养水平(％)

实施例2植物甾醇酯对子代体重和平均日增重以及血清激素的影响

1、为了研究植物甾醇酯作为饲料添加剂的效果，试验以白洛克种鸡为研究对象，试验选用体况良好，产蛋正常的36周龄白羽种鸡，随机分成两组，每组40个重复，每个重复1只鸡。其中对照组采用无油脂日粮+4.12％硬脂酸，处理组为无油脂日粮+5％植物甾醇酯(植物甾醇酯为市购的产品，其主要成分包括：40％β-谷甾醇酯，20％豆甾醇酯，10％菜油甾醇酯)。

预饲1周，试验期组间及各重复鸡群平均体重无显著差异(p<0.05)。试验采用单笼饲养，试验期内鸡限饲及自由饮水。试验期2周，从第3周开始，每天收集种蛋，进行孵化。

出壳后对雏鸡公母鉴定，并选取接近平均体重相近的出雏鸡，按照种鸡的处理进行分组。其中对于子代公鸡，对照组数量为57只，植物甾醇酯组数量为55只；对于子代母鸡，对照组数量为55只，植物甾醇酯数量为26只。饲养期间自由饮水采食，种鸡实验共计3周，子代鸡实验共计49d。

2、试验结果见表2和图1。图1是植物甾醇酯对子代血清生长相关激素的影响。从结果中可以看出，日粮中添加植物甾醇酯能够显著提高子代鸡21日龄和49日龄的体重以及平均日增重，能够显著促进子代母鸡血清igf-1和insulin的含量和子代公鸡血清中tg和glu的含量；抑制子代母鸡血清中tg的含量。

试验表明，日粮中添加植物甾醇酯能够显著提高子代体重，促进子代血清生长相关的激素水平。

表2植物甾醇酯对子代体重和平均日增重的影响

实施例3植物甾醇酯对子代肌纤维密度和成肌相关因子表达的影响

1、为了研究植物甾醇酯对子代肌纤维密度以及肌纤维发育相关因子的效果，在子代鸡试验期结束后禁食称重，翅静脉采血10ml，将血清45℃倾斜放置37℃恒温箱中孵育1小时，再转移至4℃冰箱中静置30分钟，最后3500r/min离心10min制备血清，用于测定血清激素和脂代谢指标，选取接近每组平均体重的鸡进行采样，公母分开，屠宰分离腿肌并称重。取腿肌中腓肠肌经液氮速冻后置于超低温冰箱保存用于制备肌纤维切片，采用细胞膜免疫荧光染色的方法，具体操作如下：

(1)将冰冻切片用4％的甲醛溶液固定15分钟。

(2)固定后的切片用pbs洗3次，每次5分钟。

(3)将洗好的切片放在通风橱内烘干15分钟。

(4)在每个切片上滴一滴细胞膜染色剂，染色20分钟。

(5)再用pbs洗3遍，每遍5分钟。

(6)用封片剂和盖玻片进行封片。

(7)去荧光显微镜上拍照。

2、结果如图2和图3所示。

实验结果表明，植物甾醇酯能够显著提高子代母鸡腓肠肌肌纤维密度(p<0.05)，而对子代公鸡腓肠肌肌纤维密度无显著影响。而且能够显著提高子代49日龄母鸡decorin、fxr、myod、myogenin和tgr5的蛋白表达量。

实施例4植物甾醇酯对种鸡血清和蛋内胆汁酸含量，以及胆汁酸合成相关的因子mrna表达的影响

1、为了研究植物甾醇酯对种鸡血清及蛋内胆汁酸含量的影响，我们收集了试验期第14天的种蛋，制备蛋内胆汁酸样品，具体方法如下：准确吸取蛋黄稀释液0.15g于2ml离心管中，按样品:无水乙醇＝1:9进行稀释，漩涡震荡30s后，转入离心机4000r/min离心10min。取上清600μl到1.5ml离心管中，再加入600μl无水乙醇，4000r/min离心1min，取上清得待测样品，-20℃保存。采用南京建成生物工程研究所公司的胆汁酸检测试剂盒进行总胆汁酸的含量检测。试验结束后采集所有种鸡肝脏分子样，经液氮运输，保存至超低温冰箱，做胆汁酸合成相关因子mrna表达量的检测。

2、结果如图4，试验结果表明植物甾醇酯能够显著提高种鸡血清胆汁酸含量，显著促进肝脏中合成胆汁酸关键因子cyp7a1mrna的表达量，显著增加蛋内胆汁酸含量。