一种从柑橘皮中同步分离和纯化β-隐黄素及豆甾醇的方法

文档序号:9779274阅读:733来源:国知局
一种从柑橘皮中同步分离和纯化β-隐黄素及豆甾醇的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及从柑橘皮中同步分离和纯化β-隐黄素及豆留醇的技术工艺和参数。
【背景技术】
[0002] β_隐黄素是类胡萝卜素中叶黄素的一种,具有抗癌、抗氧化、抑制骨质疏松等多种 生理功能,结构式如下:
[0004] 其主要存在于高等植物、真菌、蓝藻等中;近期研究表明,β-隐黄素还是一种良好 的维生素 A前体物质。
[0005] 植物留醇是一种存在于植物中的天然活性物质,是植物体构成细胞膜的成分之 一,也是多种激素、维生素 D及留体化合物合成的前体,具有抗癌、抗炎、抗氧化、降低血脂和 胆固醇、减少冠心病发生等生理功能。豆留醇是植物留醇的典型代表之一,结构式如下:
[0007] 其主要存在各类植物及油脂脱臭馏出物中。豆留醇除具有植物留醇的一般药理特 性外,还主要用于合成各种激素及维生素 D3,被广泛应用于生物及医药行业。由于柑橘皮来 源容易且成本较低,从橘皮中提取天然β-隐黄素成为获取β-隐黄素的主要途径;柑橘果皮 中除含有果胶、纤维素、色素外,还含有黄酮、留醇等生物活性物质,但目前关于从皮渣中提 取豆留醇的研究鲜见报道。
[0008] 以下文献中所记载的内容,可以作为β-隐黄素和豆甾醇的评判依据:1、刘玉朋.红 薯茎叶化学成分的提取分离与结构鉴定[D].吉林大学,2013;2、刘志华,杨志学.马蹄莲中 植物甾醇成分的分离与结构鉴定[J].中国药师,2007,10期:978-979. DOI :doi: 10.3969/ ]_.18811.1〇〇8-〇49乂.2〇〇7.1〇.〇15;3、井凤,王丽,徐双双,等.辣椒中0-隐黄质的分离制备 [J] ·食品科学,2013,第6期:10-13 ;4、Khachik,F,Chang,ANGana,A,Mazzola,E.Partial synthesis of(3R,6'R)-alpha-cryptoxanthin and(3R)-beta_cryptoxanthin from(3R, 3,R,6,R)-lutein[J].Journal of Natural Products,2007,70(2):220-226.

【发明内容】

[0009] 本发明提供一种从柑橘皮中同步分离和纯化β-隐黄素及豆留醇的方法,可同时获 得高纯度的隐黄素和豆甾醇。
[0010] 技术方案如下:
[0011] -种从柑橘皮中同步分离和纯化β-隐黄素及豆留醇的方法,其关键在于包括以下 步骤:
[0012] 步骤一、将柑橘皮干燥并磨粉;
[0013] 步骤二、用无水乙醇浸提预处理后的原料,减压浓缩得到总酯萃取物;
[0014] 步骤三、首先将所述总酯萃取物溶于正己烷中得到萃取物溶液,再向萃取物溶液 中加入KOH-乙醇溶液进行皂化反应,皂化反应完成后进行萃取,最后水洗并减压浓缩;
[0015] 步骤四、采用色谱法分离纯化,以β_隐黄素标准品为对照,收集同时含有甾醇及β_ 隐黄素的洗脱液;
[0016] 步骤五、将步骤四中得到的洗脱液进行浓缩,得到浓缩物;
[0017] 步骤六、首先选用正己烷-丙酮对步骤四中得到的洗脱液的浓缩物进行双溶剂法 结晶,结晶出豆甾醇晶体,再将上述去除豆甾醇晶体后的洗液进行再次浓缩,得到主要含β-隐黄素的浓缩物,最后选用乙醚-甲醇进行结晶,便可结晶出β-隐黄素晶体。
[0018] 上述步骤二中,在38~45°C的条件下对柑橘皮粉进行浸提。
[0019] 上述步骤三中,所述萃取物溶液的质量浓度为0.046~0.056%,所述KOH-乙醇溶 液的质量浓度为8~12%,所述萃取物溶液与KOH-乙醇溶液的体积比为1:1,皂化时间为 12h〇
[0020] 上述步骤三中,皂化反应完成后,加入等体积的正己烷进行萃取,分离得到正己烷 相,再用等体积的质量浓度为〇. 5 %的NaCl水溶液水洗正己烷相,最后减压浓缩。
[0021] 上述步骤四中,采用硅胶柱层析分离纯化,采用正己烷湿法装柱,采用正己烷:丙 酮:甲醇=92.5:7:0.5的体积比等度洗脱,并用薄层色谱法检测,收集与β-隐黄素标准品一 致的洗脱液。
[0022]上述步骤六中,结晶出豆留醇晶体后,用正己烷清洗晶体,直至晶体无色;再将溶 液进行浓缩干燥,最后选用乙醚-甲醇对干燥后的物质进行结晶,得到隐黄素晶体,并用 甲醇清洗晶体,直至甲醇清洗液无色为止。
[0023] 上述步骤四中薄层色谱的条件为:展开剂为石油醚:乙醚=7: 3,显色剂为10%硫 酸-无水乙醇,95°C烘烤2min。
[0024] 有益效果:采用本发明的一种从柑橘皮中同步分离和纯化β-隐黄素及豆甾醇的方 法,能同时从柑橘皮中提取出隐黄素和豆留醇,方法简单实用,分离效果好,分离产物纯 度高,适合工业化生产。
【附图说明】
[0025] 图1为本发明得到的流程图;
[0026] 图2为本发明得到的豆甾醇的红外光谱图;
[0027]图3为本发明得到的豆留醇的1H-NMR谱图;
[0028]图4为本发明得到的豆甾醇的13C-NMR谱图;
[0029]图5为本发明得到的β-隐黄素的1H-NMR谱图;
[0030]图6为β-隐黄素标准品的高效液相色谱图;
[0031 ]图7为本发明得到的β-隐黄素的高效液相色谱图;
[0032]图8本发明得到的β-隐黄素的显微照片;
[0033]图9本发明得到的豆甾醇的显微照片。
【具体实施方式】
[0034] 下面结合实施例对本发明作进一步说明。
[0035] -种从柑橘皮中同步分离纯化β-隐黄素及豆留醇的方法,包括以下步骤:
[0036]步骤一、将柑橘皮于40°C的温度条件下干燥并磨粉;
[0037]步骤二、在38~45°C的水浴锅中,用无水乙醇浸提预处理后的原料2次,合并提取 液,减压浓缩得到总酯萃取物;
[0038]步骤三、首先将所述总酯萃取物溶于正己烷中得到萃取物溶液,该萃取物溶液的 质量浓度为〇. 046~0.056 %,再向萃取物溶液中加入KOH-乙醇溶液进行皂化反应,该KOH-乙醇溶液的质量浓度为8~12%,所述萃取物溶液与KOH-乙醇溶液的体积比为1:1,皂化时 间为12h;皂化反应完成后,加入等体积的正己烷进行萃取,分离得到正己烷相,再用等体积 的质量浓度为〇. 5 %的NaCl水溶液水洗正己烷相,最后减压浓缩。
[0039] 步骤四、采用硅胶柱层析分离纯化,采用正己烷湿法装柱,采用正己烷:丙酮:甲醇 = 92.5:7:0.5的体积比等度洗脱,并用薄层色谱法检测,以β-隐黄素标准品为对照,收集主 要含β-隐黄素标准品和豆留醇的洗脱液;
[0040] 所述薄层色谱的条件为:展开剂为石油醚:乙醚=7:3,显色剂为10 %硫酸-无水乙 醇,95°C 烘烤 2min。
[0041]步骤五、首先选用正己烷-丙酮对所述洗脱液的浓缩物进行双溶剂法结晶,其中丙 酮为豆留醇的良溶剂,正己烷为豆留醇的不良溶剂,于25°C条件下结晶出豆留醇晶体,用正 己烷清洗晶体,直至晶体无色;
[0042]再将溶液进行浓缩干燥,最后选用乙醚-甲醇对干燥后的物质进行结晶,其中乙醚 为β-隐黄素晶体的良溶剂,甲醇为β-隐黄素的不良溶剂,于25°C条件下结晶得到β_隐黄素 晶体,并用甲醇清洗晶体,其隐黄素的纯度达98.48%。
[0043]结晶产物的鉴定:
[0044] -、白色结晶的红外光谱分析
[0045] 图2为豆留醇晶体红外光谱图,对图2进行分析dSOO-SSOOcnf1处宽而强的谱带是 O-H伸缩振动引起的吸收谱带,它是脂肪醇的一个重要特征谱带。2870和2949为甲基的C-H 的伸缩振动峰,1448和1373为亚甲基的C-H变形振动吸收峰。1651处强度较低的弱峰是C = C
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