[0001]
本发明属于保健食品技术领域，具体涉及一种海洋星虫海参多肽饮液及其制备方法。
背景技术：
[0002]
欧美国家将功能性食品称为健康食品或营养食品，日本将其称为特殊保健用途的食品。目前，以灵芝、冬虫夏草、香菇、猴头等药食两用真菌及其多糖等提取物制成的保健食品己经在国内外上市销售。随着中药走向世界，国外对中药的保健作用进行了相当的研究，欧美等国已将银杏叶的某些成分提出制成口香糖、巧克力。国外研究了灵芝、香菇、白果、当归、大蒜抑制血小板的副作用，并利用该研究成果研制保护心血管的保健食品。各国食品科学家都将应用高新科技开发保健食品列为二十一世纪食品发展方向，尤其是发达国家应用分子生物学和基因工程等高新科技，将原来食品中有利因子增强或消除有害因子，既提高产品保健功能又实惠安全。日本利用基因工程研制的抗病毒大米和脱敏大米，可防止病毒性感染和小儿过敏性腹泻，当前又重点开发降血压、改善血管硬化、降低胆固醇等与调节循环系统有关的食品。
[0003]
在上述发展趋势下，近些年来，我国抗疲劳功能性食品的研究飞速进展，例如纯品大豆分子低聚肽、牛磺酸、辣椒素、蒜素等抗疲劳作用的研究已经非常多见。目前的抗疲劳功能性食品归纳起来可分为3类：一是抗疲劳作用明显，机理明确，结构清楚的一类，这一类主要是包括蛋白质、脂肪、糖、氨基酸、维生素b族、维生素c、维生素e和钙、磷、钾、钠、铁、硒、锌等，这些活性成分大量用于运动饮料及运动补剂中，主要是针对运动性疲劳的营养强化食品。二是抗疲劳作用明显但功能因子或其结构尚不完全清楚的一类，这一类以补益类中药及其提取物为主，如人参、枸杞、虫草、杜仲、黄茂、灵芝、牡蛎、红景天、刺五加等。三是抗疲劳食品组方中经常添加但其自身的抗疲劳功效尚未得到研究证实的，如海龙、蛤蚧等补益性生药。
[0004]
总的来说，目前所开发与应用的具有抗疲劳活性的肽还比较少。现有的研究所报道的抗疲劳肽，从结构讲，主要有高f值寡肽和谷胱甘肽等；从来源讲，主要有大豆多肽、肌肽、鹅肌肽以及鲑鱼肽等。因此，有必要开发更多具有抗疲劳活性的肽产品。
技术实现要素：
[0005]
基于背景技术存在的技术问题，本发明提供一种海洋星虫海参多肽饮液及其制备方法，旨在获取一种具有明显的抗疲劳作用的肽产品。
[0006]
本发明提出的一种海洋星虫海参多肽饮液，其原料包括：海洋星虫多肽粉、海参多肽粉、鱼皮多肽粉和水；
[0007]
其中，海洋星虫多肽粉、海参多肽粉和鱼皮多肽粉的质量比为10-20:1-5:1-3。
[0008]
优选地，所述海洋星虫多肽粉是通过对海洋星虫进行蛋白提取后，再进行控酶酶解得到。
[0009]
优选地，所述对海洋星虫进行蛋白提取具体包括：将海洋星虫用浓度为5-15wt％的nacl溶液进行盐提后，过滤后保留滤液，滤渣再用浓度为0.3-0.5mol/l的醋酸溶液进行酸提，过滤后合并两次滤液，得到海洋星虫的蛋白提取液；
[0010]
所述进行控酶酶解具体包括：将上述海洋星虫的蛋白提取液按克海洋星虫加入5-15mg的木瓜蛋白酶来进行酶解反应，灭酶处理后，经超滤膜进行超滤，冷冻干燥，得到分子量为3-10kda的海洋星虫多肽粉。
[0011]
上述海洋星虫：应符合gb 10136和/或其他有关规定。
[0012]
优选地，所述海参多肽粉是通过对海参进行控酶酶解得到。
[0013]
优选地，所述对海参进行控酶酶解具体包括：将海参按每克海参加入15-25mg的中性蛋白酶进行酶解反应，灭酶处理后，经超滤膜进行超滤，冷冻干燥，得到分子量不大于3kda的海参多肽粉。
[0014]
上述海参：应符合gb 31602的规定。
[0015]
优选地，所述鱼皮多肽粉对鱼皮进行控酶酶解得到。
[0016]
优选地，所述对鱼皮进行控酶酶解具体包括：将鱼皮按每克鱼皮加入1-10mg的胰蛋白酶进行酶解反应，灭酶处理后，经超滤膜进行超滤，冷冻干燥，得到分子量不大于10kda的鱼皮多肽粉。
[0017]
优选地，所述海洋星虫海参多肽饮液还包括低聚果糖、果胶和山梨酸钾；
[0018]
优选地，海洋星虫多肽粉、低聚果糖、果胶、山梨酸钾和水的质量比为10-20:1-10:0.1-1:0.01-0.1:200-300。
[0019]
本发明提出的海洋星虫海参多肽饮液的制备方法，包括：将海洋星虫多肽粉、海参多肽粉、鱼皮多肽粉和水混匀后煮沸，即得到所述海洋星虫海参多肽饮液。
[0020]
本发明具有以下有益效果：
[0021]
(1)本发明所述海洋星虫海参多肽饮液，通过以海洋星虫多肽粉、海参多肽粉、鱼皮多肽粉作为原料，获得了一种具有明显的抗疲劳作用饮品。
[0022]
(2)本发明通过采用不同提取工艺对海洋星虫、海参、鱼皮分别进行提取，由此获得的多肽酶解产物具有更高的生物活性，在抗疲劳作用方面效果最优。
[0023]
(3)本发明同时选择添加低聚果糖、果胶的辅料，其中低聚果糖作为优质的益生元和水溶性膳食纤维，可以促进血液循环，促进新陈代谢，并且改善了饮液的口感；进一步的，果胶可以对海洋星虫、海参以及鱼皮的多肽酶解产物进行有效吸附，由此确保了其活性组分稳定且有效控制释放。
具体实施方式
[0024]
下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
[0025]
实施例1
[0026]
一种海洋星虫海参多肽饮液，包括：海洋星虫多肽粉100g、海参多肽粉20g、鱼皮多肽粉10g、低聚果糖30g、果胶3g、山梨酸钾0.3g、水1800g；
[0027]
其中，该海洋星虫海参多肽饮液采用下述工艺制备得到：
[0028]
s1、将海洋星虫进行粉碎后，加入其重量18倍，且浓度为10wt％的nacl溶液中，在40℃水浴中保温4h，过滤后保留滤液，滤渣则加入其重量8倍，浓度为0.5mol/l的醋酸溶液
中，在5℃水浴中保温6h，过滤后将所得滤液和前述滤液合并，即得到海洋星虫的蛋白提取液；
[0029]
调节该海洋星虫的蛋白提取液的ph值为6.5，按每克海洋星虫加入10mg的木瓜蛋白酶，在60℃水浴中酶解反应4h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量10kda和3kda的超滤膜进行超滤，收集分子量3-10kda的溶液，冷冻干燥后，得到海洋星虫多肽粉；
[0030]
s2、将海参进行粉碎后，加入其重量12倍的去离子水搅拌均匀，得到海参悬浮浆液，调节该海参悬浮浆液的ph值为7，按每克海参加入20mg的中性蛋白酶，在50℃水浴中酶解反应4h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量3kda的超滤膜进行超滤，收集分子量不大于3kda的溶液，冷冻干燥后，得到海参多肽粉；
[0031]
s3、将鱼皮进行粉碎后，加入其重量8倍的去离子水搅拌均匀，再在80℃水浴中保温20min，冷却后得到鱼皮浆；加入0.05mol/l的盐酸调节该鱼皮浆的ph值为5，按每克鱼皮加入5mg的胰蛋白酶，在40℃水浴中酶解反应3h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量3kda的超滤膜进行超滤，收集分子量不大于3kda的溶液，冷冻干燥后，得到鱼皮多肽粉；
[0032]
s4、将30g低聚果糖、3g果胶和0.3g山梨酸钾加入水中，搅拌溶解完全，再加入上述工艺制备得到的100g海洋星虫多肽粉、20g海参多肽粉以及10g鱼皮多肽粉，继续搅拌30min后，加热至90℃，保温10min后，进行灌装，得到所述海洋星虫海参多肽饮液。
[0033]
实施例2
[0034]
一种海洋星虫海参多肽饮液，包括：海洋星虫多肽粉100g、海参多肽粉50g、鱼皮多肽粉5g、低聚果糖100g、果胶0.5g、山梨酸钾1g、水1000g；
[0035]
其中，该海洋星虫海参多肽饮液采用下述工艺制备得到：
[0036]
s1、将海洋星虫进行粉碎后，加入其重量18倍，且浓度为10wt％的nacl溶液中，在40℃水浴中保温4h，过滤后保留滤液，滤渣则加入其重量8倍，浓度为0.5mol/l的醋酸溶液中，在5℃水浴中保温6h，过滤后将所得滤液和前述滤液合并，即得到海洋星虫的蛋白提取液；
[0037]
调节该海洋星虫的蛋白提取液的ph值为6.5，按每克海洋星虫加入10mg的木瓜蛋白酶，在60℃水浴中酶解反应4h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量10kda和3kda的超滤膜进行超滤，收集分子量3-10kda的溶液，冷冻干燥后，得到海洋星虫多肽粉；
[0038]
s2、将海参进行粉碎后，加入其重量12倍的去离子水搅拌均匀，得到海参悬浮浆液，调节该海参悬浮浆液的ph值为7，按每克海参加入20mg的中性蛋白酶，在50℃水浴中酶解反应4h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量3kda的超滤膜进行超滤，收集分子量不大于3kda的溶液，冷冻干燥后，得到海参多肽粉；
[0039]
s3、将鱼皮进行粉碎后，加入其重量8倍的去离子水搅拌均匀，再在80℃水浴中保温20min，冷却后得到鱼皮浆；加入0.05mol/l的盐酸调节该鱼皮浆的ph值为5，按每克鱼皮加入5mg的胰蛋白酶，在40℃水浴中酶解反应3h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量3kda的超滤膜进行超滤，收集分子量不大于3kda的溶液，冷冻干燥后，得到鱼皮多肽粉；
[0040]
s4、将100g低聚果糖、0.5g果胶和1g山梨酸钾加入水中，搅拌溶解完全，再加入上述工艺制备得到的100g海洋星虫多肽粉、50g海参多肽粉以及5g鱼皮多肽粉，继续搅拌30min后，加热至90℃，保温10min后，进行灌装，得到所述海洋星虫海参多肽饮液。
[0041]
实施例3
[0042]
一种海洋星虫海参多肽饮液，包括：海洋星虫多肽粉100g、海参多肽粉5g、鱼皮多肽粉30g、低聚果糖5g、果胶10g、山梨酸钾0.05g、水3000g；
[0043]
其中，该海洋星虫海参多肽饮液采用下述工艺制备得到：
[0044]
s1、将海洋星虫进行粉碎后，加入其重量18倍，且浓度为10wt％的nacl溶液中，在40℃水浴中保温4h，过滤后保留滤液，滤渣则加入其重量8倍，浓度为0.5mol/l的醋酸溶液中，在5℃水浴中保温6h，过滤后将所得滤液和前述滤液合并，即得到海洋星虫的蛋白提取液；
[0045]
调节该海洋星虫的蛋白提取液的ph值为6.5，按每克海洋星虫加入10mg的木瓜蛋白酶，在60℃水浴中酶解反应4h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量10kda和3kda的超滤膜进行超滤，收集分子量3-10kda的溶液，冷冻干燥后，得到海洋星虫多肽粉；
[0046]
s2、将海参进行粉碎后，加入其重量12倍的去离子水搅拌均匀，得到海参悬浮浆液，调节该海参悬浮浆液的ph值为7，按每克海参加入20mg的中性蛋白酶，在50℃水浴中酶解反应4h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量3kda的超滤膜进行超滤，收集分子量不大于3kda的溶液，冷冻干燥后，得到海参多肽粉；
[0047]
s3、将鱼皮进行粉碎后，加入其重量8倍的去离子水搅拌均匀，再在80℃水浴中保温20min，冷却后得到鱼皮浆；加入0.05mol/l的盐酸调节该鱼皮浆的ph值为5，按每克鱼皮加入5mg的胰蛋白酶，在40℃水浴中酶解反应3h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量3kda的超滤膜进行超滤，收集分子量不大于3kda的溶液，冷冻干燥后，得到鱼皮多肽粉；
[0048]
s4、将5g低聚果糖、10g果胶和0.05g山梨酸钾加入水中，搅拌溶解完全，再加入上述工艺制备得到的100g海洋星虫多肽粉、5g海参多肽粉以及30g鱼皮多肽粉，继续搅拌30min后，加热至90℃，保温10min后，进行灌装，得到所述海洋星虫海参多肽饮液。
[0049]
对比例1
[0050]
一种海洋星虫海参多肽饮液，包括：海洋星虫多肽粉130g、低聚果糖30g、果胶3g、山梨酸钾0.3g、水1800g；
[0051]
其中，该海洋星虫海参多肽饮液采用下述工艺制备得到：
[0052]
s1、将海洋星虫进行粉碎后，加入其重量18倍，且浓度为10wt％的nacl溶液中，在40℃水浴中保温4h，过滤后保留滤液，滤渣则加入其重量8倍，浓度为0.5mol/l的醋酸溶液中，在5℃水浴中保温6h，过滤后将所得滤液和前述滤液合并，即得到海洋星虫的蛋白提取液；
[0053]
调节该海洋星虫的蛋白提取液的ph值为6.5，按每克海洋星虫加入10mg的木瓜蛋白酶，在60℃水浴中酶解反应4h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量10kda和3kda的超滤膜进行超滤，收集分子量3-10kda的溶液，冷冻干燥后，得到海洋星虫多肽粉；
[0054]
s2、将30g低聚果糖、3g果胶和0.3g山梨酸钾加入水中，搅拌溶解完全，再加入上述工艺制备得到的130g海洋星虫多肽粉，继续搅拌30min后，加热至90℃，保温10min后，进行灌装，得到所述海洋星虫海参多肽饮液。
[0055]
对比例2
[0056]
一种海洋星虫海参多肽饮液，包括：海参多肽粉130g、果胶3g、山梨酸钾0.3g、水1800g；
[0057]
其中，该海洋星虫海参多肽饮液采用下述工艺制备得到：
[0058]
s1、将海参进行粉碎后，加入其重量12倍的去离子水搅拌均匀，得到海参悬浮浆液，调节该海参悬浮浆液的ph值为7，按每克海参加入20mg的中性蛋白酶，在50℃水浴中酶解反应4h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量3kda的超滤膜进行超滤，收集分子量不大于3kda的溶液，冷冻干燥后，得到海参多肽粉；
[0059]
s2、将30g低聚果糖、3g果胶和0.3g山梨酸钾加入水中，搅拌溶解完全，再加入上述工艺制备得到的130g海参多肽粉，继续搅拌30min后，加热至90℃，保温10min后，进行灌装，得到所述海洋星虫海参多肽饮液。
[0060]
对比例3
[0061]
一种海洋星虫海参多肽饮液，包括：鱼皮多肽粉130g、低聚果糖30g、果胶3g、山梨酸钾0.3g、水1800g；
[0062]
其中，该海洋星虫海参多肽饮液采用下述工艺制备得到：
[0063]
s1、将鱼皮进行粉碎后，加入其重量8倍的去离子水搅拌均匀，再在80℃水浴中保温20min，冷却后得到鱼皮浆；加入0.05mol/l的盐酸调节该鱼皮浆的ph值为5，按每克鱼皮加入5mg的胰蛋白酶，在40℃水浴中酶解反应3h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液后，再经分子截留量3kda的超滤膜进行超滤，收集分子量不大于3kda的溶液，冷冻干燥后，得到鱼皮多肽粉；
[0064]
s2、将30g低聚果糖、3g果胶和0.3g山梨酸钾加入水中，搅拌溶解完全，再加入上述工艺制备得到的130g鱼皮多肽粉，继续搅拌30min后，加热至90℃，保温10min后，进行灌装，得到所述海洋星虫海参多肽饮液。
[0065]
对比例4
[0066]
一种海洋星虫海参多肽饮液，包括：海洋星虫多肽粉100g、海参多肽粉20g、鱼皮多肽粉10g、低聚果糖30g、果胶3g、山梨酸钾0.3g、水1800g；
[0067]
其中，该海洋星虫海参多肽饮液采用下述工艺制备得到：
[0068]
s1、将海洋星虫进行粉碎后，加入其重量18倍，且浓度为10wt％的nacl溶液中，在40℃水浴中保温4h，过滤后保留滤液，滤渣则加入其重量8倍，浓度为0.5mol/l的醋酸溶液中，在5℃水浴中保温6h，过滤后将所得滤液和前述滤液合并，即得到海洋星虫的蛋白提取液；
[0069]
调节该海洋星虫的蛋白提取液的ph值为6.5，按每克海洋星虫加入10mg的木瓜蛋白酶，在60℃水浴中酶解反应4h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液，冷冻干燥后，得到海洋星虫多肽粉；
[0070]
s2、将海参进行粉碎后，加入其重量12倍的去离子水搅拌均匀，得到海参悬浮浆液，调节该海参悬浮浆液的ph值为7，按每克海参加入20mg的中性蛋白酶，在50℃水浴中酶
解反应4h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液，冷冻干燥后，得到海参多肽粉；
[0071]
s3、将鱼皮进行粉碎后，加入其重量8倍的去离子水搅拌均匀，再在80℃水浴中保温20min，冷却后得到鱼皮浆；加入0.05mol/l的盐酸调节该鱼皮浆的ph值为5，按每克鱼皮加入5mg的胰蛋白酶，在40℃水浴中酶解反应3h，取出后在90℃水浴中灭酶处理15min，离心分离得到上清液，冷冻干燥后，得到鱼皮多肽粉；
[0072]
s4、将30g低聚果糖、3g果胶和0.3g山梨酸钾加入水中，搅拌溶解完全，再加入上述工艺制备得到的100g海洋星虫多肽粉、20g海参多肽粉以及10g鱼皮多肽粉，继续搅拌30min后，加热至90℃，保温10min后，进行灌装，得到所述海洋星虫海参多肽饮液。
[0073]
对上述实施例1和对比例1-4所得多肽饮液进行抗疲劳作用测试：将180只小鼠(体重均为25
±
2g)随机分成6组，每组30只，每次试验从对应组中随机抽取10只，分批试验。实施例1和对比例1-4分别对应实验组1和对照组1-4，给药剂量为2ml/(kg.d)，相当于人体给药剂量的10倍，空白对照组给予等量生理盐水，灌胃给药，每日1次，连续给药30天。
[0074]
(1)负重游泳试验：给药30d后，将小鼠尾部各负一重物铅皮(负重为体重的5％)，放入恒温水箱[水深40cm，恒温(25
±
0.5)℃]中游泳。以小鼠头部沉入水中10s不能浮出水面为体力耗竭，记录游泳开始至体力耗竭的时间，作为小鼠游泳时间，其结果如表1所示；
[0075]
(2)运动后小鼠血乳酸的测定：给药30d后，在末次给药30min后负重游泳(体重的2％)30min，休息20min采血，测定小鼠血乳酸含量。
[0076]
(3)运动后小鼠血清尿素氮的测定：给药30d后，在末次给药后30min厚游泳(不负重)90min，热风烘干，安静后取血，采用酶偶联速率法测定血清尿素氮含量。
[0077]
表1小鼠负重游泳时间测定结果
[0078]
组别动物数(只)负重游泳时间(min)空白对照组1018.2
±
7.3实验组11074.5
±
16.2**对照组11024.6
±
11.6*对照组21037.1
±
16.4*对照组31020.7
±
8.6对照组41030.9
±
20.8*
[0079]
*表示与对照组相比有显著性差异(p<0.05)，**表示与对照组相比有极显著性差异(p<0.01)。
[0080]
由表1可知，经实施例和对比例给药后的小鼠负重游泳时间都较空白组都有显著地提高(p<0.05)，其中实施例给药后的小鼠重游泳时间较空白组具有极显著地提高(p<0.01)，直观反映出了实验组所述海洋星虫海参多肽饮液能够显著延长小鼠负重游泳时间，即抗疲劳功效越好。
[0081]
表2运动后小鼠血乳酸和血清尿素氮含量测定结果
[0082]
组别血乳酸含量(mmol/l)血清尿素氮含量(mmol/l)空白对照组8.62
±
0.419.25
±
0.82实验组13.74
±
0.51**6.24
±
0.53**对照组16.72
±
0.43*7.96
±
0.64*
对照组25.79
±
0.41*7.47
±
0.62*对照组37.92
±
0.498.32
±
0.68对照组45.96
±
0.45*7.67
±
0.76*
[0083]
*表示与对照组相比有显著性差异(p<0.05)；**表示与对照组相比有极显著性差异(p<0.01)。
[0084]
由表2可知，经实施例和对比例给药后的小鼠短时间运动后血乳酸和血清尿素氮含量都较空白组都有显著地下降(p<0.05)，其中实施例给药后的小鼠运动后血乳酸和血清尿素氮含含量较空白组具有极显著地下降(p<0.01)，直观反映出了实验组所述海洋星虫海参多肽饮液能够对短时间运动后乳酸水平的升高有明显的抑制作用，即显著加快运动后小鼠血乳酸的消除；同时了实验组所述海洋星虫海参多肽饮液在一定程度内减少了小鼠运动后血尿素氮的积累，从而提高小鼠的运动耐受力。
[0085]
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。