1.本发明属于功能食品领域，具体涉及一种缓解原发性痛经的咖啡组合物及其制备方法。
背景技术：
2.原发性痛经(primary dysmenorrhea，pd)又叫功能性痛经，是临床常见妇科疾病，以年轻女性为主，临床多表现为经期前后小腹痉挛性疼痛，呈持续性或阵发性，可伴有冷汗、头晕、呕吐、腹泻、背部疼痛等。原发性痛经常于月经来潮前数小时发作，持续数小时至多天不等。据流行病学调查显示，我国原发性痛经的发病率较高，约为53.2％，其中以轻度和中度为主。如果对轻度和中度原发性痛经进行适当的干预，则患者在经期的生活、工作或学习将不会受到影响，从而减轻女性的生理、心理负担，提高女性的生活质量。
3.在中国“咖啡文化”已经充满生活的每个时刻。无论在家里、还是在办公室、或是各种社交场合，随处都可以看到咖啡的身影，它逐渐与时尚、现代生活、工作和休闲娱乐联系在一起。如果开发出一种能够有效缓解原发性痛经的咖啡饮品，既满足痛经患者日常饮用咖啡的需求，同时极大地减轻痛经及伴随的全身症状，无疑会受到市场的欢迎。
技术实现要素：
4.本发明提供一种能够缓解原发性痛经的咖啡组合物及其制备方法。
5.为此，本发明采用了如下的技术方案：
6.一种缓解原发性痛经的咖啡组合物i，原料包括如下重量份的组分：
7.熟地制黄精2～10重量份、当归1～10重量份和咖啡豆5～20重量份。
8.优选地，所述缓解原发性痛经的咖啡组合物i，原料包括如下重量份的组分：
9.熟地制黄精3～8重量份、当归2～8重量份和咖啡豆10～18重量份。
10.作为一个优选的实施方案，本发明提供一种缓解原发性痛经的咖啡组合物i，原料由熟地制黄精、当归和咖啡豆组成，各组分的重量份如前所定义。
11.优选地，所述咖啡豆为烘焙咖啡豆。
12.优选地，所述熟地制黄精通过如下方法制备：
13.取净制后的黄精置适宜容器内，蒸至带黑色，晒至半干，露天放置过夜；按照上述操作重复3次；再按照每100kg黄精用10～30kg熟地膏的比例加入熟地膏拌匀，置于容器中闷润过夜，蒸至黑透，晒至半干，露天放置过夜，最后晒干，得到熟地黄制黄精。
14.所述熟地膏可以通过公开的商业渠道购买得到。
15.本发明还提供上述咖啡组合物i的制备方法，包括按照重量份准备所述原料，混合，用水煎煮2～3次，每次用水量为所述原料总重量1-30倍，每次1～2小时，趁热过滤，合并滤液，浓缩至60℃时相对密度为1.10-1.15的清膏，干燥，粉碎，即得。
16.本发明还提供上述咖啡组合物i的另一种制备方法，包括按照重量份准备熟地制黄精和当归，混合，用水煎煮2～3次，每次用水量为所述熟地制黄精和当归总重量1～30倍，
每次1～2小时，趁热过滤，合并滤液，浓缩至60℃时相对密度为1.10～1.15的清膏，干燥，粉碎，得到药材提取物；取相当于所述重量份咖啡豆的速溶咖啡，与所述药材提取物混合，即得。
17.本发明还提供一种缓解原发性痛经的咖啡组合物ii，原料包括黄精低聚糖组合物和咖啡豆提取物，质量比为：
18.黄精低聚糖组合物∶咖啡豆提取物＝1:2～4；
19.其中，所述黄精低聚糖组合物的原料包括：黄精、熟地膏和当归；以黄精的质量为基准，其它组分的质量百分比为：
20.熟地膏10％～30％，当归25％～55％；
21.所述黄精低聚糖组合物通过如下方法制备：
22.i.熟地黄制黄精的制备
23.取净制后的黄精置适宜容器内，蒸至带黑色，晒至半干，露天放置过夜；按照上述操作重复3次；再按照质量配比加入熟地膏拌匀，置于容器中闷润过夜，蒸至黑透，晒至半干，露天放置过夜，最后晒干，得到熟地黄制黄精；
24.ii.黄精低聚糖提取液的制备
25.取步骤i得到的所述熟地黄制黄精，加入所述熟地黄制黄精质量30～40倍的蒸馏水，再加入所述熟地黄制黄精质量1％的纤维素酶，50～60℃条件下酶解1-2h，抽滤，得到酶解提取液；室温下用孔径0.2-1nm的纤维素膜对所述酶解提取液进行纳滤，收集截留液；所述截留液在室温下再通过孔径1-10nm的纤维素膜进行超滤，收集透过液，得到黄精低聚糖提取液；
26.iii.当归提取液的制备
27.取当归，加入当归质量5～10倍的蒸馏水煎煮3次，每次1-2.5小时，趁热过滤，滤液合并，得到当归提取液；
28.iv.黄精低聚糖组合物的制备
29.将步骤ii制备得到的所述黄精低聚糖提取液和步骤iii制备得到的当归提取液合并，减压浓缩，干燥，粉碎，即得。
30.优选地，所述黄精低聚糖组合物的原料，以黄精的质量为基准，熟地膏和当归的质量百分比为：
31.熟地膏10％～20％，当归40％～55％。
32.优选地，所述黄精低聚糖组合物和咖啡豆提取物的质量比为：
33.黄精低聚糖组合物∶咖啡豆提取物＝1:2.4～3。
34.作为一个优选的实施方案，本发明提供一种缓解原发性痛经的咖啡组合物ii，由所述黄精低聚糖组合物和咖啡豆提取物组成，各组分的质量比如上定义。
35.优选地，所述咖啡豆提取物为市售的速溶咖啡。
36.所述熟地膏可以通过公开的商业渠道购买得到。
37.本发明还提供上述咖啡组合物ii的制备方法，包括按照质量比准备所述黄精低聚糖组合物和咖啡豆提取物，然后混合均匀，即得。
38.此外，本发明还有一个目的在于提供上述咖啡组合物i或咖啡组合物ii在制备缓解原发性痛经的功能食品中的应用。
39.本发明还有一个目的，在于提供一种缓解原发性痛经的功能食品，包括本发明所述的咖啡组合物i或咖啡组合物ii。
40.优选地，所述功能食品还包括功能食品可以接受的辅料。
41.优选地，所述功能食品可以接受的辅料包括：(1)稀释剂，例如蒸馏水、淀粉、糖粉、糊精、乳糖、预胶化淀粉、微晶纤维、无机钙盐(如硫酸钙、磷酸氢钙、药用碳酸钙等)、甘露醇等、植物油、聚乙二醇等；(2)粘合剂，例如蒸馏水、乙醇、淀粉浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、甲基纤维素和乙基纤维素、羟丙甲纤维素等；(3)崩解剂，例如干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠等；(4)润滑剂，例如硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉、氢化植物油、聚乙二醇类、月桂醇硫酸镁等。
42.优选地，所述功能食品可以接受的辅料占所述功能食品质量的0％～35％。
43.作为一个优选的实施方案，所述缓解原发性痛经的功能食品还可以包括风味调节剂。
44.优选地，所述风味调节剂选自甜味剂、植脂末、脱脂奶粉和全脂奶粉中的一种或多种。
45.本发明采用酶解法与膜分离技术结合制备黄精低聚糖组合物，该组合物水溶性好，且有一定的甜度，可以增加咖啡的风味。动物试验证明，包含本发明所述黄精低聚糖组合物的咖啡组合物能够明显减少催产素致大鼠扭体次数，延长扭体潜伏期，降低大鼠子宫组织中pgf2α水平，同时升高pge水平。本发明的缓解原发性痛经功能食品投放市场后，既能满足女性消费者饮用咖啡的需求，还能有效缓解经期不适，预计将受到广大女性消费者的欢迎。
具体实施方式
46.以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
47.下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。实施例1：一种黄精低聚糖组合物的制备
48.本实施例的黄精低聚糖组合物的原料组成为：
49.黄精：280g
50.熟地膏：30g
51.当归：150g
52.本实施例所述黄精低聚糖组合物通过如下方法制备：
53.i.熟地黄制黄精的制备
54.取净制后的黄精置适宜容器内，蒸至带黑色，晒至半干，露天放置过夜；按照上述操作重复3次；再按照质量配比加入熟地膏拌匀，置于容器中闷润过夜，蒸至黑透，晒至半干，露天放置过夜，最后晒干，得到熟地黄制黄精；
55.ii.黄精低聚糖提取液的制备
56.取步骤i得到的所述熟地黄制黄精，加入所述熟地黄制黄精质量40倍的蒸馏水，再加入所述熟地黄制黄精质量1％的纤维素酶，50～60℃条件下酶解1.5h，抽滤，得到酶解提
取液；室温下用孔径0.6nm的纤维素膜对所述酶解提取液进行纳滤，收集截留液；所述截留液在室温下再通过孔径5nm的纤维素膜进行超滤，收集透过液，得到黄精低聚糖提取液；
57.iii.当归提取液的制备
58.取当归，加入当归质量5倍的蒸馏水煎煮3次，每次1.5小时，趁热过滤，滤液合并，得到当归提取液；
59.iv.黄精低聚糖组合物的制备
60.将步骤iii制备得到的所述黄精低聚糖提取液和步骤iv制备得到的当归提取液，减压浓缩，干燥，粉碎，即得。
61.实施例2：一种黄精咖啡
62.配方：按照实施例1所述配方和方法制备的黄精低聚糖组合物80g，速溶咖啡200g(相当于咖啡豆约1000g)。
63.制备方法：将各原料按照上述配方比例混合均匀，灭菌，分装，即得；或者将上述原料按照配方比例混合均匀，制粒，灭菌，分装，即得。
64.食用方法：取一茶匙本品，按照个人口味加入适量热水，搅拌均匀，即可饮用。
65.实施例3：一种黄精咖啡
66.配方：按照实施例1所述配方和方法制备的黄精低聚糖组合物50g，速溶咖啡150g(相当于咖啡豆约750g)。
67.制备方法：将各原料按照上述配方比例混合均匀，灭菌，分装，即得；或者将上述原料按照配方比例混合均匀，制粒，灭菌，分装，即得。
68.食用方法：取一茶匙本品，按照个人口味加入适量热水，搅拌均匀，即可饮用。
69.实施例4：一种黄精咖啡
70.配方：按照实施例1所述配方和方法制备的黄精低聚糖组合物50g，速溶咖啡120g(相当于咖啡豆约600g)。
71.制备方法：将各原料按照上述配方比例混合均匀，灭菌，分装，即得；或者将上述原料按照配方比例混合均匀，制粒，灭菌，分装，即得。
72.食用方法：取一茶匙本品，按照个人口味加入适量热水，搅拌均匀，即可饮用。
73.实施例5：一种罐装咖啡饮品
74.配方：按照实施例1所述配方和方法制备的黄精低聚糖组合物70g，速溶咖啡200g(相当于咖啡豆约1000g)。
75.制备方法：将各原料按照上述配方比例混合均匀，加入固体原料总质量10倍的蒸馏水，搅拌均匀，灭菌，罐装，即得。
76.食用方法：开罐，直接饮用。
77.实施例6：一种咖啡咀嚼片
78.配方：按照实施例1所述配方和方法制备的黄精低聚糖组合物55g，速溶咖啡140g(相当于咖啡豆约700g)，辅料(甘露醇、二氧化硅、硬脂酸、硬脂酸镁、无水乳糖、羟丙基纤维素)适量。
79.制备方法：将各原料混合均匀，按照本领域常规方法制粒、压片，包薄膜衣，即得。
80.实施例7：一种黄精咖啡
81.原料：熟地制黄精8kg，当归3.87kg，速溶咖啡4kg(相当于咖啡豆20kg)；
82.其中熟地制黄精按照实施例1中的“i.熟地黄制黄精的制备”项下所述的方法和配比制备。
83.包括按照重量份准备熟地制黄精和当归，混合，用水煎煮3次，每次用水量为所述熟地制黄精和当归总重量5倍，每次1.5小时，趁热过滤，合并滤液，浓缩至60℃时相对密度为1.10～1.15的清膏，干燥，粉碎，得到药材提取物；取速溶咖啡，与所述药材提取物混合均匀，灭菌，分装，即得；或者取速溶咖啡，与所述药材提取物混合均匀，制粒，灭菌，分装，即得。
84.试验例本发明的黄精咖啡组合物对缩宫素致大鼠痛经模型的作用
85.一、实验材料
86.1、受试药物、试剂与仪器
87.1.1受试药物
88.1)黄精咖啡组合物：按照实施例2所述配方和方法制备。
89.2)对照咖啡组合物1
90.配方：当归3.87kg，速溶咖啡4kg(相当于咖啡豆20kg)；
91.制备方法：取当归，加入当归质量5倍的蒸馏水煎煮3次，每次1.5小时，趁热过滤，滤液合并，浓缩至干，粉碎；加入速溶咖啡，混合均匀，即得。
92.3)对照咖啡组合物2：按照实施例7所述配方和方法制备。
93.4)咖啡豆提取物：市售速溶咖啡。
94.5)布洛芬缓释胶囊：珠海润都制药股份有限公司。
95.上述各受试药物用蒸馏水按所需浓度用时配制成溶液或混悬液。
96.1.2试剂
97.前列腺素2α试剂盒(武汉伊莱瑞特生物科技公司),前列腺素e2试剂盒(武汉华美生物工程有限公司),催产素试剂盒(武汉华美生物工程有限公司),缩宫素注射液(1ml:10u)(马鞍山丰原制药有限公司),苯甲酸雌二醇注射液(2ml:4g)(北京索莱宝科技有限公司),肾上腺素注射液(1ml:1mg)(北京永康药业有限公司),,医用生理盐水(0.9％：500ml)(湖北科伦药业有限公司),水合氯醛(国药集团化学试剂有限公司),医用酒精(湖北康洁医用消毒用品公司)。
98.1.3仪器和器材
99.16cm直头手术剪刀(苏州六六视觉科技有限公司),sw-cj-1fd超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司),8.5cm无齿手术镊子(苏州六六视觉科技有限公司),1ml注射器(江阴市长强医疗器械有限公司),me104e电子天平(mettler toledo公司),lg-r-80电脑血液黏度测试仪(北京世帝科学仪器公司),bc-2800vet兽用全自动血液细胞分析仪(迈瑞生物医疗电子股份有限公司),kz
‑ⅱ
全自动研磨机(武汉塞维尔生物科技有限公司)。
100.2、实验动物
101.选取雌性未孕且未交配的sd大鼠70只(清洁级)，体重在220g左右，来源于北京维通利华生物科技有限公司；适应性喂养5天，保持环境开阔通风，每天更换1次垫料。
102.3、造模、分组及给药
103.雌性的sd大鼠70只随机分为正常对照组、模型对照组、布洛芬组、黄精咖啡组(黄精咖啡组合物)、对照咖啡1组(对照咖啡组合物1)、对照咖啡2组(对照咖啡组合物2)和单纯
咖啡组(速溶咖啡)。除正常组不予处理外，其余各组大鼠均每天皮下注射苯甲酸雌二醇及盐酸肾上腺素，连续10天，其中，每日注射盐酸肾上腺素0.9mg/kg/d后，开始对各组大鼠采用综合刺激(a:声刺激5min/次，3-4次/天；b:光刺激5min/次，3-4次/天；c:束缚带束缚10min/次，2次/天；d:书夹夹尾30min/次，2次/天)。第1、第10天每只大鼠给予皮下注射苯甲酸雌二醇5.0mg/kg/d，第2～9天皮下注射苯甲酸雌二醇2.5mg/kg/d。从注射苯甲酸雌二醇第5天起，给予大鼠灌胃给药，按临床治疗原发性痛经的生药剂量，大鼠与人的剂量相关计数换算后，布洛芬组给予布洛芬混悬液，药物剂量为0.02g/kg/天；黄精咖啡组、对照咖啡1组、对照咖啡2组和单纯咖啡组给予水溶液，药物剂量为3.3g生药/kg/天。正常对照组及模型组给予同等体积生理盐水灌胃处理。连续灌胃7天。末次注射苯甲酸雌二醇后间隔24h，即第11天时，末次灌胃给药结束后1h,除正常组外，其余各组均给予腹腔注射缩宫素2u/只，从而复制出大鼠痛经模型。
104.4、行为学观察
105.于第11天在模型组和各试验组大鼠腹腔注射缩宫素后，立即观察大鼠0-30分钟内的扭体次数及扭体潜伏期(注：评估扭体反应的标准—大鼠腹部收缩内凹、躯干与后肢伸展，臀部与一侧肢体内旋。扭体潜伏期：腹腔注射催产素后开始至大鼠出现第1次扭体反应的时间)。
106.5、标本采集
107.观察结束后，对大鼠行水合氯醛麻醉，采取心尖血，装于肝素抗凝管，用于行血液流变学检测。采血完毕后，用剪刀减去大鼠腹部皮毛，局部酒精消毒，剥离子宫组织，剔除子宫表面附着的脂肪组织，生理盐水冲洗，滤纸吸干水分，用于组织匀浆取上清液以行elisa检测。
108.6、elisa法检测大鼠子宫组织pgf2α、pge2及ot值，严格按照试剂盒说明书操作步骤执行：
①
称取子宫组织样本，按1:9(重量：体积)比例加入pbs缓冲液，保持低温情况下上离心机3500r/min,离心5分钟，充分匀浆，得上清液，装入ep管。
②
酶标孔上设空白、标准、待测3类，空白孔加样品稀释液，标准孔加标准品，待测孔加待测品，每孔各100μl，覆膜，37℃温育120min。
③
空白孔加100μl生物素抗体，100μl酶标记溶液加入标准孔、待测孔。覆膜，摇匀，37℃温育60min。
④
反复洗板5次，并于吸水纸上轻轻扣板，待孔内变干。
⑤
各孔按顺序分别加入a、b显色液90μl，覆膜，轻摇，再次37℃温育15-30min，不超过30min。
⑥
各孔依次加中止液50μl，终止反应。
⑦
将酶标仪上设置波长为450nm，5min内测得各孔吸光度值。绘出标准曲线，计算浓度值。
109.7、数据的分析与处理
110.采用spss17.0行统计学分析，所得实验数据用均数
±
标准差表示，计量资料行t检验，组间差异行方差分析，p＜0.05表明差异有统计学意义，p＜0.01表明差异有显著统计意义。
111.二、实验结果
112.1、各组大鼠的扭体反应
113.结果见表1。
114.表1各组大鼠的扭体反应
115.组别扭体潜伏期(min)30min内扭体次数
正常对照组00模型对照组5.25
±
4.3210.28
±
3.09布洛芬组10.54
±
3.79
**
5.41
±
2.63
**
黄精咖啡组11.01
±
4.83
**
6.13
±
1.03
*
对照咖啡1组8.21
±
6.23
*
7.55
±
3.34对照咖啡2组9.15
±
7.41
*
7.21
±
3.54单纯咖啡组7.08
±
5.848.45
±
2.89
116.注：与模型组比较，*p《0.05,**p《0.01
117.由表1可见，除正常对照组外，其余各组大鼠在注射缩宫素后均发生扭体反应，说明此次造模成功。与模型组比较，布洛芬组和黄精咖啡组大鼠的扭体潜伏期都显著延长(p＜0.01)，对照咖啡1组和对照咖啡2组大鼠的扭体潜伏期延长(p＜0.05)。与模型组比较，布洛芬组大鼠扭体次数明显减少(p＜0.01)，黄精咖啡组大鼠扭体次数减少，差异具有统计学意义(p＜0.05)。与模型对照组相比,在观察时间内没观察到对照咖啡1组、对照咖啡2组和单纯咖啡组扭体次数明显变化。
118.2.各组大鼠子宫组织pgf2α、pge2及pgf2α/pge2的变化
119.结果见表2。
120.表2各组大鼠子宫组织pgf2α、pge2水平的变化
121.组别pgf2α值(pg/ml)pge2值(pg/ml)正常对照组52.24
±
15.4793.35
±
21.37模型对照组101.26
±
20.75
##
66.25
±
13.54
##
布洛芬组75.98
±
17.42
*
83.31
±
19.31
**
黄精咖啡组78.23
±
16.21
*
72.33
±
15.56
*
对照咖啡1组90.54
±
19.3271.05
±
23.45
*
对照咖啡2组86.32
±
23.5171.23
±
21.56
*
单纯咖啡组93.45
±
21.2970.02
±
22.45
122.注：与正常组比较，
#
p《0.05,
##
p《0.01；与模型组比较，
*
p《0.05,
**
p《0.01.
123.表2示出，与正常对照组相比，模型对照组pgf2α均显著升高，pge2水平明显下降，差异有极显著统计学意义(p＜0.01)。与模型组比较，布洛芬组、黄精咖啡组均能降低pgf2α的水平(p＜0.05)，升高pge2水平。与模型组比较，对照咖啡1组和对照咖啡2组pge2水平升高(p＜0.05)，pgf2α水平有所降低，但差异没有统计学意义(p》0.05)。与模型对照组相比,在观察时间内单纯咖啡组大鼠子宫内膜pgf2α和pge2水平变化没有统计学意义(p》0.05)。
124.三、讨论
125.原发性痛经发病机制研究发现经环氧合酶介导生成的前列腺素(prostaglandin，pg)，在痛经的发生中扮演着重要角色。不同类型的pg,对子宫平滑肌的作用也不同。对于非孕子宫平滑肌而言，pgf2α能促进子宫收缩，pge2的作用则相反。人体子宫组织中pgf2α、pge2水平的变化，是随月经周期而变化的。在月经期，受雌激素水平的影响，子宫内膜发生脱落，环氧合酶介导的pg大量合成，导致体内pgf2α、pge2水平增高。大量研究证实，pgf2α水平的升高是痛经发生的主要原因。经血中pgf2α水平升高，pgf2α/pge2比值也会相应升高，导致子宫平滑肌剧烈收缩，局部组织血管发生缺血缺氧状态，从而发生小腹痉挛性疼痛。因
此调控pgf2α的水平是治疗原发性痛经的关键。
126.对催产素致大鼠痛经模型造模各组大鼠发现，推测本发明的黄精咖啡组合物发挥治疗作用之机理是通过减少体内前列腺素、催产素等物质的生成，改善局部血液循环，减少子宫肌层因持续痉挛导致的局部缺氧缺血状态，从而达到缓解痛经的作用。
127.本发明作为一个药食同源的组方，具有保健功效，有利于人们保持良好的身体健康状况，尤其适于爱好咖啡且痛经以及希望尽快缓解的人士饮用。