一种发酵虫草源性β-葡聚糖提取物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于真菌资源应用领域，涉及发酵虫草源性(6-葡聚糖提取物的制备方 法。
【背景技术】
[0002] (6-葡聚糖是一种具有多种功能活性的多糖，主要化学结构(6-1,3葡聚糖和 3 -1，6葡聚糖，其中前者具有抗肿瘤性质，而且能够极大地提高人体自然免疫力。
[0003] 日本科学家研究成果表明，P_葡聚糖具有调节血糖水平，激活胰岛素活性的作 用，为高血糖患者带来了福音。由于国内对虫草多糖的研究还处于比较低的水平，甚至一些 生产商片面追求总多糖含量，添加麦芽糖糊精，3 _环糊精和黄糊精，导致国外内外对真菌 多糖的兴趣丧失。
[0004] 为了进一步开发利用发酵虫草资源，充分促进真菌多糖在食品中的应用，发明人 提供一种发酵虫草源性3-葡聚糖提取物，推动了发酵虫草的广泛应用。
【发明内容】
[0005] 本发明为了克服上述不足之处，一种发酵虫草源性(6-葡聚糖提取物及其提取方 法，该提取物具有高含量的总多糖和1，3-1，6 0葡聚糖，以及低含量的a葡聚糖，为生产高 档次的保健产品和化妆品提供了原料，推动发酵虫草的广泛应用。
[0006] 本发明的目的是通过以下方式实现的：
[0007] -种发酵虫草源性P_葡聚糖提取物，该提取物含有总多糖50%以上，1，3-1，6 3 葡聚糖40%以上，a葡聚糖含量在10%以下。
[0008] 上述发酵虫草源性3 _葡聚糖提取物，该发酵虫草源性3 _葡聚糖提取物是通过 以下方法制备得到的：
[0009] a)向发酵的湿虫草菌丝体中，加入质量浓度为70-95 %的乙醇，加热至20_50°C， 保持2h_5h后，离心，弃去滤液，得到湿菌丝体；
[0010] b)向a)中湿菌丝体加入纯化水进行洗涤，得到洗涤后的菌丝体；
[0011] c)将b)中洗涤后的菌丝体，加入纯化水，菌丝体与纯化水重量比例为1:2-5,煮沸 后，保温3h-10h，每隔1-1. 5h，在10-20r/min转速条件下搅拌5min-20min，离心，弃去菌丝 体，保留滤液；
[0012] d)将c)中所得滤液，浓缩至比重为0.8-1.3,加入乙醇进行醇沉，离心，得到湿 葡聚糖提取物，回收乙醇；
[0013] e)将d)中得到的湿P-葡聚糖提取物在真空度0. 02MPa-0.IOMPa条件下真空干 燥，湿料厚度不高于5cm，干燥温度60-90°C，干燥40h-80h。
[0014] 步骤a)中该浓度范围的乙醇的使用，除去了低分子多糖及醇溶性多糖，提高产品 中有效成分P葡聚糖含量，优选采用的乙醇浓度为80%。
[0015] 步骤b)中具体的洗涤步骤为：湿菌丝体加入纯化水，湿菌丝体与纯化水的重量比 例为1:2-5,转速为10r/min-100r/min条件下搅拌5-30min，然后离心，弃滤液，得到洗漆后 的菌丝体。
[0016] 步骤d)中具体的醇沉步骤为：向浓缩后的滤液中边搅拌边加入浓缩液体积1-5倍 量乙醇使乙醇浓度为50-80%，静置8h以上，进行醇沉。
[0017] 上述发酵虫草源性(6-葡聚糖提取物中，还可以将步骤e)中得到的干燥品用纯化 水溶解，干燥品与纯化水的重量比例为1:2-5 ;然后在真空度0. 02MPa-0.IOMPa,干燥温度 60-90°C条件下减压真空干燥40h-80h，粉碎，过80目筛，总混60-90min，得到成品。该过程 使得提取的0葡聚糖粗品再次溶解，干燥，进一步有效除去产品中乙醇的残留。
[0018] 步骤a)中离心可采用卧螺离心机，离心条件为转速1000r/min-5000r/min。步骤 b)中提到的离心可采用卧螺离心机，离心条件为转速1000r/min-3000r/min，离心时间为 0. 5-1. 5h〇
[0019] 本发明所述的虫草为蝙蝠蛾拟青霉（PaecilomycesHepialiChenetDai, sp.Nov)〇
[0020] 发酵的湿虫草菌丝体可按照如下工艺进行：
[0021] 将蝙蝠蛾拟青霉菌种接于新鲜斜面培养基上，培养基配方为：土豆8-9%，葡萄糖 2-4. 0%，磷酸二氢钾 0? 2-0. 3%，硫酸镁 0? 15-0. 17%，琼脂L3-1. 5%，26-28°C培养 4 天； 在斜面培养好的菌种转接到摇瓶中，摇瓶培养基为：葡萄糖2. 0-4. 0%，蛋白胨1. 0-2. 0%， 磷酸二氢钾〇. 1-0. 3 %，硫酸镁0. 05-0. 07 %，26-28 °C培养2天；摇瓶培养结束后，将菌种转 接到种子罐中，种子罐培养基为：葡萄糖2. 0-3. 0%，蛋白胨1-2%，磷酸二氢钾0. 1-0. 3%， 硫酸镁0.05-0. 07%，消泡剂0. 1-0. 2%，发酵工艺条件为：接种量10%，温度26°C±1°C， 通气量I: 0. 5vvm，罐压0. 03MPa;种子罐发酵3天后转接到发酵罐发酵，发酵罐培养基 为：蛋白胨2-4%、葡萄糖1. 5-1. 7%、磷酸二氢钾0. 05-0. 07%、硫酸镁0. 07-0. 08%、消泡 剂0. 1-0. 3%。发酵工艺为：接种量10%，发酵温度26°C±1°C，通气量1 : 0. 5vvm，罐压 0.03MPa。发酵罐体积为种子罐的10倍。发酵结束后，发酵液经卧式螺旋卸料沉降离心机 分离，得到菌丝体。
[0022] 步骤c)所述的保温优选在80-10(TC条件下保温。
[0023] 步骤d)所述的离心分离条件为采用卧螺离心机在500_2500r/min转速条件下，分 离10-30min;所述的干燥条件是将离心分离得到的虫草多糖在60-90°C下干燥40h-80h。
[0024] 上述发酵虫草源性P_葡聚糖提取物的制备方法具体包括以下步骤：
[0025] a)向发酵的湿虫草菌丝体中，加入质量浓度为70-95 %的乙醇，加热至20_50°C， 保持2h_5h后，离心，弃去滤液，得到湿菌丝体；
[0026] b)向a)中湿菌丝体加入纯化水进行洗涤，得到洗涤后的菌丝体；
[0027] c)将b)中洗涤后的菌丝体，加入纯化水，菌丝体与纯化水比例为1:2-5,煮沸后， 保温3h-10h，每隔1-1. 5h，在10-20r/min转速条件下搅拌5min-20min，离心，弃去菌丝体， 保留滤液；
[0028] d)将c)中所得滤液，浓缩至比重为0.8-1.3,加入乙醇进行醇沉，离心，得到湿 葡聚糖提取物，回收乙醇；
[0029]e)将d)中得到的湿P-葡聚糖提取物在真空度0. 02MPa_0.IOMPa条件下真空干 燥，湿料厚度不高于5cm，干燥温度60-90°C，干燥40h-80h。
[0030] 该P-葡聚糖提取物可制备具有保健效果的食品或药品，如咖啡。
[0031] 一种发酵虫草源性(6-葡聚糖咖啡，包括(6-葡聚糖提取物，氯化钠与咖啡粉，3 葡聚糖，氯化钠与咖啡粉的比例为I:1 :(0.05-0. 30) :(10-30)。在总混中加入氯化钠可以 使咖啡中的焦糖化的味道更为突出，咖啡味道柔和浓郁。
[0032] 上述P_葡聚糖咖啡的制备方法包括以下步骤：
[0033] a)向发酵的湿虫草菌丝体中，加入质量浓度为70-95 %的乙醇，加热至20_50°C， 保持2h_5h后，离心，弃去滤液，得到湿菌丝体；
[0034] b)向a)中湿菌丝体加入纯化水进行洗涤，得到洗涤后的菌丝体；
[0035] c)将b)中洗涤后的菌丝体，加入纯化水，菌丝体与纯化水比例为1:2-5,煮沸后， 保温3h-10h，每隔1-1. 5h，在10-20r/min转速条件下搅拌5min-20min，离心，弃去菌丝体， 保留滤液；
[0036] d)将c)中所得滤液，浓缩至比重为0.8-1.3,加入乙醇进行醇沉，离心，得到湿 葡聚糖提取物，回收乙醇；
[0037] e)将d)中得到的湿P-葡聚糖提取物在真空度0. 02MPa_0.IOMPa条件下真空干 燥，湿料厚度不高于5cm，干燥温度60-90°C，干燥40h-80h。
[0038] f)将e)中干燥品用纯化水溶解,干燥品与纯化水重量比例为1:2-5 ;然后在真空 度0. 02MPa-0.lOMPa，干燥温度60-90°C条件下减压真空干燥40h-80h，粉碎，过80目筛，总 混60-90min，得到成品；
[0039] g)P-葡聚糖，氯化钠与咖啡粉的比例为1 :0. 05-0. 30 :10-30,用三维运动混合机 混匀60_90min。即葡聚糖咖啡。
[0040] 本发明加入氯化钠可中和丹宁酸的苦味，使咖啡中的焦糖化的味道更为突出。
[0041] 所使用的氯化钠为食品级氯化钠，市售可得。
[0042] 与现有技术比较本发明的有益效果：
[0043] 1、市售的真菌多糖提取物中，具有活性的P葡聚糖含量较低，P葡聚糖的含量 仅在1-5%。而本发明显著提高了真菌多糖提取物中P葡聚糖的含量，总多糖含量高达 56 %的同时，1，3-1，6 3葡聚糖含量高达43. 5 %，腺苷含量高达0. 33 %，甘露醇含量高达 12.0%，而a葡聚糖含量可在10%以下。
[0044] 2、多糖提取物粘度较大，传统上会加入糊精等方式降低黏度，但是这种方法降低 了产品中P葡聚糖含量，在本发明中采用特定的减压真空的干燥方式，在无淀粉