专利名称：2’,3’－o－异亚丙基核苷5’－硫代磷酰氨基酸酯化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种2’，3’-0-异亚丙基核苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，该化合物具有良好的生物活性和抗病毒、抗肿瘤、抗HIV等药物活性，可在临床应用中发展成为一种核苷类抗病毒、抗肿瘤、抗HIV前药(prodrugs)。
硫代磷酸在磷原子上含有一个硫取代氧的结构，虽然这个结构仍然保留着原来的电荷，保留着高水溶性的性质，但硫代磷酸的寡聚脱氧核糖核酸(S-oligos)的其他理化特性和生物学属性均与天然的磷酸二酯原型有很大的差别。最显著的差别之一是硫代磷酸对核酸酶具有抵抗性。由于细胞内外核酸酶的存在，很快消化掉了加入的磷酸二酯类反义寡聚核苷酸，使其丧失作用功能。
本发明的目的是研制一种2′，3′-O-异亚丙基核苷5′-硫代磷酰氨基酸酯化合物，通过合成具有抵抗核酸酶的硫代磷酸类化合物，开发用于抗病毒、抗肿瘤、抗HIV活性的药物。
本发明的2′，3′-O-异亚丙基核苷5′-硫代磷酰氨基酸酯化合物，共有四种，其中第一种2′，3′-O-异亚丙基腺苷5′-硫代磷酰氨基酸甲酯化合物的结构式为 上述结构式中R为H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2。化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入相同物质的量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂(如三乙胺，N-甲基咪唑)。
3)制备2′，3′-O-异亚丙基腺苷备用室温下取腺苷悬浮于干燥的丙酮中配成0．5mol／L的溶液，搅拌下向其中加入等物质的量的对甲苯磺酸和原甲酸三乙酯，约1小时后体系变澄清，用浓氨水与大量水进行中和，然后将上述溶液减压浓缩，在冰箱中静置过夜即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基腺苷。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将上述(3)中制备的2′，3′-O-异亚丙基腺苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加缚酸剂。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，即可得到本发明的产物。
第二种2′，3′-O-异亚丙基鸟苷5′-硫代磷酰氨基酸甲酯化合物的结构式为 上述结构式中R为H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2。化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入相同物质的量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂(如三乙胺，N-甲基咪唑)。
3)制备2′，3′-O-异亚丙基鸟苷备用室温下取鸟苷悬浮于干燥的丙酮中配成0．17mol／L的溶液，搅拌下向其中加入对甲苯磺酸和原甲酸三乙酯，继续加入鸟苷，使鸟苷的浓度达到0．5mol／L，约1小时后体系变澄清，用浓氨水与水进行中和，此时产物2′，3′-O-异亚丙基鸟苷慢慢析出，室温下静置过夜，过滤后再用冰-水混合物充分洗涤，干燥后得产物2′，3′-O-异亚丙基鸟苷。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将上述(3)中制备的2′，3′-O-异亚丙基鸟苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加缚酸剂。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，即可得到产物。
第三种2′，3′-O-异亚丙基胞苷5′-硫代磷酰氨基酸甲酯化合物的结构式为 上述结构式中R为H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2。化合物的合成步骤
1)在氮气保护下，室温(25℃)将三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入相同物质的量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂(如三乙胺，N-甲基咪唑)。
3)2′，3′-O-异亚丙基胞苷的合成室温下将胞苷悬浮于干燥的丙酮中配成0．5mol／L的溶液，搅拌下向其中加入少量对甲苯磺酸和2倍物质的量的原甲酸三乙酯，约1小时后体系变澄清，加入NaHCO3进行中和，继续搅拌15分钟，过滤后固体用丙酮洗涤，将滤液与洗涤液蒸干后得到产物2′，3′-O-异亚丙基胞苷。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将上述(3)中制备的2′，3′-O-异亚丙基胞苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加缚酸剂。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，即可得到产物。
第四种2′，3′-O-异亚丙基尿苷5′-硫代磷酰氨基酸甲酯化合物的结构式为 上述结构式中R为H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2。化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入相同物质的量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂(如三乙胺，N-甲基咪唑)。
3)2′，3′-O-异亚丙基尿苷的合成室温下将尿苷悬浮于干燥的丙酮中配成1mol／L的溶液，搅拌下向其中加入无水CuSO4和少量浓H2SO4，37℃隔绝空气搅拌72小时，将混合物抽滤后用丙酮洗涤，滤液中加入Ca(OH)2，搅拌1小时以中和H2SO4，过滤后滤液经减压蒸馏得到产物2′，3′-O-异亚丙基尿苷。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将上述(3)中制备的2′，3′-O-异亚丙基尿苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加缚酸剂。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，即可得到产物。
上述合成的系列化合物经CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验发现均有不同程度的活性。2′，3′-O-异亚丙基核苷5′-硫代磷酰氨基酸甲酯是一类全新的具有抗HIV药物活性的化合物，通过合成不同种类的核苷-氨基酸缀合物，并进行活性实验，初步得到了满意的结果，为进一步研制和开发新型抗HIV药物提供了基础研究成果。
以下是
具体实施例方式实例12′，3′-O-异亚丙基腺苷5′-硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物的制备，其中R为H。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．125g)的甘氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)制备2′，3′-O-异亚丙基腺苷备用室温下取1mol(267g)腺苷悬浮于2L的丙酮中，搅拌下向其中加入1．1mol(210g)对甲苯磺酸和4mol(640ml)原甲酸三乙酯，约1小时后体系变澄清，用100ml浓氨水与5．9L水进行中和，然后将上述溶液减压浓缩至1．5L，在冰箱中静置过夜即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基腺苷266g(87％)。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．31g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基腺苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基腺苷5′-硫代磷酰甘氨酸甲酯2′，3′-O-异亚丙基腺苷5′-硫代磷酰甘氨酸甲酯，产率为58．4％。波谱数据如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ60．38，61．02；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9．26，9．22(bs，1H，NH)，8．43(1H，s，H-2)，8．23(1H，s，H-8)，7．40(2H，s，NH2)，6．44(1H，m，H-1′)，4，50 (2H，m，H-2′，3′)，3．97(1H，m，H-4′)，3．88(3H，s，OCH3)，3．64(2H，m，H-5′)，3．57(2H，m，H-α)，1．54(3H，s，CH3)，1．33(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ173．24(COOMe)，163．70(C-2)，150．43(C-4)，140．76(C-6)，117．02，116．96(＞CMe2)，101．76(C-1′)，87．74(C-5)，84．83(C-2′)，73．54(C-3′)，69．80(C-4′)，60．87(C-5′)，54．78(OCH3)，45．86(C-α)，26．40(CH3)，26．86(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z476(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z474(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验HIV=Human immunodeficiency virusMT-4=Human leukenia T cellCEM=Human lymphoblastoid T cellED50=抗病毒活性指标CD50=细胞毒性指标ED50CEM-TK- 5×10-3M(CD507×10-6M)CEM-SS4×10-3M(CD508×10-6M)MT4 2×10-3M(CD508×10-6M)实例22′，3′-O-异亚丙基腺苷5′-硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物的制备，其中R为CH3。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．14g)的丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-异亚丙基腺苷的合成同上述实例(1)。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．31g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基腺苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基腺苷5′-硫代磷酰丙氨酸甲酯，产率为62．4％。波谱数据如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ57．86，57．03；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9．44，9．40(bs，1H，NH)，8．89(1H，s，H-2)，8．67(1H，s，H-8)，7．67(2H，s，NH2)，6．59(1H，m，H-1′)，4，78(2H，m，H-2′，3′)，4．22(1H，m，H-4′)，3．98(3H，s，OCH3)，3．85(2H，m，H-5′)，3．67(2H，m，H-α)，1．61(3H，s，CH3)，1．42(3H，s，CH3)，1．31，1．30(3H，d，3J=6，β-CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ180．24(COOMe)，170．70(C-2)，156．43(C-4)，149．76(C-6)，117．02，116．96(＞CMe2)，108．23(C-1′)，89．66(C-5)，85．87(C-2′)，76．23(C-3′)，69．66(C-4′)，61．23(C-5′)，54．78(OCH3)，50．73(C-α)，48．66(C-β)，26．40(CH3)，26．86(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z487(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z489(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK- 4×10-3M(CD502×10-6M)CEM-SS6×10-3M(CD509×10-6M)MT4 8×10-3M(CD506×10-6M)实例32′，3′-O-异亚丙基腺苷5′-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物的制备，其中R为C6H5CH2。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于己干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．22g)的苯丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-异亚丙基腺苷的合成同上述实例(1)。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．31g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基腺苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基腺苷5′-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，产率为58．7％。波谱数据如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ58．64，58．33；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9．21，9．15(bs，1H，NH)，8．67(1H，s，H-2)，8．58(1H，s，H-8)，7．88(2H，s，NH2)，7．15-7．35(5H，m，Ph)，6．59(1H，m，H-1′)，4，55(2H，m，H-2′，3′)，4．37(1H，m，H-4′)，3．79(3H，s，OCH3)，3．66(2H，m，H-5′)，3．48(2H，m，H-α)，2．32(2H，m，H-β)，1．61(3H，s，CH3)，1．49(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ174．24(COOMe)，170．60(C-2)，159．43(C-4)，148．36(Ph-jpso)，117．02，116．96(＞CMe2)，136．11(C-6)，135．12(Ph-para)，130．42(Ph-ortho)，119．91(Ph-meta)，108．23(C-1′)，89．65(C-5)，87．87(C-2′)，76．23(C-3′)，72．66(C-4′)，61．23(C-5′)，56．82(C-β)，56．78(OCH3)，52．73(C-α)，26．40(CH3)，23．80(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z565(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z563(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK-8×10-3M(CD504×10-6M)CEM-SS 9×10-3M(CD507×10-6M)MT46×10-3M(CD508×10-6M)实例42′，3′-O-异亚丙基腺苷5′-硫代磷酰缬氨酸甲酯化合物的制备，其中R为(CH3)2CHCH。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．17g)的缬氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．31g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基腺苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)2′，3′-O-异亚丙基腺苷的合成同上述实例(1)。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基腺苷5′-硫代磷酰缬氨酸甲酯，产率为55．2％。波谱数据如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ56．32，56．14；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9．44，9．40(bs，1H，NH)，8．67(1H，s，H-2)，8．58(1H，s，H-8)，7．54(2H，s，NH2)，6．59(1H，m，H-1′)，4，78(2H，m，H-2′，3′)，4．22(1H，m，H-4′)，3．98(3H，s，OCH3)，3．85(2H，m，H-5′)，3．67(1H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，1．61(3H，s，CH3)，1．42(3H，s，CH3)，1．31(3H，d，3J=6，CH3)，1．25(3H，d，3J=6，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ172．24(COOMe)，165．70(C-2)，159．43(C-4)，145．76(C-6)，117．02，116．96(＞CMe2)，108．23(C-1′)，89．66(C-5)，85．87(C-2′)，76．23(C-3′)，69．66(C-4′)，61．23(C-5′)，54．78(OCH3)，50．73(C-α)，48．66(C-β)，26．40(CH3)，26．86(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z518(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z516(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK-5×10-3M(CD502×10-6M)CEM-SS 6×10-3M(CD505×10-6M)MT48×10-3M(CD506×10-6M)实例52′，3′-O-异亚丙基腺苷5′-硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物的制备，其中R为(CH3)2CHCH2。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．18g)的亮氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．31g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基腺苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)2′，3′-O-异亚丙基腺苷的合成同上述实例(1)。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基腺苷5′-硫代磷酰亮氨酸甲酯，产率为53．2％。波谱数据如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ54．32，54．14；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9．31，9．27(bs，1H，NH)，8．67(1H，s，H-2)，8．58(1H，s，H-8)，7．54(2H，s，NH2)，6．59(1H，m，H-1′)，4，78(2H，m，H-2′，3′)，4．22(1H，m，H-4′)，3．98(3H，s，OCH3)，3．85(2H，m，H-5′)，3．67(1H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，3．21(1H，m，H-γ)，1．61(3H，s，CH3)，1．42(3H，s，CH3)，1．31(3H，d，3J=6，CH3)，1．25(3H，d，3J=6，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ172．24(COOMe)，165．70(C-2)，159．43(C-4)，145．76(C-6)，116．02，115．96(＞CMe2)，109．23(C-1′)，89．66(C-5)，85．87(C-2′)，76．23(C-3′)，69．66(C-4′)，61．23(C-5′)，54．78(OCH3)，50．73(C-α)，48．66(C-β)，46．35(C-γ)，23．40(CH3)，22．86(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z 531(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z529(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK-5×10-3M(CD502×10-6M)CEM-SS 2×10-3M(CD505×10-6M)MT45×10-3M(CD509×10-6M)实例62′，3′-O-异亚丙基鸟苷5′-硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物的制备，其中R为H。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．125g)的甘氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)制备2′，3′-O-异亚丙基鸟苷备用室温下取0．33mol(94．4g)鸟苷悬浮于2L的丙酮中，搅拌下向其中加入1．1mol(210g)对甲苯磺酸和4mol(640ml)原甲酸三乙酯，继续加入0．66mol(189g)的鸟苷，约1小时后体系变澄清，用100ml浓氨水与5．9L水进行中和，此时产物2′，3′-O-异亚丙基鸟苷慢慢析出，室温下静置过夜，过滤后再用冰-水混合物充分洗涤，干燥后得到产物2′，3′-O-异亚丙基鸟苷240g(74％)。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．323g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基鸟苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基鸟苷5′-硫代磷酰甘氨酸甲酯，产率为58．4％。波谱数据如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ56．68，56．39；1H NMR(500MHz，D2O)δ8．18(1H，s，H-8)，5．82，5．81(1H，d，3J=6．0，H-1′)，4，89(1H，m，H-2′)，4．23(1H，m，H-3′)，3．23(1H，m，H-4′)，3．54(3H，s，OCH3)，3．65(2H，m，H-5′)，3．54(2H，m，H-α)，1．66，1．65(3H，d，3J=6．0，β-CH3)，1．35(3H，s，CH3)，1．33(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ172．31(COOMe)，165．81(C-2)，158．67(C-6)，152．34(C-4)，139．66(C-8)，121．11(＞CMe2)，118．71(C-5)，89．42(C-4′)，86．25(C-1′)，73．55(C-3′)，70．82(C-2′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH3)，50．62(C-β)，45．89(C-α)，28．66(CH3)，26．15(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z 491(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z489(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK-8×10-3M(CD506×10-6M)CEM-SS 3×10-3M(CD504×10-6M)MT46×10-3M(CD503×10-6M)实例72′，3′-O-异亚丙基鸟苷5′-硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物的制备，其中R为CH3。化合物的结构式 化合物的合成步骤
1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．140g)的丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-异亚丙基鸟苷的合成同上述实例(6)。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．31g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基鸟苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基鸟苷5′-硫代磷酰丙氨酸甲酯2′，3′-O-异亚丙基鸟苷5′-硫代磷酰丙氨酸甲酯，产率为52．3％。波谱数据如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)855．88，55．37；1H NMR(500MHz，D2O)δ8．07(1H，s，H-8)，5．82，5．81(1H，d，3J=6．0，H-1′)，4，51(1H，m，H-2′)，4．18(1H，m，H-3′)，3．94(1H，m，H-4′)，3．86(3H，s，OCH3)，3．68(2H，m，H-5′)，3．57(2H，m，H-α)，1．35(3H，s，CH3)，1．33(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ178．31(COOMe)，156．81(C-2)，153．67(C-6)，151．34(C-4)，135．66(C-8)，120．11(＞CMe2)，116．71(C-5)，86．42(C-4′)，85．25(C-1′)，73．74(C-3′)，70．42(C-2′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH3)，45．89(C-α)，23．66(CH3)，23．15(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z 506(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 504(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK-6×10-3M(CD507×10-5M)CEM-SS 6×10-3M(CD509×10-6M)MT42×10-4M(CD507×10-5M)实例82′，3′-O-异亚丙基鸟苷5′-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物的制备，其中R为C6H5CH2。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．21g)的苯丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-异亚丙基鸟苷的合成同上述实例(6)。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．31g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基鸟苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基鸟苷5′-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，产率为50．3％。波谱数据如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ57．18，56．89；1H NMR(500MHz，D2O)δ8．07(1H，s，H-8)，7．25-7．41(5H，m，Ph)，5．79，5．78(1H，d，3J=6．0，H-1′)，4，41(1H，m，H-2′)，4．18(1H，m，H-3′)，3．94(1H，m，H-4′)，3．86(3H，s，OCH3)，3．68(2H，m，H-5′)，3．57(2H，m，H-α)，2．27(2H，m，H-β)，1．21(3H，s，CH3)，1．17(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ180．31(COOMe)，166．81(C-2)，161．67(C-6)，158．34(C-4)，151．26(Ph-jpso)，135．66(C-8)，130．07(Ph-para)，128．23(Ph-ortho)，118．45(Ph-meta)，108．11(＞CMe2)，96．71(C-5)，86．42(C-4′)，85．25(C-1′)，73．74(C-3′)，70．42(C-2′)，61．45(C-5′)，57．22(C-β)，54．62(OCH3)，45．89(C-α)，23．66(CH3)，23．15(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z 581(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 579(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK-6×10-3M(CD507×10-5M)CEM-SS 6×10-3M(CD509×10-6M)MT42×10-4M(CD507×10-5M)实例92′，3′-O-异亚丙基鸟苷5′-硫代磷酰缬氨酸甲酯化合物的制备，其中R为(CH3)2CH。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．170g)的丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-异亚丙基鸟苷的合成同上述实例(6)。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．31g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基鸟苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加lmmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基鸟苷5′-硫代磷酰缬氨酸甲酯，产率为56．2％。波谱数据如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ58．86，58．27；1H NMR(500MHz，D2O)δ9．07(1H，s，H-8)，6．82，6．81(1H，d，3J=6．0，H-1′)，5，48(1H，m，H-2′)，4．95(1H，m，H-3′)，4．36(1H，m，H-4′)，3．86(3H，s，OCH3)，3．68(2H，m，H-5′)，3．57(2H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，1．35(3H，s，CH3)，1．31(3H，s，CH3)，1，16，1．15(3H，d，3J=6．0，CH3)，1．06，1．05(3H，d，3J=6．0，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ178．31(COOMe)，156．81(C-2)，153．67(C-6)，151．34(C-4)，135．66(C-8)，120．11(＞CMe2)，116．71(C-5)，86．42(C-4′)，85．25(C-1′)，73．74(C-3′)，70．42(C-2′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH3)，45．89(C-α)，44．24(C-β)，23．66(CH3)，23．15(CH3)，21．26(CH3)，20．05(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z533(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 531(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK-5×10-3M(CD506×10-5M)CEM-SS 7×10-3M(CD509×10-6M)MT44×10-4M(CD508×10-5M)实例102′，3′-O-异亚丙基鸟苷5′-硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物的制备，其中R为(CH3)2CHCH2。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．180g)的亮氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmmol(0．2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-异亚丙基鸟苷的合成同上述实例(6)。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．31g)已溶于THF中的2′3′-O-异亚丙基鸟苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基鸟苷5′-硫代磷酰亮氨酸甲酯，产率为50．2％。波谱数据如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ55．86，55．27；1H NMR(500MHz，D2O)δ9．07(1H，s，H-8)，6．82，6．81(1H，d，3J=6．0，H-1′)，5，48(1H，m，H-2′)，4．95(1H，m，H-3′)，4．36(1H，m，H-4′)，3．86(3H，s，OCH3)，3．68(2H，m，H-5′)，3．57(2H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，3．22(1H，m，H-γ)，1．35(3H，s，CH3)，1．31(3H，s，CH3)，1．16，1．15(3H，d，3J=6．0，CH3)，1．06，1．05(3H，d，3J=6．0，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ178．31(COOMe)，166．81(C-2)，159．67(C-6)，156．34(C-4)，134．66(C-8)，117．11(＞CMe2)，116．71(C-5)，86．42(C-4′)，85．25(C-1′)，73．74(C-3′)，70．42(C-2′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH3)，45．89(C-α)，44．24(C-β)，41．24(C-γ)，21．26(CH3)，20．05(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z 548(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 546(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK-6×10-3M(CD506×10-5M)CEM-SS 8×10-3M(CD508×10-6M)MT48×10-4M(CD502×10-5M)实例112′，3′-O-异亚丙基胞苷5′-硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物的制备，其中R为H。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．125g)的甘氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)制备2′，3′-O-异亚丙基胞苷备用室温下取1mol(244g)鸟苷悬浮于2L的丙酮中，搅拌下向其中加入0．1mol(19g)对甲苯磺酸和2mol(320ml)原甲酸三乙酯，约1小时后体系变澄清，加入1mol(84g)NaHCO3进行中和，继续搅拌15分钟，过滤后固体用丙酮洗涤，将滤液与洗涤液蒸干后得到产物2′，3′-O-异亚丙基胞苷慢慢析出，室温下静置过夜，过滤后再用冰-水混合物充分洗涤，干燥后得到产物2′，3′-O-异亚丙基胞苷263g(92％)。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．282g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基胞苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基胞苷5′-硫代磷酰甘氨酸甲酯，产率为60．4％。波谱数据如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ57．68，56．26；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．90，7．89(1H，d，3J=5．5，H-6)，6．24(1H，m，H-1′)，5．84，5．83(1H，d，3J=6，H-5)，4．28(1H，m，H-3′)，3．88(1H，m，H-4′)，3．71(3H，s，OCH3)，3．65(2H，m，H-5′)，2．69(2H，m，H-α)，2．15(1H，H-2′)，1．15(3H，s，CH3)，1．07(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ177．63(COOMe)，165．82(C-4)，158．13(C-2)，140．34(C-6)，121．11(＞CMe2)，93．71(C-5)，87．25(C-1′)，84．42(C-4′)，70．42(C-3′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH3)，45．89(C-α)，39．82(C-2′)，28．66(CH3)，26．15(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z 451(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z449(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK-8×10-4M(CD506×10-5M)CEM-SS 6×10-3M(CD504×10-5M)MT46×10-4M(CD503×10-6M)实例122′，3′-O-异亚丙基胞苷5′-硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物的制备，其中R为CH3。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．14g)的丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-异亚丙基胞苷的合成同上述实例11。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．282g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基胞苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基胞苷5′-硫代磷酰丙氨酸甲酯，产率为62．4％。波谱数据如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ55．66，55．31；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．90，7．89(1H，d，3J=5．5，H-6)，6．88(1H，m，H-1′)，5．84，5．83(1H，d，3J=6，H-5)，4．68(1H，m，H-3′)，3．88(1H，m，H-4′)，3．71(3H，s，OCH3)，3．65(2H，m，H-5′)，2．89(2H，m，H-α)，2．66(1H，H-2′)，1．45(3H，d，3J=6，H-β)，1．15(3H，s，CH3)，1．07(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ185．63(COOMe)，165．82(C-4)，158．13(C-2)，145．34(C-6)，121．11(＞CMe2)，93．71(C-5)，87．25(C-1′)，84．42(C-4′)，70．42(C-3′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH3)，50．86(C-β)，45．89(C-α)，39．82(C-2′)，27．66(CH3)，24．15(CH3)，ESI-MS(pos．)m／z 464(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 462(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK-5×10-3M(CD505×10-5M)CEM-SS 5×10-3M(CD508×10-6M)MT47×10-4M(CD503×10-6M)实例132′，3′-O-异亚丙基胞苷5′-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物的制备，其中R为C6H5CH2。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．22g)的苯丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-异亚丙基胞苷的合成同上述实例11。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．282g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基胞苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基胞苷5′-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，产率为56．7％。波谱数据如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ58．71，58．13；1H NMR(500MHz，D2O)δ8．22，8．21(1H，d，3J=5．5，H-6)，7．29-7．41(5H，m，Ph)，7．03(1H，m，H-1′)，5．84，5．83(1H，d，3J=6，H-5)，4．66(1H，m，H-3′)，3．82(1H，m，H-4′)，3．58(3H，s，OCH3)，3．44(2H，m，H-5′)，2．89(2H，m，H-α)，2．66(1H，H-2′)，2．27(1H，m，H-β)，1．15(3H，s，CH3)，1．07(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ180．63(COOMe)，165．82(C-4)，158．13(C-2)，146．36(Ph-jpso)，117．02，136．11(C-6)，137．12(Ph-para)，136．42(Ph-ortho)，122．91(Ph-meta)，121．11(＞CMe2)，93．71(C-5)，87．25(C-1′)，84．42(C-4′)，70．42(C-3′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH3)，50．86(C-β)，45．89(C-α)，39．82(C-2′)，27．66(CH3)，24．15(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z 540(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z538(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK-5×10-4M(CD508×10-5M)CEM-SS 6×10-4M(CD508×10-5M)MT48×10-4M(CD507×10-6M)实例142′，3′-O-异亚丙基胞苷5′-硫代磷酰缬氨酸甲酯化合物的制备，其中R为(CH3)2CH。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．17g)的缬氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-异亚丙基胞苷的合成同上述实例11。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．282g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基胞苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基胞苷5′-硫代磷酰缬氨酸甲酯，产率为52．4％。波谱数据如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ56．98，56．21；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．90，7．89(1H，d，3J=5．5，H-6)，6．63(1H，m，H-1′)，5．84，5．83(1H，d，3J=6，H-5)，4．61(1H，m，H-3′)，3．69(1H，m，H-4′)，3．76(3H，s，OCH3)，3．65(2H，m，H-5′)，2．89(2H，m，H-α)，2．66(1H，H-2′)，2．14(1H，m，H-β)，1．15(3H，s，CH3)，1．07(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ185．63(COOMe)，165．82(C-4)，158．13(C-2)，145．34(C-6)，121．11(＞CMe2)，93．71(C-5)，87．25(C-1′)，84．42(C-4′)，70．42(C-3′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH3)，50，86(C-β)，49，89(C-α)，46．21(C-β)，39．82(C-2′)，24．37(CH3)，23．22(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z 506(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 504(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK-5×10-4M(CD505×10-7M)CEM-SS 5×10-4M(CD506×10-6M)MT48×10-3M(CD503×10-5M)实例152′，3′-O-异亚丙基胞苷5′-硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物的制备，其中R为(CH3)2CHCH2。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．18g)的亮氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-异亚丙基胞苷的合成同上述实例11。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．282g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基胞苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基胞苷5′-硫代磷酰亮氨酸甲酯，产率为55．4％。波谱数据如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ54．36，53．56；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．96，7．95(1H，d，3J=6，H-6)，6．36(1H，m，H-1′)，5．84，5．83(1H，d，3J=6，H-5)，4．78(1H，m，H-3′)，3．88(1H，m，H-4′)，3．76(3H，s，OCH3)，3．65(2H，m，H-5′)，3．22(2H，m，H-α)，2．96(1H，H-2′)，2．77(1H，m，H-β)，2．39(1H，m，H-γ)，1．15(3H，s，CH3)，1．07(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ185．63(COOMe)，165．82(C-4)，158．13(C-2)，145．34(C-6)，121．11(＞CMe2)，93．71(C-5)，88．25(C-1′)，85．42(C-4′)，70．42(C-3′)，61．45(C-5′)，54．88(OCH3)，50．86(C-β)，48．89(C-α)，46．21(C-γ)，39．82(C-2′)，23．39(CH3)，23．01(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z508(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z506(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK-5×10-3M(CD506×10-6M)CEM-SS 8×10-4M(CD509×10-6M)MT47×10-4M(CD508×10-6M)实例162′，3′-O-异亚丙基尿苷5′-硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物的制备，其中R为H。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．125g)的甘氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)制备2′，3′-O-异亚丙基尿苷备用室温下取0．04mol(10g)尿苷悬浮于250ml的丙酮中，搅拌下向其中加入0．124mol(20g)无水CuSO4和0．25ml浓硫酸，37℃隔绝空气搅拌72小时，将混合物抽滤后用丙酮洗涤，滤液中加入Ca(OH)2，搅拌1小时以中和H2SO4，过滤后滤液经减压蒸馏得到产物2′，3′-O-异亚丙基尿苷9．5g(90％)。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．284g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基尿苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基尿苷5′-硫代磷酰甘氨酸甲酯，产率为63．4％。波谱数据如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ57．68，56．26；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．79，7．78(1H，dd，3J=4．5，H-6)，5．82(2H，m，H-1′，5)，4．93(2H，m，H-2′，3′)，4．52(1H，m，H-4′)，4．00(2H，m，H-5′)，3．63(3H，s，OCH3)，3．57(2H，m，H-α)，1．53(3H，s，CH3)，1．33(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ177．08(COOMe)，169．02(C-4)，153．99(C-2)，145．39，145．36(C-6)，117．02，116．96(＞CMe2)，104．33，104．22(C-5)，95．83，95．16(C-1′)，87．97(C-4′)，87．20，87．13(C-2′)，83．64，83．51(C-3′)，67．24(C-5′)，55．09(OCH3)，45．80，45．73(C-α)，28．63(CH3)，26．86(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z453(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 451(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK-8×10-3M(CD509×10-5M)CEM-SS 9×10-3M(CD508×10-5M)MT48×10-4M(CD505×10-6M)实例172′，3′-O-异亚丙基尿苷5′-硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物的制备，其中R为CH3。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．14g)的丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-异亚丙基尿苷的合成同上述实验16。
4)用核磁共振使(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．284g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基尿苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基尿苷5′-硫代磷酰丙氨酸甲酯，产率为58．4％。波谱数据如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ58．32，57．68；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．88，7．87(1H，dd，3J=5，H-6)，5．89(2H，m，H-1′，5)，4．98(2H，m，H-2′，3′)，4．61(1H，m，H-4′)，4．04(2H，m，H-5′)，3．73(3H，s，OCH3)，3．57(2H，m，H-α)，1．61(3H，s，CH3)，1．42(3H，s，CH3)，1．31，1．30(3H，d，3J=6，β-CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ175．04(COOMe)，166．73(C-4)，149．28(C-2)，144．36，144．32(C-6)，118．40，117．59(＞CMe2)，107．62，107．43(C-5)，98．76，98．41(C-1′)，86．23(C-4′)，85．71，85．63(C-2′)，82．70，82．58(C-3′)，65．44(C-5′)，56．87(OCH3)，50．73(C-α)，48．66(C-β)，26．53(CH3)，25．85(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z 466(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z464(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK- 8×10-4M(CD509×10-4M)CEM-SS 7×10-4M(CD506×10-5M)MT4 8×10-3M(CD505×10-5M)实例182′，3′-O-异亚丙基尿苷5′-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物的制备，其中R为C6H5CH2。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．21g)的苯丙氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-异亚丙基尿苷的合成同上述实验16。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．284g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基尿苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基尿苷5′-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，产率为51．4％。波谱数据如下31PNMR(D2O，δppm，JHz)δ60．32，59．68；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．88，7．87(1H，dd，3J=5，H-6)，7．22-7．46(5H，m，Ph)，6．08(2H，m，H-1′，5)，5．15(2H，m，H-2′，3′)，4．71(1H，m，H-4′)，4．34(2H，m，H-5′)，3．93(3H，s，OCH3)，3．57(2H，m，H-α)，2．37(2H，m，H-β)，1．57(3H，s，CH3)，1．32(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ178．04(COOMe)，166．73(C-4)，149．28(C-2)，148．39(Ph-jpso)，148．36，148．32(C-6)，139．12(Ph-para)，129．42(Ph-ortho)，122．91(Ph-meta)，118．40，117．59(＞CMe2)，110．62，110．43(C-5)，98．76，98．41(C-1′)，88．23(C-4′)，85．71，85．63(C-2′)，83．27，82．58(C-3′)，65．44(C-5′)，56．87(OCH3)，50．73(C-α)，48．66(C-β)，26．53(CH3)，25．85(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z542(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z540(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK-8×10-4M(CD507×10-4M)CEM-SS 9×10-4M(CD509×10-4M)MT48×10-4M(CD506×10-4M)实例192′，3′-O-异亚丙基尿苷5′-硫代磷酰缬氨酸甲酯化合物的制备，其中R为(CH3)2CH。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．14g)的缬氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-异亚丙基尿苷的合成同上述实验16。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．284g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基尿苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基尿苷5′-硫代磷酰缬氨酸甲酯，产率为61．4％。波谱数据如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ57．32，56．55；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．89，7．88(1H，dd，3J=5，H-6)，5．99(2H，m，H-1′，5)，4．96(2H，m，H-2′，3′)，4．61(1H，m，H-4′)，4．04(2H，m，H-5′)，3．73(3H，s，OCH3)，3．57(2H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，1．61(3H，s，CH3)，1．42(3H，s，CH3)，1．31，1．30(2H，d，2CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ178．04(COOMe)，167．55(C-4)，146．28(C-2)，144．36，144．32(C-6)，118．40，117．59 (＞CMe2)，107．62，107．43(C-5)，98．76，98．41(C-1′)，86．23(C-4′)，85．71，85．63(C-2′)，82．70，82．58(C-3′)，65．44(C-5′)，56．87(OCH3)，50．73(C-α)，48．66(C-β)，26．53(CH3)，25．85(CH3)，22．45(CH3)，22．55(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z 494(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 492(M-H)-。该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK-9×10-5M(CD508×10-5M)CEM-SS 6×10-4M(CD508×10-4M)MT48×10-4M(CD502×10-5M)实例202′，3′-O-异亚丙基尿苷5′-硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物的制备，其中R为(CH3)2CHCH2。化合物的结构式 化合物的合成步骤1)在氮气保护下，室温(25℃)将1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．18g)的亮氨酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)2′，3′-O-异亚丙基尿苷的合成同上述实验16。
4)用核磁共振仪(NMR)跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将1mmol(0．284g)已溶于THF中的2′，3′-O-异亚丙基尿苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加1 mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解。
6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，洗脱剂为异丙醇∶氨水∶水=33∶1∶1即可得到产物2′，3′-O-异亚丙基尿苷5′-硫代磷酰亮氨酸甲酯，产率为57．5％。波谱数据如下31P NR(D2O，δppm，JHz)δ56．66，56．10；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．89，7．88(1H，dd，3J=5，H-6)，5．82(2H，m，H-1′，5)，4．86(2H，m，H-2′，3′)，4．41(1H，m，H-4′)，4．04(2H，m，H-5′)，3．73(3H，s，OCH3)，3．57(2H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，3．21(2H，m，H-γ)，1．61(3H，s，CH3)，1．42(3H，s，CH3)，1．31，1．30(2H，d，2CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ178．04(COOMe)，167．55(C-4)，152．28(C-2)，146．36，146．32(C-6)，118．40，117．59(＞CMe2)，107．62，107．43(C-5)，98．76，98．41(C-1′)，88．23(C-4′)，85．71，85．63(C-2′)，82．70，82．58(C-3′)，67．44(C-5′)，58．54(OCH3)，50．73(C-α)，48．66(C-β)，35．68(C-γ)，26．53(CH3)，25．85(CH3)，22．45(CH3)，22．55(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z508(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z506(M-H)该化合物在CEM细胞和MT-4细胞中的抗HIV-1活性实验ED50CEM-TK-5×10-4M(CD506×10-4M)CEM-SS 6×10-5M(CD508×10-5M)MT47×10-4M(CD507×10-4M)
权利要求
1.一种2′，3′-O-异亚丙基核苷5′-硫代磷酰氨基酸酯化合物，其特征在于该化合物的结构式为 上述结构式中R为H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2；上述化合物的合成包括以下步骤1)在氮气保护下，室温将三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃中，配制成1mol／L的溶液；2)向上述溶液中加入相同物质的量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂；3)制备2′，3′-O-异亚丙基腺苷备用室温下取腺苷悬浮于干燥的丙酮中配成0．5mol／L的溶液，搅拌下向其中加入等物质的量的对甲苯磺酸和原甲酸三乙酯，约1小时后体系变澄清，用浓氨水与大量水进行中和，然后将上述溶液减压浓缩，在冰箱中静置过夜即可得到产物2′3′-O-异亚丙基腺苷；4)用核磁共振仪跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将上述(3)中制备的2′，3′-O-异亚丙基腺苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加缚酸剂；5)监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解；6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，即可得到本发明的产物。
2．一种2′，3′-O-异亚丙基鸟苷5′-硫代磷酰氨基酸甲酯化合物，其特征在于该化合物的结构式为 上述结构式中R为H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2；该化合物的合成包括以下步骤1)在氮气保护下，室温将三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃中，配制成1mol／L的溶液；2)向上述溶液中加入相同物质的量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂；3)制备2′，3′-O-异亚丙基鸟苷备用室温下取鸟苷悬浮于干燥的丙酮中配成0．17mol／L的溶液，搅拌下向其中加入对甲苯磺酸和原甲酸三乙酯，继续加入鸟苷，使鸟苷的浓度达到0．5mol／L，约1小时后体系变澄清，用浓氨水与水进行中和，此时产物2′，3′-O-异亚丙基鸟苷慢慢析出，室温下静置过夜，过滤后再用冰-水混合物充分洗涤，干燥后得产物2′，3′-O-异亚丙基鸟苷；4)用核磁共振仪跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将上述(3)中制备的2′3′-O-异亚丙基鸟苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加缚酸剂；5)监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解；6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，即可得到本发明的产物。
3.一种2′，3′-O-异亚丙基胞苷5′-硫代磷酰氨基酸甲酯化合物，其特征在于该化合物的结构式为 上述结构式中R为H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2；该化合物的合成包括以下步骤1)在氮气保护下，室温将三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃中，配制成1mol／L的溶液；2)向上述溶液中加入相同物质的量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂；3)2′，3′-O-异亚丙基胞苷的合成室温下将胞苷悬浮于干燥的丙酮中配成0．5mol／L的溶液，搅拌下向其中加入少量对甲苯磺酸和2倍物质的量的原甲酸三乙酯，约1小时后体系变澄清，加入NaHCO3进行中和，继续搅拌15分钟，过滤后固体用丙酮洗涤，将滤液与洗涤液蒸干后得到产物2′，3′-O-异亚丙基胞苷；4)用核磁共振仪跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将上述(3)中制备的2′，3′-O-异亚丙基胞苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加缚酸剂；5)监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解；6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，即可得到本发明的产物。
4.一种2′，3′-O-异亚丙基尿苷5′-硫代磷酰氨基酸甲酯化合物，其特征在于该化合物的结构式为 上述结构式中R为H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2；该化合物的合成包括以下步骤1)在氮气保护下，室温将三氯硫磷溶于已干燥过的四氢呋喃中，配制成1mol／L的溶液；2)向上述溶液中加入相同物质的量的氨基酸甲酯盐酸盐，搅拌均匀后慢慢滴加缚酸剂；3)2′，3′-O-异亚丙基尿苷的合成室温下将尿苷悬浮于干燥的丙酮中配成1mol／L的溶液，搅拌下向其中加入无水CuSO4和少量浓H2SO4，37℃隔绝空气搅拌72小时，将混合物抽滤后用丙酮洗涤，滤液中加入Ca(OH)2，搅拌1小时以中和H2SO4，过滤后滤液经减压蒸馏得到产物2′，3′-O-异亚丙基尿苷；4)用核磁共振仪跟踪反应进程，待三氯硫磷全部反应完毕以后，将上述(3)中制备的2′，3′-O-异亚丙基尿苷慢慢滴入上述体系中，搅拌均匀后继续滴加缚酸剂；5)监测反应完成后，过滤，旋转蒸馏除去溶剂及其他低沸点物质，最后用氨水进行水解；6)水解完全以后，用硅胶柱进行柱层析分离，即可得到本发明的产物。
全文摘要
本发明涉及一种2′,3′－O－异亚丙基尿苷5′－硫代磷酰氨基酸甲酯化合物,其合成过程为:首先,将三氯硫磷溶于四氢呋喃中,再加入氨基酸甲酯盐酸盐,将2′,3′－O－异亚丙基尿苷慢慢滴入上述体系中,滴加缚酸剂,用氨水水解,最后用硅胶柱进行柱层析分离,即可得产物。本发明的化合物具有抗HⅣ药物活性。
文档编号A61P35/00GK1291615SQ0012456
公开日2001年4月18日 申请日期2000年9月22日 优先权日2000年9月22日
发明者赵玉芬, 苗志伟, 韩波, 付华 申请人:清华大学