用于治疗女性性机能障碍的化合物的制作方法

专利名称：用于治疗女性性机能障碍的化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及可用于治疗女性性机能障碍(FSD)，尤其是女性性唤起机能障碍(FSAD)的药物。
本发明还涉及一种治疗FSD，尤其是FSAD的方法。
本发明还涉及筛选可用于治疗FSD，尤其是FSAD的化合物的分析法。
为了方便起见，在权利要求部分之前提供了用于下文的缩写表。女性性反应在阴道和阴蒂以及另外的性器官开始发生生理变化之前，女性唤起性反应期不容易与欲望期区分。性兴奋和快感伴随有导致阴蒂、阴唇和阴道壁的充血，增加的阴道润滑和阴道腔扩大的血管和神经肌肉活动的组合(Levin，1980；Ottesen，1983；Levin，1991；Levin，1992；Sjoberg，1992；Wagner，1992；Schiavi等，1995；Masters等，1996；Berman等1999)。
阴道的充血使得发生渗出，这个过程导致增加的阴道润滑。渗出使得血液通过上皮并达到阴道表面，由于该推动力增加了唤起状态期间毛细血管床中的血流。此外，充血导致阴道长度和腔直径的增加，尤其是阴道腔远侧2/3处。阴道腔的扩张是由于其壁的平滑肌的松弛和骨盆底肌肉骨骼肌肉的松弛的结合一些性疼痛疾病，如阴道痉挛被认为至少部分是由于防止阴道扩张的不足松弛；还有待于证实这是否主要是平滑肌或骨骼肌的问题(Levin，1980；Ottesen，1983；Levin，1991；Levin，1992；Sjoberg，1992；Wagner，1992；Schiavi等，1995；Master等，1996；Merman等，1999)。
阴道的血管和微血管受含有神经肽和另外的神经介质候选活性剂的神经支配。包括降钙素基因相关肽(CGRP)、神经肽Y(NPY)、氧化氮合酶(NOS)、P活性剂和血管活性肠肽(VIP)(Hoyle等，1996)。存在于阴蒂中的肽将在下面讨论。通常与VIP同存在一个部位的氧化氮合酶免疫学上在深的动脉和静脉，而非本身的血管中显示更大的表达(Hoyle等，1996)。女性性机能障碍业已知一些人可患有女性性机能障碍(FSD)。
FSD被清楚地定义为女性在性表达获得满意时的困难和无力。FSD是一些不同的女性性失调的总称(Leiblum，1998，Berman等，1999)。女性可能缺乏欲望、唤起或性高潮困难、性交期间伴有疼痛或这些问题的混合。一些类型的疾病、药物、损伤或心理问题可导致FSD。
夫妇中性功能障碍的研究表明高达76％的妇女具有性功能障碍，30-50％的美国妇女有FSD的经历。
FSD的亚型包括活动减退性性欲望障碍，女性性唤起障碍、性高潮障碍和性欲望障碍。
处于开发中的治疗针对治疗特定的FSD亚型，主要是欲望和唤起障碍。
通过将它们与正常女性性反应期对比很好地定义了FSD的分类欲望、唤起和高潮(Leiblum1998)。欲望或性欲是性表达的动力-表现包括当感兴趣的伴侣在一起时或暴露于另外的色情的刺激时的性想法。相反，性唤起是对性刺激的血管反应，其中重要的一个部分是阴道的润滑和阴道的伸长。因此，与性欲望相反，性唤起是与生殖器(例如阴道和阴蒂)的血流而不是必需的敏感性相关的反应。性欲高潮是在唤起期间达到顶点的性紧张的释放。因此，FSD通常在妇女在欲望、唤起或高潮的任一阶段具有不足或不满意的反应时发生。FSD类型包括活动减退性性欲望障碍，性唤起障碍、性高潮障碍和性疼痛障碍。
如果一个妇女对性没有或具有很少的欲望并没有或很少性想法或幻想，则存在活动减退性性欲望障碍。由于自然绝经或手术绝经，这类FSD可由低的睾酮水平导致。另外的的原因包括疾病、药物、疲劳、抑郁和焦虑。
女性性唤起障碍(FSAD)特征在于对性刺激的不足的生殖器反应。生殖器(例如阴道和/或阴蒂)没有标志正常性唤起的充血。阴道壁润滑不好，这样性交疼痛。性高潮障碍。唤起障碍可由在绝经或生育和哺乳以及疾病和血管疾病，如糖尿病和动脉粥样硬化之后降低的雌激素所导致。另外的原因来自使用利尿剂、抗组胺药、抗抑郁药，例如SSRIs或抗高血压药。下面更详细讨论FSAD。
性疼痛障碍(包括性交困难和阴道痉挛)特征在于来自穿过的疼痛并可能由降低的润滑、子宫内膜异位、骨盆炎性疾病、炎性肠疾病或尿道疾病的药物导致。
FSD的流行难于测定是因为该术语包括一些类型的问题，其中一些难于测定，并且由于对治疗FSD感兴趣相对是近来的事。许多妇女性疾病直接与妇女年龄增长过程或慢性疾病，如糖尿病和高血压有关。
在报道的FSD发病率和流行情况中有很大的变化，一部分解释是由于使用不同的评价标准，但大多数调查表明很大一部分另外的健康的妇女具有一种或多种FSD亚组综合症。作为实例，比较夫妇的性障碍的研究表明与40％患有勃起或射精障碍的男性相比，63％的妇女患有唤起或高潮障碍(Frank等，1978)。然而，女性性唤起障碍在调查与调查之间变化很大。在最近国家健康和社会生活调查中，19％的妇女被报道润滑困难，而14％的门诊病人被妇科临床报道具有类似的润滑困难(Rosen等，1993)。
一些研究还报道糖尿病妇女中的性唤起障碍(高达47％)，这包括降低的阴道润滑(Wincze等，1993)。神经病与性机能障碍之间没有关系。
许多研究还表明总的来说在11-48％的妇女中随着年龄可能具有降低的性欲望。类似地，11-50％的妇女报道唤起和润滑困难，并因此性交疼痛。阴道痉挛不常见，影响约1％的妇女。
对具有性经历的妇女的研究表明5-10％患有基本性快感缺乏症。另外的10％具有不经常的性欲高潮，另外10％不一致地体验(Spector等，1990)。
由于FSD由在性反应周期各个阶段表现症状的一些亚型组成，因此没有单一的治疗。目前对FSD的治疗主要集中在心理或相关的方面。对FSD的治疗逐渐演变成更为临床，基础科学研究集中于对此医学问题的研究上。妇女性抱怨在病理生理学并不都是心理上的，尤其是可能患有一种导致综合性的女性性抱怨的血管发生机能障碍(例如FSAD)的那些人。目前没有批准用于FSD的治疗药物。经验的药物治疗包括使用雌激素(局部或作为激素代替治疗)、雄激素或改变情绪的药物，如丁螺环酮或曲唑酮。由于低效或不能接受的副作用，这些治疗方案经常不令人满意。
由于兴趣最近相对集中于用药物治疗FSD，治疗由下面组成心理咨询，非处方性润滑和研究的候选药物，包括批准用于另外的疾病的药物。这些药物由激素活性剂、睾酮或雌激素和睾酮的结合以及在雄性勃起机能障碍中被证实有效的最新的血管药物。其中没有一种药物已被证实在治疗FSD中非常有效。女性性唤起机能障碍(FSAD)性唤起反应由骨盆的血管充血、阴道润滑和外生殖器延伸和膨胀组成。障碍导致明显的压抑和/或人之间交往的困难。夫妇中性机能障碍的研究表明有许多患有性唤起机能障碍的女性；另外的已知为女性性唤起障碍(FSAD)。
美国精神病协会的诊断和统计手册(DSM)IV定义女性性唤起障碍(FSAD)如下“在性活动足够的性兴奋的润滑-膨胀反应完成之前，持续或经常发生的获得或维持的无能。障碍必定导致明显的压抑或人之间交往的困难”。
FSAD为影响绝经前，绝经期和绝经后(±HRT)妇女的高发的性疾病。它与伴行的疾病相关，如抑郁、心血管疾病，糖尿病和UG疾病。
FSAD的主要后果是缺乏充血/膨胀，缺乏润滑和缺乏愉快的生殖器感觉。FSAD的第二种后果是降低的性药欲望、性交疼痛和难于获得性高潮。
最近已假设至少在一部分患有FSAD的病人中存在血管基础(Goldstein等，1998)，已有动物试验支持这种观点(Park等，1997)。
正研究其功效的用于治疗FSAD的药物候选物主要为促进男性生殖器血液循环的勃起机能障碍治疗。它们由两种类型的剂型组成，口服或舌下药物(阿朴吗啡、酚妥拉明和Sildenafil)和在男性注射或经尿道施用和在女性局部施用于生殖器的前列腺素(PGE1-Alprostadil)。
本发明努力提供一种有效治疗FSD，尤其是FSAD的方法。
本发明创造性的发现是使用INPY能治疗患有FSD(优选FSAD)的女性。
根据本发明，本发明的INPY称之为“本发明的活性剂”。
本发明的活性剂也可与一种或多种另外的药物活性活性剂结合使用。如果与本发明的活性剂同时存在或结合使用，另外的药物活性活性剂可称为“另外的活性剂”。一种或多种这些另外的活性剂可为一种或多种IPDE、INEP，另一种INPY。这些活性剂的结合将在下面详细描述。
如果本发明另外的活性剂为IPDE，那么对于一些具体的实例而言，所述PDE为水解cAMP的PDE(和任选水解cGMP)。术语“水解cAMP”还包括代谢和/或分解cAMP。术语“水解cAMP(和任选cGMP)”指另外的活性剂除水解cAMP外还可以水解cGMP。这里，术语“水解cGMP”还包括代谢和/或分解cGMP。然而，对于本发明一些具体实例来讲，应理解所述另外的活性剂不需要一定能水解cGMP。
本文一般性涉及的活性剂可适用于另外的活性剂以及本发明的活性剂。根据本发明，本发明的活性剂对靶起作用，优选特异性地对靶起作用。靶有时指“本发明的靶”。然而，本发明的活性剂可对一种或多种其他靶作用。这些其他的靶可指“其他靶”。同样，如果使用其他活性剂，那么其他活性剂可靶定本发明相同的靶和/或其他靶(它不必是被本发明的活性剂作用的相同的另外的靶)。本文描述这些靶。应理解本文一般性地指的靶可适用于其他的靶以及本发明的靶。
本发明的另一个创造性的发现是使用本发明的活性剂能增强女性生殖器(例如阴道或阴蒂)血流。
在我们的实验中，我们发现FSAD与降低的生殖器血流量相关-尤其是阴道和/或阴蒂中降低的血流量。因此，治疗患有FSAD的妇女可通过血管活性剂增加生殖器的血流来获得。在我们的研究中，我们已证实cAMP介导阴道和阴蒂的血管舒张以及生殖器(例如阴道和阴蒂)血流量可通过提高cAMP的水平来增加/增强。这是我们的又一个创造性发现。
在这个方面，以前没有人提出FSAD可以此方式治疗-即通过直接或间接升高cAMP的水平。而且，在现有技术中没有教导FSAD与cAMP的活性和/或水平的不利调节相关以及cAMP负责介导阴道和阴蒂的血管舒张。因此，本发明尤其令人惊奇。
此外，我们发现通过使用本发明的活性剂，可以增加生殖器的充血并治疗FSAD，例如增加的阴道润滑和增加的阴道和阴蒂的敏感性。
因此，在宽的一方面，本发明涉及使用cAMP的增效剂来治疗FSD，尤其是FSAD。
本发明是有利的，因为它提供了一种恢复正常性唤起反应的方法-即增加生殖器的血流量，导致阴道、阴蒂和阴唇的充血。借助于血浆的渗出，这导致增加的阴道润滑，增加的阴道顺应性和增加的生殖器(例如阴道和阴蒂)敏感性。因此，本发明提供一种恢复、或增强正常性唤起反应的方法。
在一个方面，本发明涉及一种用于(或当使用时)治疗FSD，尤其是FSAD的药物组合物；该药物组合物包含一种能增效患有FSD，尤其是FSAD的女性的性生殖器中cAMP的活性剂；其中该活性剂任选与药物可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合；并且其中所述活性剂为如本文定义的本发明的活性剂。这里，组合物(如本文所述的任何其他组合物)可被包装用于随后的FSD，尤其是FSAD的治疗中。
在另一个方面，本发明涉及一种活性剂在制备用于治疗FSD，尤其是FSAD的药物(如药物组合物)中的用途；其中该活性剂能增效患有FSD，尤其是FSAD的女性的性生殖器中的cAMP；其中所述活性剂为如本文所定义的活性剂。
在另一个方面，本发明涉及一种治疗患有FSD，尤其是FSAD的女性的方法；该方法包括给女性施用能增效性生殖器中cAMP的活性剂；其中该活性剂为导致女性性生殖器中cAMP增效的量；其中活性剂任选与药物可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合；和其中所述活性剂为如本文定义的活性剂。
在另一个方面，本发明涉及一种鉴定可被用于治疗FSD，尤其是FSAD的活性剂的分析法，该分析法包括确定一种活性剂是否可直接或间接增效cAMP，其中在活性剂存在下，cAMP的增效表明该活性剂可用于治疗FSD，尤其是FSAD；和其中所述活性剂为INPY。
作为例证，本发明涉及一种鉴定可直接或间接增效cAMP以治疗FSD，尤其是FSAD的活性剂的分析法，该分析法包括将活性剂与能影响cAMP活性和/或水平的部分接触；和测定cAMP的活性和/或水平；其中在活性剂的存在下，cAMP的增效表明该活性剂可用于治疗FSD，尤其是FSAD；和其中所述活性剂为INPY。
作为另一个例证，本发明涉及鉴定可直接或间接增效cAMP以治疗FSD，尤其是FSAD的活性剂的分析法，该分析法包括将该活性剂与cAMP接触；和测定cAMP的活性；其中在活性剂的存在下，cAMP的增效表明该活性剂可用于治疗FSD，尤其是FSAD；和其中所述活性剂为INPY。
在另一个方面，本发明涉及一种方法，包括步骤(a)进行根据本发明的分析；(b)鉴定一种或多种可直接或间接增效cAMP活性的活性剂；和(c)制备一定量的那些一种或多种鉴定的活性剂；和其中所述活性剂为INPY。
对于这个方面，可修饰步骤(b)中鉴定的活性剂以例如使活性最大化，接着可重复步骤(a)。可重复这些步骤直至获得所需的活性或药物动力学分布。
因此，在另一个方面，本发明涉及一种方法，包括步骤(a1)进行根据本发明的分析；(b1)鉴定一种或多种可直接或间接增效cAMP活性的活性剂；(b2)修饰一种或多种所述鉴定的活性剂；(a2)任选重复步骤(a1)；和(c)制备一定量的那些一种或多种鉴定的活性剂(即已被修饰的那些)；和其中所述活性剂为INPY。
在另一个方面，本发明涉及一种通过用一种活性剂增效体内cAMP来治疗FSD，尤其是FSAD的方法；其中该活性剂在体外分析法中能直接或间接增效cAMP；其中体外分析法为根据本发明的分析法；和其中所述活性剂为INPY。
在另一个方面，本发明涉及一种活性剂在制备用于治疗FSD，尤其是FSAD的药物组合物中的用途，其中在通过用根据本发明的分析法体外分析时该活性剂能直接或间接增效cAMP；和其中所述活性剂为INPY。
在另一个方面，本发明涉及用于鉴定能治疗FSD(尤其是FSAD)的活性剂的动物模型，所述模型包括一个麻醉的雌性动物，包括在刺激其骨盆神经后测定所述动物的阴道和/或阴蒂血流量变化的装置；其中所述活性剂为INPY。
在另一个方面，本发明涉及一种用于鉴定可直接或间接增效cAMP以治疗FSAD的活性剂的分析法，该分析法包括给本发明的动物模型施用一种活性剂；和测定所述动物阴道和/或阴蒂中任何cAMP的增效和/或血流的增加；和其中所述活性剂为INPY。
在另一个方面，本发明涉及一种诊断方法，该方法包括从雌性中分离样品；确定样品是否包含以导致FSD，优选FSAD的量存在的物质，或其量是否导致FSD，优选FSAD；其中该物质对雌性性生殖器中的cAMP的水平或活性具有直接或间接的作用；和其中所述物质可通过使用一种活性剂来调节以获得有益效果；和其中所述活性剂为INPY。
在另一个方面，本发明涉及一种诊断组合物或试剂盒，包含测定分离的雌性样品中物质的工具；其中这些工具可被用来确定样品是否包含且为导致FSD，优选FSAD的量的物质，或其量是否导致FSD，优选FSAD；其中该物质对雌性性生殖器中的cAMP水平或活性具有直接或间接的作用和其中所述物质可通过使用一种活性剂来调节以获得有益的效果；和其中所述活性剂为INPY。
为了便于参考，本发明的这些和其他方面现将在适宜的章节标题下讨论。然而，各个章节的教导不必限于各个特定的章节。优选的方面优选地，本发明的活性剂用于治疗FSAD。
优选地，本发明的活性剂为雌性生殖器(例如阴道或阴蒂)血管舒张的介质。
在一个具体实施方案中，优选本发明的活性剂用于口服给药。
在另一个具体实施方案中，本发明的活性剂可用于局部给药。
优选地，本发明的活性剂为拮抗剂。
本发明的活性剂为INPY(有时写为NPYi)。
对于一些应用，优选所述活性剂为INPY Y1或INPY Y2或INPY Y5，更优选所述活性剂为INPY Y1。
优选地，所述活性剂为选择性的INPY。
优选地，所述活性剂为INPY Y1。
优选地，所述活性剂为选择性的INPY Y1。
对于一些应用，本发明的活性剂可与其他药物活性剂结合使用。这里，共同施用不需同时进行，更不用通过相同途径。共同给药的组合物的实例可为包含根据本发明的活性剂和另外的活性剂的组合物，其中所述另外的活性剂可对cAMP具有直接的增效作用。结合的实例将在下文讨论。
对于一些应用，优选所述另外的活性剂对cAMP具有间接的增效作用。这些另外的活性剂的实例包括INEP和/或INPY。换句话说，对于一些应用，优选所述另外的活性剂对cAMP不具有直接的增效作用。应理解所述另外的活性剂可通过对天然发现和天然定位的直接作用活性剂，如天然发现和定位的VIP起作用对cAMP具有间接的增效作用。
对于一些应用，优选所述另外的活性剂对cAMP具有直接的增效作用。这些另外的活性剂的实例包括IPDE。
对于一些应用，所述另外的活性剂为一种抑制剂，即它能显示抑制功能。
对于一些应用，所述另外的活性剂为拮抗剂。
对于一些应用，优选所述另外的活性剂为IPDE(有时写为PDEi)。
对于一些应用，优选所述另外的活性剂为选择性的IPDE。
对于一些应用，优选所述另外的活性剂为IPDE1或IPDE2(有时写为IPDEII或PDEIIi或PDEIIi或PDE2i)或IPDE3或IPDE4或IPDE7或IPDE8，更优选所述活性剂为IPDE2。
对于一些应用，优选所述另外的活性剂为选择性IPDEII。
对于一些应用，优选所述另外的活性剂为INEP(有时写为为NEPi)。
对于一些应用，优选所述另外的活性剂为选择性INEP。
对于一些应用，优选所述另外的活性剂为INEP，其中所述NEP为EC3.4.24.1l对于一些应用，优选所述另外的活性剂为选择性INEP，其中所述NEP为EC3.4.24.11。
对于一些应用，优选所述另外的活性剂为INPY(有时写为NPYi)。
对于一些应用，优选所述另外的活性剂为INPY Y1或INPY Y2或INPYY5，更优选活性剂为INPY Y1。
对于一些应用，优选所述另外的活性剂为选择性INPY。
对于一些应用，优选所述另外的活性剂为INPY Y1。
对于一些应用，优选所述另外的活性剂为选择性INPY Yl对于一些应用，该活性剂不导致血压长时间降低-或以一定的方式施用而不导致血压长时间降低(例如约5分钟或更长的时间)。在这个具体实施方案中，如果所述活性剂局部送递，则该活性剂可能具有导致血压降低的能力(如它经静脉内送递)，前提是在局部施用时，最低水平的所述活性剂进入血流中。对于口服活性剂，优选该活性剂不导致血压长时间降低。
在一个优选的方面，本发明的活性剂不导致或以一定的方式施用而不导致心率大的变化。治疗应理解本文涉及的治疗包括一种或多种治疗性、减轻性和预防性治疗。优选地，术语治疗包括至少治疗性治疗和/或减轻性治疗。女性生殖器根据Gray氏解剖学，C.D.Clemente，13版美国编中提供的定义使用术语“女性生殖器”，即“生殖器由内源殖器和外生殖器组成。内源殖器位于骨盆中，由卵巢、输卵管、子宫和阴道组成。外生殖器位于泌尿生殖器的表面和盆膈之下。它们包括阴阜、阴唇和小阴唇、阴蒂、阴道前庭、阴道前庭球和前庭腺”。内源cAMP在一个高度优选的具体实施方案中，本发明的活性剂增效内源cAMP-如增加内源cAMP的水平。
这里，术语“内源cAMP”指来自性刺激(性唤起)的cAMP。因此，术语不包括独立于性驱动而升高的cAMP水平。
因此，根据本发明，通过直接或间接增效反过来增加阴道血流量/润滑和/或阴蒂血流量的内源cAMP信号传输获得对FSAD的治疗；从而增加天然性唤起反应。因此，本发明的治疗法恢复或增加正常的唤起反应。
在本发明的治疗方法中，这个结果可通过使用NPY受体拮抗剂来获得。
本文提供可一种动物试验模型。该动物试验模型可被用来确定作为cAMP增效的结果的生殖器血流量的增加。在该动物模型中，刺激骨盆神经-它带来模拟性唤起/反应生理学的效果。在这些实验中，在刺激神经后，根据本发明的活性剂导致高于对照增加的血流量的增加。在无刺激时，所述活性剂对导致血流量增加无效果(或为可忽略不计)。通常，在这些实验中，刺激神经以获得血流量的基线增加。接着，一种候选(或实际)活性剂例如通过静脉内、局部或口服途径送递至全身或局部。与对照增加比较，血流量的增加指示本发明活性剂。性刺激本发明还包括在性刺激之前和/或期间施用本发明的活性剂。这里术语“性刺激”就与“性唤起”同义。本发明的这个方面是有利的，因为它提供全身的选择性。天然级联放大仅在生殖器而不在其他位置发生-例如在心脏等处。因此，可以获得对生殖器的选择性作用。
因此，对于本发明的一些方面，非常希望有一个性刺激步骤。我们发现这个步骤可提供全身性的选择性。这里“性刺激”可为一种或多种肉眼刺激，物理刺激和听觉刺激或思想刺激。
因此，优选地，在性刺激之前或期间送递本发明的活性剂，尤其是当那些活性剂被用于口服送递。
因此，对于这个优选的方面，本发明提供本发明的活性剂在制备用于治疗FSAD的药物中的应用；其中该活性剂在患有FSAD的女性的性生殖器中能增效cAMP；和其中所述女性在施用所述药物之前或期间被性刺激。
优选地，本发明提供本发明的活性剂在制备用于治疗FSAD的药物中的应用；其中该活性剂在患有FSAD的女性的性生殖器中能增效cAMP；其中所述女性在施用所述药物之前或期间被性刺激；和其中所述药物经口服送递至所述女性中。
此外，对于这个优选的方面，本发明提供一种治疗患有FSAD的女性的方法；该方法包括将能增效性生殖器中cAMP的本发明的活性剂送递至女性中；其中该活性剂为导致女性性生殖器中cAMP增效的量；其中该活性剂任选与药物可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合；和其中所述女性在施用所述活性剂之前或期间被性刺激。
优选地，本发明提供一种治疗患有FSAD女性的方法；该方法包括将能增效性生殖器中cAMP的本发明的活性剂送递至女性中；其中该活性剂为导致女性性生殖器中cAMP增效的量；其中该活性剂任选与药物可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合；和其中所述女性在施用所述活性剂之前或期间被性刺激；和其中所述活性剂经口服送递至所述女性中。增效cAMP涉及cAMP如本文所使用的，术语“增效”包括下面一种或多种增加cAMP的有效性，增加cAMP的水平，增加cAMP的活性、降低cAMP降解水平，降低cAMP抑制水平。
增效作用可为直接的作用。直接作用的一个实例为通过一种增加其表达的在活性剂上调cAMP水平。
另一方面，增效作用可为间接作用。这种作用的一个实例为对以另一种方式抑制和/或降低cAMP水平和/或活性的活性剂起作用。这种作用的另一个实例为提高增加cAMP有效性，提高cAMP水平，增加cAMP的活性，降低cAMP的降解水平或降低cAMP抑制水平的活性剂的作用。
另外的PcAMP的实例为IPDE，如IPDEII。cAMP模拟物对于本发明的一些方面，所述另外的活性剂可起cAMP模拟物的作用。
如本文所采用的，术语“cAMP模拟物”指在女性性生殖器中可以与cAMP类似的方式(例如具有类似的生物分布和作用)作用和在如此作用中产生下面一种或多种作用提高cAMP样部分有效性，提高cAMP样部分水平，增加cAMP样部分的活性，降低cAMP样部分抑制水平，降低cAMP样部分的抑制水平。
CAMP模拟物的一个实例为毛喉素。这里我们发现毛喉素增加阴道和阴蒂血流量，并且它还可起阴道松弛剂的作用。
在一个优选的方面，cAMP模拟物经口服给药。cAMP的活化剂如本文所采用的，术语“cAMP的活化剂”指一种在女性性生殖器中控制或释放cAMP的活性剂。控制可为直接(例如对cAMP本身)或间接的(例如借助于cAMP的活化)。为了便于参考，我们将这些活性剂称为AcAMP。靶如本文使用的，涉及本发明的术语“靶”指为cAMP、AcAMP、IcAMP或AMcAMP的任一活性剂。用另一种方式表示，本发明的靶可称为PcAMP靶。
本发明的靶和/或另外的靶可为氨基酸序列和/或编码它的核苷酸序列和/或负责表达它的表达单元和/或它的调节子。
靶甚至可为这些靶的结合。活性剂本发明的活性剂可为能起PcAMP作用的任何适宜的活性剂。
所述活性剂(即本发明的活性剂和/或所述另外的活性剂)可为氨基酸序列或其化学衍生物。该活性剂甚至可为有机化合物或其他化学活性剂。该活性剂甚至可为核苷酸序列-它可为有义序列或反义序列。该活性剂甚至可为抗体。
因此，术语“活性剂”包括，但不局限于可从任何适宜的来源，天然或非天然来源获得或从其制备的化合物。
该活性剂可从可能包含肽以及其他化合物，如小分子有机分子，如铅化合物的化合物库中设计或获得。
作为例证，该活性剂可为天然活性剂、生物大分子或从生物活性剂，如细菌、真菌或动物(尤其是哺乳动物)细胞或组织制备的提取物、有机或无机分子、合成活性剂、半合成活性剂、结构或功能模拟物、肽、肽模拟物、衍生物、从完整蛋白裂解的肽或合成肽(如使用肽合成仪或通过重组技术或它们的结合、重组活性剂、抗体、天然或非天然活性剂、融合蛋白或其等同物及其突变体、衍生物或它们组合。
如本文所采用的，术语“活性剂”可为单一物质或活性剂的组合。
如果所述活性剂为有机化合物，则对于一些应用，如如果活性剂为INPY-则有机化合物可通常包含两个或多个连接的烃基基团。对于一些应用，优选所述活性剂包含至少两个环状基团-任选其中一个环状基团可为融合的环结构。对于一些应用，至少一个环状基团为杂环基团。对于一些应用，优选杂环基团在环中至少包含一个N。这些化合物的实例提供在本文的实施例部分。
如果所述活性剂为有机化合物，则对于一些应用-例如如果活性剂为INEP-则有机化合物通常可包含一个酰胺基团(即-N(H)-C(O)-或甚至-C(O)-N(H)-)和一个或多个烃基基团。这里，术语“烃基”指包含至少C和H并可任选包含一个或多个其他适宜的取代基的基团。这些取代基的实例可包括卤素、烷氧基、硝基烷基、环状基团等。除取代基可能为环状基团外，取代基结合可形成环状基团。如果烃基包含多于一个的C，则那些碳不必相互连接。例如，至少两个碳可借助于适宜的元素或基团相连。因此，烃基基团可包含杂原子。适宜的杂原子对于本领域技术人员来讲是显而易见的，包括例如硫、氮和氧。对于一些应用，优选活性剂包含至少一个环状基团。对于一些应用，优选活性剂包含至少一个借助于酰胺键与另一个烃基基团相连的环状基团。这些化合物的实例提供在本文的实施例部分。
如果所述活性剂为有机化合物，则对于一些应用，例如如果活性剂所谓IPDE-则有机化合物通常可包含两个或多个相连的烃基基团。对于一些应用，优选活性剂包含至少两个环状基团-其中一个环状基团可为融合的环状结构。对于一些应用，优选至少一个环状基团为杂环基团。对于一些应用，优选杂环基团在环中包含至少一个N。这些化合物的实例提供在本文的实施例部分。
所述活性剂可包含卤素基团。这里，“卤素”指氟、氯、溴或碘。
所述活性剂可包含一个或多个可为直链或支链的烷基、烷氧基、链烯基、亚烷基和亚烯基基团。
所述活性剂可为药物可接受的盐的形式-如酸加成盐或碱盐-或其溶剂化物，包括它的水合物。对于适宜盐的综述参见Berge等，药物科学杂志(J.Pharm.Sci)1977，66，1-19。
适宜的酸加成盐由形成无毒盐的酸形成，实例为盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、乙酸盐、马来酸盐、富马酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、葡糖酸盐、琥珀酸盐、蔗糖盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和羟嗪酸盐等。
适宜的碱盐从形成无毒盐的碱形成，实例为钠、钾、铝、钙、镁、锌和二乙醇胺盐。
本发明活性剂的药物可接受的盐可容易地通过将活性剂的溶液与所需的酸或碱适宜地混合在一起而制备。盐可从溶液中沉淀并通过过滤收集或通过蒸发溶剂回收。
活性剂可以多晶型物形式存在。
活性剂可包含一个或多个不对称碳原子，因此存在两个或多个立体异构体形式。当活性剂包含一个链烯基或亚烯基基团时，还可出现顺(E)和反(Z)异构现象。本发明包括活性剂各个立体异构体以及，适宜时，其各种互变异构形式和其混合物。
非对映异构体或顺和反式异构体的分离可通过常规方法实现，例如通过活性剂或适宜盐或其衍生物的立体异构体混合物的分级结晶、色谱或H.P.L.C.。活性剂的各种对映体也可从相应的光学纯中间体制备或通过拆分，如适当地通过使用适宜的手性载体对相应的外消旋体进行H.P.L.C.或通过对通过将相应的外消旋体与适宜的光学活性酸或碱反应形成的非对映异构体盐进行分级结晶。
本发明还包括活性剂或其药物可接受的盐的所有适宜的同位素变异体。本发明活性剂或药物可接受的盐的同位素变异体被定义为其中至少一个原子被具有相同原子数但具有与自然界通常发现的原子量不同的原子量的原子替代。可搀入至活性剂和其药物可接受的盐中的同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分别如2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36Cl。本发明活性剂或其药物可接受的盐的一些同位素变异体，例如其中搀入了放射性同位素，如3H和14C的那些可用于药物和/或底物组织分布的研究。由于其制备的简易和可检测性，氚化的，即3H和碳-14，即14C的同位素尤其是优选的。而且，用同位素，如氘，即2H的取代可提供一些来自更大的代谢稳定性，例如增加的体内半衰期或降低的剂量需求的治疗的有利性并因此在一些情况下是优选的。本发明活性剂和其药物可接受的盐的同位素变异体通常可通过常规方法，使用适宜试剂的适宜同位素变异体来制备。
本领域技术人员应理解所述活性剂可来自药物前体。药物前体的实例包括具有一些保护基团并可能不具有药物学活性，但可能在一些情况下施用(如口服或胃肠外)，而后在身体中代谢以形成具有药物活性的活性剂的物质。
应理解已知为“部分前体”的一些部分，例如H.Bundgaard，Elsevier，1985(其公开被本文引作参考)的“药物前体设计”中描述的，可被放置在活性剂的适宜官能团上。这些药物前体也包括在本发明的范围内。
PcAMP可起下面一种或多种作用直接或间接增加cAMP的有效性，直接或间接增加cAMP的水平，直接或间接增加cAMP的活性，直接或间接降低cAMP降解的水平，直接或间接降低cAMP抑制水平。
优选地，本发明活性剂直接或间接增加患有FSAD的女性性生殖器中的cAMP水平。
更优选地，本发明的活性剂直接或间接选择性地增加患有FSAD的女性性生殖器中的cAMP水平。
更优选地，本发明的活性剂直接或间接选择性地增加cAMP水平，其中所述cAMP为性唤起诱导的cAMP。
在一个高度优选的方面，本发明的活性剂增加性唤起诱导的cAMP的相对量。
对于一些应用，本发明活性剂选择性治疗FSAD。
在一个方面，该活性剂可抑制或拮抗适宜的靶并且从而增加女性性生殖器中的cAMP水平。在本文中，我们使用术语抑制剂指抑制剂和/或拮抗剂。
在另一个方面，所述活性剂可活化或兴奋适宜的靶，并且从而增加女性性生殖器中的cAMP水平。在本文中，我们使用术语活化剂和上调物抑制剂指活化剂和/或上调物和/或兴奋剂。
因此，所述活性剂可兴奋、拮抗、上调或抑制适宜的靶。
本发明的活性剂可为能显示两种或多种这些性质的单一物质。另外，或除此之外，本发明的活性剂可为能显示一种或多种这些性质的活性剂的组合。
优选地，所述活性剂可选择性地兴奋、选择性地拮抗、选择性地上调或选择性地抑制适宜的靶。
优选地，所述活性剂可选择性地兴奋、选择性地拮抗、选择性地上调或选择性地抑制选择性的适宜的靶。
所述活性剂还能显示一种或多种其他有利的功能特性。作为实例，本发明的活性剂可增效cAMP以及cGMP。
对于一些应用(如局部施用)，所述活性剂还可显示ACE(血管紧张肽转化酶)抑制作用。ACE分析提供在本文的实验部分。对于一些应用(如对于特殊病人类型)，这些活性剂(即也显示ACE抑制作用的那些)可能不适宜于口服给药。
对于一些应用，所述活性剂还可显示ECE(内皮肽转化酶)抑制作用。ECE分析为现有技术熟知。药物组合物本发明的活性剂可与一种或多种其他药物活性活性剂结合使用，如PcAMP(如磷酸二酯酶5型抑制剂，例如Sildenafil，或氧化氮供体，或氧化氮前体，例如L-精氨酸或精氨酸酶抑制剂)和/或起中枢作用的药物(例如盐酸多巴胺受体兴奋剂，如阿朴吗啡或选择性盐酸多巴胺D2兴奋剂，如PNU-95666或melanocortin受体兴奋剂，如melanotan II)。在US-A-5945117中可发现关于阿朴吗啡作为药物的用途。在该具体的文件中，阿朴吗啡经舌下送递。此外，或另一方面，该活性剂可与下面一种或多种结合使用PDE5抑制剂(例如sildenafil，Vardenafil(Bayer BA 38-9456)和IC351(Cialis，IcosLilly))，一种或多种氧化氮供体(例如NMI-921)，一种或多种盐酸多巴胺受体兴奋剂(例如阿朴吗啡、Uprima、Ixsene)、一种或多种杂环胺，如WOOO/40226中一般性和具体公开的那些，尤其是实施例号7，8和9，一种或多种melanocortin受体兴奋剂(例如Melanotan II或PT14)，一种或多种钾通道开放剂(例如DATP通道开放剂(例如米诺地尔、尼可地尔)和/或钙活化的钾通道开放剂(例如BMS-204352)，一种或多种α1-肾上腺能受体拮抗剂(例如酚妥拉明、Vasofem、Vasomax)，一种或多种VIP受体兴奋剂或VIP类似物(例如Ro-125-1553)或VIP片段，一种或多种与VIP结合的α-肾上腺能受体拮抗剂)(例如Invicorp，Aviptadil)，一种或多种α2-肾上腺能受体拮抗剂)(例如育亨宾)，一种或多种雌激素、雌激素和甲羟孕酮或醋酸甲羟孕酮(MPA)或雌激素和甲基睾酮激素替代治疗剂(例如HRT，尤其是Premarin、Cenestin、Oestrofeminal、Equin、Estrace、Estrofem、Elleste Solo、Estring、Eastraderm、Eastraderm TTS、Eastraderm Matrix、Dermestril、Premphase、Prempro、Prempak、Premique、Estratest、Estratest HS、Tibolone)，一种或多种睾酮替代剂(inc DHEA(脱氢雄烯二酮、睾丸素(Tostrelle)或睾酮植入物(Organon))，一种或多种睾酮/雌二醇，一种或多种雌激素兴奋剂，例如Lasofoxifene，一种或多种5-羟色胺受体兴奋剂或拮抗剂(例如5HT1A、5HT2C、5HT2A和5HT3受体兴奋剂和拮抗剂；如WO2000/28993描述的)，一种或多种前列腺素类受体兴奋剂(例如Muse、前列腺素E、米索前列醇)，一种或多种嘌呤能受体兴奋剂(尤其是P2Y2和P2Y4)，一种或多种抗抑郁剂(例如丁氨苯丙酮(Wellbutrin)、Mirrtazapine、萘发扎酮)。IC351的结构为 如果结合施用活性剂，那么它们可同时、分别或顺序给药。VIP组合根据本发明，所述活性剂不为VIP(或优选不是其类似物或其片段)。然而，对于一些具体实例，本发明的活性剂可与VIP或其类似物或其片段共同施用。
在一个高度优选的方面，不施用VIP或其类似物或其片段。这是因为有报道说VIP输注导致显著的心血管副作用，如心律加快和动脉舒张压降低(Ottesen1983，1987，1995)。
此外，虽然Ottesen和他的同事已证实VIP诱导健康自愿者阴道血流量的增加和润滑，但是VIP发挥其作用的机理不清楚。在文献中，有许多VIP作为信号转输通过不同的第二信号系统的实例，例如cGMP/鸟苷酸环化酶(Ashur-Fabian，1999)；一氧化碳(CO)/血红素氧化酶(Fan等，1998)和cAMP/腺苷酸环化酶(Foda，1995；Schoeffter，1985；Gu1992)。这通过最近的报道例举，该报道描述了在子宫动脉中VIP的血管舒张作用如何通过氧化氮的释放来解释(Jovanovic，1998)。而且，还有证据表明在男性泌尿生殖功能中VIP调节氧化氮(NO)/cGMP(Kim，1994)。
而且，在文献中，已报道在阴道平滑肌细胞培养物中VIP对cAMP水平无影响(参见Traish，A.，Moreland，R.B.，Huang，Y.，等(1999)。人和兔阴道平滑肌细胞培养物的制备血管活性剂对环状核苷酸细胞内水平的影响。分子细胞生物学研究通讯(Mol.Cell Biol.Res.Comm)2，131-137)。
而且在接下来的研究中，Ottesen和他的同事们(参见Palle，Bredkjaer，Ottesen和Fahrenkrug1990临床和实验药物学和生理学17卷61-68)，报道与给药途径无关，VIP对阴道血流量的影响是全身血管舒张作用的一部分而不是局部反应。此外，他们报道许多血管副作用与VIP相关-即潮红、高血压和心动过速。Ki值对于一些应用，优选本发明的活性剂(和任选地所述任选的其他活性剂)具有小于约100nM的Ki值，优选小于约75nM，优选小于约50nM，优选小于约25nM，优选小于约20nM，优选小于约15nM，优选小于约10nM，优选小于约5nM。Kb值对于一些应用，优选本发明的活性剂(和任选地所述任选的其他活性剂)具有小于约100nM的Kb值，优选小于约75nM，优选小于约50nM，优选小于约25nM，优选小于约20nM，优选小于约15nM，优选小于约10nM，优选小于约5nM。Ka值对于一些应用，优选本发明的活性剂(和任选地所述任选的其他活性剂)具有小于约100nM的Ka值，优选小于约75nM，优选小于约50nM，优选小于约25nM，优选小于约20nM，优选小于约15nM，优选小于约10nM，优选小于约5nM。药物动力学对于本发明的一些具体实施方案，优选本发明的活性剂(和任选地所述任选的另外的活性剂，例如INEP)具有-2至+4的logD，更优选-1至+2。logD可通过本领域熟知的标准方法确定，如描述在药物与药物学杂志(J.Pharm.Pharmacol)1990，42144。
此外，或另一方面，对于一些具体实施方案，本发明的活性剂(和任选地所述任选的另外的活性剂，例如INEP)具有大于2X10-6ms-1的caco-2通量，更优选大于5×10-6ms-1。caco通量值可通过本领域已知的标准方法确定，如药物科学杂志(J.Pharm.Sci)79，7，595-600页(1990)和药物研究(pharm.Res)14卷6号(1997)中所描述。选择性对于一些应用，优选本发明的活性剂(和任选地所述任选的另外的活性剂)对希望的靶具有至少约100倍选择性，优选对希望的靶具有至少约150倍的选择性，优选对希望的靶具有至少约200倍的选择性，优选对希望的靶具有至少约250倍的选择性，优选对希望的靶具有至少约300倍的选择性，优选对希望的靶具有至少约350倍的选择性。
对于一些应用，优选本发明的活性剂(和任选地所述任选的另外的活性剂)对希望的靶具有至少约400倍选择性，优选对希望的靶具有至少约500倍的选择性，优选对希望的靶具有至少约600倍的选择性，优选对希望的靶具有至少约700倍的选择性，优选对希望的靶具有至少约800倍的选择性，优选对希望的靶具有至少约900倍的选择性，优选对希望的靶具有至少约1000倍的选择性。化学合成方法通常所述活性剂通过化学合成技术制备。
所述活性剂或其靶或变异体、同系物、衍生物、片段或模拟物可使用化学方法合成整个活性剂或活性剂的一部分来制备。例如，可通过固相技术合成肽，从树脂上裂解，通过制备高效液相色谱纯化(例如Creighton(1983)蛋白质结构和分子原理，WH Freeman和Co，纽约NY)。合成肽的组成可通过氨基酸分析或测序来证实(例如Edman降解法；Creighton，见上文)。
所述活性剂或其靶或变异体、同系物、衍生物、片段或模拟物可使用各种固相技术进行(Roberge JY等(1995)科学269202-204)，可实现自动合成，例如根据制造商提供的说明使用AB1 43 1A肽合成仪(Perkin Elmer)。此外，在直接合成期间，可改变包含所述活性剂或其任何一部分的氨基酸序列和/或使用化学方法与来自其他亚基的序列或其任一部分化合以产生变异的活性剂或靶，如变异的NPY。
在本发明另一个具体实施方案中，所述活性剂靶或变异体、同系物、衍生物、片段或模拟物的编码序列可使用本领域熟知的化学方法全部或部分合成(参见Caruthers MH等(1980)核酸研究论文集(Nuc Acids Res Symp Ser)215-23，Horn T等(1980)核酸研究论文集225-232)。模拟物如本文所采用的，术语“模拟物”指包括，但不局限于肽、多肽、抗体或具有相同性质的活性或对靶起参考活性剂作用的其他有机化合物的任何化学活性剂。化学衍生物本文使用的术语“衍生物”或“衍生化”包括活性剂的化学修饰。这些化学修饰的实例是氢被卤素、烷基、酰基或氨基置换。化学修饰在本发明的一个具体实施方案中，所述活性剂可为化学修饰的活性剂。
活性剂的化学修饰可增强或降低活性剂与靶之间的氢键的相互作用、电荷的相互作用、疏水相互作用、范德华力相互作用或偶极相互作用。
在一个方面，确定的活性剂可起开发其他化合物的模型(例如模板)的作用。重组方法通常，用于本发明分析法中的靶可通过重组DNA方法制备。增效cGMP对于cGMP，如本文所采用的，术语“增效”包括下面一种或多种作用增加cGMP的有效性，增加cGMP的水平，增加cGMP的活性，降低cGMP降解的水平，降低cGMP抑制水平。
增效作用可为直接的作用。另外，它可为次级作用和/或下游作用。
这里，优选增效cGMP的活性剂对IcGMP和/或AMcGMP起作用，其中cGMP的介质对cGMP具有不利作用，这样该活性剂降低和/或消除和/或掩盖和/或分流IcGMP和/或AMcGMP对cGMP的不利作用。
因此，本发明包括一种或多种IIcGMP和一种或多种IIcGMP的组合。在一个方面，IIcGMP为IPDEcGMP。IcAMP和/或AMcAMP我们发现cAMP调节生殖器(例如阴道或阴蒂)的血流量，通过增强cAMP的信号传输，我们可在动物模型中增加生殖器(例如阴道或阴蒂)的血流。因此，上调/增加cAMP介导的血管舒张的活性剂将在治疗FSAD中有效。为了便于参考，我们将这些物质称为IcAMP和AMcAMP。这里，IcAMP和/或AMcAMP对cAMP水平或活性具有不利的作用。
因此，所述活性剂可为IIcAMP和/或IAMcAMP多种中的任一种。
所述活性剂可为能显示两种或多种这些性质的单一实体。另外，或此外，活性剂可为能显示一种或多种这些性质的活性剂的组合。
IcAMP和AMcAMP的实例包括NPY和任选一种或多种PDE和NEP，或与其相关的任何组分。相关的组分可为例如受体和/或辅因子。
因此，优选本发明的活性剂可与IPDEcAMP和INEP多种中的任一种结合使用。
同样，所述活性剂可为显示两种或多种这些性质的单一物质。另外，或此外，所述活性剂可为能显示一种或多种这些性质的活性剂的组合。IIcAMP和/或IAMcAMP根据本发明，我们发现通过使用降低/或消除和/或掩盖和/或分流和/或预防IcAMP和/或AMcAMP对cAMP的不利作用的活性剂可以治疗和/或预防FSAD。所述活性剂甚至可恢复被IcAMP和/或AMcAMP降低的cAMP水平。方便起见，我们将这些活性剂称为IIcAMP和/或IAMcAMP。这里，IIcAMP和/或IAMcAMP预防或降低对cAMP水平或活性的不利作用。
因此，在一个优选的方面，所述活性剂为IIcAMP或IAMcAMP，其中AMcAMP对AMcAMP具有不利作用。AcAMP根据本发明，我们发现FSAD的一个重要的原因是由于女性生殖器中低水平或低活性的cAMP。
因此，所述活性剂可为UAcAMP。
因此，优选本发明的活性剂也能起下面多种中的任一种的作用，和/或与任一种结合使用AAC，AVIPr，AVIPn，IIVIPr或IIVIPn。
所述活性剂可为显示两种或多种这些性质的单一物质。另外，或此外，所述活性剂可为能显示一种或多种这些性质的活性剂的组合。UAcAMP在另一个方面，另外的靶可为增加cAMP水平的组分。因此，所述活性剂可起UAC的作用。
因此，作为例证，本发明的活性剂也能起下面多种中的任一种的作用，和/或与任一种结合使用UAcAMP、AAC，AVIPr，AVIPn，IIVIPr或IIVIPn。
作为例证，靶可为cAMP本身或AC或VIP(或其组合)。IIcAMP和/或IMcAMP和/或UAcAMP的组合在另一个方面，本发明的活性剂可与cAMP增效剂结合使用。作为例证，本发明的活性剂可与下面的一种或多种组合使用IPDEcAMP
IPDEncAMPINPYINPY YnINEPUAcAMPAACAVIPrAVIPnIIVIPrIIVIPnCAMP模拟物抑制剂对于本发明的活性剂，本文所采用的术语“抑制剂”指可降低和/或消除和/或掩盖和/或预防IcAMP和/或McAMP对cAMP的不利作用的活性剂。所述抑制剂可起拮抗剂的作用。
活化剂对于本发明的活性剂，本文所采用的术语“活化剂”指可增加和/或产生和/或暴露和/或升高和/或确保cAMP和/或AcAMP作用的活性剂。活化剂可起兴奋剂的作用。
其他活性组分在另一个方面，本发明的活性剂甚至可与一种或多种其他活性组分结合使用，如一种或多种能增效cGMP的活性剂。
氨基酸序列如本文所采用的，术语“氨基酸序列”与术语“多肽”和/或术语“蛋白质”同义。在一些情况下，术语“氨基酸序列”与术语“肽”同义。在一些情况下，术语“氨基酸序列”与术语“蛋白质”同义。
氨基酸序列可从适宜的来源制备，或它可合成制备或它可通过使用重组DNA技术制备。
在一个方面，本发明提供在确定一种或多种能影响氨基酸序列的活性剂和/或其衍生物以增效cAMP来治疗FSAD的分析中能起靶作用的氨基酸序列。
核苷酸序列如本文所采用的，术语“核苷酸序列”与术语“多核苷酸”同义。
核苷酸序列可为基因组或合成或重组来源的DNA或RNA。核苷酸序列可为代表有义或反义或其组合的单链或双链。
对于一些应用，优选核苷酸序列为DNA。
对于一些应用，优选，核苷酸序列通过使用重组DNA技术来制备(例如重组DNA)。
对于一些应用，优选核苷酸序列为cDNA。
对于一些应用，对于这方面，优选核苷酸序列可与天然存在的形式相同。
在一个方面，本发明提供编码一种在确定一种或多种能影响所述物质以增效cAMP来治疗FSAD的分析(例如，酵母双杂交测试)中能起靶作用的物质的核苷酸序列。
本领域技术人员应理解由于遗传密码的简并性，大量不同的核苷酸序列可编码靶。此外，应理解本领域技术人员可使用常规方法产生基本上不影响由本发明核苷酸序列编码的活性的核苷酸取代以反映表达靶的任何特定宿主生物的密码子使用。因此，术语与所附序列表中提供的核苷酸序列相关的“变异体”、“同源物”或“衍生物”包括从或对序列的任何取代、变异、修饰、替代、缺失或添加一个(或多个)核苷酸，前提是产生的核苷酸序列编码根据本发明的功能靶(或如果所述活性剂包含核苷酸序列或氨基酸序列，甚至根据本发明的活性剂)。
如上所述，对于序列同源性，优选与序列表所示序列至少75％，更优选至少85％，更优选至少90％同源性。更优选至少95％，更优选至少98％同源性。核苷酸同源性比较可如上所述进行。优选序列比较程序为如上所述的GCGWisconsin Bestfit程序。对于各确定的核苷酸，误差计算矩阵具有10的匹配值和对于每个错配具有-9的匹配值。误差间隔产生的补偿为-50，对于每个核苷酸误差间隔延伸的补偿为-3。
本发明还包括能与本文提供的序列，或其任何变异体，片段或衍生物，或上面任一的互补序列选择性杂交的核苷酸序列。核苷酸序列优选长度为至少15个核苷酸，较优选至少长度为20，30，40或50个核苷酸。这些序列可被用作探针，如在诊断试剂盒中。变异体/同源物/衍生物除开本文所述的具体的氨基酸序列和核苷酸序列，本发明还包括其变异体、同源物和衍生物的应用。这里，术语“同源性”可与“相同性”同义。
在本文中，同源序列被认为包括可至少75，85或90％相同，优选至少95或98％相同的氨基酸序列。尤其是，同源性应通常针对已知活性所必需的序列的那些区域考虑。虽然同源性还可根据类似性来考虑(即具有类似化学性质/功能的氨基酸残基)，在本发明上下文中，它优选表示根据序列相同性的同源性。
同源性比较可通过肉眼，或更通常借助于可获得的序列比较程序进行。这些商业可获得的计算机程序可计算两个或多个序列的以％表示的同源性。
同源性百分数可针对连续的序列来计算，即将一个序列与另一个序列比较，一个序列中的每个氨基酸直接与另一个序列的相应的氨基酸比较，一次一个残基。这称为“没有间隔的”比较。通常，这些没有间隔的比较仅在相对短数目的残基中进行。
虽然这是一个极简单和固定的方法，但它没有考虑到例如在序列其他相同的配对中，一个插入或缺失将导致下面的氨基酸残基排出在比较之外，因此可能导至当进行整个比较时，同源性百分数大的降低。结果，大多数序列比较方法被设计产生考虑可能的插入和缺失，而不过度损失整个同源性值的最佳比较。这通过在序列比较中插入“缺口”以尽可能最大化局部的同源性。
然而，这些更复杂的方法分配了在比较中出现的对每个缺口的“缺口补偿”，这样对于相同数目的氨基酸，序列比较具有尽可能少的缺口-反映了两个比较序列之间的较高的相关性-将获得比具有多个缺口的更高的值。通常使用对于缺口的存在付与相对更高的值和对于缺口中每个后面的残基更小的补偿的“亲族缺口值”。这最常用于缺口计算系统。高缺口补偿当然产生具有少的缺口的优化的比较。大多数比较程序能修饰缺口补偿。然而，当使用这些软件用于序列比较时，优选使用误差值。例如当使用GCG Wisconsin Bestfit软件包(见下文)，氨基酸序列的误差缺口补偿对于一个缺口为-12，对于各个延伸为-4。
因此，最大同源性百分数的计算考虑到缺口补偿，首先要求产生最佳比较。用于进行这些比较的适宜的计算机程序为GCG Wisconsin Bestfit软件包(Wisconsin大学，U.S.A.；Devereux等1984，核酸研究12387)。可进行序列比较的其他软件的实例包括，但不局限于，BLAST软件包(参见Ausubel等1999上文-18章)，FASTA(Atschul等，1990，分子生物学杂志J.Mol.Biol403-410)和GENEWORKS比较工具软件。BLAST和FASTA可非在线和在线检索(参见Ausubel等，1999出处同上，7-58，7-60)。然而，优选使用GCG Bestfit程序。称为BLAST2的新的工具也可用于比较蛋白质和核苷酸序列(参见FEMS微生物通讯(FEMS Microbiol Lett)1999 174(2)247-50；FEMS微生物通讯1999 177(1)187-8和tatiana＠ncbi.nlm.nih.gov)。
虽然最后的同源性百分数可根据相同性确定，然而，比较过程本身通常不以全部-或无碱基对比较为基础。相反，通常使用对每个配对比较计分并基于化学相似性或进化距离的换算的相似性值矩阵。一个通常使用的矩阵的实例为BLOSUM62矩阵-用于BLAST软件程序的误差矩阵。GCG Wisconsin程序通常使用公开的误差值或如果提供，常用的符号比较表(进一步详情参见使用手册)。优选使用GCG软件包的公开的误差值，或在其他软件的情况下，误差矩阵，如BLOSUM62。
一旦软件产生了最佳比较，可以计算同源性的百分数，优选序列相同性的百分数。软件通常完成它作为序列比较的一部分并产生数值结果。
序列还可具有产生沉默变化和导致功能等同物的氨基酸的缺失、插入或取代。具体的氨基酸取代可在残基极性、电荷、溶解性、疏水性、亲水性和/或两亲性的类似性的基础上进行，只要保留活性剂的次级结合活性。例如，带负电荷的氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸；带正电荷的氨基酸包括赖氨酸和精氨酸；带有具有类似亲水性值的不带电荷的极性首基的氨基酸包括亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸。
例如根据下表可进行保守取代。第二列相同单元和优选第三列相同行的氨基酸可相互取代
本发明还包括可发生同源取代(取代和置换在本文被用来指现有的氨基酸残基与另一个残基的相互交换)，即类似的取代，如碱性的取代碱性的，酸性的取代酸性的、极性的取代极性的等。也可发生非同源的取代，即从一类残基取代为另一类或另外包括含有非天然氨基酸，如鸟氨酸(下文称为Z)，二氨基丁酸鸟氨酸(下文称为B)、正亮氨酸鸟氨酸(下文称为O)、pyriylalanine、噻吩丙氨酸、萘基丙氨酸和苯基甘氨酸。
置换也可用非天然氨基酸进行，包括天然氨基酸的α*和α-二取代*的氨基酸、N-烷基氨基酸*、乳酸*、卤素衍生物，例如三氟酪氨酸*、对氯苯基丙氨酸*、对溴苯基丙氨酸*、对碘苯基丙氨酸、L-烯丙基甘氨酸*、β-丙氨酸*、L-α氨基丁酸*、L-γ-氨基酸丁酸*、L-α-氨基异丁酸*、L-ε-氨基己酸#、7-氨基庚酸*、L-甲硫氨酸砜#、L-正亮氨酸*、L-正缬氨酸、对硝基-L-苯丙氨酸*、L-羟基脯氨酸#、L-硫脯氨酸*、苯丙氨酸(phe)的甲基衍生物，如4-甲基-Phe*五甲基-Phe*、L-Phe(4-氨基)#、L-Tyr(甲基)*、L-Phe(4-异丙基)*、L-Tic(1，2，3，4-四氢异喹琳-3-羧酸)*、L-二氨基酸丙酸#和L-Phe(4-苄基)*。符号*用于上面讨论的目的(与同源或不同源取代相关)，以表明衍生物的疏水特性，而#用于表示衍生物的亲水特性，#*表示两亲性特性。
变异的氨基酸序列可包括可在序列的任何两个氨基酸残基之间插入的适宜的间隔基团，除氨基酸间隔团外，如甘氨酸或β-丙氨酸残基外，还包括烷基基团，如甲基、乙基或丙基。另一种形式的变异，包括类肽(peptoid)形式中存在的一个或多个氨基酸残基，将被本领域技术人员熟知。为了避免混乱，“类肽形式”被用来指变异的氨基酸残基，其中α碳取代基团位于残基的氮原子上而非α碳原子上。制备类肽形式的肽的方法为本领域所熟知，例如Simon RJ等PNAS(1992)89(20)，9367-9371和Horwell DC，生物技术趋势(1995)13(4)，132-134。
杂交本发明还包括可与本文提供的靶序列杂交的序列的用途-例如如果所述活性剂为反义序列。
如本文所采用的术语“杂交”包括“核酸链通过碱基配对与互补链相连的过程”以及在聚合酶链式反应(PCR)技术中进行的扩增过程能与本文提供的核苷酸序列选择性杂交或与它们互补的本发明的核苷酸序列与本文提供的相应的互补核苷酸序列在至少20，优选至少25或30，例如至少40，60或100或更多连续的核苷酸的区域中至少75％，优选至少85或90％，更优选至少95％或98％同源。优选本发明的核苷酸序列包含与本发明序列表中的SEQIDNO2提供的核苷酸序列同源优选至少80％或90％，更优选与本发明序列表中的SEQIDNO2提供的核苷酸序列至少95％同源的区。
术语“可选择性杂交”指当用作探针时，在发现靶核苷酸序列以明显高于本底的水平与探针杂交的条件下使用该核苷酸序列。由于存在的其他核苷酸序列，可能出现杂交本底，例如在筛选的cDNA或基因组DNA文库中。在这种情况下，本底指由探针与比用靶DNA观察的特异性相互作用强度小10倍，优选小100倍的文库中非特异性DNA成员之间的相互作用产生的信号水平。相互作用的强度可测定，例如通过放射标记探针，例如用32P。
杂交条件基于核酸结合复合物的解链温度(Tm)，如Berger和Kimmel(1987，分子克隆技术指南，酶学方法，152卷，Academic Press，圣地亚哥CA)所教导，定义“严谨”为如下解释。
最大严谨通常发生在大约Tm-5℃(比探针的Tm低5℃)；高严谨比Tm低约5℃至10℃；中度严谨比Tm低约10℃至20℃；低度严谨比Tm低约20℃至25 ℃。本领域技术人员理解最大严谨杂交可用来确定或检测相同的核苷酸序列，而中等(低等)严谨杂交可被用来确定或检测类似或相关的多核苷酸序列。
在一个优选的方面，本发明包括在严谨条件下(例如65℃和0.1XSSC{1XSSC＝0.15M NaCl，0.015M柠檬酸钠pH7.0)可与本发明核苷酸序列杂交的核苷酸序列。当本发明的核苷酸序列为双链时，本发明包括单个或结合的双螺旋双链。在核苷酸序列为单链时，应理解核苷酸序列的互补序列也包括在本发明的范围内。
与本发明的序列不为100％同源但仍在本发明范围内的核苷酸序列可以许多方式获得。本文描述的序列的其他变异体可通过例如探测从各种来源制备的DNA文库获得。此外，可获得其他病毒/细菌或细胞同源物，尤其是在哺乳动物细胞中发现的细胞同源物(例如大鼠、小鼠、牛和灵长类细胞)，这些同源物和其片段能选择性与本文序列表中所示序列杂交。这些序列可通过探测来自其他动物种类的cDNA文库或基因组DNA文库和在高度严谨条件下，用包含本文提供的核苷酸序列或其一部分的探针来探测这些文库来获得。用类似的想法获得本发明种的同源物和氨基酸和/或核苷酸序列的等位基因变异体。
变异体和菌株/种的同源物也可使用简并PCR获得，该方法使用设计用来靶定变异体序列的引物和编码本发明序列中的保守氨基酸序列的同源物。保守序列可通过例如比较来自一些变异体/同源物的氨基酸序列来预测。可使用本领域熟知的计算机软件进行序列比较。例如广泛使用GCG Wisconsin PileUp程序。在简并PCR中使用的引物包含一个或多个简并位置，并将在低于使用针对已知序列的单个序列引物克隆序列的那些条件的严谨条件下使用。
另外，这些核苷酸序列可通过确定序列的定点诱变获得，如本发明序列表SEQIDNO2提供的核苷酸序列。在例如沉默密码子变化被要求测定以优化其中表达核苷酸序列的具体的宿主细胞的密码子优先时可使用它。可希望其他序列变化以导入限制性酶识别位点，或改变由核苷酸序列编码的蛋白质的活性。
本发明的核苷酸序列可被用来制备引物，例如PCR引物，其他扩增反应的引物，探针，例如使用放射性或非放射性标记的常规方法用显色标记标记的探针，或核苷酸序列可被克隆至载体中。这些引物，探针和其他片段长度至少为15，优选至少为20，例如至少25，30或40个核苷酸，并也包括在如本文使用的本发明的核苷酸序列术语中。
核苷酸序列，如根据本发明的DNA多核苷酸和探针可重组、合成或通过本领域技术人员可获得的任何方法制备。它们还可通过标准方法克隆。
通常，引物可通过合成方法制备，包括一次一个核苷酸的逐步制备所需的核酸序列。本领域很容易获得使用自动技术完成它的方法。
通常使用重组方法制备较长的核苷酸序列，例如使用PCR(聚合酶链反应)克隆技术。这包括制备位于希望克隆的靶序列一个区域侧翼的一对引物(例如约15至30个核苷酸)，将引物与从动物或人细胞中获得的mRNA或cDNA接触，在使希望的区域扩增的条件下进行聚合酶链式反应(PCR)，分离扩增的片段(例如通过用琼脂糖凝胶纯化反应混合物)和回收扩增的DNA。可设计引物包含适宜的限制性酶识别位点，这样扩增的DNA可被克隆至适宜的克隆载体中。
由于遗传密码固有的简并性，编码本质上相同或功能等同的氨基酸序列的其他DNA序列可被用来克隆和表达靶序列。如本领域技术人员所理解的，对于一些表达系统，制备具有非天然产生的密码子的靶序列可能是有利的。例如可选择特定的原核或真核宿主优选的密码子(Murray E等(1989)核酸研究17477-508)以增加靶表达的比例或制备具有所需特性的重组RNA转录体，如比从天然产生的序列制备的转录体更长的半衰期。表达载体用作靶或用于表达靶的核苷酸序列可被搀入至重组可复制载体中。载体可被用来在和/或从相容宿主细胞中复制和表达核苷酸序列。可使用包含启动子/增强子和其他表达调控信号的调控序列控制表达。可使用原核启动子和在真核细胞中起作用的启动子。还可使用包含来自上述两个或多个不同启动子序列基元的嵌合启动子。
取决于使用的序列和/或载体，由重组宿主细胞表达核苷酸序列产生的蛋白质可被分泌出来或可包含在细胞内。编码序列可被设计具有指导序列编码的活性剂从特定的原核或真核细胞膜分泌出来的信号序列。融合蛋白靶氨基酸序列可以融合蛋白的形式制备以例如有助于提取和纯化。融合蛋白配对物的实例包括谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、6xHis、GAL4(DNA结合和/或转录活化区)和β-半乳糖苷酶。它也可方便地包括融合蛋白配对物与感兴趣的蛋白序列之间的蛋白裂解位点以使得能提取融合蛋白序列。优选融合蛋白不阻碍靶的活性。
融合蛋白可包含与本发明物质融合的抗原或抗原决定簇。在这个具体实施方案中，融合蛋白可为在提供免疫系统一般性刺激方面可起佐剂作用的物质的非天然产生的融合蛋白。抗原或抗原决定簇可与该活性剂的氨基或羧基末端相连。
在本发明另一个具体实施方案中，氨基酸序列可与异源序列相连以编码融合蛋白。例如，对于肽文库筛选能影响该物质活性的活性剂，它可用于编码表达被商业可获得的抗体识别的异源表位的嵌合活性剂。抗体在本发明的具体实施方案中，所述活性剂可为抗体。此外，或另一方面，靶可以为抗体。此外，或另一方面，检测靶的手段可为一种抗体。
抗体可通过标准方法制备，如用本发明的活性剂免疫或通过使用噬菌体显示文库。
为了本发明的目的，术语“抗体”，除非另有说明，包括，但不局限于多克隆、单克隆。嵌合、单链、Fab片段、Fab表达文库产生的片段以及其模拟物。这些片段包括保留其对靶活性剂的结合活性的整个抗体的片段、Fv、F(ab’)和F(ab’)2片段以及单链抗体(scFv)、融合蛋白和包含抗体的抗原结合位点的其他合成蛋白质。而且，抗体和其片段可为人源化抗体。中和抗体，即抑制活性剂肽的生物活性的那些尤其优选用于诊断和治疗。
如果需要多克隆抗体，选择的哺乳动物(例如小鼠、兔、山羊、马等)被用具有可从确定的活性剂和/或本发明的活性剂获得的表位的免疫原肽免疫。取决于宿主种类，各种佐剂可被用来增加免疫反应。这些佐剂包括，但不局限于，Freund氏、矿质胶，如氢氧化铝和表面活性活性剂，如溶血卵磷脂、多聚醇、聚阴离子、肽、油乳液、匙孔血蓝蛋白和二硝基苯酚。BCG(BacilliCalmette-Guerin)和小棒杆菌为如果纯化的活性剂多肽施用于免疫调和个体用于刺激全身防御的目的时，可能采用的可能有用的人佐剂。
收集来自免疫动物的血清并根据已知方法处理。如果包含针对可从确定的活性剂和/或本发明的活性剂获得的表位的多克隆抗体的血清包含针对其他抗原的抗体时，多克隆抗体可通过免疫亲和层析纯化。本领域已知用于制备和处理多克隆抗血清的方法。为了能制备这样的抗体，本发明还提供用作动物或人免疫原的其他多肽的半抗原化的本发明的多肽或其片段。
针对可从确定的活性剂和/或本发明的活性剂获得的表位的单克隆抗体也可容易地由本领域技术人员制备。通过杂交瘤制备单克隆抗体的一般方法是熟知的。可通过细胞融合制备无限增殖的产生抗体的细胞系，和还通过其他方法，如用致癌DNA直接转化B淋巴细胞，或用Epstein-Barr病毒转染。可筛选针对轨道表位产生的单克隆抗体的板的各种性质，即同型和表位亲和性。
针对所述活性剂和/或确定活性剂的单克隆抗体可使用提供培养物中连续细胞系产生抗体分子的任何方法制备。这些方法包括，但不局限于最初由Koehler和Milstein(1975自然256495-497)描述的杂交瘤技术，人B细胞杂交瘤技术(Kosbor等(1983)今日免疫学(Immunol Today)472；Cote等(1983)国家科学院院刊Proc Natl Acad Sci)802026-2030)和EBV-杂交瘤技术(Cole等(1985)单克隆抗体和癌症治疗，Alan R Liss Inc，pp77-96)。此外，可使用开发用于制备“嵌合抗体”的技术，将小鼠抗体基因与人抗体基因剪接起来以获得具有适宜抗原特异性和生物活性的分子(Morrison等(1984)Proc Natl Acad Sci 816851-6855；Neuberger等(1984)自然312604-608；Takeda等(1985)自然314452-454))。另外，可修改制备单链抗体所描述的方法(美国专利号4,946,779)以制备活性剂特异性单链抗体。
针对可从确定的活性剂和/或物质获得的表位的抗体，单克隆和多克隆抗体，尤其用于诊断，中和的那些用于被动免疫。尤其是单克隆抗体可用于产生抗独特型抗体。抗独特型抗体为带有针对它希望产生保护的活性剂和/或试剂的“内部图象”的免疫球蛋白。本领域熟知产生抗独特型抗体的方法。这些抗独特型抗体也可用于治疗。
如Orlandi等(1989，Proc Natl Acad Sci863833-3837)和Winter G和Milstein C(1991；自然349293-299)所描述的，抗体还可通过在体内在淋巴细胞群中诱导产生或通过筛选重组免疫球蛋白文库或高特异性结合试剂板。
还可产生包含所述活性剂特异性结合位点的抗体片段。例如，这些片段包括，但不局限于可通过胃蛋白酶消化抗体分子制备的F(ab’)2片段和可通过减少F(ab’)2片段的二硫键产生的Fab片段。另外，可构建Fab表达文库以使得能迅速和容易确定具有所需特异性的单克隆Fab片段(Huse WD等(1989)科学2561275-1281)。报道基因各种报道基因可用于本发明的分析方法(和筛选)中，优选的报道基因提供可方便检测的信号(例如通过分光术)。作为例证，报道基因可编码催化改变光吸收特性的反应的酶。
报道分子的实例包括，但不局限于β-半乳糖苷酶、转化酶、绿色荧光蛋白、荧光素酶、氯霉素、乙酰转移酶、β-半乳葡糖醛酸糖苷酶、外切葡聚糖酶和葡糖淀粉酶。另外，放射标记或荧光标记物标记的核苷酸可被掺入至当与寡核苷酸探针结合时被鉴定的新生转录体中。
在一个优选的实施方案中，报道分子的制备通过报道基因产物，如β-半乳糖苷酶的酶活性测定。
本领域已知用于检测和测定靶表达的各种方法，如通过使用特异于蛋白的多克隆或单克隆抗体。实例包括酶联免疫吸着测定法(ELISA)、放射免疫分析法(RIA)和荧光活化细胞分选(FACS)。优选使用与多肽中两个不干扰表位反应的单克隆抗体的两位点基于单克隆的免疫分析法，但可采用竞争性结合分析法。这些和其他分析法描述于其他地方以及Hampton R等(1990，血清学方法，实验室手册，APS出版，St Paul MN)和Maddox DE等(1983，实验医学杂志(JExpmed)15 8121 1)。
本领域技术人员熟知各种标记和结合技术并且可用于各种核酸和氨基酸分析中。制备用于检测靶多核苷酸序列的标记的杂交或PCR探针的方法包括少标记、切口翻译或末端标记或使用标记的核苷酸的PCR扩增。另外，编码序列或其任一一部分可被克隆至载体中用于制备mRNA探针。这些载体为本领域所熟知，可商业购得，并可通过加入适宜的RNA聚合酶，如T7、T3或SP6以及标记的核苷酸被用于体外合成RNA探针。
许多公司，如Pharmacia Biotech(Piscataway，NJ)、Promega(Madison，WI)和美国生物化学公司(Cleveland，OH)提供商业试剂盒和用于这些过程的方法。适宜的报道分子或标记包括那些放射性核素、酶、荧光、化学发光活性剂或产色素活性剂以及底物、辅因子、抑制剂、磁性颗粒等。专利报道了这些标记的使用，包括美国专利(US-A)3817837；美国专利3850752；美国专利3939350；美国专利3996345；美国专利4277437；美国专利4275149和美国专利4366341。而且，重组免疫球蛋白可如美国专利4816567所述来制备。
定量特定分子表达的其他方法包括放射标记(Melby PC等1993免疫学方法159235-44)或生物素化(Duplaa C等1993生物化学年鉴(Anal Biochem)229-36)核苷酸、对照核酸的共扩增和实验结果插入其中的标准曲线。可通过在ELISA方法中进行分析来加快多个样品的定量，其中感兴趣的寡聚体以各种稀释度存在并且分光光度或热量反应产生迅速的定量测定。
虽然标记基因表达的存在/不存在表明感兴趣的基因仍然存在，但应证实它的存在和表达。例如，如果核苷酸序列被插入到标记基因序列中，包含它的重组细胞可通过标记基因的功能的缺乏来证实。另外，标记基因可与靶编码序列串联放置于单个启动子的控制下。对诱导或选择响应的标记基因的表达通常也表明靶的表达。
另外，包含靶编码序列并表达靶编码区的宿主细胞可通过本领域技术人员已知的各种方法来确定。这些方法包括，但不局限于包括用于检测和/或定量核酸或蛋白质的膜基、溶液基或片基技术的DNA-DNA或DNA-RNA杂交和蛋白质生物分析或免疫分析技术。对cAMP活性/水平的一般分析一种试验活性剂增效cAMP的能力可通过测定靶水平的相关增加或减少来确定。此外，或另一方面，一种试验活性剂增加cAMP的能力可通过测定cAMP水平的相对增加来确定。作为例证，可采用Smith等的教导1993(应用生物化学和生物技术(Apdl Biochem Bio technol)41189-218)。还有用于cAMP测定的商购免疫分析试剂盒(例如Amersham International，ArlingtonHeights，IL和DuPont，Boston，MA)。有关适宜的cAMP分析的详细说明提供在实验部分。筛选任一一种或多种适宜的靶-如氨基酸序列和/或核苷酸序列-在任一种药物筛选方法中可被用来确定PcAMP。用于该试验的靶在溶液中可为游离的形式，附着于固体载体上，位于细胞表面或位于细胞内。靶甚至可在动物模型中，其中所述靶可为外源靶或导入的靶。动物模型为非人动物模型。可测定靶活性的消失或靶与试验活性剂之间的结合复合物的形成。
用于药物筛选的方法可基于1984年9月13日公开的Geysen，欧洲专利申请84/03564中描述的方法。总而言之，大量不同的小肽试验化合物在固体载体上合成，如塑料针或一些其他的表面。肽试验化合物与适宜的靶或其片段反应并被洗涤。接着检测结合的部分-如通过本领域熟知的适当改进的方法。纯化的靶还可被直接包被至平板上以用于药物筛选方法中。另外，未中和抗体可被用来捕获肽并将它固定在固体载体上。
本发明还包括使用竞争性药物筛选分析，其中能结合靶的中和抗体特异性地与试验化合物竞争与靶的结合。
用于筛选的其他技术提供对所述活性剂具有适宜结合亲和性的活性剂的高流通量筛选(HTS)并以WO84/03564中详细描述的方法为基础。
期望本发明的分析法适宜于试验化合物的小和大范围筛选以及定量分析。因此，本发明还涉及鉴定增效cAMP的活性剂的方法，该方法包括将适宜的靶与所述活性剂接触，接着测定cAMP的活性和/或水平。
本发明还涉及鉴定选择性增效女性性生殖器中的cAMP的活性剂的方法，该方法包括接触来自女性性生殖器的适宜的靶，接着测定cAMP的活性和/或水平。
本发明还涉及一种鉴定增效cAMP的活性剂的方法，该方法包括将适宜的靶与所述活性剂接触，接着测定该靶的活性和/或水平。
本发明还涉及鉴定选择性增效女性性生殖器中的cAMP的活性剂的方法，该方法包括接触来自女性性生殖器的适宜的靶，接着测定该靶的活性和/或水平。
在一个优选的方面，本发明的筛选包括至少下面步骤(不需要以相同的连续的次序)(a)进行体外筛选以确定候选的活性剂是否具有相关活性(如NPY的调节(例如拮抗))；(b)进行一个或多个选择性筛选以确定所述候选活性剂的选择性(例如观察是否所述活性剂也为ACE抑制剂-如通过使用本文提供的分析法)；和(c)对所述候选活性剂进行体内筛选(例如使用功能性动物模型)。通常如果所述候选活性剂通过筛选(a)和筛选(b)，那么进行筛选(c)。诊断本发明还提供用于检测FSAD倾向的诊断组合物或试剂盒。在此方面，该组合物或试剂盒包含能指示试验样品中一种或多种靶的存在-或一种或多种靶的不存在的物质。优选地，试验样品从女性性生殖器或其分泌物中获得。
作为例证，诊断组合物可包含任一种本文提到的核苷酸序列或变异体、同源物、其片段或衍生物，或能与所述任一核苷酸序列的整体或一部分杂交的序列。
为了提供诊断疾病的基础，应建立来自靶的正常或标准值。这通过在本领域熟知的适宜于复合物形成的条件下，将体液或从正常个体，动物或人获得的细胞提取物与靶的抗体混合。标准复合物形成的量可通过将它与阳性对照的稀释系列比较来定量，其中已知量的抗体与已知浓度的纯化靶混合。接着，从正常样品获得的标准值可与从可能受FSAD影响的个体的样品中获得的值比较。标准与个体值之间的偏差确定疾病状态的存在。
靶本身或其任一部分可提供诊断和/或治疗化合物的基础。对于诊断目的，靶多核苷酸序列可被用来检测和定量在其中可暗示FSAD的疾病、障碍或生病时的基因表达。
编码靶的多核苷酸序列可被用来诊断来自靶表达的FSAD。例如，编码靶的多核苷酸序列可用于杂交或来自活体解剖或尸体解剖或生物体液的组织的PCR分析以检测靶表达的异常。这些定量或定性形式的方法可包括DNA或蛋白质分析、点渍法或其他膜基技术；PCR技术；沾粘(dip stick)；针或芯片技术；和ELISA或其他多样品常规技术。所有这些技术为本领域熟知并且事实上为许多商购诊断试剂盒的基础。
这些分析可被修改以评价具体治疗方案的效果并可用于动物研究，临床试验或监测各病人的治疗中。为了提供诊断疾病的基础，应建立靶表达的正常或标准分布图。这通过在适宜于杂交或扩增的条件下，将从正常个体，动物或人获得的体液或细胞提取物与靶或其一部分混合来实现。标准杂交可通过将从正常个体获得的值与相同实验中阳性对照的的稀释系列比较来定量，其中使用已知量的纯化靶。从正常样品获得的标准值可与来自可能受与靶编码序列的表达相关的障碍或疾病影响的个体的样品所获得的值比较。标准与个体值之间的偏差确定疾病状态的存在。如果疾病被证实，施用现有的治疗剂，可产生治疗分布图或值。最后，可在有规律基础上重复分析以评价这些值是否靠近或回到正常或标准状态。连续的治疗分布图可被用来显示几天或几个月期间的治疗的效果。
因此，在一个方面，本发明涉及使用靶多肽，或其变异体、同源物、片段或衍生物以产生可例如诊断地用于检测和定量FSAD状态下的靶水平的抗靶抗体。
本发明进一步提供用于检测细胞和组织中的靶的诊断分析法和试剂盒，其包含可被用作阳性对照的纯化靶和抗靶抗体。这些抗体可被用于溶液基、膜基或组织基方法以检测与靶蛋白表达或其缺失物或变异体、同源物，片段或衍生物的表达相关的任一疾病状态或疾病。分析法诊断组合物和/或方法和/或试剂盒可被用于下面的方法中，它包括，但不局限于竞争和非竞争性分析法、放射免疫分析法、生物发光和化学发光分析法、荧光测定、夹层分析法、免疫放射分析法、斑点印迹、酶联分析法，包括ELISA、微量滴定平板法、抗体包被带状分析法或迅速监测尿或血液的蘸片法、免疫组织化学分析法和免疫细胞化学分析法。
作为例证，免疫组织化学分析法试剂盒还可用于定位生殖器组织中NPY的活性。使用可用于研究和临床目的的光学和电子显微镜，该免疫组织化学试剂盒能定位组织切片和培养的细胞中的NPY的位置。这些信息在检测和/或预防和/或治疗FSD，如FSAD中可用于诊断和可能的治疗目的。对于各个试剂盒，确立了分析的范围、灵敏度、准确性、可靠性、特异性和可重复性。确立了分析中以及分析之间的变化为替换或活性的标准曲线中为20％，50％和80％的点。探针本发明的另一个方面是提供核酸杂交或PCR探针，该探针能检测(尤其是能选择性地选择的那些)多核苷酸序列，包括基因组序列、编码靶的编码区或极其相关的分子，如等位基因。探针的特异性，即它是否来自高度保守、保守或不保守区或区域以及杂交的严谨性或扩增(高、中等或低)将决定该探针是否仅鉴定天然产生的靶编码序列或相关序列。用于检测相关核酸序列的探针选自靶家族成员保守或高度保守的核苷酸区，这些探针可用于简并探针库中。对于检测确定的核酸序列，或其中希望最大的特异性时，核酸探针选自非保守核苷酸区或靶多核苷酸的独特区。如本文所采用的，术语“非保守核苷酸区”指本文公开的靶编码序列特有并在相关家族成员中不出现的核苷酸区。
描述在美国专利4683195、美国专利4800195和美国专利4965188的PCR提供了基于靶序列的寡核苷酸的其他用途。这些寡聚体通常为化学合成的，但它们可通过酶促产生或从重组来源制备。寡聚体通常包含两个核苷酸序列，一个为有义方向(5’→3’)和一个为反义方向(3’←5’)，在用于确定特定基因或条件的优化条件下采用。在不甚严谨的条件下，可采用相同的两个寡聚体，寡聚体的嵌套组或甚至寡聚体的简并库以检测和/或定量极其相关的DNA或RNA序列。
如前所述，靶的核酸序列还可被用于制备杂交探针用于对内源基因组序列作图。使用熟知的方法，序列可被作图于特定的染色体上或染色体的特定区域。这些包括对染色体涂片的原位杂交(Verma等(1988)人染色体基本方法手册，Pergamon Press，纽约市)、流式细胞分选染色体制备或人工染色体构建，如YAC、细菌人工染色体(BACs)、细菌PI构建或单个染色体cDNA文库。
染色体制备物的原位杂交和物理作图方法，如使用确定的染色体标记的连锁分析在扩展基因图谱中是非常宝贵的。基因图谱的实例可在科学(Science)(1995；270410f和1994；2651981f)中找到。甚至如果特定人染色体的编号或臂不了解，通常，另一种哺乳动物物种的染色体上基因的排列可显示相关的标记。通过物理作图，新序列可确定于染色体臂上或其某部分。这为研究者使用定位克隆或其他基因发现方法研究疾病基因提供了有价值的信息。一旦疾病或症状通过基因连锁被粗略定位于特定的基因组区，对该区的任何序列作图可代表用于进一步研究的相关或调节基因。本发明的核苷酸序列还可被用于检测由于易位、翻转等导致的正常、携带或受影响个体之间染色体位置的差异。宿主细胞与本发明相关的术语“宿主细胞”包括可包含所述活性剂的靶的任何细胞。
因此，本发明的另一个具体实施方案提供了用为靶或表达靶的多核苷酸转化或转染的宿主细胞。优选所述多核苷酸携带于用于复制和表达多核苷酸的载体中，其中多核苷酸为靶或将表达靶。选择细胞与所述载体相容并例如可为原核(例如细菌)、真菌、酵母或植物细胞。
革兰氏阴性细菌大肠杆菌被广泛用作异源基因表达的宿主。然而，大量的异源蛋白积累在细胞内。随后从大肠杆菌细胞内蛋白块中纯化所需蛋白有时可能是困难的。
与大肠杆菌相反，来自杆菌属的细菌极适宜于作为异源宿主，由于它们能将蛋白分泌至培养基中。其他适宜于作为宿主的细菌为来自链霉菌属和假单胞杆菌属的那些。
取决于编码本发明多肽的多核苷酸的性质，和/或可望进一步加工表达的蛋白，可优选真核宿主，如酵母或其他真菌。通常，酵母细胞比真菌细胞更优选，因为它们容易制备。然而，一些蛋白难于从酵母细胞中分泌，或在一些情况下不能适当加工(例如酵母中的糖基化)。在这些情况下，应选择不同的真菌宿主生物。
本发明范围内的适宜的表达宿主的实例为真菌，如曲霉属的种(如EP-A-0184438和EP-A-0284603描述的那些)和木霉属的种；细菌，如杆菌属的种(如EP-A-0134048和EP-A-0253455)、链霉属的种和假单胞杆菌属的种；和酵母，如克鲁维酵母菌属的种(如EP-A-0096430和EP-A-0301670)和糖酵母属的种。作为例证，典型的表达宿主可选自黑色曲霉、黑色曲霉变种(Aspergillusniger var.tubigenis)、黑色曲霉变种(Aspergillus niger var.awamori)、棘孢曲霉、构巢曲霉、米曲霉、木酶(Trichoderma reesei)、枯草芽孢杆菌、地衣形芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、乳克鲁维酵母和啤酒糖酵母。
适宜宿主细胞的使用，如酵母、真菌和植物宿主细胞-可提供用于翻译后修饰(例如豆蔻酰化、糖基化、平截、lapidation和酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸磷酸化)，可能需要这样来授予本发明重组表达产物最佳的生物活性。生物与本发明有关的术语“生物”包括可包含靶和/或从中获得的产物的任何生物。生物的实例可包括真菌、酵母或植物。
与本发明有关的术语“转基因生物”包括靶和/或从中获得的产物的任何生物。宿主细胞/宿主生物的转化如前面所述，宿主生物可为原核或真核生物。适宜的原核宿主的实例包括大肠杆菌和枯草芽孢杆菌。有关原核宿主的转化的教导为本领域所熟知，例如参见Sarmbrook等(分子克隆实验室手册，第二版，1989，冷泉港实验室出版)和Ausubel等现代分子生物学方法(Current protocols in Mole CularBiology)(1995)，John Wiley & Sons，Inc.
如果使用原核宿主，那么在转化前可能需要将核苷酸序列适当修饰，如通过除去内含子。
在另一个具体实施方案中，转基因生物可为酵母。在此方面，酵母也广泛用作异源基因表达的载体。菌种啤酒糖酵母具有很长历史的工业用途，包括它用于异源基表达。Goodey等(1987，酵母生物技术，D R Berry等编，pp401-429，Allen和Unwin，伦敦)和King等(1989，酵母的分子和细胞生物学，E FWalton和G T Yarronton编pp107-133，Blackie，Glasgow)对异源基因在啤酒糖酵母中的表达作了综述。
由于一些原因，酿酒酵母极适宜于异源基因的表达。首先，它对人为非病原性的，并且它不能产生某些内毒素。第二，在用于各种目的的数个世纪的商业开发后，它具有长期的安全使用历史。这导致宽的公众可接受性。第三，对该生物的广泛的商业用途和研究导致了对酿酒酵母的遗传学和生理学以及大规模发酵特性的丰富的了解。
E Hinchcliffe E Kenny(1993，“酵母作为表达异源基因的载体”，酵母，第5卷，Anthony H Rose和J Stuart Harrison编，第二版，AcademicPress Ltd)提供了有关酿酒酵母中的异源基因表达原理和基因产物的分泌的综述。
可获得一些类型的酵母载体，包括为了它们的保留需要与宿主基因组重组的整合载体，和自动复制质粒载体。
为了制备转基因酵母，通过将本发明的核苷酸序列插入设计在酵母中表达的构建体中来制备表达构建体。开发了一些类型的用于异源表达的构建体。构建体包含在酵母中具有活性并与本发明核苷酸序列融合的启动子，通常使用酵母来源的启动子，如GAL1启动子。通常使用酵母来源的信号序列，如编码SUC2信号肽的序列。在酵母中具有活性的终止子终止表达系统。
为了转化酵母，开发了一些转化方法。例如，根据本发明的转基因酵母可根据Hinnen等(1978，Proceedings of National Academy of Sciences ofthe USA 75，1929)；Beggs，JD(1978，自然，伦敦，275，104)；和Ito，H等(1983，细菌学杂质153，163-168)的教导制备。
使用各种选择性标记选择转化的酵母细胞。用于转化的标记为许多营养缺陷标记，如LEU2，HIS4和TRP1和显性抗生素抗性标记，如氨基糖苷抗生素标记，例如G418。
另一种宿主生物为植物。构建遗传修饰的植物的基本原理是在植物基因组中插入遗传信息以获得插入的遗传活性剂的稳定存在。存在插入遗传信息的一些方法，两个主要原理是直接导入遗传信息和通过使用载体系统导入遗传信息。一般方法的综述可见于Potrykus(植物生理与植物分子生物学年鉴(AnnuRev Planf physiol plant Mol Biol)42205-225)和Christou(农业-食品-工业(Agro-Food-Industry)Hi-Tech3月/4月1994 17-27)的文章。关于植物转化的其他教导可见于EP-A-0449375。
因此，本发明还提供一种用为靶或表达靶的核苷酸序列转化宿主细胞的方法。用核苷酸序列转化的宿主细胞可培养在适宜于表达和从细胞培养物中回收编码蛋白的条件下。取决于使用的序列和/或载体，通过重组细胞产生的蛋白可被分泌或可细胞内获得。本领域技术人员应理解，包含编码序列的表达载体可被设计为带有指导编码序列从特定的原核或真核细胞膜分泌的信号序列。其他重组构建体可将编码序列与编码将便于可溶性蛋白纯化的多肽区域的核苷酸序列相连(Kroll DJ等(1993)DNA细胞生物学(DNA Cell Biol)12441-53)。药物组合物本发明还提供包含治疗有效量的本发明的活性剂和药物可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物(包括其组合)。
药物组合物可用在用于人或动物用途的人用药和兽药，通常包含任一一种或多种药物可接受的稀释剂、载体或赋形剂。用于治疗用途的可接受的载体或稀释剂为药物领域所熟知，描述在例如Remington药物科学，Mack Publishing公司(A.R.Gennaro编1985)。可根据预期的给药途径和标准的药物实践选择药物载体、赋形剂或稀释剂。药物组合物除载体、赋形剂或稀释剂外，还可包含任何适宜的粘合剂、润滑剂、悬浮剂、涂布剂和加溶剂。
防腐剂、稳定剂、染料和甚至香味剂可提供在药物组合物中。防腐剂的实例包括苯甲酸钠、山梨酸和对羟基苯甲酸酯。还可使用抗氧化剂和悬浮剂。
取决于不同的送递系统，可有不同的组成/制剂要求。作为例证，本发明的药物组合物可被配制成使用微型泵或通过粘膜途径，例如以鼻喷雾或用于吸入的气雾剂或可消化的溶液剂送递或经胃肠外送递，其中组合物配制成可注射形式，例如通过静脉内、肌肉内或皮下途径送递。另外，制剂可被设计为通过两种途径送递。
在所述活性剂通过胃肠粘膜经粘膜送递时，在转运通过胃肠道期间应能保持稳定；例如应抗蛋白降解，在酸性pH下稳定和抗胆汁的去污作用。
适宜时，药物组合物可通过吸入，以栓剂或阴道栓剂的形式，通常为洗剂、溶液剂、霜剂、软膏或粉剂的形式通过使用皮贴给药，或为包含赋形剂，如淀粉或乳糖的片剂形式，或为单独或与赋形剂混合的胶囊剂或珠状剂，或为包含香味剂或着色剂的酏剂、溶液剂或悬浮剂形式口服给药，或它们可经胃肠外注射，例如静脉、肌肉内或皮下注射。对于胃肠外给药，组合物最好可以可包含其他活性剂，例如足够的盐或单糖以使得溶液与血液等渗的无菌溶液剂的形式使用。对于颊或舌下给药，组合物可以通过常规方法配制的片剂或锭剂的形式施用。
对于一些具体实施方案，所述活性剂还可与环糊精结合使用。已知环糊精与药物分子形成包含体和非包含体复合物。药物-环糊精复合物的形成可改变药物分子的溶解性、溶解速率、生物利用率和/或稳定性。药物环糊精复合物通常可用于大多数剂型和给药途径。作为与药物直接结合的另一种方式，环糊精可被用作辅助添加剂，例如载体、稀释剂或增溶剂。α-、β-、γ-环糊精为最常用的并且适宜的实例描述在WO-A-91/11172、WO-A-94/02518和WO-A-98/55148。
在一个优选实施方案中，本发明的活性剂全身性送递(如口服、颊、舌下)，较优选口服。
因此，优选的所述活性剂为适宜于口服送递的形式。
对于一些具体实施方案，优选当使用时，所述活性剂不对中枢神经系统起作用。
对于一些具体实施方案，优选当使用时，所述活性剂为外周起作用。给药术语“给药”包括通过病毒或非病毒方法的送递。病毒送递原理包括，但不局限于腺病毒载体、腺病毒相关(AAV)载体、疱疹病毒载体、逆转录病毒载体、慢病毒载体和杆状病毒载体。非病毒送递机理包括脂介导转染、脂质体、免疫脂质体、脂转染、阳离子表面亲水脂分子(CFAs)和其组合。
本发明的活性剂可单独施用，但通常以药物组合物的形式给药-例如当所述活性剂与根据预期的给药途径和标准药物实践选择的适宜的药物赋形剂、稀释剂或载体混合时。
例如，所述活性剂可以可包含芳香剂或着色剂的片剂、胶囊剂、珠状剂、酏剂、溶液剂或悬浮剂的形式施用以用于立即、延迟、改变、维持、脉冲或控制释放应用。
片剂可包含赋形剂，例如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙和甘氨酸，崩裂剂，如淀粉(优选玉米、土豆或木薯淀粉)、淀粉乙醇酸钠、交联羧甲基纤维素钠和一些硅酸盐复合物和成粒剂，如聚乙烯吡咯烷酮、羟基丙基甲基纤维素(HPMC)、羟基丙基纤维素(HPC)、蔗糖、明胶和阿拉伯胶。另外，可包括润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸、山嵛酸甘油酯和滑石。
类似类型的固体组合物还可用作明胶胶囊剂中的填料。这方面优选的赋形剂包括乳糖、淀粉、纤维素、乳糖或高分子量聚乙二醇。对于含水悬浮剂和/或酏剂，可将所述活性剂与各种甜味剂或芳香剂、着色剂或染料混合，与乳化剂/或悬浮剂和稀释剂，如水、乙醇、丙二醇和甘油以及它们的混合物混合。
给药(送递)途径包括，但不局限于下面的一种或多种口服(例如片剂、胶囊剂或可摄入溶液剂)、局部、粘膜(例如为鼻喷雾剂或吸入气雾剂)、鼻、胃肠外(例如通过可注射形式)、胃肠道、脊柱内、腹膜内、肌肉内、静脉内、子宫内、眼眶内、真皮内、颅内、气管内、阴道内、脑室内、脑内、皮下、眼(包括晶体内或眼室内)、透皮、直肠、粘膜、阴道、硬膜外或舌下。
应理解并非所有的所述活性剂需要通过相同的途径施用。同样，如果组合物包含多于一种的活性成分，那么那些成分可通过不同的途径施用。
如果本发明的活性剂经胃肠外施用，那么这些施用的实例包括下面的一种或多种静脉内、动脉内、腹膜内、膜内、脑室内、尿道内、胸内、颅内、肌肉内或皮下施用该活性剂；和/或通过浸剂方法。
对于胃肠外给药，所述活性剂最好以可包含其他活性剂，例如足够的盐或葡萄糖以使得溶液与血液等渗的无菌溶液的形式施用。如果需要，水溶液应被适宜地缓冲(优选pH3-9)。无菌条件下适宜胃肠外制剂的配制可容易地通过本领域技术人员熟知的标准制药方法完成。
如上所述，本发明的活性剂可经鼻内或通过吸入给药并方便地以干粉吸入器或来自使用适宜推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氢氟烷烃，如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 1334TM)或1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷(HFA227EATM)、二氧化碳或其他适宜气体的加压容器、泵、喷洒或喷雾器的气雾剂喷雾形式送递。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可通过提供送递计量量的阀来确定。加压容器、泵、喷洒或喷雾器可包含活性化合物的溶液或悬浮液，例如使用乙醇和推进剂的混合物作为溶剂，它可另外包含润滑剂，例如山梨酸三油酸酯。用于吸入或吹入剂的胶囊剂和筒剂(例如由明胶制成)可制备成包含活性剂和适宜粉基质，如乳糖或淀粉的粉末混合物。
另外，所述活性剂可以栓剂或阴道栓剂的形式施用，或它可以凝胶、水凝胶、洗剂、溶液剂、霜剂、软膏或细粉末的形式局部施用。所述活性剂还可经真皮或透皮施用，例如通过使用皮贴。它们还可通过肺或直肠途径施用。它们还可经眼施用。对于经眼的使用，所述化合物可制备成等渗、调节了pH、无菌盐的降低体积的悬浮液，或优选为等渗、调节了pH、无菌盐溶液，任选与防腐剂如benylalkonium choride混合。另外，它们可被配制成软膏，如凡士林软膏。
对于经皮肤的局部施用，所述活性剂可被配制成包含悬浮或溶解在例如与下面一种或多种的混合物中的活性化合物的适宜的软膏矿物油、煤油、白矿脂、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。另一方面，它可被配制为适宜的洗剂或霜剂、悬浮或溶解在例如下面一种或多种的混合物中矿物油、山梨酸-硬脂酸酯、聚乙二醇、液体石蜡、多乙氧基醚60、十六烷基酯蜡、ceteary alcohol、2-辛基十二烷醇、苄基醇和水。
本发明的组合物可通过直接注射施用。
对于一些应用，优选所述活性剂经口服给药。
对于一些应用，优选所述活性剂经局部给药。剂量水平通常，医生决定最适宜于各个病人的实际剂量。用于任何具体病人的具体的剂量水平和剂量频率可能是不同的，取决于各种因素，包括采用的具体化合物的活性，化合物作用的代谢稳定性和长短，年龄，体重，一般的健康状况，性别，饮食，给药的方式和时间，排泄速率，药物组合，具体疾病的严重性和个体进行的治疗。本发明的活性剂和/或药物组合物可以每天1至10次的方式施用，如每天1至2次。
对于对病人的口服和胃肠外给药，所述活性剂的每天剂量水平可为单剂量或多次剂量。
根据需要，所述活性剂可以0.01-30mg/kg体重的剂量给药，例如0.1-10mg/kg体重，较优选0.1-1mg/kg体重。自然，本文提到的剂量为平均状况下的一个实例。当然，存在需要更高或更低剂量范围的各种情况。制剂所述活性剂可被配制成药物组合物，如使用本领域熟知的方法，通过与一种或多种适宜载体、稀释剂或赋形剂混合。
下面提供了一些非限制性的制剂的实例。制剂1使用下面的成分制备片剂重量/mg活性剂 250纤维素，微晶 400二氧化硅，烟雾 10硬脂酸 5总共 665
将各成分混合并挤压形成每片重量为665mg的片剂。制剂2可如下制备静脉内制剂活性剂 100mg等渗盐溶液 1,000ml药物活性盐所述活性剂可以药物可接受的盐的形式施用。通常，药物可接受的盐可容易地通过适当使用所需酸或碱来制备。盐可从溶液中沉淀并可通过过滤或通过蒸发溶剂来回收。动物试验模型体内模型可被用来研究和/或设计治疗方案或治疗剂以治疗FSAD。模型可被用来研究各种工具/主要化合物对表明性唤起反应的各种参数的影响。这些动物模型可被用作或用在本发明的分析中。所述动物试验模型可以是非人的动物试验模型。
存在许多可被使用的用于血管源的女性性功能障碍(FSAD)的动物模型。
作为例证，可参考创伤性动物模型(例如参见Park等，1997)。这里，在正常和动脉粥样硬化雌性兔中刺激骨盆神经后，可直接记录阴道和阴蒂血液动力学反应。可在正常或FSAD动物中研究cAMP增强剂的体内作用。
作为另一个实例，可参考非创伤性动物模型(例如参见Goldstein等，1998；Laan等，1998的综述)。这里，Doppler超声波记录仪的脉冲波提供了一种检测阴道和阴蒂动脉中血流变化的方式。这种模型可被用来研究药理学施用血管舒张剂的血管原作用。
可使用的其他非创伤性方法包括阴道光体积描记器，它提供对阴道粘膜扩张的定量测定，和阴道热清除法，它基于阴道血流量的变化可通过测定从保持在恒定温度的阴道内探针的热转移来记录的原理。性唤起的动物模型在我们的研究中，我们开发了一种性唤起生理的耐用的可再现性模型。该模型使用麻醉的兔子并采用Laser Doppler技术在常规性记录心血管参数的同时监测阴道的血流量。我们能够测定由刺激骨盆神经或在试验化合物存在和不存在时注入VIP所诱导的阴道(和甚至阴蒂)血流量的小的变化。
我们认为我们的动物模型直接反映了临床数据。这里，该模型被用来研究候选活性剂对FSAD的治疗，如测定阴道或阴蒂血流量的增加。雌性性唤起的生理测定根据本发明，许多方法可用来测定阴蒂和阴道的血流量。作为例证，可使用阴道光体积描记器，阴道热释放技术，阴蒂和阴道对照增强MRI，阴蒂/女阴激光Doppler脉冲成像和阴蒂超声波扫描术。
阴道润滑性的定量还可通过本领域已知的方法测定-如(a)刺激前和后阴道塞的重量，和(b)测定阴道液体的pH。对于后一方面，当在性刺激期间液体渗出时，随着它接近血液pH，阴道中正常静止的酸介质变得碱性更大。NPY(神经肽Y)根据本发明，靶为PcAMP靶，PcAMP靶为NPY或其一种相关的受体。NPY和其受体的核苷酸序列和氨基酸序列在文献中可获得。一些序列提供在本文的序列表中。
这里，我们发现神经肽Y(NPY)对血管活性肠肽(VIP)介导的血管舒张产生抑制调节影响。因此，NPY受体的抑制将导致增加的骨盆神经和VIP-介导的生殖器(例如阴道或阴蒂)血流量的增加。临床上，这将导致最终借助于血浆渗出和增加的阴道应变性而导致增加的润滑的增大的阴道和/或阴蒂充血。因此，治疗FSAD的合适的靶是NPY或者其相关受体之一。
因此，在一个优选的方面，所述活性剂为NPY Y1Y2或Y5拮抗剂，优选口服NPY Y1Y2或Y5拮抗剂。该活性剂通过增加生殖器(例如阴道或阴蒂)的血流量以及增加润滑来治疗FSAD。
因此，VIP诱导血流量增加的NPY介导的拮抗作用代表一个可能的治疗靶，通过它可影响女性生殖道中的血流量。该拮抗作用发生的机理最可能是通过NPY Y1受体诱导Gi/o的活化。在其他生理系统中，NPY Y1受体参与介导血管收缩和抑制交感递质的释放(Lundberg等1996；NPY Y2的作用不能被排除)。我们认为NPY借助于腺苷酸环化酶的直接抑制来抑制血管舒张的女性生殖道指导抑制VIP的释放或交感神经传递。
如上所述，PcAMP靶为一种NPY受体。
NPY的神经元释放调节阴道血管床的VIP诱导的血管舒张。这最可能借助于涉及NPY Y1受体的突触前机理发生，虽然不可排除作用的突触后方式。NPY拮抗剂可增加阴道血管床VIP诱导的血管舒张。临床上这将借助于阴道壁的充血导致增加的阴道润滑和应变性。
由我们进行的NPY受体表达研究鉴定了人阴道内NPY Y1Y2和Y5受体亚型。
因此，一方面，PcAMP靶是一种或多种NPY Y1Y2和Y5受体亚型。
Victor A.McKusick等介绍了NPY和NPY相关受体的背景技术，参见http//www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm.。从该文献摘取出下面涉及NPY的说明。
“神经肽Y(NPY)是哺乳动物神经系统中大量广泛分布的肽。其表现出与YY肽的序列同源性和与胰多肽(PNP；167780)的氨基酸和核苷酸序列超过50％的同源性。NPY是36个氨基酸肽。Minth等(1984)从嗜铬细胞瘤的mRNA克隆了NPY基因。Takeuchi等(1985，1986)分别从嗜铬细胞瘤和胰内分泌肿瘤分离了NPY和PNP基因的cDNA克隆。使用这些cDNA探针分析来自人-小鼠体细胞杂种的染色体定位系列的基因组DNA，人们检查了这些基因是否是同染色体上的。研究表明不是同染色体上的，NPY在7pter-7q22上，和PNP在17p11.1-17qter上。通过对与Musspretus回交的研究，Bahary等(1991)将同源NPY基因对小鼠染色体6绘图。因为小鼠染色体6与人7q具有同源性，有可能人NPY基因定位于7cen-q22区。Meisler等(1987)排除了囊性纤维化位点(219700)和神经肽Y之间的紧密连锁。Y.Terenghi等(1987)利用原位杂交技术测定了外科活组织检查样品和尸体大脑大脑皮层中神经元中编码NPY的mRNA的分布。它们一致证明了正常成熟皮层神经元中NPY基因转录和表达的定位。Baker等(1995)通过荧光原位杂交证明NPY基因位于7p15.1并且以单一拷贝形式存在。他们强调NPY是已知的最保守的肽之一，例如人与鲨之间只有三个氨基酸不同。神经肽Y是控制能量平衡中的涉及的神经调质并且在ob/ob小鼠的下丘脑中超量生产。为了确定NPY在响应leptin(164160)缺陷中的作用，Erickson等(1996)创建了NPY缺陷ob/ob小鼠模型。没有NPY存在下，ob/ob小鼠由于减少的食物摄取和增大的能量消耗而不肥胖，并且不受糖尿病，不育和生长激素性缺损的影响。这些结果解释为表明NPY是leptin缺陷的中心效应器。有选择地优先嗜酒的大鼠的基因连锁分析鉴定了包括NPY基因的染色体区(Carr 等，1998)。嗜酒的大鼠与不嗜酒的大鼠相比在大脑的几个区具有较低水平的NPY。因此Thiele等(1998)研究了作为靶向基因破坏的结果的完全缺失NPY的小鼠对酒的消耗(Erickson等，1996)。他们发现与野生型小鼠相比，NPY缺陷小鼠表现出对含有6％，10％和20％(体积比)乙醇的溶液的增大的消耗。即使血浆乙醇浓度与那些对照不明显不同，从乙醇诱发的睡眠中更快苏醒来看，NPY缺陷小鼠对乙醇的镇静/催眠作用更不敏感。相反，在通常表达NPY基因的神经元中超表达标记的NPY基因的转基因小鼠与对照相比对乙醇具有较低的嗜好并且对乙醇的镇静/催眠作用更敏感。这些提供的数据直接证明醇消耗和抗性与大脑中NPY水平成反比相关。作为正在进行的肥胖症遗传学基础的研究的一部分，Karvonen等(1998)鉴定了导致在pre-pro-NPY的单链肽部分7位的亮氨酸被脯氨酸取代的1128T-C多态性。该多态性不与肥胖症或能量代谢相关，但是却明显地和始终与正常体重和肥胖芬兰人和肥胖德国受试者高血清总水平和高LDL胆固醇水平有关。Uusitupa等(1998)发现芬兰人的14％具有pro7多态性但是6％的荷兰人具有pro7多态性。NPY中具有pro7的受试者比没有该基因突变的那些平均血清总胆固醇水平高0.6-1.4mmol/l。因为正常体重的荷兰人没有发现pro7NPY对血清胆固醇水平的影响，可以假设肥胖症病人对该基因变异体的作用更加易感。经计算NPY中pro7的可能性在肥胖症患者中占50％-60％这样高，血清胆固醇等于或高于8mmol/l。至少在芬兰人中，NPY中pro7形式是影响血清胆固醇水平的最强的遗传因素之一。还参见Allen和Bloom(1996)；Dockray(1986)；Maccarrone和Jarrott(1986)；Minth等(1986)”。
Victor A.McKusick等(出处同上)给出了关于NPY及其相关受体的背景技术。从该文献摘取关于NPYR1的描述。
“神经肽Y(NPY；162640)是在哺乳动物神经系统中最广泛分布的神经肽，并且具有宽范围的重要生理学活性，包括对精神运动性活性，食物摄取，中枢内分泌内分泌的分泌作用的影响，和潜在的对心血管系统的活血管作用。药物学标准鉴定了两种主要亚型NPY(Y1和Y2)。在多种组织中鉴定有NPY Y1受体，包括脑，脾，小肠，肾，睾丸，胎盘和主动脉平滑肌。Y2受体主要在中枢神经系统中发现。Herzog等(1992)报道了克隆了编码人NPY受体的cDNA，他们证实人NPY受体是G蛋白-偶联受体超家族中的一员。当在中国仓鼠卵巢(CHO)或者人胚肾细胞中表达时，该受体表现出特征性配体特异性。在肾细胞系中，该受体偶联百日咳毒性敏感G蛋白，该蛋白介导环AMP积累的抑制。另一方面，在CHO细胞系中，偶联的受体不抑制腺苷酸环化酶而是提高细胞内钙含量。因此，偶联G蛋白的第二信使是取决于该细胞型中的G蛋白和效应子系统的特异性所有组成成分的特异性细胞型。Larhammar等(1992)独立地克隆和表征了神经肽Y受体。Herzog等(1993)测定了人NPY Y1受体基因的分子组成和调节。与大多数G蛋白偶联受体基因的连续结构相反，他们发现NPY Y1受体基因具有三个外显子。他们还鉴定了该基因的第一内含子中共同的Pstl多态性。通过高分辨率荧光原位杂交，他们定位该基因是4q31.3-q32。Herzog等(1997)发现NPY1R和NPY5R(602001)基因定位于染色体4q31-q32。这两个基因从共同启动子区以相反方向转录。一个Y1受体基因的交替剪接的5-引物外显子是Y5受体的编码序列的一部分。Herzog等(1997)提出的不常见的排列是基因复制作用产生的这两个基因并且它们可以同等表达。通过种间回交分析，Luta等(1997)分别对小鼠染色体8和3的保守连锁基团绘制出Npy1r和Npr2r基因，其相应于人染色体4q的远侧区”。
Victor A.McKusick等(出处同上)给出了关于NPY及其相关受体的背景技术。从该文献摘取关于NPYR2的描述。
“神经肽Y(NPY)通过脑和交感神经元中存在的G蛋白-偶联受体家族传递信号。根据药学标准，组织分布和编码基因的结构确定了至少3种类型的神经肽Y受体；参见162641和162643。Rose等(1995)报道了在COS细胞中克隆了人2型受体NPY2R的cDNA的表达。转染的细胞表现出对于NPY(162640)，YY肽(PYY；600781)和包括氨基酸13-36的NPY片段的高的亲和性。预测的381个氨基酸的蛋白质具有7个G蛋白-偶联受体跨膜结构域特征并且只有31％与人Y1受体(NPY1R；162641)相同。在来自神经系统的几个区的组织样品的蛋白质印迹上检测到4-kb mRNA。Gerald等(1995)使用放射性标记PYY-结合测定从人hippocampal cDNA表达文库克隆了相应于人Y2受体的cDNA。他们在COS-7细胞中表达了Y2基因并且进行了激素结合测试，其表明Y2受体结合(从最高至最低亲和性)PYY，NPY和胰多肽(PP；167780)激素.Ammar等(1996)克隆和表征了编码2型NPY受体的人基因。该转录物跨越9kb的基因组序列，并且在2号外显子中编码。如在1型NPY受体基因中，4.5kb间插序列插入NPY2R的5-引物非翻译区。Ammar等(1996)通过啮齿类-人细胞杂交物的DNA印迹分析以及接着的荧光原位杂交(FISH)证明NPY2R基因在图谱上处于4q31上，即包含NPY1R基因的相同区，提示这些亚型尽管他们的结构有差异但是可以通过基因复制产生。通过种间回交分析，Lutz等(1997)分别将Npy1r和Npr2r基因作图于小鼠染色体8和3的保守连锁基团上，其相应于人染色体4q的远侧区”。
WO-A-98/52890公开了测定一种推测的或实际的活性剂是否结合NPY的测试法(参见其96页，2-28行)。INPY如上所述，该活性剂可以是可以用作INPY的任何合适的活性剂(有时称之为NPY拮抗剂)。在下面的综述文章中讨论了1NPY(特别是NPY拮抗剂)Dunlop J，Rosenzweig-Lipson S肥胖症的治疗方法(Therapeuticapproaches to obestity)Exp Opin Ther Pat1999 8 12 1683-1694Wang S，Ferguson KC，Burns TP，Dhurandhar NV第8界肥胖症和非胰岛素依赖性糖尿病年度国际研讨会(8th annual international conference onobesity and non-insulin dependent diabetes mellitusnovel drugdevelopments).实验药科研究观点(Exp Opin Invest Drugs)1999 871117-1125Ling AL神经肽Y受体拮抗剂(Neuropeptide Y receptor antagonists)ExpOpin Ther Pat 1999 9 4 375-384Adham N，Tamm J，Du P，Hou C等拮抗剂SNAP 6608与Y5受体结合结合中涉及的残基的鉴定(Identification of residues involved in thebinding of the antagonist SNAP 6608 to the Y5 receptor)Soc NeurosciAbstr 1998 24部分2 626.9Shu YZ，Cutrone JQ，Klohr SE，Huang SBMS-1 92548，来自黑色曲霉WB2346.II的神经肽Y受体的四环结合抑制剂.物理-化学性质和结构特征(atetracyclic binding inhibitor of neuropeptide Y receptors，fromAspergillus niger WB2346.II.Physico-chemical properties andstructural characterization)，抗生素杂志(J Antibiot)1995 48 101060-1065Rigollier P，Rueger H，Whitebread S，Yamaguchi Y，Chiesi M，SchillingW，Criscione L神经肽Y Y5受体的有力的选择性拮抗剂CGP 71 683A的合成和SAR(Synthesis and SAR of CGP 71 683A，a potent and selectiveantagonist of the neuropeptide YY5 receptor).Int Symp Med Chem 199815th Edinburgh 239Criscione L，Rigollier P，Batzl-Hartmann C，Rueger H，Stricker-Krongrad A等，神经肽Y5受体介导的自由进食和能量丧失瘦大鼠的食物摄取(Food intake in free-feeding and energy-deprived lean rats is mediatedby the neuropeptide Y5 receptor).临床研究杂志(J Clin Invest)1998102 12 2136-2145Neurogen CorpNGD 95-1临床试验监测(Clin Trials Monitor)1996 5 10Ab 19244Buttle I-A抗肥胖症药物瞄准巨大的市场销售(AnU-obesity drugsontarget for huge market sales).Exp Opin Invest Drugs 1996 5 121583-1587Gehlert DR，Hipskind PA肥胖症中的神经肽Y受体拮抗剂(Neuropeptide Yreceptor antagonists in obesity).Exp Opin Invest Drugs 19967 91827-1838Goldstein DJ，Trautmann ME肥胖症治疗(Treatments for obesity).出现的药物(Emerging Drugs)1997 2-1-27Hipskind PA，Lobb KL，Nixon JA，Britton TC，Bruns RF，Catlow J，DieckmanMcGinty D K，Gackenheimer S L，Gitter B D，lyengar S，Schober D A等有力的选择性1，2，3-三取代吲哚NPY Y-1拮抗剂(Potent and selective1，2，3-trisubstituted indole NPY Y-1 antagonists)。药物化学杂志(J MedChem)1997 40 3712-3714Zimmerman DM，Cantrall BE，Smith ECR，Nixon JA，Bruns RF，Gitter B，HipskindPA，Ornstein PL，Zarrinmayeh H，Britton TC，Schober DA，Gehlert DR一系列1-取代的-4-甲基苯并咪唑神经肽Y-1受体拮抗剂的结构-活性相关性(Structure-activity relationships of a series of 1-substituted-4-methylbenzimidazole neuropeptide Y-1 receptor antagonists)，生物有机药物化学快报(Bioorganic Med Chem Lett)1998 85 473～76Zarrinmayeh H，Nunes A，Ornstein P，Zimmerman D，Arnold MB等作为选择性神经肽Y Y1受体拮抗剂的一系列新的2-[(4-氯代苯氧基)甲基]苯并咪唑的合成与评价(Synthesis and evaluation of a series of novel 2-[(4-chlorophenoxy)methy]benzimidazoles as selectiveneuropeptide YY1 receptor antagonists)，药物化学杂志(J Med Chem 1998 41 15 2709-2719Britton TC，Spinazze PG，Hipskind PA，Zimmerman DM，Zarrinmayeh H，SchoberDA，Gehlert DR，Bruns RF一系列苯并噻吩衍生的NPY-Y1拮抗剂的结构-活性相关性C2侧链的最优化(Structure-activity relationships of aseries of benzothiophene-dervied NPY-Y1 antagonistsoptimization ofthe C2 side chain)，生物有机药物化学快报(Bioorganic Med ChemLett)1999 93 475-480Zarrinmayeh H，Zimmerman DM，Cantrell BE，Schober DA，Bruns RF，Gackenheimer SL，Ornstein PL，Hipskind PA，Britton TC，Gehlert DR作为神经肽Y Y1受体拮抗剂的一系列二氨基烷基取代的苯并咪唑的结构-活性相关性(Structure-activity relationship of a series of diaminoalkylsubstituted benzimidazole as neuropeptide Y Y1 receptor antagonists)，生物有机药物化学快报(Bioorganic Med Chem Lett)1999 9 5 647-652Murakami Y，Hara H，Okada T，Hashizume H，Ku M，Ishihara Y，IshikawaM，MiharaS-I，Kato G，Hanasaki K，Hagishita S，Fujimoto M作为新的有力的选择性神经肽Y Y1受体拮抗剂的1，3-二取代的苯并吖庚因(1，3-disubstitutedbenzazepines as novel，potent，selective neurpeptide Y Y1 receptorantagonists)，药物化学杂志(J Med Chem)1999 42 14 2621-2632Rudolf K，Eberlein W，Engel W1 Wieland HA，Willim KD，Entzeroth M，Wienen W，Beck Sickinger AG，Doods HN第一种高有力的和选择性非肽神经肽YY1受体拮抗剂BIBP3226(The first highly potent and selectivenon-peptide neuropeptide YY1 receptor antagonistB1BP3226)，欧洲药物杂志(Eur J Pharmacol)1994 271 2-3 R11-R13Wieland HA，Willim KD，Entzeroth M，Wienen W，Rudolf K，Eberlein W，Engel W，Doods HN非肽神经肽YY1受体拮抗剂B1BP 3226的亚型选择性就拮抗剂分布(Subtype selectivity and antagonbist profile of thenonpeptide neuropeptide Y1 receptor antagonist BIBP 3226)，实验治疗药理学杂志(J Pharmacol Exp Ther)1995 275 1 143-149。Wright J，Bolton G，Creswell M，Downing D，Georgic L，Heffner T，HodgesJ，MacKenzie R，Wise L8-氨基-6-(芳基磺酰基)-5-硝基喹诺酮新的非肽神经肽Y1受体拮抗剂(8-amino-6-(arylsulphonyl)-5-nitroquinolonesnovel nonpeptide～neuropeptide Y1 receptor antagonists)，生物有机药物化学快报(Bioorganic Med Chem Lett)1996 6 15 1809-1814Capurro D，Huidobro-Toro JP血压压力感受器反射中涉及神经肽YY1受体用BIBP 3226和BIB 3304研究(The involvement of neyropeptide Y Y1receptors in the blood pressure baroreflexstudies with BIBP 3226 andBIB 3304).欧洲药理学杂志(Eur J Pharmacol)1999 376 3 251-255Dumont Y，Cadieux A，Doods H，Quirion R研究中枢和外周神经系统中的神经肽Y受体的新的工具BIBO-3304(Y1)，BIIE-246(Y2)和-GR-231 118(Y1/Y4)(New tools to investigate neuropeptide Y receptors inthe central and peripheral nervous systemsBIBO-3304(Y1)，BIIE-246(Y2)and-GR-231 118(Y1/Y4)).Soc Neurosci Abstr 1999 25Part 1 Abs 74.11Hegde SS，Bonhaus DW，Stanley W，Eglen RM，Moy TM，Loeb M等一种高亲和性和选择性神经肽Y(NPY)-Y1受体拮抗剂1229U91的药理学评价(Pharmacological evaluation of 1229U91，a high affinity and selectiveneuropeptideY(NPY)-Y1 receptor antagonist)，药理研究(PharmacolRes)199531190Matthews JE，Chance WT，Grizzle MK，’Heyer D，Daniels AJ用一种NPY-Y1受体GI 264879A治疗的大鼠的食物摄取抑制和体重减轻(Food intakeinhibition and body weight loss in rats treated with GI 264879A，anNPY-Y1 receptor).Soc Neurosci Abstr 1997 23 Pt 2 1346Doods HN，Willim K-D，Smith SJBIBP 3226一种选择性高度有力的NPY-Y1拮抗剂(BIBP 3226a selective and highly potent NPY-Y1 antagonist)，Proc Br Pharmacol Soc 1994 13-16 Dec.C47Rudolf K，Eberlein W，Engel W，Wieland HA，Willim KD，Entzeroth M，Wienen W，Beck Sickinger AG，Doods HN第一种高度有力的和选择性非肽神经肽YY1受体拮抗剂BIBP3226(The first highly potent and selectivenon-peptide neuropeptide YY1 receptor antagonistB1BP3226)，欧洲药理杂志(Eur J Pharmacol)1994 271 2-3 R11-R13 Serradelil-Le-Gal C，Valette G，Rouby PE，Pellet A，Villanova G，Foulon L，Lespy L，NeliatG，Chambon JP，Maifrand JP，Le-Fur GSR 120107A和SR 120819A两种有力的和选择性口服有效的NPY Y1受体拮抗剂(SR 120107A and SR120819ATwopotent and selective，orally-effectiye antagonists for NPY Y1receptors)，Soc NeurosciAbstr 1994 20 Pt 1 907-Abs 376.14Hong Y，Gregor V，Ling AL，Tompkins EV，Porter J，Chou TS，PaderesG，Peng Z，Hagaman C，Anderes K，Luthin D，May J作为有力的NPY Y1受体拮抗剂的新的脒基脲化合物的合成和生物学评价(Synthesis andbiological evaluation of novel guanylurea compounds as potent NPY Y1receptor antagonist)Acs 1999 217 Anabeim MEDI 108下面的文献中公开了1NPY(特别是NPY拮抗剂)WO-98/07420WO-94/00486WO-96/22305WO-97/20821WO-97/20822WO-96/14307JP-07267988WO-96/12489US-5552422WO-98/35957WO-96/14307WO-94/17035EP-0614911WO-98/40356EP-0448765EP-0747356WO-98/35941WO-97/46250EP-0747357从下面的结构选择INPY的优选实施方案。对这些化合物进行试验并且发现在增效cAMP中是有用的，并且在FSAD治疗中是有用的。在实验部分(下文)给出了涉及这些化合物的实验数据。
PDE(磷酸二酯酶)根据本发明的一个方面，另外的靶是PcAMP靶，PcAMP靶是PDE(磷酸二酯酶)，特别是cAMP水解PDE的PDE(和任选地水解cGMP)。
已知环核苷酸，例如cAMP和cGMP是重要的细胞内第二信使。环核苷酸磷酸二酯酶-也称之为PDE-是催化环核苷酸降解的酶的家族，并在此成为调节环核苷酸浓度的细胞成分之一。
近几年，以底物亲和性和辅助因子要求确定了至少7种PDE酶(例如PDEI-PDEVII)，以及这些酶的很多亚型(BeavoJA和ReifsnyderDH，药物科学动向(Trends Pharmacol Sci.)11150；BeavoJ，在环核苷酸磷酸二酯酶结构，调节和药物作用，Beavoj和Housley MD(编著)，WileyChichester，pp.3—15)。
PDE的例子包括PDEI，其是Ca2+/钙调蛋白-依赖性PDE；PDEII，其是cAMP和cGMP刺激PDE；PDEIII，其是cGMP抑制PDE；PDEIV，其是高亲和性cAMP-特异性PDE；和PDEV，其是cGMP特异性PDE。PDEI等有时称之为PDEI型等或PDE1型等。
各PDE家族可以包含两个或多个异构体(即可以有两个或多个PDE同工酶)。例如，哺乳动物PDEIV，Drosophila Dunce基因的同系物(Chen CN等，美国国家科学院院刊839313)，已知在大鼠中具有四个同工型(SwinnenJV等，美国国家科学院院刊865325)。也已知人PDEs以同工型存在并且具有剪接变异体。例如，1990年报道了从单细胞克隆了PDEIV的一种人同工型(Livi等，分子细胞生物学(Mol.Cell.Bio.)，102678)。进一步举例，其它工作者独立地克隆了PDEIV的三个剪接变异体，其现在指定为hPDEIV-B1，hPDEIV-B2和hPDEIV-B3。
US-A-5932423和US-A-5932465中也公开了关于环核苷酸磷酸二酯酶的教导。
WO-A-97/35989公开了关于另一种环核苷酸磷酸二酯酶-称之为CN PCDE8-的教导。根据WO-A-97/35989，CN PCDE8有两种同工酶-指定为CN PCDE8A和CN PCDE8B。术语“同工酶”在本领域有时指“同工型”。
根据WO-A-97/35989，鉴定了很多不同PDE的抑制剂，并且一些进行了临床评估。例如，PDEIII正在开发成抗血栓药物，抗高血压药物和用于治疗充血性心力衰竭的强心剂。咯利普兰，一种PDEIII抑制剂，已经用于治疗抑郁症，以及其它PDEIII的抑制剂正在进行作为抗炎药物的评估。咯利普兰还表现出抑制脂多糖(LPS)诱导的α-TNF，所述α-TNF表现出体外提高HIV-1复制。因此，咯利普兰可以抑制HIV-1复制(Angel等，1995，AIDS91137-44)。另外，根据其抑制α-和β-TNF和γ-干扰素产生的能力，咯利普兰表现出有效治疗脑脊髓炎，多发性硬化实验动物模型(Sommer等，1995Nat Med1244-248)并且可以有效治疗迟发性运动障碍(Sasaki等，1995，欧洲药学杂志(Eur J Phamacol)28271-76)。
根据WO-A-97/35989，也有非特异性PDE抑制剂，例如在治疗支气管哮喘和其它呼吸道疾病中使用的茶碱，和在治疗间歇性跛行和糖尿病诱发的外周血管疾病中使用的己酮可可碱。认为茶碱对呼吸道平滑肌功能起作用以及在治疗呼吸道疾病中的抗炎或免疫调节能力中起作用(Banner等，1995，Respir J8996-1000)，认为他们通过抑制CN PDEcAMP和cGMP水解而起作用(Banner等，1995，Monaldi Arch Chest Dis50286-292)。也已知阻断α-TNF产生的己酮可可碱可以抑制HIV-1复制(Angel等，出处同上)。同处同上的Beavo 1995给出了CN PDE目录。
曾经提出过除了其同工酶和它们的亚型外，PDE的选择性抑制剂将导致具有更少副作用的更有效的治疗。例如，参见WieshaarRE等(药物化学杂志(J.Med.Chem.)28537)，GiembyczMA(生物化学药物(Biochem.Pharm.)432041)和LoweJA和ChengJB(未来药物(Drug of theFuture)17799-807)的综述中的教导。
因此对于一些应用，期望具有各种类型的PDE的选择性抑制。
Victor A.McKusick等介绍了PDE的背景技术，参见http//www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm.。从该文献摘取出下面涉及PDE2或cGMP-刺激的PDE的信息。
“环核苷酸作为介导对胞外信号例如激素，光和神经递质的多种细胞应答的第二信使而起作用。环核苷酸磷酸二酯酶(PDEs)通过调节环核苷酸的细胞浓度起着信号传导作用。哺乳动物细胞包含多种PDEs，以它们的底物亲和性和它们对辅助因子和抑制药物的选择性敏感性为基础将它们分为至少7个家族。这些家族是(I)Ca2+/钙调蛋白-依赖性PDE；(II)cGMP刺激PDEs；(III)cGMP抑制PDEs；(IV)cAMP-特异性PDEs；(V)cGMP特异性PDEs；(VI)光感器PDEs；和(VII)高亲和性cAMP-特异性。从氨基酸序列证明，所有这些PDE家族包含相关的结构域，想必是催化结构域，各族之间有大约30％序列相同性。相同家族的成员更紧密相关；它们在整个编码区具有60-80％序列相同性。
Michaeli等(1993)建立了用于分离编码cAMP磷酸二酯酶的cDNA的高敏感性功能筛选，是通过缺失两个内源cAMP PDE基因，PDE1和PDE2的酿酒酵母菌株中的缺陷互补。使用该功能筛选从人成胶质细胞瘤cDNA文库分离了对应编码cAMP-特异性PDEs的三个不同的人基因的三组cDNAs。这些基因中的两个与果蝇‘dunce’cAMP-特异性PDE紧密相关。第三个基因，Michaeli等(1993)称之为HCP1，编码新的cAMP-特异性PDE。HCP1具有与所有环核苷酸PDEs的催化结构域的序列相关的氨基酸序列。但是其是不具有cAMP-特异性PDE家族的其它性质的高亲和性cAMP-特异性PDE。HCP1的PDE活性对cGMP或对cGMP-可抑制PDEs的其它抑制剂不敏感。HCP1的生物化学和药学性质提示Michaeli等(1993)其是先前没有发现的环核苷酸PDE家族中的一员，他们将其指定为VII家族。Northern印迹分析表明人骨骼肌中存在高水平的HCP1RNA。
通过体细胞杂交细胞系的Southern印迹分析，Milatovich等(1994)绘图HCP1位于染色体8；通过包含染色体8的不同区的体细胞杂交系的研究，他们定位在8q13-q22。Han等(1998)通过荧光原位杂交将PDE7A基因定位于8q13。通过种间回交分析，他们将小鼠Pde7A基因定位于染色体3的近侧区”。
JenniferP.Macke等介绍了PDE2的背景技术，参见http//www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm.。从该文献摘取出下面涉及PDE2 cGMP-刺激的PDE2的信息。
“Rosman等(1997)克隆了相应于人PDE2A的cDNA。该PDE2A基因编码941个氨基酸的多肽，预计分子量是106kD。该蛋白质序列与牛和大鼠PDE2A序列具有90％相同性。DNA印迹分析表明PDE2A在试验的所有人组织中以不同水平被表达为4.2-kb mRNA，在大脑中表达量最大。表达研究表明，PDE2A水解了cAMP和cGMP，并且受PDE2A特异性抑制剂EHNA的抑制”。
从文献可以获知PDE的核苷酸序列和氨基酸序列。在本申请的序列表中给出了一些序列。
一方面，PDE靶选自下面PDE酶中的一种或多种PDEcAMP1，PDEcAMP2，PDEcAMP3，PDEcAMP4，PDEcAMP7和PDEcAMP8。
更优选的一方面，PDE靶选自下面PDE酶中的一种或多种PDEcAMP1，PDEcAMP2，PDEcAMP3，PDEcAMP4。
对于本发明，优选地PDE至少瞄向PDE2。
IPDE如上所述，另外的活性剂是可以作为IPDE的任何合适的活性剂。另外，或者，本发明的活性剂也可以用作IPDE。
IPDE的例子公开于EP-A-091133和EP-A-0771799。
优选地，IPDE是IPDE2。因此，优选的例示的化合物是EP-A-0771799中公开的那些化合物。
为了方便起见，现在重复EP-A-0771799的权利要求1具有通式(I)的嘌呤-6-酮衍生物 其中R1代表氢或者含有至多8个碳原子的直链或支链的烷基；R2代表含有至多4个碳原子的直链或支链的酰基，或者至多8个碳原子的直链或支链的烷基，任选被羟基，叠氮基或式-NR3R4或-OSO2R5的基团取代；其中R3和R4是相同或不同的，且代表含有3-6个碳原子的环烷基，氢，甲酰基，或者含有至多6个碳原子的直链或支链的烷基，其任选被各自含有至多6个碳原子的直链或支链的烷氧基或烷氧羰基或者被式-(CO)a-NR6R7基团取代，其中a是0或1的数；R6和R7是相同或不同的，且代表氢，甲酰基，羟基，苯基或含有至多6个碳原子的直链或支链的烷基，其任选被羟基或含有至多5个碳原子的直链或支链的烷氧基取代；或者R3和/或R4代表含有至多6个碳原子的直链或支链的烷氧羰基，羧基或者含有至多6个碳原子的酰基，任选被羟基或含有至多4个碳原子的直链或支链的烷氧基取代的直链或支链；或者
R3和/或R4代表具有式-(CO)b-NR8R9，-CO-R10，-SO2R11或-SO2NR12R13的残基，其中b具有上文对于a给出的含义并且与a相同或不同；T可以代表含有至多5个碳原子的直链或支链的烷基，或者当b≠0时，其也可以代表一个键；R8和R9具有上文对于R6和R7给出的含义并且与R6和R7相同或不同；R10代表含有至多3个选自S，N和/或O的杂原子的饱和的，部分不饱和的或不饱和的5-至7-元杂环，其在N官能任选还可以被含有至多4个碳原子的直链或支链的烷基，烷氧基或烷氧羰基，羧基，苄基氧基羰基或羟基取代；R11代表含有至多5个碳原子的直链或支链的烷基，苄基或苯基；R12和R13是相同或不同的，且代表氢，苯基或者含有至多6个碳原子的直链或支链的烷基；或者R3和R4与氮原子一起形成含有至多3个选自S，N和/或O的杂原子的饱和的，部分不饱和的或不饱和的5-或6-元杂环或-NR14残基，其任选被羰基，其本身可以被羟基，羧基或者各自含有至多6个碳原子的直链或支链的酰基，烷氧基或烷氧羰基取代的含有至多5个碳原子的直链或支链的烷氧羰基或含有至多5个碳原子的直链或支链的烷基取代；其中R14代表氢，羰基或者各自含有至多5个碳原子的直链或支链的烷基或烷氧羰基；和R5代表苯基或者含有至多5个碳原子的直链或支链的烷基；A代表各自含有至多6个碳原子的亚烷基或亚烯基；D和L是相同或不同的，并且代表含有6-10个碳原子的芳基或者含有至多3个选自S，N和/或O的杂原子并且任选地被选自卤素，羟基，硝基，三氟甲基，羧基，各自含有至多6个碳原子的直链或支链的基，烷氧基或烷氧羰基或者式-(V)c-NR15R16和/或-OR17的基团至多3次相同或不同地取代的任选与苯环稠合的5-至7-元芳香杂环；其中c是0或1的数；V代表具有式-CO或-SO2的残基；R15和R16是相同或不同的并且具有上文对于R3和R4的含义；R17代表氢，含有至多8个碳原子的直链或支链的链烯基或者含有至多8个碳原子的直链或支链的烷基，其任选被选自羟基，羰基或含有至多5个碳原子的直链或支链的烷氧羰基的取代基至多3次相同或不同地取代；和/或任选被含有6-10个碳原子的芳基或者被任选与苯环稠合的5-至7-元芳香杂环取代的环，所述杂环含有至多3个选自S，N和/或O的杂原子并且任选地被卤素，羟基，硝基，羧基，三氟甲基或各自含有至多5个碳原子的直链或支链的烷基，烷氧基或烷氧羰基或者式(V’)d-NR18R19的基团至多2次取代；其中d具有上文对于a给出的定义并且与a相同或不同；R18和R19具有上文对于R3和R4给出的含义并且与R3和R4相同或不同；V’具有上文对于V给出的定义并且与V相同或不同；和/或代表下文对于D给出的环系，其任选被含有至多5个碳原子的直链或支链的酰基取代，任选被羟基，含有至多5个碳原子的直链或支链的烷氧基或者被式-NR20R21的基团取代；其中R20和R21是相同或不同的并且具有上文对于R3和R4给出的含义；或者E代表具有式-CH2-Y-Z-的残基；其中Y代表一个键或氧原子或硫原子或者基团-NH-；Z代表含有至多5个碳原子的直链或支链的烷基；D代表具有下式的残基 及其互变异构体及其盐。优选的IPDE选自下面的结构 NEP(神经内肽酶)根据本发明的一个方面，另外的靶是PcAMP靶，其PcAMP靶是NEP。
从文献可以获知NEP的核苷酸序列和氨基酸序列。在本申请的序列表中给出了一些序列。
一方面，NEP是NEP(EC3.4.24.11)(也已知为脑啡肽酶或内肽酶-2)。这里，我们在人和兔阴道发现了NEP EC3.4.24.11mRNA和表达的蛋白质。
这里我们确信包括患有FSAD的那些雌性中，NEP EC3.4.24.11降解VIP。因此，NEP抑制剂将增强在唤醒对感觉刺激的反应状态期间释放的VIP的内源血管舒张作用。这将导致如通过增加阴道充血而治疗FSAD。我们证明NEPEC3.4.24.11的选择性抑制剂增强骨盆神经刺激和VIP诱导的生殖器(例如阴道或阴蒂)血流量的增加。另外，选择性NEP抑制剂增强分离的阴道壁的VIP和神经介导的松弛。
Victor A.McKusick等介绍了NEP的背景技术，参见http//www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm.。从该文献摘取出下面涉及NEP的信息。
“常见的急性淋巴细胞白血病抗原是在人急性淋巴细胞白血病(ALL)的诊断中重要的细胞表面标记。其存在于pre-B表型的白血病细胞上，其代表85％的ALL病例。CALLA不限于白血病细胞，而且在多种正常组织中发现。CALLA是在肾中特别丰富的糖蛋白，其存在于近端小管的刷状缘和肾小球皮质上。Letarte等(1988)克隆了编码CALLA的cDNA并且证明从该cDNA序列推导出的氨基酸序列与人膜相关神经内肽酶(NEP EC3.4.24.11)(也已知为脑啡肽酶)的序列相同。NEP在疏水性残基的氨基一侧裂解肽并且灭活几种肽激素，包括胰高血糖素，脑啡肽，P活性剂，神经降压肽，催产素和缓激肽。通过cDNA转染分析，Shipp等(1989)证实CALLA是原先称之为脑啡肽酶的功能神经内肽酶类型。Barker等(1989)证实编码100kDII型跨膜糖蛋白的CALLA基因存在于大于45kb的单拷贝中，其在表达细胞表面CALLA的恶性肿瘤中没有重排。通过研究体细胞杂种和原位杂交将该基因定位于人染色体3，并且将其位置定位于3q21-q27。Tran-Paterson等(1989)通过人-啮齿类动物体细胞杂种的DNA的Southern印迹分析也认为将基因定位于3号染色体上。D’Adamio等(1989)证明该CALLA基因大于80kb并且由24个外显子组成”。
INEP如上所述，另外的活性剂是可以作为INEP起作用的任何合适的活性剂。另外，或者，本发明的活性剂也可以用作INEP。
下面部分给出了用于鉴定和/或研究INEP的合适的测试系统的详细描述。
在下面的综述文章中讨论了INEP生物病理(Pathol.Biol.)，46(3)，1998，191最新药物设计(Current Pharm.Design)，2(5)，1996，443.Biochem.Soc.Trans.，21(3)，1993，678.药物实验手册.(Handbook Exp.Pharmacol.)，104/1，1993，547.TiPS，11，1990，245.药学研究.(Pharmacol.)，45(1)，1993，87.最新药物研究(Curr.Opin.Inves.Drugs)，2(11)，1993，1175.抗高血压药物(Antihypertenes.Drugs)，(1997)，113.Chemtracts，(1997)，10(11)，804.Zinc Metalloproteases Health Dis.(1996)，105.心血管药物研究.(Cardiovasc.Drug Rev.)，(1996)，14(2)，166.基因药物.(Gen.Pharmacol.)，(1996)，27(4)，581.心血管药物研究.，(1994)，12(4)，271.临床实验药物生理学.(Clin.Exp.Pharmacol.Physiol.)，(1995)，22(1)，63.心血管药物研究.，(1991)，9(3)，285.Exp.Opin.Ther.Patents(1996)，6(11)，1147.下面文献公开了INEPEP-509442AUS-192435US-4929641EP-599444BUS-884664EP-544620A
US-798684药物化学杂志(J.Med.Chem.)1993，3821.
循环学(Circulation)1993，88(4)，1.
EP-136883JP-85136554US-4722810最新药物设计，1996，2，443.
EP-640594药物化学杂志1993，36(1)，87.
EP-738711-AJP-270957CAS#115406-23-0DE-19510566DE-19638020EP-830863JP-98101565EP-733642WO9614293JP-08245609JP-96245609WO9415908JP05092948WO-9309101WO-9109840EP-519738EP-690070药物化学杂志(1993)，36，2420.
JP-95157459生物有机药物化学快报，1996，6(1)，65.下面的文献中公开了优选的INEP
EP-A-0274234JP-88165353生物化学生理学研究通讯1989，164，58EP-629627-AUS-77978药物化学展望(1993)，45.
EP-358398-BINEP的优选的实施例选自下面的结构 更优选的INEP选自下面的结构 更优选的INEP选自下面的结构
根据实验部分(下文)给出的教导制备这些化合物。这些化合物作为活性剂进行试验并且发现在增效cAMP方面有用，从而在治疗FSAD中有用。该实验部分(下文)给出了关于这些化合物的一些试验数据。
NEP测试从犬，大鼠，兔和人肾皮质制备和测定可溶性(NEP)神经内肽酶从肾皮质获得可溶性NEP并且通过测定裂解NEP底物Abz-D-Arg-Arg-Leu-EDDnp产生其荧光产物Abz-D-Arg-Arg的速度来测定活性。
实验方法1.材料所有的水都两次去离子化。
1.1组织人肾IIAM(Pennsylvania.U.S.A.)大鼠肾兔肾狗肾1.2均化培养基100mM甘露醇和20mM TrispH 7.1在1升水中稀释2.42克Tris(FisherT/P630/60)并且在室温下用6M盐酸将pH调节至7.1。向其中加入18.22克甘露醇(SigmaM-9546)。
1.3 Tris缓冲液(NEP缓冲液)在950毫升水中稀释50毫升50mM Tris pH7.4(SigmaT2663)。
1.4底物(Abz-D-Arg-Arg-Leu-EDDnp)以SNPE顺序制备，并且以粉末保存于-20℃下。小心将该底物再悬浮于Tris缓冲液来制备2mM贮存液，不进行涡旋或超声处理。
2mM贮存液的600μl等份试样于-20℃下贮存最多一个月(Medeiros，M.A.S.，Franca，M.S.F等(1997)，巴西药物和生物研究杂志(Brazilian Journal of Medical and Biological Research)30，1157-1162)。
1.5总的产物在平板上包括相应于100％底物转化至产物的样品，使得能测定底物转化的百分率％。通过在37℃下将1毫升2mM底物与20μl酶贮存液温育24小时产生总的产物。
1.6终止溶液在NEP缓冲液中制备300μm Phosphoramidon贮备液(SigmaR7385)并且以50μl等份在20℃下保存。
1.7二甲亚砜(DMSO)1.8氯化镁-MgCl2.6H2O(FisherMO600/53)。
1.9 Black96孔平底测试平板(Costar3915)。
1.10 TopsealA(Packard6005185)。
1.11离心管2.具体设备2.1 SorvallRC-5B离心机(SS34GSA转子，预冷至4℃)。
2.2 Braun miniprimer混合器。
2.3 BeckmanCS-6R离心机。
2.4 Fluostar galaxy2.5 Wesbart1589摇床培养箱。
3.方法3.1组织制备3.2使用Booth，A.G.&Kenny，A.J.(1974)Biochem.J.142，575-581的改进方法从肾皮质获得狗，大鼠和人NEP。
3.3使冷冻的肾的室温下解冻并且从髓质切除皮质。
3.4将皮质切得很碎并且使用Braun miniprimer(2.2)在大约10体积的匀浆缓冲液(1.2)中匀浆。
3.5向匀浆中加入氯化镁(1.8)(20.3mg/gm组织)并且在冰水浴中搅拌15分钟。
3.6将上清液移至新离心管并且弃除沉积之前在Beckman离心机(2.3)中在1500g(3820rpm)下离心匀浆。
3.7在Sovall离心机(2.1)中以15000g(12100rpm)将上清液离心12分钟并且弃除上清液。
3.8移取残留的沉积物上面浅粉色层并且再悬浮于含有氯化镁的匀浆缓冲液中(每克组织5ml缓冲液中9mgMgCl)。
3.9在弃除沉积之前在Beckman离心机(2.3)中在2200g(4630rpm)下将悬浮液离心12分钟。
3.10使用Sovall离心机(2.1)以15000g(12100rpm)将上清液离心12分钟并且弃除上清液。
3.11将最后的沉积物再悬浮于含有氯化镁的匀浆缓冲液中(每克组织0.5ml缓冲液中0.9mgMgCl)。使用Braun miniprimer(2.2)得到均匀的悬浮液。然后以100μl等份冷冻用于测定NEP活性。
4.0 NEP活性测定通过其裂解NEP特异性肽底物的能力测定已分成等份试样的NEP的活性。
4.1制备4％DMSO/NEP缓冲液(96mlNEP缓冲液中4mlDMSO)。
4.2底物，总产物，酶和Phosphoramidon贮存液在冰上解冻。
4.3向各孔中加入50μl4％DMSO/NEP缓冲液。
4.4将2mM底物贮存液以1∶40稀释制备50μM溶液。向各孔中加入100μl50μM底物(终浓度25μM)。
4.5加入50μl一定范围的酶稀释液引发反应(通常使用1∶100，1∶200，1∶400，1∶800，1∶1600和1∶3200)。向空白孔加入50μlNEP缓冲液。
4.6 2mM总产物以1∶80稀释得到25μM溶液，向一个新平板的头4个孔加入200μl 25μM产物。
4.7平板在摇床培养箱中在37℃下保温60分钟。
4.8 300μM Phosphoramidon贮存液以1∶100稀释至300nM。通过加入100μl300nM Phosphoramidon终止反应并且在摇床培养箱中在37℃下保温20分钟后在Fluostar(ex320/em420)上读数。
5.NEP抑制测定5.1底物，总产物，酶和Phosphoramidon贮存液在冰上解冻。
5.2在100％DMSO中制备化合物贮存液并且以1∶25在NEP中稀释得到4％DMSO溶液。所有进一步的稀释在4％DMSO溶液中进行(96mlNEP缓冲液中4mlDMSO)。
5.3两次向96孔板加入50μl的化合物并且向对照和空白孔加入50μl的4％DMSO/NEP。
5.4将2mM底物贮存液以1∶40在NEP中稀释制备50μM溶液(对于1板275μl2mM底物对10.73ml缓冲液足够了)。
5.5在NEP缓冲液中稀释酶贮存液(从活性检查测定)。
5.6将2mM总产物贮存液以1∶80在NEP中稀释制备25μM溶液。向另一个平板的头4个孔加入200μl.
5.7 300μM Phosphoramidon贮存液以1∶1000稀释制备300nM贮存液(11μl Phosphoramidon对10.99mlNEP缓冲液)。
5.8向96孔板的每一个孔加入下面的试剂要向96孔板加入的试剂表
5.9通过加入NEP酶引发反应，然后在摇床培养箱中在37℃保温1小时。
5.10加入100μl300nM Phosphoramidon终止反应并且在摇床培养箱中在37℃下保温20分钟后在Fluostar(ex320/em420)上读数。
6.计算在有和没有化合物存在下测定NEP酶的活性并且以百分比表示。
％对照活性(酶的周转)(对照平均FU-空白平均FU)/(总的平均FU-空白平均FU)×100％用抑制剂的活性(化合物平均FU-空白平均FU)/(总的平均FU-空白平均FU)×100以对照百分比％表示的活性用抑制剂的百分比活性/对照百分比活性×100S形剂量-反应曲线符合活性百分比％(对照百分比％)对化合物浓度，并且使用Excel中LabStats符合-曲线计算IC50会值。
VIP(血管活性肠肽)
根据本发明的一个方面，另外的靶物是PcAMP靶，PcAMP靶是VIP或其相关的受体之一。当前分类/命名法指定这些为VPAC1，VPAC2和PACAP。
从文献得知VIP及其受体的核苷酸序列和氨基酸序列。本申请提供的序列表中给出了一些序列。
我们证实VPAC1和VPAC2存在于人或兔阴道内。在人或兔阴道内都没有PACAP。
VIP是在性唤起期间释放的主要内源神经递质，其是位于阴道壁的血管床的神经诱导的阴道血管舒张的原因。这些血管舒张作用由腺苷酸环化酶激活和cAMP产生介导。没有理论的约束，该作用可能通过VIP受体亚型VPAC1，VPAC2或PACAP(垂体腺苷酸环化酶激活肽)受体介导。VPAC2和PACAP在CNS中最广泛地表达，并且尽管在垂体中表达，受体表现出不具有广泛分布的生物功能。
该活性剂可以增效VIP和/或起VIP模拟物或其类似物的作用。然后该活性剂促进和/或模拟性唤起期间释放的内源VIP的血管舒张作用。该活性剂还可以对VIP-诱导的阴道平滑肌的松弛有着另外的作用。临床上这将导致FSAD治疗，但是通过阴道壁充血和顺应提高了阴道润滑性。但是，在该实施方案中，模拟物或类似物不具有上文讨论的VIP的不利性质。
Victor A.McKusick等介绍了VIP及其相关受体的背景技术，参见http//www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm.。从该文献摘取出下面涉及VIP的信息。
“血管活性肠肽(VIP)是28个氨基酸的肽，最早从猪的十二指肠分离，不仅存在于胃肠组织而且也存在于神经组织中，可能作为神经递质，并且具有多种生物学作用。因为VIP表现出与胰高血糖素，胰泌素和肠抑胃肽(GIP)相似，认为其是胰高血糖素-胰泌素家族的一员。编码VIP的mRNA的最初的翻译产物(prepro-VIP)具有20道尔顿的分子量。通过克隆与编码人VIP的mRNA互补的DNA序列，Itoh等(1983)发现VIP母体不仅包含VIP而且包含27个氨基酸的新的肽，称之为PHM27，其具有组氨酸氨基末端和甲硫氨酸羧基末端。其与从猪肠分离的PHI17有2个氨基酸不同；PHI27，正如其指定指出的，具有异亮氨酸羧基末端。Linder等(1987)分离了VIP和PHM27的人基因并且研究了其在大鼠的各种组织中的表达。Heina-Erian等(1985)提示VIP神经肽对于囊纤维变性患者的汗腺有缺陷的创新可能是降低水含量和表征囊纤维变性的上皮对氯和其它离子的相对不可渗透性的基础机理。为了验证该假设，Gozes等(1987)进行了“候选基因”的研究。Bodner等(1985)证明相邻的外显子编码VIP和PHM-27。Gozes等(1987)使用编码PHM-27的基因组片段来检测VIP基因存在于6q21-qter。因此，他们排除缺损VIP基因作为最初引起囊纤维变性(其由7号染色体编码)的候选者。通过原位杂交技术，Gozes等(1987)将VIP基因定位于6q24。这将VIP置于MYB(189990)区，其绘图是6q22。Gozes等(1987)研究了神经元组织中两个基因之间的功能相关性。他们在3天龄大鼠的海马趾中发现MYBmRNA的明显高峰，在8天龄大鼠的该区存在的VIPmRNA峰之前。Omary和Kagnoff(1987)发现人结肠腺癌细胞系中VIP的核受体。Gotoh等(1988)通过基因的分子克隆片段对分类的染色体的点印迹杂交指出VIP位于6号染色体。通过原位杂交将该定位确定为6q26-q27”。
如所指出的，VictorA.McKusick等(出处同上文)介绍了VIP及其相关受体的背景技术。从该文献摘取出下面涉及VIPR1或VPAC1的信息。
“血管活性肠肽(VIP；192320)是主要在中枢神经系统的胆碱能突触前神经元和在外周肽能神经元神经支配分布组织中发现的28聚(octacosameric)神经内分泌介体。在具有免疫功能的很多神经内分泌肽中，VIP的不同在于其直接影响B和T细胞的能力。不同亚组的神经，呼吸道，肠胃和免疫细胞具有对VIP的高亲和性受体，其与能激活腺苷酸环化酶的鸟嘌呤核苷酸-结合(G)蛋白相关。Libert等(1991)通过从甲状腺cDNA选择性扩增和克隆获得了G-蛋白-偶联受体家族的4个新的受体。其中之一，称之为RDC1，由Sreedharan等(1991)鉴定为VIP受体。Libert等(1991)通过原位杂交将VIPR基因定位于2q37。后来的信息使其产生疑惑位于2q37的基因事实上是VIP受体基因(Vassart，1992)。Sreedharan等(1991)指定的GPRN1并且定位于2q37的序列被Wenger(1993)发现并不结合VIP。Sreedharan等(1995)分离了真正的I型VIP受体基因并且通过原位杂交将其定位于与小细胞肺癌相关的区的3q22带。通过种间回交分析，Hashimoto等(1999)将小鼠Vipr1基因定位于9号染色体的远侧区，该区表现出与人染色体3q同线性同源性。Sreedharan等(1993)克隆了人肠VIP受体基因；该推导的氨基酸序列与大鼠VIP受体具有84％相同性。Couvineau等(1994)从人空肠上皮细胞cDNA文库分离了2VIPR cDNA克隆。一个编码由460个氨基酸组成并且具有7个假定的跨膜区的VIP受体，和其它G蛋白-偶联受体一样。另一个编码495-氨基酸VIP受体相关蛋白，所述蛋白质表现出与C-末端区超过428个氨基酸的功能VIP受体100％同源性，但是包含完全不同的67-氨基酸N-末端区。当在COS-7细胞中表达时，第二种蛋白质不结合放射性碘标记的VIP，虽然其通常位于质膜，这一点通过免疫荧光研究证明。Sreedharan等(1995)发现I型VIP受体，也称之为II型PACAP受体(参见对于另一种类型的PACAP受体的102981)大约22kb大小并且由13个外显子(范围从42至1400bp)和12个内显子(范围自0.3至6.1kb)组成。Sreedharan等(1995)还表征了该基因的启动子和5-引物侧翼区”。
如所指出的，VictorA.McKusick等(出处同上文)介绍了VIP及其相关受体的背景技术。从该文献摘取出下面涉及VIPR2或VPAC2的信息。
“血管活性肠肽(VIP；192320)和垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP；102980)是起神经递质和神经内分泌激素作用的同系物肽类。VIP和PACAP的受体具有同源性，但是他们底物特异性和表达模式不一样。参见VIPR1(192321)和ADCYAP1R1(102981)。Svoboda等(1994)使用以VIP受体中保守序列为基础的引物进行低严谨性PCR。他们从淋巴母细胞cDNA文库克隆了人VIP2受体基因。该基因编码与大鼠VIP2受体具有86％相同性的438个氨基酸的多肽。他们在中国仓鼠卵巢细胞中表达人VIP2受体并且发现其结合PACAP-38，PACAP-27，VIP和毒蜥素，并且该受体这些肽的所有结合都激活腺苷酸环化酶。发现GTP抑制肽结合。Adamou等(1995)从人胎盘cDNA文库克隆了VIP2受体基因。Northern印迹表明VIPR2在骨骼肌中高水平和在心脏，大脑，胎盘和胰腺低水平表达为4.6kb和2.3kb2个转录本。Mackay等(1996)使用荧光原位杂交将VIPR2基因定位于人染色体7q36.3。用来自3型前脑无裂畸形(HPE3；142945)患者的细胞系进一步作图表明VIPR2基因位于HPE3最小临界区内。Mackay等(1996)陈述尽管VIPR2可能导致HPE3表型，但是不是起作用的唯一因素”。
AC(腺苷酸环化酶)根据本发明的一个方面，另外的靶是PcAMP靶，PcAMP靶是AC。
从文献获知AC的核苷酸序列和氨基酸序列。
为了证实VIP通过提高细胞内cAMP水平并接着激活腺苷酸环化酶诱导血管舒张，我们测定了VIP刺激期间阴道cAMP浓度，并且使用毛喉素，腺苷酸环化酶激活剂，模拟激活cAMP/腺苷酸环化酶途径的作用。
在这些研究中，我们发现在分离的阴道组织中，VIP治疗和毛喉素治疗提高了细胞内cAMP浓度。
我们还发现在性唤起动物模型中毛喉素提高了阴道血流量。
另外我们发现毛喉素诱导分离的阴道的松弛作用。
Victor A.McKusick等介绍了AC的背景技术，参见http//www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.htm.。从该文献摘取出下面涉及AC的信息。
“腺苷酸环化酶(EC4.6.1.1)催化ATP向环AMP的转化。该酶的活性是在几种激素的控制下，不同的多肽参与信号自受体向催化部分的转导。刺激或抑制受体(Rs和Ri)与表现出GTP酶活性的G蛋白(Gs和Gi相互作用)并且它们调控腺苷酸环化酶催化亚基的活性。Parma等(1991)克隆了相应于人大脑腺苷酸环化酶的cDNA，并且将其记为HBAC1。通过使用人大脑cDNA探针与中期染色体扩散原位杂交，Stengel等(1992)证明该基因位于8q24.2。通过相同的方法指出高同源性基因，ADCY2(103071)位于5p15.3”。
一般的重组DNA方法技术尽管这里提到的一般技术是本领域公知的，但是可以特别参考Sambrook等，分子克隆，实验室手册(1989)和Ausubel等，分子生物学中的快捷方法(1999)第4版，John Wiley&Sons，Inc.。US-A-4683195，US-A-4800195和US-A-4965188描述了PCR方法。
总之，本发明涉及使用INPY治疗FSD，特别是FSAD。
实施例现在以举例的方式描述本发明，其中参考下面的附图是坐标图的

图1，骨盆神经刺激和血流量之间的生殖器血流量-频率反应关系；是坐标图的图2，a)VIP对阴道血流量的影响，2b)重复输入VIP对阴道血流量的影响；是坐标图的图3，VIP，NEP抑制剂，PDEcAMP抑制剂或骨盆神经刺激对麻醉兔的平均动脉压的影响；是坐标图的图4，4a)毛喉素(一种cAMP模拟物)增加麻醉的兔的阴道血流量，4b)分离的兔阴道中的VIP刺激的cAMP产生，4c)毛喉素对分离的兔阴道的松弛作用；是坐标图的图5，VIP和毛喉素增加麻醉的兔的阴蒂血流量；是坐标图的图6，NEP抑制剂对麻醉的兔中骨盆神经刺激的阴道血流量变化的影响；是坐标图的图7，VIP(6μg/kg)对存在或不存在NEP抑制剂下的阴道血流量的影响，VIP(60μg/kg)对存在或不存在NEP抑制剂下的阴道血流量的影响；是坐标图的图8，PDEcAMP2型抑制剂对骨盆神经刺激阴道血流量增加的影响；是坐标图的图9，PDEcAMP2型抑制剂对VIP-诱导的阴道血流量的增加的影响；是坐标图的图10，NPYY1拮抗剂对麻醉的兔中骨盆神经刺激的阴道血流量增加的影响；是坐标图的图11，增加cAMP信号传输增加兔神经介导的阴道血流量(VBF)的增大的程度；和是坐标图的图12，NEPi对骨盆神经刺激阴蒂血流量增大的影响。
要明白的是本发明的活性剂是INPY。也给出了关于IPDE和INEP的教导，因为这将清楚地指示本领域技术人员本发明的活性剂可以一种或两种类型的这些活性剂组合来实现这里提到的有益效果。也包括这些附加的教导进一步支持我们的创造性发现。
现在将更详细地讨论附图。
图1-性唤起的麻醉的兔模型中骨盆神经电刺激诱导的依赖频率增加的阴道血流量。提高刺激频率诱导血流量更大的增加。使用激光Doppler技术监测变化。
图2-性唤起的麻醉的兔模型中血管活性肠肽(VIP)-诱导的阴道血流量的增加。图2a说明阴道血流量怎样通过输注VIP(快速静脉注射(iv bolus))以浓度依赖性方式增加。图2b证明两次重复输注VIP血流量产生类似的增加。注意反应持续时间也是类似的。使用激光Doppler技术监测所有变化。
图3-性唤起的麻醉的兔模型中血管活性肠肽(VIP)降低平均动脉血压。该坐标图说明麻醉的兔中血管活性试剂和用来研究阴道血流量的刺激参数对平均动脉血压的典型影响。这些观察到的影响一般是所有试验动物观察到的倾向。VIP诱导平均动脉血压的明显抑制而骨盆神经刺激，对照输注Hepsaline或PDEcAMP或NEP抑制剂对血压没有影响。注意，与VIP有关的血压降低也与心率的大幅增加有关。
图4-cAMP/腺苷酸环化酶途径激活模拟阴道组织VIP介导的血管舒张和平滑肌松弛。图4a说明输注毛喉素(40nmol，静脉内大丸剂，一种cAMP模拟物)诱导阴道血流量的明显增加。注意，反应的幅度和周期也与VIP(20.0μg/kg，快速静脉注射)诱导的类似。令人感兴趣的是对血流量的影响对外阴道壁有着更长时间的作用。图4b证明VIP(0.1μM)和毛喉素(10μM)明显将兔阴道内cAMP的细胞内浓度提高高于基础水平。图4c证明毛喉素诱导预先收缩(1μM苯福林)兔阴道带的强烈的松弛作用，IC50～300nM。使用体内激光Doppler技术，生物化学cAMP酶免疫测试或者通过体外组织松弛作用定量测定所有的变化。
图5-输注VIP增加性唤起的麻醉的兔模型中阴蒂血流量及激活cAMP/腺苷酸环化酶途径模拟VIP介导的阴蒂血管舒张。输注VIP(60-200μg/kg)诱导阴蒂血流量浓度依赖性增加。静脉输注200μg/kgVIP后观察到阴蒂血流量增加115％。通过输注cAMP模拟物毛喉素(FSK，40nmol/kg，快速静脉注射)可以模拟VIP对阴蒂血流量的影响。静脉输注40nmol/kg毛喉素后观察到阴蒂血流量增加156％。所有的增加都明显高于对照输注(Hepsaline)。注意，反应幅度类似于用VIP(200μg/kg，快速静脉注射)诱导的并且可以与图2和4中对阴道血流量所观察到的结果相比。使用体内激光Doppler技术定量测定所有的变化，并且与赋形剂输注(Hepsaline)相比明显增加。
图6-NEP EC3.4.24.11的选择性抑制剂增强性唤起的麻醉的兔模型中骨盆神经刺激(PNS)增加阴道血流量的程度。以15分钟的间隔反复给与PNS诱导阴道血流量可重现的增加(白色框)。与匹配的对照刺激或赋形剂对照(阴影框)时间观察的增加相比，给与NEP抑制剂(灰色框)增强了由次极大刺激频率(例如4Hz)诱导的阴道血流量的增加的峰。观察到下面的剂量依赖性增强-0.3mg/kg静脉内引起40％的增加，1.0mg/kg静脉内引起91％的增加(平均n＝3)。NEP抑制剂对基础(没有刺激)阴道血流量没有影响(没有给出数据)。使用激光Doppler技术监测所有的变化。
图7-NEP EC3.4.24.11的选择性抑制剂增强性唤起的麻醉的兔模型中VIP-诱导的增加阴道血流量的程度。以30分钟的间隔反复输注VIP诱导阴道血流量可重现的增加(参见图2b)。当增加是由于次极大剂量例如6.0μg/kg的VIP诱导的时，NEP抑制剂即能增强增加的血流量的幅度又能延长增强的血流的时间。在诱导阴道血流量最大增加的VIP剂量下，例如60μg/kg下，NEP抑制剂只延长增加的阴道血流量的时间。NEP抑制剂存在下的VIP-诱导的增加以实心三角形表示而对照VIP反应以空心三角形表示。对照输注Hepsaline对反应的幅度没有影响。使用激光Doppler技术监测所有的变化。
图8-2型PDEcAMP选择性抑制剂增强性唤起麻醉的兔模型中骨盆刺激(PNS)增加阴道血流量的程度。以15分钟的间隔反复给与PNS诱导阴道血流量可重现的增加(白方块)。与匹配对照刺激期间观察的增加(空心方块)相比，给与2型PDEcAMP抑制剂增大次极大刺激频率(黑方块；4Hz)诱导的阴道血流量增加的峰。输注PDE2抑制剂(500μg/kg)诱导阴道血流量86.8±21.9％增加(平均±semn＝2)。使用激光Doppler技术监测所有的变化。
图9-2型PDEcAMP选择性抑制剂增强性唤起麻醉的兔模型中VIP-诱导的增加阴道血流量的程度。以30分钟的间隔反复输注VIP诱导阴道血流量可重现的增加(参见图2b)。2型PDEcAMP选择性抑制剂(25μg/kg，快速静脉注射)延长VIP(60μg/kg，快速静脉注射)诱导的阴道血流量增加的时间。PDEcAMP抑制剂存在下的VIP-诱导的增加以实心三角形表示而对照VIP反应以空心三角形表示。对照输注Hepsaline对反应的幅度没有影响。使用激光Doppler技术监测所有的变化。
图10-NPY Y1受体的选择性拮抗剂增强性唤起麻醉的兔模型中骨盆神经刺激(PNS)增加阴道血流量的程度。以15分钟的间隔反复给与PNS诱导阴道血流量可重现的增加(数据没有给出)。与时间匹配的对照刺激或赋形剂对照(阴影框)观察的增加相比，给与NPY Y1拮抗剂(灰色框)增大了由次极大刺激频率(例如4Hz)诱导的阴道血流量增加的峰。观察到下面的剂量依赖性增强-0.01mg/kg静脉内引起15.8±19.6％的增加；0.03mg/kg静脉内引起35.1±17.17％的增加；0.10m/kg静脉内引起60.1±16.9％的增加和0.3mg/kg静脉内输注引起91.9±27.4％的增加(平均±sem n＝3)。NPY Y1拮抗剂对基础(没有刺激)阴道血流量没有影响(没有给出数据)。使用激光Doppler技术监测所有的变化。
图11提供了这里提供的一些数据的总结坐标图，表明这些活性剂通过增大内源性cAMP水平在增加阴道血流量中是非常有用的。
图12-NEP EC3.4.24.11的选择性抑制剂增强性唤起的麻醉的兔模型中骨盆神经刺激(PNS)增加阴蒂血流量的程度。与匹配的对照刺激或赋形剂对照(阴影框)时间观察的增加相比，给与NEP抑制剂(灰色框)增大了由次极大刺激频率(例如4Hz)诱导的阴蒂血流量增加的峰。观察到下面的剂量依赖性增强-1.0mg/kg静脉内引起131％的增加(平均n＝3)。NEP抑制剂对基础(没有刺激)阴蒂血流量没有影响(没有给出数据)。使用激光Doppler技术监测所有的变化。
测定cAMP活性/水平的测试使用Biotrak cAMP酶免疫测定(EIA)试剂盒(Amersham LifeSciencesRPN225)测定来自阴道组织样品的cAMP。
通过EIA测定来自阴道组织样品的cAMP。EIA以未标记的cAMP和固定量的过氧化物酶标记的cAMP之间对于限制量的cAMP特异性抗体的竞争为基础。
1.材料除非另有说明，所有材料由Amersham Life Science cAMP EIA试剂盒(RPN225)提供。
1.1微量滴定板-包被驴抗-兔IgG的96孔平板。
1.2测定缓冲液-含有0.02％牛血清白蛋白和0.5％用于再配制的防腐剂的0.05M乙酸钠缓冲液pH5.8。将瓶中内含物转移到使用3×15ml蒸馏水洗涤的有刻度的圆柱筒中。然后将终体积调节到500毫升。
1.3 cAMP标准物(用于乙酰化方法)。含有0.02％牛血清白蛋白和0.5％用于再配制的防腐剂的0.05M乙酸盐缓冲液pH5.8中10.24pmol/ml的cAMP。标准物溶解于2.5ml测定缓冲液中备用。
1.4抗血清。含有0.02％牛血清白蛋白和0.5％用于再配制的防腐剂的0.05M乙酸盐缓冲液pH5.8中的抗-cAMP抗体。使用前，用11毫升测定缓冲液稀释抗体并且小心翻转混合以溶解内含物。
1.5 cAMP缀合物。含有0.02％牛血清白蛋白和0.5％用于再配制的防腐剂的0.05M乙酸盐缓冲液pH5.8中的cAMP辣根过氧化物酶。使用前，用11毫升测定缓冲液稀释抗体并且小心翻转混合以溶解内含物。
1.6洗涤缓冲液。含有0.05％(v/v)用于再配制的TweenTM20的0.01M磷酸盐缓冲液pH7.5。将瓶中内含物转移到使用3×15ml蒸馏水洗涤的有刻度的圆柱筒中。然后将终体积调节到500毫升。
1.7TMB底物。20％(v/v)二甲基甲酰胺中的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TMB)/过氧化氢。
备用。
1.8乙酰化试剂。2毫升乙酸酐，4毫升三乙胺，根据需要制备。
1.9硫酸(1M)。从18M贮存液(BDH)制备1M硫酸。将1.11毫升酸加入到18.8毫升蒸馏水。
2.具体设备2.1一次性的5毫升玻璃试管2.2分光光度平板读数器(Spectra max190)
2.3微量滴定平板摇瓶机(LuckhamR100)3.方法·组织样品制备。在5毫升样品的生理盐水溶液中用相关的预处理方法例如拮抗剂，cAMP模拟物等处理组织。处理后，样品在液氮中急速冷冻，然后使用小锤破碎。将粉末刮到离心管中，并加入1ml的0.5M冰冷却的高氯酸(PCA)。将样品涡流混合并且置于冰上1小时。
·从组织样品中提取cAMP。样品在4℃下以10000g离心5分钟。取出上清液置于另一个离心管。沉积物在-80℃下保存用于蛋白质分析。然后使用硫酸钾将上清液样品中和至pH大约为6。在4℃下以10000g离心5分钟。回收上清液并且用5体积(5毫升)的水饱和的乙醚洗涤4次。每次洗涤后弃除上面乙醚层。将含水相转移到短的薄的玻璃管中并且在60℃氮气流下干燥。在1毫升测定缓冲液中溶解干燥的提取物并且在冰箱中保存备用(或者可以冷冻)。
·将贮存试剂平衡至室温，然后制备工作溶液。
·在标记的2，4，8，16，32，64，128，256和512fmol的玻璃管中制备cAMP标准物。这通过向除了512fmol标准物的所有试管加入1毫升测定缓冲液来实现。然后向两个最高的标准物(256和512fmol)加入1毫升乙酰化作用标准物(10.24pmol/ml)。将256fmol标准物涡流混合并且将1毫升转移到128fmol标准物中。继续直到对2fmol标准物处理，从其中取出1毫升。零标准物试管含有1毫升测定缓冲液。
·组织提取样品在冰上解冻(如果需要)并且在标记的玻璃管内以1∶100稀释(10μl样品比990μl测定缓冲液)。
·通过在通风厨中顺着试管壁加入100μl乙酰化试剂然后立即涡流混合将所有标准物和样品中的cAMP乙酰化。
·向96孔平板的合适的孔加入50μl所有的标准物和样品，并且向非特异性结合(NSB)孔加入150μl测定缓冲液。
·向除了空白(B)和NSB的所有孔加入100μl抗血清，然后在3-5℃下温育2小时。
·温育后，向除了B的所有孔加入100μl cAMP-过氧化物酶缀合物，然后在3-5℃下又温育1小时。
·将平板翻转向下倒空并且印迹到吸收纸上腾空平板，然后用400μl洗涤缓冲液将各孔冲洗4次。每次冲洗平板后再次印迹以保证取出了所有的残留冲洗缓冲液。然后立即向所有的孔加入200μlTMB。
·室温下将平板置于平板摇瓶机上30分钟，然后向所有的孔加入100μl的1M硫酸。在30分钟内在450nm处在Spectra max190上读取光密度。
4.标准物对于每一种测定建立下面的标准物试管4.1在测定缓冲液中掺加标准物向测定缓冲液中掺入已知量的cAMP来测定试验的效率。向测定缓冲液中加入70pmol/ml cAMP，其相当于测定中的35fmol/孔，其位于剂量反应曲线的中间。
制备1毫升标准物68.4μl 521fmol/孔标准物931.6μl测定缓冲液4.化合物对平板的作用建立标准物来测定功能研究中使用的化合物是否对96孔平板有作用或者影响cAMP的结合。
这些包括·只向测定缓冲液掺入化合物来评价化合物对平板的直接作用。
·向含有基础水平的cAMP的血浆中掺入化合物来评价化合物对cAMP结合平板的影响。
向各标准物掺入5nM浓度的化合物。之所以选择5nM是因为输注最后的总的药物水平在过去大约是150-300nM。在测定前将样品以1∶100稀释，因此对于比输注最后的总的药物预期水平高的任何情况允许使用5nM。
5.计算在450nm处用Spectra max平板读数器读取光密度(OD)。
在Spectra max上通过用％B/Bo(y轴)对cAMP fmol/孔(x轴)作图产生标准曲线。
如下计算每一个样品和标准物的％B/Bo(结合百分率)Bo＝0标准(参见方法3.2)％B/Bo＝(标准或样品OD-NSBOD)/(Bo OD-NSB OD)×100然后对于每一个样品可以从标准曲线直接读取fmol/孔体积。在取各对样品的平均值之前将值转化为pmol/ml。
将fmol/孔的值转化为pmol/mlfmol至pmol ＝除以1000孔中的体积 ＝50μl…So(×1000)50样品以1/100稀释，所以总共＝1×1000/1000×100/50＝2因此所有的fmol/孔乘以2给出pmol/ml。
动物试验模型增强环腺苷酸-3’，5’-单磷酸(cAMP)的作用导致的性唤起的麻醉的兔模型中阴道血流量增加。
1.0目的1.开发和确认雌性性唤起动物模型2.鉴定引起麻醉的兔中生殖器血流量调节的机理。
3.鉴定增加阴道和阴蒂血流量的潜在的途径。
4.研究阴道平滑肌松弛的机理和鉴定阴道松弛作用增强的潜在的途径。
2.0导论正常的性刺激反应包括性兴奋期间发现的几种生理反应。这些变化，例如阴道，阴唇和阴蒂充血是由于生殖器血流量的增加引起的。充血导致通过血浆渗出增加的阴道润滑性，增强的阴道柔顺性(阴道平滑肌的松弛作用)和增强的阴道和阴蒂敏感性。
女性性刺激失调(FSAD)是最普遍的性失调，影响多达40％的绝经前，绝经期和绝经后(±HRT)妇女。FSAD的第一种结果是减少生殖器充血或者本身充血过分缺少阴道润滑性和缺少令人满意的生殖器敏感性。第二种结果包括降低性欲，性交时疼痛和难以达到高潮。FSAD引起的最常见的是减小血流量，导致减低程度的阴道，阴唇和阴蒂充血(Park，1997；Goldstein，1998；Berman，1999a，Werbin，1999)。
正如这里解释的，本发明提供了通过增加生殖器血流量恢复或增强患有FSAD的妇女正常性刺激反应的方法。
在我们的研究中，我们使用激光Doppler技术测定生殖器血流量小的变化鉴定了作为阴道血管舒张介体的cAMP(环腺苷酸-3’，5’-单磷酸)。使用VIP代谢抑制剂(一种NEP EC3.4.24.11抑制剂)，我们也证明了骨盆神经刺激(即性唤起)期间观察到的生殖器血流量的增加是由VIP介导的。这涉及开发性刺激动物模型并且证明该数据反映雌性性刺激期间观察到的生理变化。然后使用该模型来鉴定和证实增加生殖器血流量的机理，例如直接或间接促进cAMP-介导的的血管舒张。
3.0方法3.1麻醉方法用肌内注射0.5ml/kg的美托咪定(Do mifor)和肌内注射0.25ml/kg的氯胺酮(Vetalar)的组合预先处理雌性新西兰兔(～2.5kg)，同时通过面罩保持给氧。切开兔的气管，使用连接通风器的PortexTM没有封套的气管内插管3ID，并且保持每分钟30-40次呼吸的通气速度，大约潮涌体积量是18-20ml，最大气道压力10cmH2O。然后给与异氟烷麻醉并且继续以2升/分钟用氧气通气。使用23G或24G导管插入右侧边缘耳静脉，以0.5ml/分钟的速度输入乳酸Ringer溶液。在伤害手术期间兔保持3％异氟烷，降至2％保持麻醉状态。
3.2插入容器切开左侧腹谷沟区并且沿着大腿垂直切开大约5cm深。暴露出股静脉和股动脉，分离，然后插入PVC导管(17G)用于输入药物和化合物。对于股动脉重复插入导管，插入导管的深度是10cm以保证导管达到腹主动脉。该动脉导管连接Gould系统来记录血压。通过该动脉导管也取到用于血气分析的样品。测定收缩压和舒张压，使用公式(舒张压×2＋收缩压)/3计算平均动脉血压。通过脉冲血氧计和Po-ne-mah数据接收软件系统(Ponemah PhysiologyPlatform，Gould Instrument Systems Inc)测定心率。
3.3刺激骨盆神经对腹腔进行腹中线切开。在耻骨上端大约5cm处切开。用钝器剔除脂肪和肌肉暴露出顺着体腔下行的下腹神经。为了避免损伤位于耻骨之上的股静脉和股动脉，基本上保持紧贴着耻骨的外侧曲线。坐骨神经和骨盆神经位于较深处，在进一步解剖之后位于兔的背侧。一定鉴定了坐骨神经，也就容易定位骨盆神经。术语骨盆神经的使用不很确切；解剖学教科书对于该术语没有充分详细地定义该神经。但是，该对神经刺激引起阴道和阴蒂血流量增加和骨盆区神经支配。从周围组织分开该骨盆神经并且在该神经周围放置Harvard双极刺激电极。将该神经稍稍拉紧这样该电极位置固定。在神经和电极周围放置大约1ml轻石蜡油。其对神经起保护性润滑作用并且防止血液污染电极。电极连接GrassS88刺激器。使用下面的参数刺激骨盆神经5V，脉冲宽度0.5ms，刺激持续10秒，频率范围2-16Hz。当每15-20分钟刺激该神经时获得可重复的反应。
为了确定用作次极大反应的最佳频率，在每一次试验开始时测定频率反应曲线，一般为4Hz。使用Harvard22输入泵通过股静脉输入要试验的化合物，使进行一次连续的15分钟刺激周期。
3.4激光Doppler探针的位置在耻骨的尾侧端做腹中线切开，暴露耻骨区。去除结缔组织暴露出阴蒂的被膜，保证其壁没有小的血管。通过去除所有的结缔组织也暴露外阴道壁。将一个激光Doppler流量探针插入阴道3厘米处，使得该探针轴的一半仍然可见。放置第二个探头使得其刚好位于外阴蒂壁之上。然后调节这些探头的位置直到获得信号。第二个探头刚好置于外阴道壁上血管的表面之上。将两个探针都夹在适当的位置。
使用Po-ne-mah数据接收软件(Ponemah Physiology Platform，GouldInstrument Systems Inc)从流量计直接读取数字记录阴道和阴蒂血流量或者从Gould自动记录图表扫描间接记录阴道和阴蒂血流量。实验开始时进行校正(0-125ml/min/100g组织)。
3.5输入血管活性肠肽(VIP)(VIP)(Bachem，H-3775)输入剂量是2.0，6.0，20.0，60.0μg/kg，静脉内输入，并且以0.5ml盐水体积输入。使用Harvard22泵，通过3-道管以500μl/分钟将VIP输入股静脉。输入VIP后，用肝素化盐水(Hepsaline)冲洗导管使得导管中没有剩余VIP。
对于使用VIP输入的实验，为了获得可重复反应，需要一个起始敏感剂量反应曲线(2-60μg/kg)。起始输入Hepsaline(50Ul/ml)作为负对照。
3.6输入抑制剂在盐水或5％葡萄糖溶液(用于注射的200μl50％葡萄糖，于1.8ml水中)制备NEP(中性内肽酶EC3.4.24.11)抑制剂，5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂和NPY Y1拮抗剂。PDEcAMP抑制剂溶解于40％乙醇溶液(用于注射的200μl50％葡萄糖，于1.8ml水中)。以与VIP相同的速度输入抑制剂和赋形剂对照。在VIP剂量反应曲线前30分钟输入NEP抑制剂，而NEP抑制剂，NPY Y1受体拮抗剂和PDEcAMP抑制剂在骨盆神经刺激之前15分钟输入。
3.7离体的兔阴道平滑肌松弛的测定3.7(a).体外兔阴道制品通过断颈手术杀死雌性新西兰白兔(2.0-3.0kg)。打开腹腔切除阴道。在Wesley Co.5ml用丝线缝合的硅烷化器官腔(6/0标准)中纵向固定组织带，所述组织最初静态张力为1.5g，放置于Krebs碳酸氢盐缓冲液中，保持37℃，并且通入95％O2/5％CO2。每一条组织带的上结扎端连接一个10克能力力移传感器并且使用DART体外数据捕获系统测定和记录等同力变化。让组织平衡1.5小时并且有规律地用Krebs洗涤。
3.7(b).血管活性肠肽诱导的兔阴道的松弛使用1μM浴浓度苯福林收缩各组织。当收缩反应达到稳定状态(～15分钟)时，以log单位向该器官腔累计加入VIP以产生0.1-100nM浓度。加入各种浓度的VIP 5分钟后测定松弛反应；该时间达到最大松弛。然后将组织置于试验试剂(例如NEP或PDE抑制剂)或DMSO赋形剂(时间匹配的对照)中。
3.7(c).VIP松弛实验的数据分析对于各VIP浓度松弛-反应曲线，以最大苯福林诱导收缩百分比表示VIP诱导的松弛反应。然后用这些数值对logVIP浓度作图并且画出S形曲线。为了画出曲线目的，将最小松弛反应规定为0％并且使最大松弛反应自由配合。测定产生50％的苯福林收缩松弛需要的VIP浓度(EC50PE)。
3.7(d).兔阴道的电场刺激松弛根据3.7(a)部分所述制备兔阴道带。以大约4cm间隔将组织带固定在置于器官腔顶部和底部之间的两个铂电极中间。使用1μM苯福林浴浓度收缩各组织。当收缩反应达到稳定状态(～15分钟)时，使组织经历预电场刺激处理(EFS)诱导松弛曲线。以千分之0.5秒脉冲幅度10秒冲程送递的2，4，8和16Hz相继的频率在40-60伏中间进行。使组织恢复到各频率(5分钟)之间的收缩前张力基础线并且记录的松弛反应大小。
完成预处理EFS反应曲线后，对所有的组织冲洗15分钟，使组织恢复到基础线张力。然后组织接受试验试剂(例如NEP或PDE抑制剂，氧化氮合酶[NOS]抑制剂)或DMSO赋形剂(时间匹配对照)。加入化合物或赋形剂后用苯福林(1μM)使组织再次收缩15分钟，并且如上所述测定EFS诱导的松弛反应曲线。
对于EFS实验，用阿托品(10μM)和胍乙啶(150μM)补充Krebs破坏阴道的胆碱能或肾上腺素能神经元神经支配。
3.8.分离的兔阴道中cAMP水平的测定使用Biotrak cAMP酶免疫测定(EIA)试剂盒(Amersham LifeSciencesRPN225)对来自阴道组织的提取物测定cAMP浓度。
用试验试剂(例如毛喉素或VIP)处理离体阴道组织样品。5分钟后用液氮快速冷冻样品，匀浆并且提取cAMP。通过EIA测定cAMP水平。EIA以未标记的cAMP和固定量的过氧化物酶标记的cAMP对于有限量的cAMP特异性抗体之间的竞争为基础。
3.9离体兔阴道中磷酸二酯酶(PDE)活性的测定从ABS Inc.，Delaware(供体年龄41和60岁)获得人阴道壁胞质提取物。通过Mono-Q阴离子交换色谱分离PDE同工酶并且根据它们的底物选择性，对别构调节剂和选择性抑制剂的敏感性表征。也使用特异性PDE同工酶抗体进行Western分析来监测人阴道中PDE表达。
所有的数据以平均值±s.e.m.表示。使用Student’s t-检验鉴定显著变化。
4.0结果和讨论4.1性唤起动物模型在我们的研究中，我们开发了一种性唤起生理学可稳定重复的模型。使用这种麻醉的兔模型，我们能使用激光Dopple技术测定生殖器血流量的小的变化。使用骨盆神经刺激来刺激性唤起的神经元作用。
我们发现骨盆神经刺激诱导频率依赖性阴道和阴蒂血流量增大(参见图1)。当在内阴道壁或外阴道壁上记录时，阴道血流量增大明显。2Hz下骨盆神经刺激诱导平均最大阴道血流量增大为10.3±1.8，4Hz时20.0±4.6，8Hz时36.3±4.8和16Hz时46.6±4.7ml/min/100g组织(n＝4)；15-20V，0.5ms，10s)并且2Hz时阴蒂血流量增加为14.7±3.6，4Hz时29.4±1.4和8Hz时69.7±2.1。这些值与事先在人研究和动物唤起模型所观察的值具有类似幅度(Berman，1999a；Park，1997)。
我们发现次极大骨盆神经刺激导致可重复的生殖器血流量的增加(例如每15分钟4Hz刺激平均增加的血流量是8.5±0.10ml/min/100g组织n＝8和平均阴蒂血流量增加为13.65±0.86ml/min/100g组织n＝11)。这种可重复性保持最多5 小时。我们可以利用这些反应的可重复性来研究a).介导生殖器充血的内源生血管活性剂/机理的鉴定，和b).在增加阴道和/或阴蒂血流量中可能是有效的药物的影响。
我们发现麻醉兔中没有与骨盆神经刺激相关的心血管副作用(参见图3)。性唤起期间生殖器血流量通过增加的动脉血供给而增加-阴道动脉，子宫动脉阴道分支，内阴动脉和中直肠动脉的中分支全都在向阴道和阴蒂供血中涉及。起源S2/S4脊柱区的骨盆神经神经支配雌性生殖器并且分支终止于下部阴道，阴蒂和相关的血管。通过刺激骨盆神经我们可以刺激性唤起期间发现的血流量效果，即生殖器动脉血流量的增加。令人感兴趣的是，增加的动脉血流量不会因使得毛细管网络充血的静脉分流而受影响。阴道充血通过增加的血浆渗漏引起阴道润滑，而这是性刺激期间观察的第一骨盆反应之一。骨盆神经刺激或性唤起时释放的神经递质目前还没有鉴定。免疫组织化学鉴定了神经支配阴道和阴蒂血管和微血管的含有神经肽或其它神经递质候选者的神经。这些研究表明，钙调蛋白基因相关肽(CGRP)，神经肽Y(NPY)，氧化氮合酶(NOS)，活性剂P和血管活性肠肽(VIP)都存在于神经支配人阴道和阴蒂的神经中(Hoyle，1996；Burnett，1997；Hauser-Kronberger，1999)。
4.2性唤起的麻醉兔模型的确认为了将使用该模型产生的血流量数据翻译为性刺激人模型观察的数据，我们直接将我们的阴道血流量数据与临床前研究产生的心血管数据相比较。
我们发现在性刺激兔模型中输入VIP后带来下面的效果；·外源VIP(快速静脉注射)诱导明显的浓度依赖性阴道血流量增加(参见图2a)。当在内阴道壁或外阴道壁上记录时这些增加明显高于基础血流量值。静脉内给与VIP(60μg/kg)阴道血流量增大为24.7±3.6ml/min/100g组织。输入后血流量保持高于基础大约11分钟。低剂量诱导较小幅度增加，例如6.0μg/kg，增加血流量为7.5±1.3ml/min/100g组织。输入后血流量保持高于基础7分钟。
·反复输入类似剂量的VIP(以30分钟间隔静脉内给药)诱导明显的可重复性阴道血流量增加(参见图2b)。
·VIP(静脉内)明显增大心率和降低平均动脉血压(参见图3)。6.0μg/kgVIP(静脉内)引起平均动脉血压明显降低13.2±0.7mmHg和心率明显加快16±4次/分钟。
该动物模型直接反映对健康志愿者输入VIP时观察到的临床数据，即增大阴道血流量，降低血压和加快心率。因此，该模型可以用来研究性唤起时发生的生理变化的机理，另外确认增大阴道血流量从而治疗FSAD的新的方法。
4.3通过刺激cAMP/腺苷酸环化酶途径的VIP诱导的阴道血流量变化Ottesen及其同事证明对于健康志愿者VIP诱导阴道血流量增大和润滑。但是，VIP表现出其作用的机理还不清楚。文献中，有大量的VIP通过不同第二信使系统传递信号的实施例，所述第二信使系统包括cGMP/鸟苷酸环化酶(Ashur-Fabian，1999)，一氧化碳/血红素合酶(Fan，1998)和cAMP/腺苷酸环化酶(Schoeffter，1985；Gu，1992；Foda，1995)。最近一篇描述怎样通过氧化氮的释放解释子宫动脉中VIP的松弛效果的报道对此以实例进行描述(Jovanovic，1998)。令人感兴趣的是也有VIP调节雄性泌尿生殖器功能中的NO/cGMP(Kim，1994)的证明和有用VIP(0.5μM)不能提高cAMP水平的治疗人阴道平滑肌细胞培养物的直接证据(Traish，1999，上文)。
在该项研究中，我们发现VIP通过提高细胞内cAMP水平来诱导血管舒张。通过进行一系列功能实验，我们测定了血流量和平滑肌松弛，还有生物化学测定细胞内cAMP浓度。我们使用了毛喉素，其是腺苷酸环化酶或cAMP模拟物的激活剂，来模拟激活cAMP/腺苷酸环化酶途径的效果。鉴定了VIP和毛喉素对阴道血流量和松弛作用的生理唤醒作用的影响。
VIP(20μg/kg)和毛喉素(40nmol/kg)分别诱导阴道血流量明显增大13.2和12.7ml/min/100g组织(参见图2a和4a)。这些由VIP和毛喉素诱导的幅度的变化没有明显不同。当在内阴道壁或外阴道壁上记录时这些增大明显高于基础血流量值。
VIP(0.1μM)和毛喉素(10μM)两者明显将离体阴道组织中的细胞内cAMP浓度增大高于基础水平(参见图4b)。
VIP(0.1μM)和毛喉素(10μM)分别将基础浓度从276nM提高156％和238％。这些百分比的不同反映出使用的VIP和毛喉素的浓度的不同，例如浓度为0.1μM的VIP将收缩前分离的阴道松弛大约80％，而10μM毛喉素足以完全松弛分离的组织。
另外，我们发现VIP和毛喉素在分离的阴道组织中诱导松弛作用，EC50值分别为18.8±0.6nM和320±20nM(参见图4c)。
这些数据证明VIP通过cAMP/腺苷酸环化酶途径诱导阴道血管舒张，因此该模型可以用来研究骨盆神经刺激即性刺激是否导致VIP的释放/cAMP/腺苷酸环化酶途径的释放。另外，也可以研究例如通过直接或间接增强cAMP信号传输来增大性刺激时的阴道血流量的途径。
4.4 cAMP是阴道血管舒张的介体目前还没有鉴定出在性唤起期间导致阴道血流增加的神经递质和第二信使候选者。今天，人们关注氧化氮(NO)/cGMP途径。根据本发明，我们已证明1).cAMP/腺苷酸环化酶途径介导VIP诱导的阴道血流量增大；2).VIP是性唤起时释放的内源神经递质和3).内源释放的VIP通过增多cAMP的诱导其血管舒张作用。
目前还没有鉴定出导致阴道壁松弛的神经递质。我们证明VIP是刺激骨盆神经时释放的神经递质，cAMP介导VIP介导的血管舒张，抑制VIP的代谢或者直接增强cAMP信号的试剂增加骨盆神经刺激的阴道血流量的增加，各自例如NEP抑制剂或PDEcAMP抑制剂(参见下面部分)。
在我们的研究中，我们发现我们可以排除NO在VIP诱导的阴道松弛中的作用。有力的和选择性5型PDE抑制剂对VIP诱导的离体阴道平滑肌的松弛作用具有最小的影响(将VIP诱导的松弛作用增强30％；参见表1)。
表1离体兔阴道的VIP介导的松弛作用的增强。该表详细说明预收缩(1μM苯福林)的阴道平滑肌的VIP诱导的松弛作用的EC50增大的百分比。1，2，3和4型PDEcAMP的选择性抑制剂全都显著促进VIP介导的松驰作用，而5型PDEcGMP的选择性抑制剂或赋形剂对照对VIP介导的松弛作用没有影响。
我们证明VIP也是部分负责离体阴道平滑肌的EFS诱导的松弛作用的内源NANC(非肾上腺素能，非胆碱能)神经递质。高剂量的氧化氮合酶抑制剂(L-NOARG，300μM)只抑制EFS诱导的松弛作用的50％。防止NEP诱导的VIP的代谢因此增强VIP信号传输的NEP抑制剂(1μM)增强EFS诱导的非氧化氮NANC松弛作用。我们证明NO和VIP两者调节阴道壁中平滑肌的伸缩性。治疗上来讲，可用增强NO/cGMP和/或VIP/cAMP介导信号传输的活性剂来增强阴道平滑肌的松弛作用。
4.5 VIP通过cAMP途径诱导阴蒂血管舒张目前还没有鉴定出在性唤起期间增加阴蒂血流的神经递质和第二信使候选者。在目前阴道血流量的研究中，工作具体观注氧化氮(NO)/cGMP途径。没有报导关于VIP在介导阴蒂血流量/膨胀中起作用，虽然在阴蒂组织中可见含有VIP神经元(Hauser-Kronberger等，1999)。
在该项研究中我们证明1.输注VIP增大阴蒂血流量2.cAMP/腺苷酸环化酶途径介导VIP诱导的阴蒂血流量的增大3.VIP是性唤起时释放的内源阴蒂神经递质1.输入VIP(60-200μg/kg，静脉内大丸剂)诱导浓度依赖性阴蒂血流量增大(图5)。静脉内输入200μg/kgVIP后发现阴蒂血流量增大115％。这比对照输入(Hepsaline)提高明显。
2.可以通过输入cAMP模拟物毛喉素(40nmol/kg，快速静脉注射，图5)模拟VIP对阴蒂血流量的影响。静脉内输入40nmol/kg毛喉素后发现阴蒂血流量增大156％。这比对照输入(Hepsaline)提高明显。注意反应的幅度与VIP(200μg/kg，快速静脉注射)诱导的类似并且可与图2和4中的阴道血流量观察的结果相比。
3.临床相关剂量的NEP EC3.4.24.11的选择性抑制剂明显增加骨盆神经刺激的阴蒂血流量的增大程度(参见图12)。NEP抑制剂与赋形剂对照增大相比将阴蒂血流量增大的峰增强最多131％。
这些数据证明VIP能增大阴蒂血流量/血管舒张，这可以通过激活cAMP/腺苷酸环化酶途径模拟。NEP EC3.4.24.11(负责VIP的代谢)的抑制剂增加骨盆神经刺激的阴蒂血流量增大的发现证明VIP是骨盆神经刺激/性唤起时释放的神经递质。
4.6直接或间接提高cAMP水平的药剂增大生殖器血流量FSAD与减小的生殖器血流量相关并且可能由减小的生殖器血流量产生。治疗该疾病的有效途径围绕增大生殖器血流量。证明cAMP是生殖器血管舒张的介体和cAMP的增加是神经元释放的VIP的结果，我们相信如果增强cAMP信号，则结果生殖器血流量将增大，因此将生殖器血流量恢复至正常水平并治疗FSAD。
在特别优选的方面，我们选择三个靶物直接或间接增强cAMP介导的血管舒张-PDEcAMP抑制剂，例如2型PDEcAMP抑制剂，NEP(EC3.4.24.11)抑制剂和神经肽YY1(NPYY1)受体拮抗剂。
4.6.1中性内肽酶(NEP EC3.4.24.11)抑制剂NEP EC3.4.24.11代谢VIP并且因此终止VIP-介导的生物活性。NEP抑制剂将促进刺激时释放的VIP的内源血管舒张作用。这将具有增加生殖器充血的临床效果。
先前文献没有报道过NEP EC3.4.24.11定位或者其在阴道组织中的功能作用或者在性刺激中的作用。
临床相关剂量的NEP EC3.4.24.11的选择性抑制剂明显增加骨盆神经刺激阴道血流量的增大(参见图6)。
与时间匹配的对照增大相比，NEP抑制剂将阴道血流量增大的峰增强至多53％。次极大刺激频率(例如4Hz)的增大是剂量依赖性的，例如0.1mk/kg静脉内输入诱导35.0±7.6％增大；0.3mk/kg静脉内输入诱导42.60±27.7％增大和1.0mk/kg静脉内输入诱导52.8±32.5％增大。NEP抑制剂对基础(没有刺激)阴道血流量没有影响。因此，本发明活性剂通过增效cAMP信号传输增强唤起，而不是诱导没有性愿望的唤起，即通过直接增加cAMP信号传输。
临床相关剂量的NEP EC3.4.24.11的选择性抑制剂明显增加骨盆神经刺激阴蒂血流量增大的程度(参见图12)。与赋形剂对照增大相比，NEP抑制剂将阴蒂血流量增大的峰增强至多131％。NEP抑制剂对基础(没有刺激)阴道血流量没有影响。这进一步支持我们相信本发明活性剂通过增效cAMP信号传输增强唤起，而不是诱导没有性愿望的唤起，即通过直接增加cAMP信号传输。
与时间匹配的对照相比，临床相关剂量的NEP EC3.4.24.11的选择性抑制剂增加VIP诱导的阴道血流量的增大(参见图6)。次极大剂量的VIP(例如6.0μg/kg)明显增强增大峰值(95±6％)并且将增强作用时间(大约140％)，从7分钟延长至超过17分钟；参见图7。当与产生最大流量增加的VIP剂量结合施用时，NEP抑制剂明显延长VIP诱导的阴蒂血流量的增大的时间(80％增大时间大约11-20分钟)。
临床相关剂量的NEP明显增强离体组织中VIP诱导的和神经介导的松弛作用。在选择性NEP抑制剂存在下(1μM)，VIP的EC50明显从18.8±0.6nM降低至2.9±0.3nM。NEP抑制剂的作用是浓度依赖性的。
通过Northern和Western分析在人和兔阴道中鉴定了NEP EC3.4.24.11mRNA信息和表达蛋白质。
4.6.2磷酸二酯酶(PDE)抑制剂cAMP水解PDE即PDEcAMP降解cAMP。PDEcAMP抑制剂将增强唤起时释放的cAMP的内源血管舒张作用。这将具有增大阴道充血的临床效果。
先前文献没有报道过PDEcAMP定位或者这些同工酶在阴道组织中的功能作用或者在性唤起中的作用。人和兔阴道的PDE曲线证明存在下面的PDEcAMP1，2，3，4，7和8同工酶。这些PDEcAMP的抑制剂代表增大阴蒂血流量和/或松弛阴道平滑肌的有潜力的试剂。
临床相关剂量的2型PDEcAMP的选择性抑制剂明显增加骨盆神经刺激阴道血流量的增大(参见图8)。与时间的匹配对照观察到的增大相比(@4Hz)，2型PDEcAMP抑制剂(500μg/kg)；静脉内将阴道血流量增大的峰增强86.8±21.9％。
2型PDEcAMP选择性抑制剂明显延长阴道血流量峰值超过100％的VIP(60μg/kg)诱导的增大的时间(50％幅度下测定；参见图9)。选择性2型PDEcAMP抑制剂明显增强VIP刺激诱导的血流量增大的峰值(大约15±3％[200μg/kg])。
明显延长阴道血流量峰值超过100％的VIP-诱导的增大的时间(50％幅度下测定；参见图8)。选择性2型PDEcAMP抑制剂明显增强骨盆神经刺激诱导的血流量增大的峰值(大约15±3％[200μg/kg]，4Hz)。
PDEcAMP抑制剂增强VIP诱导的预收缩的分离的阴道平滑肌的松弛作用(1μM苯福林；参见表1)。1，2，3和4型PDEcAMP选择性抑制剂全部明显促进VIP介导的松弛作用(210％@76nM，130％@8nM，220％@3.4μM和160％@686nM，VIPEC50值的增加)。以已知对于感兴趣的特定PDEcAMP选择性的剂量施用这些抑制剂。5型PDEcAMP选择性抑制剂或赋形剂对照物对VIP介导的松弛作用没有可见的作用。
4.6.3NPY Y1受体拮抗剂NPY表现出对VIP介导的血管舒张的抑制影响和NPY Y1受体拮抗剂将有利于唤起时释放的内源VIP的血管舒张作用。这将具有增大阴道充血的临床效果。
先前文献没有报道过NPY受体定位或者这些受体在阴道组织中的功能作用或者在性唤起中的作用。
Northern和Western分析鉴定了人和兔阴道中存在NPY Y1，Y2和Y5受体亚型的NPY受体表达研究。
临床相关剂量的NPY Y1的选择性抑制剂明显增加骨盆神经刺激阴道血流量的增大(参见图10)。与时间匹配的对照增大相比，NPY Y1拮抗剂将阴道血流量增大的峰增强至多92％。次极大刺激频率的增大(例如4Hz)是剂量依赖性的，例如0.01mk/kg静脉内输入诱导15.8±19.6％增大；0.03mk/kg静脉内输入诱导35.1±17.17％增大；0.10mk/kg静脉内输入诱导60.1±16.9％增大和0.30mk/kg静脉内输入诱导91.9±27.4％增大(平均值±sem n＝3)。NPY Y1拮抗剂对基础(没有刺激)阴道血流量没有影响。这加强了我们的观点，即它们通过增效cAMP信号传输增强唤起，而不是诱导没有性愿望的唤起，即通过直接增加cAMP信号传输。
4.7增强cAMP或增大阴道血流量的活性剂对麻醉的兔的平均动脉血压的影响在口服治疗FSAD的研究中，期望没有相关的心血管副作用，例如对血压或心率的影响。在我们的研究中，我们发现输入VIP明显降低平均动脉血压(参见图3)并且明显加快心率。因此，在最优选的方面，该活性剂不是VIP。骨盆神经刺激和PDcAMP和NEP的抑制剂对血压没有影响。6.0μg/kgVIP(静脉内)引起平均动脉血压明显降低13.2±0.7毫米汞柱并将心率明显加快16±4次/分钟。更高剂量例如60.0μg/kgVIP(静脉内)引起平均动脉血压明显降低14.7±1.37毫米汞柱，并且这与心率明显加快111±30次/分钟相关联，其然后将平均动脉血压提高8.5±1.4毫米汞柱。试验的化合物根据本发明方法试验了上面提到的系列化合物并且发现根据本发明是有效的-即它们为了治疗FSD，特别是FSAD可作为PcAMP起作用。
这些化合物包括式Ia的化合物(“Fla”)-即5-[4-(二乙基氨基)苄基]-1-甲基-3-丙基-6，7-二氢-1H-吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮。Fla可以根据EP-A-0911333(其实施例50)的教导制备。式II的化合物(“FII”)-即9-(1-乙酰基-4-苯基丁基)-2-[(3，4-二甲氧基苯基)甲基]-1，9-二氢-6H-嘌呤-6-酮。FII可以根据EP-A-0771799(其实施例100)的教导制备。式III的化合物(“FIII”)-即甲氰吡酮。FIII是可购得的产物。式IV的化合物(“FIV”)-即环戊苯吡酮。FIV是可购得的产物。式V的化合物(“FV”)-即环己烷羧酸3-[[[1-(2-羧基-4-戊烯基)环戊基]羰基]氨基]-，1-乙酯。FV可以根据EP-A-0274234(其实施例300)的教导制备。式VI的化合物(“FVI”)-即环己烷羧酸，3-[[[1-(2-羧基-4-戊烯基)环戊基]羰基]氨基]-。FVI可以根据EP-A-0274234(其实施例379)的教导制备。
特别地，Fla，FII，FIII和FIV是PDEcAMP抑制剂。Fla是IPDEI，FII是IPDEII，FIII是IPDEIII和FIV是IPDEIV。
这些化合物的数据在上文上面的实施例部分给出-例如参见表I。
显然，这些PDEcAMP抑制剂增强离体组织的VIP诱导的松弛作用。
FII-其是选择性IPDEII-在临床恰当剂量时增强阴道血流的增加。
FII在临床恰当剂量时也增强骨盆神经刺激的阴道血流的增加。
FV和FVI是NEP EC3.4.24.11.的选择性抑制剂。
前面实施例部分对FVI给出了数据。而且对于FV获得了相似的结果。
显然，FV和FVI在临床恰当剂量时增强VIP-诱导的阴道血流的增加。
FV和FVI在临床恰当剂量时也增强骨盆神经刺激的阴道血流的增加。
FV和FVI在临床恰当剂量时也增强离体组织的VIP-诱导的和神经-介导的松弛作用。
测试并且证明有效的另外的化合物包括2-[(1-{[(1-苄基-6-氧代-1，6-二氢-3-吡啶基)氨基]羰基}环戊基)甲基]-4-甲氧基丁酸(F57)2-{[1-({[3-(2-氧代-1-吡咯烷基)丙基]氨基}羰基环戊基]-甲基}-4-苯基丁酸(F58)(+)-2-{[1-({[2-(羟基甲基)-2，3-二氢-1H-茚-2-基]氨基}羰基)环戊基]-甲基}-4-苯基丁酸(F59)2-[(1-{[(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}环戊基)甲基]-4-苯基丁酸(F60)顺-3-(2-甲氧基乙氧基)-2-[(1-{[(4-{[(苯基磺酰基)氨基]羰基}环己基)氨基]羰基}环戊基)甲基]丙酸(F61)(+)-2-{[1-({[2-(羟基甲基)-2，3-二氢-1H-茚-2-基]氨基}羰基)环戊基]-甲基}戊酸(F62)(+)-2-[(1-{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}环戊基)甲基]戊酸(F63)2-({1-[(3-苄基苯胺基)羰基]环戊基}甲基)戊酸(F64)2-[(1-{[(1-苄基-6-氧代-1，6-二氢-3-吡啶基)氨基]羰基}环戊基)甲基]戊酸(F65)2-{[1-({[(1R，3S，4R)-4-(氨基羰基)-3-丁基环己基]氨基}羰基)环戊基]甲基}戊酸(F66)每一种化合物F57-66是INEP。化合物F57-66的合成下面的描述中，制备实施例是中间体的合成；而实施例是本发明各化合物的合成。实旋例12-[(1-{[(1-苄基-6-氧代-1，6-二氢-3-吡啶基)氨基]羰基}环戊基)甲基]-4-甲氧基丁酸(F57) 在30psi和室温下将40％乙醇水溶液(21ml)中的来自制备1的苄基酯(1/62)(850mg，1.64mmol)和5％披钯木炭(250mg)的混合物氢化30分钟。通过Hyflo过滤反应混合物，并且在减压下蒸发滤液。使用二氯甲烷∶甲醇(97∶3)为洗脱液通过在硅胶上进行柱层析来纯化残余的泡沫，得到为白色泡沫的标题化合物，550mg，79％；1H NMR(DMSO-d6，300MHz)d1.24-2.17(m，12H)，2.18-2.31(m，1H)，3.07(s，3H)，3.21(t，2H)，5.08(s，2H)，6.63(d，1H)，7.23-7.41(m，5H)，7.72(d，1H)，8.24(s，1H).分析实测值C，67.46；H，7.18；N，6.24.C2H30N2O5要求值C，67.58；H，7.09；N，6.57％.实施例22-{[1-({[3-(2-氧代-1-吡咯烷基)丙基]氨基}羰基环戊基]-甲基}-4-苯基丁酸(F58) 在60psi氢气压力下在室温下将乙醇∶水(90∶10体积比)(30ml)中的来自制备物3的苄基酯(3/67)(780mg，1.55mmol)和10％披钯木炭(100mg)的混合物氢化1.5小时。滤出催化剂，并且在减压下蒸发滤液，得到为白色泡沫的标题化合物，473mg，74％；1H NMR(CDCl3，300MHz)d1.26-1.77(m，10H)，1.78-2.46(m，11H)，2.49-2.70(m，2H)，2.95-3.36(m，4H)，6.92-7.38(m，5H)；分析实测值C，64.05；H，7.73；N，6.22.C24H34N2O4；0.75H2O要求值；C，65.88；H，7.83；N，6.40％.实施例3(+)-2-{[1-({[2-(羟基甲基)-2，3-二氢-1H-茚-2-基]氨基}羰基)环戊基]-甲基}-4-苯基丁酸(F59) 使用AD柱和使用己烷∶异丙醇∶三氟乙酸(70∶30∶0.2)为洗脱液，通过标准HPLC方法可以纯化2-{[1-({[2-(羟基甲基)-2，3-二氢-1H-茚-2-基]氨基}羰基)环戊基]-甲基}-4-苯基丁酸(WO9110644)，得到实施例3的标题化合物，99.5％ee；[α]D＝+9.1(c＝1.76，在乙醇中)。实施例42-[(1-{[(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}环戊基)甲基]-4-苯基丁酸(F60) 在60psi压力下将乙醇(20ml)中的来自制备物4的苄基酯(4/70)(187mg，0.39mmol)和10％披钯木炭(80mg)的混合物氢化18小时。Tlc分析表明残留起始物，因此又加入10％披钯木炭(100mg)，反应又继续5小时。Tlc分析表明还残留起始物，因此又加入催化剂(100mg)，继续氢化18小时。通过Arbocel过滤混合物，并且在减压下浓缩滤液，并且与二氯甲烷共沸。通过使用Biotage柱和使用二氯甲烷∶甲醇(95∶5)为洗脱液在硅胶上继续层析来纯化粗产物，得到为澄清油状物的标题化合物，80mg，53％；1H NMR(CDCl3，300MHz)d1.51-1.89(m，9H)，2.03(m，1H)，2.20(m，1H)，2.40(m，2H)，2.60(m，5H)，7.15-7.30(m，5H)；LRMSm/z387.8(MH+).实施例5顺-3-(2-甲氧基乙氧基)-2-[(1-{[(4-{[(苯基磺酰基)氨基]羰基}环己基)氨基]羰基}环戊基)甲基]丙酸(F61) 室温下将二氯甲烷(5ml)和三氟乙酸(5ml)中的来自制备物8的叔丁酯(8/66)(446mg，0.75mmol)的溶液搅拌18小时。减压下浓缩反应混合物，残余物先与二氯甲烷，然后与甲苯，最后与乙醚共沸，得到为白色泡沫的标题化合物，385mg，95％；1H NMR(CDCl3，400MHz)d1.48-2.17(m，18H)，2.40(s，1H)，2.66(s，1H)，3.37(s，3H)，3.50-3.70(m，6H)，3.94(s，1H)，6.10(d，1H)，6.59(s，1H)，7.55(t，2H)，7.61(m，1H)，8.02(d，2H)，9.11(s，1H)；分析测定值C，54.88；H，6.90；N，5.04.C26H38N2O8S；1.7H2O要求值C，57.97；H，7.11；N，5.20％.实施例6(+)-2-{[1-({[2-(羟基甲基)-2，3-二氢-1H-茚-2-基]氨基}羰基)环戊基]-甲基}戊酸(F62) 使用AD柱和使用己烷∶异丙醇∶三氟乙酸(90∶10∶0.1)为洗脱液，通过HPLC进一步纯化2-{[1-({[2-(羟基甲基)-2，3-二氢-1H-茚-2-基]氨基}羰基)环戊基]-甲基}戊酸(WO9110644)，得到实施例6的标题化合物，99％ee；[α]D＝+10.4(c＝0.067，乙醇)。实施例7(+)-2-[(1-{[(5-乙基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}环戊基)甲基]戊酸(F63) 使用AD柱和使用己烷∶异丙醇∶三氟乙酸(85∶15∶0.2)为洗脱液，通过HPLC进一步纯化得自制备物18的酸(18/ex4)(824mg)，得到为白色泡沫的实施例7的标题化合物，386mg，99％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ0.90(t，3H)，1.38(m，6H)，1.50-1.79(m，9H)，2.19(m，1H)，2.30(m，1H)，2.44(m，1H)，2.60(m，1H)， 2.98(q，2H)，12.10-12.27(bs，1H)；LRMSm/z338(MH)；和[α]D＝+3.8°(c＝0.1，甲醇)实施例82-({1-[(3-苄基苯胺基)羰基]环戊基}甲基)戊酸(F64) 在30psi和室温下将水(10ml)和乙醇(10ml)中的来自制备10的苄基酯(10/53)1.3mg，2.47mmol)和5％披钯木炭(130mg)的混合物氢化2小时。通过Arbocel过滤反应混合物，并且在减压下浓缩滤液。用二氯甲烷研磨残余物。残余胶状物先用乙醚研磨后用己烷研磨，并且在50℃下干燥，得到为固体的标题化合物，0.79g，81％；1HNMR(CDCl3，300MHz)d0.95(t，3H)，1.24-1.51(m，3H)，1.58-1.80(m，7H)，1.88(dd，1H)，2.15(m，2H)，2.24(m，1H)，2.48(m，1H)，4.00(s，2H)，6.98(d，1H)，7.24(m，6H)，7.40(m，3H)；分析实测值C，75.48；H，7.76；N，3.59.C25H31NO3；0.25H2O要求值C，75.44；H，7.98；N，3.51％.实施例92-[(1-{[(1-苄基-6-氧代-1，6-二氢-3-吡啶基)氨基]羰基}环戊基)甲基]戊酸(F65) 根据制备物19(19/ex21)中描述的类似的方法，从得自制备物13的苄基酯(13/56)得到为白色泡沫的标题化合物，产率51％，除了使用乙酸乙酯为洗脱液通过柱层析纯化产物；1H NMR(CDCl3，300MHz)d0.96(t，3H)，1.28-1.80(m，12H)，2.01(m，1H)，2.30-2.52(m，2H)，5.02(dd，2H)，6.60(d，1H)，7.27(m，5H)，7.70(s，1H)，8.34(s，1H)；分析实测值C，69.52；H，7.41；N，6.51.C24H30N2O4；0.25H2O要求值C，69.45；H，7.41；N，6.75.实施例102-{[1-({[(1R，3S，4R)-4-(氨基羰基)-3-丁基环己基]氨基}羰基)环戊基]甲基}戊酸(F66)根据制备物14(14/ex1)中描述的类似的方法，从相应的叔丁酯制备的式ic的化合物，即其中r1是丙基的通式i的化合物。 制备物1(1/62)2-[(1-{[(1-苄基-6-氧代-1，6-二氢-3-吡啶基)氨基]羰基}环戊基)甲基)-4-甲氧基丁酸苄酯 将草酰氯(0.26ml，3.0mmol)加入到冰冷却的1-{2-[(苄基氧基)羰基]-4-甲氧基丁基}环戊烷羧酸(EP274234)(1.0g，3.0mmol)和N，N-二甲基甲酰胺(2滴)的二氯甲烷(20ml)溶液中，该反应混合物在室温下搅拌2小时。将该溶液减压浓缩并且残余物与二氯甲烷(3×10ml)共沸。产物溶解于二氯甲烷(20ml)，然后在冰浴中冷却。加入得自制备物2的胺(2/28)(600m8，3mmol)和N-甲基吗啉(0.6ml，5.45mmol)，该反应在室温下搅拌18小时。该反应混合物在减压下浓缩，并且分配在水和乙醚之间。有机层用盐酸(2N)，碳酸氢钠溶液后用水洗涤，干燥(硫酸镁)并减压下蒸发。使用乙酸乙酯∶己烷(90∶10)为洗脱液，通过在硅胶上中等压力柱层析来纯化残留的绿色固体，得到标题化合物，880mg，57％；1H NMR(CDCl3，300MHz)d1.37-2.28(m，12H)，2.46-2.64(m，1H)，3.20(s，3H)，3.31(m，2H)，4.97(dd，2H)，5.08(dd，2H)，6.57(d，1H)，7.12(m，1H)，7.18-7.48(m，10H)，8.08(d，1H).制备物2(2/28)5-氨基-1-2(1H)-吡啶酮 将浓盐酸(14ml)中的1-苄基-5-硝基-1H-吡啶-2-酮(Justus LiebigsAnn.Chem.484；1930；52)(1.0g，4.35mmol)和锡颗粒(3.5g，29.5mmol)的混合物在90℃加热1.5小时。冷却的溶液用水稀释，用碳酸钠溶液中和，并且用乙酸乙酯(共250ml)萃取。过滤合并的有机萃取液，干燥(硫酸镁)，并且减压下蒸发，得到浅绿色固体标题化合物(随着时间变蓝)，440mg，51％；1H NMR(CDCl3，250MHz)δ4.12-4.47(bs，2H)，5.00(s，2H)，6.31(d，1H)，6.86(s，1H)，7.07(m，1H)，7.14-7.42(m，5H).制备物3(3/67)2-{[1-({[3-(2-氧代-1-吡咯烷基)丙基]氨基}羰基环戊基]-甲基}-4-苯基丁酸苄酯 室温下依次向冷却的无水二氯甲烷(15ml)中的1-{2-[(苄基氧基)羰基]-4-苯基丁基}环戊烷-羧酸(EP274234)(1.5g，3.94mmol)的溶液加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸化物(1.06g，5.53mmol)，1-羟基苯并三唑水合物(0.60g，4.44mmol)和4-甲基吗啉(0.56g，5.54mmol)，接着加入N-(3-氨基丙基)-2-吡咯烷酮(0.56g，3.94mmol)，该反应在室温下搅拌18小时。该混合物用水，2N盐酸，饱和碳酸氢钠水溶液洗涤后干燥(硫酸镁)并且减压下蒸发。通过使用乙酸乙酯∶戊烷(50∶50)为洗脱液在硅胶上进行柱层析来纯化残留的黄色油状物，得到澄清的胶状物的标题化合物，800mg，40％；1H NMR(CDCl3，300MHz)d1.37-2.20(m，16H)，2.34-2.58(m，5H)，2.92-3.46(m，6H)，5.07(d，1H)，5.18(d，1H)，6.98-7.47(m，10H).制备物4(4/70)2-[(1-{[(5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-基)氨基]羰基}环戊基)甲基]-4-苯基丁酸苄酯 根据制备物5(5/68)描述的类似的方法，从1-{2-[(苄基氧基)羰基]-4-苯基丁基}环戊烷-羧酸(EP274234)和2-氨基-5-甲基-1，3，4-噻二唑得到作为澄清的油状物的标题化合物，产率74％；1H NMR(CDCl3，400MHz)d1.58-1.76(m，7H)，1.83-1.98(m，3H)，2.03(m，1H)，2.20(m，1H)，2.35(m，1H)，2.44(m，3H)，2.65(s，3H)，5.02(dd，2H)，7.00(d，2H)，7.15(m，1H)，7.19(m，2H)，7.35(m，5H)；LRMSm/z 478.7(MH+).制备物5(5/68)2-{[1-({[3-(甲基氨基)-3-氧代丙基]氨基}羰基)环戊基]甲基}-4-苯基丁酸苄酯 室温下依次向冷却的N，N-二甲基甲酰胺(5ml)中的1-{2-[(苄基氧基)羰基]-4-苯基丁基}环戊烷-羧酸(EP274234)(202mg，0.53mmol)的溶液顺序加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸化物(122mg，0.64mmol)，1-羟基苯并三唑水合物(86mg，0.64mmol)和4-甲基吗啉(173μl，1.59mmol)，接着加入得自制备物6(6/23)的胺盐酸化物(146mg，1.06mmol)，该反应在90℃下搅拌18小时。减压下浓缩该冷却的溶液，残余物分配在水(20ml)和乙酸乙酯(100ml)之间。分离各层，有机相用水(3×30ml)，盐水(25ml)洗涤，干燥(硫酸镁)，并且减压下蒸发，得到澄清的油状物。通过使用二氯甲烷∶甲醇(98∶2)为洗脱液在硅胶上进行柱层析来纯化粗产物，得到无色油状物的标题化合物，162mg，67％；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.38-1.53(m，2H)，1.53-1.96(m，8H)，2.02(m，2H)，2.27(t，2H)，2.46(m，3H)，2.76(d，3H)，3.44(m，2H)，5.13(s，2H)，5.79(bs，1H)，6.38(m，1H)，7.06(d，2H)，7.18(m，1H)，7.22(m，2H)，7.38(m，5H)；LRMSm/z 465.5(MH+).制备物6(6/23)3-氨基-N-甲基丙酰胺盐酸化物 在50psi和室温下将乙醇(300ml)中的来自制备物7的氨基甲酸苄基酯(7/13)(7.92g，33.5mmol)和5％披钯木炭(800mg)的混合物氢化4小时。通过Arbocel过滤反应混合物，用乙醇洗涤，并且向合并的滤液加入1N盐酸(36.9ml，36.9mmol)。在减压下浓缩该溶液，残余物与二氯甲烷共沸，得到为无色泡沫的标题化合物，4.66g，1H NMR(DMSOd6，300MHz)δ2.46(t，2H)，2.60(s，3H)，2.95(m，2H)，7.98-8.16(m，2H).制备7(7/13)3-(甲基氨基)-3-氧代丙基氨基甲酸苄酯 室温下，将二氯甲烷(200ml)中的N-[(苄基氧基)羰基]-β-丙氨酸(10g，44.8mmol)，甲基胺盐酸化物(3.33g，49.28mmol)，1-羟基苯并三唑水合物(6.05g，44.8mmol)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸化物(10.3g，53.76mmol)和N-甲基吗啉(11.33ml，103mmol)的混合物搅拌18小时。过滤得到的沉淀物，得到无色泡沫的期望的产物，并且减压下蒸发滤液。使用乙酸乙酯∶己烷的洗脱梯度(90∶10至100∶0)，通过在硅胶上进行柱层析来纯化残余物，得到附加的产物7.96g，总产率75％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ2.42(t，2H)，2.80(s，3H)，3.50(m，2H)，5.21(s，2H)，5.49(bs，1H)，5.63(bs，1H)，7.36(m，5H)；分析实测值C，60.68；H，7.00；N，11.95.C12H16N2O3要求值C，61.00；H，6.83；N，11.86％.制备物8(8/66)顺-3-(2-甲氧基乙氧基)1-2-[(1-{[(4-{[(苯基磺酰基)氨基]羰基}环己基)氨基]羰基}环戊基)甲基]丙酸叔丁酯 向冰冷却的二氯甲烷(12ml)和N，N-二甲基甲酰胺(0.5ml)中的得自制备物9的酸(9/63)(400mg，0.878mmol)的溶液加入N，N’-二环己基碳化二亚胺(199.9mg，0.97mmol)，4-二甲基氨基吡啶(118mg，0.97mmol)和苯磺酰胺(152mg，0.97mmol)，该反应在室温下搅拌20小时。该混合物在减压下浓缩，并且残余物悬浮于冷的乙酸乙酯中。滤出得到的不溶活性剂，滤液用盐酸(1N)和水洗涤后干燥(硫酸镁)并减压下蒸发。使用二氯甲烷∶甲醇(95∶5至90∶10)的洗脱梯度，通过在硅胶上进行柱层析来纯化粗产物，得到白色泡沫状标题化合物，480mg，92％；1H NMR(CDCl3，400MHz)d1.44(s，9H)，1.63(m，13H)，1.80(m，2H)，1.88(m，1H)，1.98(m，2H)，2.36(m，1H)，2.57(m，1H)，3.38(s，3H)，3.40(m，1H)，3.51(t，2H)，3.58(m，3H)，3.95(m，1H)，5.92(d，1H)，7.56(m，2H)， 7.62(m，1H)，8.05(d，2H)，8.75(bs，1H)；LRMSm/z618(MNa+).制备物9(9/63)4-{[(1-{3-叔丁氧基-2-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]-3-氧代丙基}环戊基)羰基]氨基}环己烷羧酸 在50psi和室温下将水(10ml)和乙醇(50ml)中的4-{[(1-{3-叔丁氧基-2-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]-3-氧代丙基}环戊基)羰基]氨基}环己烷羧酸苄酯(EP274234)和10％披钯木炭(250mg)的混合物氢化18小时。通过Solkafloc过滤反应混合物，并且在减压下浓缩滤液。残余物先与甲苯(3×)再与二氯甲烷(3×)共沸，得到标题化合物，2.0g，96％；1H NMR(CDCl3，300MHz)d1.48(s，9H)，1.53-1.84(m，14H)，1.94-2.10(m，5H)，2.60(m，2H)，3.40(s，3H)，3.41-3.63(m，5H)，3.96(m，1H)，5.90(bd，1H).制备物10(10/53)根据制备物12(12/52)描述的类似的方法，从得自制备物11(11/3)的酰氯和适当的胺制备下面的化合物 其中 1＝使用二氯甲烷为柱洗脱液制备物11(11/3)2-{[1-(氯羰基)环戊基]甲基}戊酸苄酯 向冰冷却的1-{2-[(苄基氧基)羰基]戊基}环戊烷羧酸(EP274234)(2.0g，6.3mmol)的无水二氯甲烷(20ml)的溶液加入草酰氯(1.15ml，13.2mmol)，该溶液在室温下搅拌2小时。该反应混合物在减压下浓缩并且残余物与二氯甲烷(3×)共沸，得到金黄色油状物的标题化合物，2.1g；1H NMR(CDCl3，300MHz)d0.88(t，3H)，1.28(m，2H)，1.43(m，2H)，1.63(m，6H)，2.00(m，1H)，2.08-2.35(m，3H)，2.44(m，1H)，5.15(s，2H)，7.28(m，5H).制备物12(12/52)2-({1-[(3-吡啶基氨基)羰基]环戊基}甲基)戊酸苄酯
向二氯甲烷(3ml)中得自制备物11的酰氯(11/3)(200mg，0.60mmol)和2-氨基吡啶(61mg，0.65mmol)的混合物加入三乙胺(0.11ml，0.78mmol)，该反应在室温下搅拌16小时。该混合物在减压下蒸发，残余物分配在碳酸氢钠溶液(5ml)和乙酸乙酯(20ml)之间，分离各层。干燥有机相(硫酸镁)，并且减压下蒸发得到胶状物。使用乙酸乙酯为洗脱液通过在硅胶上进行柱层析纯化粗产物，得到标题化合物，130mg；1HNMR(CDCl3，400MHz)d0.82(t，3H)，1.21(m，3H)，1.40(m，1H)，1.43-1.72(m，6H)，1.81(d，1H)，1.98(m，1H)，2.18(m，1H)，2.24(m，1H)，2.46(m，1H)，4.98(m，2H)，7.20-7.38(m，6H)，7.42(s，1H)，8.06(d，1H)，8.35(d，1H)，8.56(s，1H).制备物13(13/56)根据制备物12(12/52)描述的类似的方法，从得自制备物11(11/3)的酰氯和适当的胺制备下面的化合物 其中 2＝使用N-甲基吗啉为碱。制备物14(14/ex1)2-({1-[(1，3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基氨基)羰基]环戊基}甲基)戊酸 向得自制备15(15/34)(130mg，0.31mmol)的叔丁酯的二氯甲烷(5ml)溶液加入三氟乙酸(5ml)，该溶液在室温下搅拌4小时。减压浓缩反应混合物，残余物与甲苯和二氯甲烷共沸，得到澄清油状物的标题化合物，112mg，1H NMR(CDCl3，400MHz)δ 0.83(t，3H)，1.22-1.40(m，3H)，1.50-1.72(m，8H)，1.95(m，1H)，2.10(m，2H)，2.19(m，1H)，4.30(m，2H)，5.93(s，2H)，5.99(bs，1H)，6.74(m，3H)；LRMSm/z 380(MH-).制备物15(15/34)根据制备物17(17/33)描述的类似的方法，从得自制备物16(16/1)的酸和适当的胺制备下面的化合物 其中 制备物16(16/1)1-[2-(叔丁氧羰基)-4-戊基]-环戊烷羧酸 在30psi和室温下将无水乙醇(200ml)中1-[2-(叔丁氧羰基)-4-戊烯基]-环戊烷羧酸(23g，81.5mmol)和10％披钯木炭(2g)的混合物氢化18小时。通过Arbocel过滤反应混合物，并且在减压下蒸发滤液得到黄色油状物。使用乙酸乙酯∶戊烷(40∶60)为洗脱液通过在硅胶上进行柱层析来纯化粗产物，得到为澄清油状物的期望的化合物，21g，91％；1H NMR(CDCl3，0.86(t，3H)，1.22-1.58(m，15H)，1.64(m，4H)，1.78(dd，1H)，2.00-2.18(m，3H)，2.24(m，1H)；LRMSm/z 283(M-H)-制备物17(17/33)2-{[1-({[1-(羟甲基)环戊基]氨基}羰基)-环戊基]甲基}戊酸叔丁酯 向N，N-二甲基甲酰胺(3ml)中来自制备物16(16/1)的酸(150mg，0.53mmol)的溶液加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸化物(41mg，0.21mmol)，1-羟基苯并三唑水合物(27mg，0.2mmol)，N-甲基吗啉(35μl，0.31mmol)和最后的1-氨基-1-环戊烷甲醇(25mg，0.22mmol)，该反应混合物在90℃下搅拌18小时。冷却的溶液用乙酸乙酯稀释(90ml)，用水(3×25ml)和盐水(25ml)洗涤后干燥(硫酸镁)并且在减压下蒸发。使用乙酸乙酯∶戊烷(30∶70)为洗脱液通过在硅胶上进行层析来纯化粗产物，得到标题化合物，38mg，57％；
1H NMR(CDCl3，400MHz)d0.88(t，3H)，1.29(m，3H)，1.41-1.78(m，26H)，1.78-1.98(m，4H)，2.04(m，1H)，2.26(m，1H)，3.59(dd，1H)，3.70(dd，1H)，4.80(t，1H)，5.81(s，1H)；LRMSm/z 380(MH-).制备物18(18/ex.4)根据制备物14(14/ex.1)描述的类似方法从相应的叔丁酯制备下面结构式的化合物。
3＝用乙醚重结晶制备物19(19/ex.21)2-({1-[(3-苄基苯胺基)羰基]环戊基}甲基)戊酸 在30psi和室温下将水(10ml)和乙醇(40ml)中来自制备10(10/53)的苄基酯(1.3mg，2.47mmol)和5％披钯木炭(130mg)的混合物氢化2小时。通过Arbocel过滤反应混合物，并且在减压下浓缩滤液，残余物用二氯甲烷研磨。残余胶状物用乙醚研磨后用己烷研磨，50℃下干燥，得到为固体的标题化合物，0.79g，81％；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ0.95(t，3H)，1.24-1.51(m，3H)，1.58-1.80(m，7H)，1.88(dd，1H)，2.15(m，2H)，2.24(m，1H)，2.48(m，1H)，4.00(s，2H)，6.98(d，1H)，7.24(m，6H)，7.40(m，3H)；分析实测值C，75.48；H，7.76；N，3.59.C25H31NO3；0.25H2O要求值C，75.44；H，7.98；N，3.51％.
ACE测定来自猪和人肾皮质的可溶性血管紧张肽转化酶(ACE)的制备和分析从肾皮质获得可溶性ACE活性并且通过测定ACE底物Abz-Gly-p-硝基-Phe-Pro-OH裂解产生其荧光产物Abz-Gly的速率进行分析。
1.材料所有的水都两次去离子化。
1.1人肾IIAM(Pennsylvania，U.S.A.)或UK Human Tissue Bank(UKHTB)1.2猪肾ACE Sigma(A2580)1.3匀浆缓冲液-1100mM甘露醇和20mM Tris@pH7.1在1升水中稀释2.42克Tris(FisherT/P630/60)，并且使用6M盐酸在室温下将pH调节到7.1。加入到18.22g甘露醇(SigmaM-9546)。
1.4匀浆缓冲液-2100mM甘露醇，20mM Tris@pH7.1和100mM MgCl2.6H2O(FisherM0600/53)向500毫升该匀浆缓冲液1(1.4)加入1.017g MgCl2。
1.5 Tris缓冲液(ACE缓冲液)50mM Tris和300mM NaCl@pH7.4由50ml 50mM Tris pH7.4(SigmaT2663)和17.52g NaCl(FisherS/3160/60)制备1000ml水溶液。
1.6底物(Abz-D-Gly-对-硝基Phe-Pro-OH)(BachemM-1100)ACE底物以粉末状在-20℃下保存。将该底物小心再悬浮于ACE缓冲液制备2mM贮存液，这不一定需要涡流或超声处理。400μl等份的2mM贮存液在-20℃下保存至多一个月。
1.7总产物相当于底物100％转化为产物的样品放置于平板上以测定底物转化率(见计算)。通过将1ml 2mM底物与20μl酶贮存液在37℃下温育产生总产物。
1.8终止溶液以1∶250在ACE缓冲液中稀释0.5M EDTA(Promega CAS[6081/92/6])制备2mM溶液。
1.9二甲亚砜(DMSO)。
1.10氯化镁-MgCl2.6H2O(FisherM0600/53)。
1.11 Black96孔平底测定板(Costar3915或Packard)。
1.12 TopsealA(Packard6005185)1.13离心管2.具体设备2.1 SorvallRC-5B离心机(SS34GSA转子，在-4℃预冷)。
2.2 Braun miniprimer混合器。
2.3 BeckmanCS-6R离心机。
2.4 BMG Fluostar Galaxy。
2.5 Wesbart1589摇床式培养箱。
3.方法3.1组织制备3.3采用Booth，A.G.&Kenny，A.J.(1974)生物化学杂志(Biochem.J.)142，575-581的改进方法从肾皮质获得人ACE。
3.3让冷冻的肾在室温下解冻并且从髓质切除皮质。
3.4将皮质切碎并且使用Braun miniprimer(2.2)在大约10体积的匀浆缓冲液-1(1.4)中匀浆。
3.5向匀浆中加入氯化镁(1.11)(20.3mg/mg组织)并且在冰水浴下搅拌15分钟。
3.6在Beckman离心机(2.3)上以1500g(3820rpm)将匀浆离心12分钟，然后将上清液移至新的离心管并弃除沉积物。
3.7在Sovall离心机(2.1)上以15000g(12100rpm)将上清液离心12分钟，弃除上清液。
3.8取出残留的沉积物的上部浅粉色层并再悬浮于匀浆缓冲液-2(1.5)中(对于每克组织用5ml缓冲液)。
3.9在Beckman离心机上以2200g(4630rpm)将悬浮液离心12分钟，然后弃除沉积物。
3.10在Soyall离心机上以15000g(12100rpm)将上清液离心12分钟，弃除上清液。
3.11最后的沉积物再悬浮于匀浆缓冲液-2中(对于每克组织用0.5ml缓冲液)。使用Braun miniprimer获得匀浆悬浮液。然后以100μl等份冷冻以备测定NEP活性。
4.0 ACE活性测定通过其裂解ACE特异性肽底物的能力测定预先分成等份的ACE的活性。
将猪ACE(1.2)解冻并且以O.004U/μl再悬浮于ACE缓冲液(1.6)，以50μl等份冷冻。
4.1制备4％DMSO/ACE缓冲液(94mlACE缓冲液中有4mlDMSO)。
4.2使底物(1.7)，总产物(1.8)和酶(1.1，1.2，1.3)置于冰上解冻。
4.3向各孔加入50μl4％DMSO/ACE缓冲液。
4.4以1∶100稀释2mM底物贮存液制备20μM溶液。向各孔加入100μl 20μM底物(测定中的终浓度是10μM)。
4.5加入一系列酶稀释液50μl来起始反应(通常使用1∶100，1∶200，1∶400，1∶800，1∶1600和1∶3200)。向空白孔加入50μlACE。4.6以1∶200稀释2mM总产物制备10μM溶液。向新板的头4个孔加入200μl10μM产物。
4.7在37℃下在摇床式培养箱中培养平板60分钟。
4.8通过加入100μl2mMEDTA的ACE缓冲液溶液终止酶反应并且在37℃下在摇床式培养箱中培养20分钟，然后在BMG Fluostar Galaxy(ex320/em420)上读数。
5.ACE抑制测定5.1底物，总产物和酶贮存液在冰上解冻。
5.2在100％DMSO中制备化合物贮存液并且以1∶25在ACE缓冲液中稀释，达到4％DMSO溶液。在4％DMSO/ACE缓冲液中进一步稀释(96mlACE缓冲液中有4mlDMSO)。
5.3 50μl化合物，双份，加入到96孔板中并且向对照和空白孔加入50μl4％DMSO/ACE缓冲液。
5.4手工或者使用Packard多探头自动机器进行步骤5.2和5.3。
5.5以1∶100在ACE缓冲液中稀释2mM底物贮存液来制备20μM溶液(测定中10μM终浓度)(对于一个平板向10.89ml缓冲液中加入110μl2mM底物就足够了)。
5.6在ACE缓冲液中稀释酶贮存液，根据活性检查确定(4.0)。
5.7以1∶200稀释在ACE缓冲液中2mM总产物贮存液制备10μM溶液。向另一个平板的头4个孔加入200μl。
5.8以1∶250稀释0.5mM贮存液来制备2mM贮存液(44μlEDTA对10.96mlACE缓冲液)。
5.9向96孔平板的每个孔加入下面的试剂表1向96孔平板加入的试剂
5.10以双份试验向相同的96孔板加入测定中使用的最高浓度的各化合物50μl，和5.7一样。加入150μl ACE缓冲液测定所有化合物荧光。
5.11加入ACE酶起始反应，然后在37℃学摇床式培养箱中温育。
5.12通过加入100μl2mM EDTA终止反应并且在37℃下在摇床式培养箱中培养20分钟，然后在BMG Fluostar Galaxy(ex320/em420)上读数。
6.计算在有和没有化合物存在下测定ACE酶的活性并且以百分比表示。
FU＝荧光单位(i)％对照活性(酶的周转)(对照的平均FU-空白的平均FU)/(总的平均FU-空白的平均FU)×100(ii)％有抑制剂的活性(化合物的平均FU-空白的平均FU)/(总的平均FU-空白的平均FU)×100(iii)以对照的％表示的活性％有抑制剂的活性/％对照活性×100或者(化合物的平均FU-空白的平均FU)/(对照平均FU-空白的平均FU)×100
(iV)抑制％＝100-对照％(v)对于荧光化合物，从用来计算％活性的化合物的平均FU值推导出含有化合物(5.10)的空白的平均FU。
以％活性(对照的百分比)对化合物浓度画出S形剂量-反应曲线并且使用Excel中的LabStats符合曲线计算IC50值。
结论我们开发出了一种动物模型，其反映雌性性唤起时观察到的生理唤起反应并且直接反映在人类志愿者中获得的临床数据。该模型使用激光Doppler技术记录骨盆神经刺激或者血管活性神经递质诱导的阴道和阴蒂血流量的小的变化。在性唤起期间，由骨盆神经增加的神经支配产生生殖器血流量增大。动物模型中观察到的骨盆神经刺激的阴道和阴蒂血流量增大代表雌性性唤起时观察的内源血管效果-即充血。因此，该模型可以首先用来鉴定阴道和阴蒂血流量调节中涉及的机理，其次，确认增大生殖器血流量的新的途径。
该项研究成功地使用在体内，体外与生物化学技术的结合来证明VIP介导生殖器血流量并且鉴定cAMP是调节生殖器血管舒张(和阴道壁松弛)的介体/第二信使。使用该动物模型，我们证明了输入VIP诱导阴道和阴蒂血流量增大。使用VIP代谢的抑制剂(例如NEP EC3.4.24.11抑制剂)，我们还证明VIP介导骨盆神经刺激(即性唤起)时观察到的生殖器血流量增大。我们证明VIP介导的生殖器血流量增大是由于组织cAMP增多引起的，而先前证明VIP表现出增大健康志愿者的阴道血流量但是没有鉴定细胞学机理。另外，我们证明cAMP模拟物可以直接或者通过用2型PDEcAMP抑制剂或NPY Y1受体拮抗剂增大cAMP浓度间接增大生殖器血流量。
FSAD的主要原因是降低的生殖器血流量并且这本身表现出阴道，阴唇和阴蒂充血的减少。通过恢复正常性唤起反应实现对FSAD妇女的治疗。这可以通过增大生殖器血流量来实现。我们治疗FSAD的途径是例如使用NEP(EC3.4.24.11)抑制剂，cAMP水解PDE抑制剂或NPY受体拮抗剂直接或间接增效内源cAMP信号传输来增大生殖器血流量从而增加阴道充血/润滑和阴蒂充血/敏感性。这将具有恢复或增强正常性刺激反应的总的效果并且没有心血管副作用。性唤起/充血将被增强，而不是在没有性驱力时简单诱导，其可以是外源施用血管活性剂例如VIP的情况。
总之，本发明特别涉及用于(或在使用时)治疗FSD，优选FSAD的药物组合物；该药物组合物含有能增效患有FSD，优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP的活性剂；其中该活性剂任选地与药学可接受载体，稀释剂或赋形剂混合。
一种活性剂在制备用于治疗FSD，优选FSAD的药物中的用途；其中该活性剂能增加患有FSD，优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP。
一种治疗雌性(例如患有FSD，优选FSAD的雌性)的方法；该方法包括对雌性施用能增效性生殖器中cAMP的活性剂；其中该活性剂的量是引起雌性性生殖器中cAMP增效的量；其中该活性剂任选地与药学可接受载体，稀释剂或赋形剂混合。
在高度优选的实施方案中，本发明特别涉及用于(或在使用时)治疗FSD，优选FSAD的药物组合物；该药物组合物含有能增效患有FSD，优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP的活性剂；其中活性剂剂任选地与药学可接受载体，稀释剂或赋形剂混合；其中所述药剂口服给药。
一种活性剂在制备用于治疗FSD，优选FSAD的药物中的用途；该活性剂能增效患有FSD，优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP；其中该药剂口服给药。
一种治疗雌性(例如患有FSD，优选FSAD的雌性)的方法；该方法包括对雌性施用能增效性生殖器中cAMP的活性剂；其中该活性剂的量是引起雌性性生殖器中cAMP增效的量；其中该活性剂任选地与药学可接受载体，稀释剂或赋形剂混合；其中该药剂口服给药。
在另外高度优选的实施方案中，本发明特别涉及用于(或在使用时)治疗FSD，优选FSAD的药物组合物；该药物组合物含有能增效患有FSD，优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP的活性剂；其中活性剂剂任选地与药学可接受载体，稀释剂或赋形剂混合；其中所述活性剂增效内源cAMP。
一种活性剂在制备用于治疗FSD，优选FSAD的药物中的用途；该活性剂能增效患有FSD，优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP；其中该活性剂增效内源cAMP。一种治疗雌性(例如患有FSD，优选FSAD的雌性)的方法；该方法包括对雌性施用能增效性生殖器中cAMP的活性剂；其中该活性剂的量是引起雌性性生殖器中cAMP增效的量；其中该活性剂任选地与药学可接受载体，稀释剂或赋形剂混合；其中该药剂增效内源cAMP。
在进一步高度优选的实施方案中，本发明特别涉及用于(或在使用时)治疗FSD，优选FSAD的药物组合物；该药物组合物含有能增效患有FSD，优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP的活性剂；其中该活性剂任选地与药学可接受载体，稀释剂或赋形剂混合；其中所述药剂口服给药并且其中所述药剂增效内源cAMP。
一种活性剂在制备用于治疗FSD，优选FSAD的药物中的用途；该活性剂能增效患有FSD，优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP；其中该药剂口服给药并且其中所述活性剂增效内源cAMP。
一种治疗雌性(例如患有FSD，优选FSAD的雌性)的方法；该方法包括对雌性施用能增效性生殖器中cAMP的活性剂；其中该活性剂的量是引起雌性性生殖器中cAMP增效的量；其中该活性剂任选地与药学可接受载体，稀释剂或赋形剂混合；其中该活性剂口服给药并且其中所述药剂增效内源cAMP。
上面说明书中提到的所有公开出版物在这里引作参考。描述的方法和本发明系统的各种修饰和变化对于本领域技术人员来说是显而易见却不超出本发明的精神和范围。尽管本发明参照具体优选的实施方案进行了描述，但是应该理解本发明所要求保护的不受到这些具体实施方案的限制。事实上，为实施本发明而对描述的模式的各种变化对于生物化学和生物技术或相关领域的技术人员是显而易见的并且在下面权利要求书的范围内。
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gene to 6126-q27 regionby spot blot hybridization and in situ hybridization).国际生物化学研究(Biochem.Int.)17555-562，1988.3.Gozes，I.；Avidor，R.；Yahav，Y.；Katznelson，D.；Croce，C.M.；Huebner，K.血管活性肠肽编码基因位于人染色体6p21-6qter(The geneencoding vasoactive intestinal peptide is located on human chromosome6p21-6qter).人类遗传学(Hum.Genet.)7541-44，1987.4.Gozes，I.；Nakai，H.；Byers，M.；Avidor，R.；Weinstein，Y.；Shani，Y.；Shows，T.B.位于人染色体区6q24的C-MYB和VIP基因在神经系统中的序列表达(Sequential expression in the nervous system of C-MYB andVIP genes，located in～human chromosomal region 6q24).Somat.CellMolec.Genet.13305-313，1987.5.Heinz-Erian，P.；Dey，R.D.；Flux，M.；Said，S.I.囊纤维化患者的汗腺缺陷型血管活性肠肽神经支配(Deficient vasoactive intestinalpeptide innervation in sweat glands of cystic fibrosis patients).Science 2291407-1408，1985.6.ltoh，N.；Obata，K.；Yanaihara，N.；Okamoto，H.人前血管活性肠肽原包含新的类PHI-27肽，PHM-27(Human preprovasoactive intestinalpolypeptide contains a novel PHI-27-like peptide，PHM-27).Nature 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2.Hashimoto，H.；Nishino，A.；Shintani，N.；Hagihara，N.；Copeland，N.G.；Jenkins，N.A.；Yamamoto，K.；Matsuda，T.；Ishihara，T.；Nagata，S.；Baba，A.小鼠血管活性肠肽1(VPAC-1)受体的基因组组构和染色体定位(Genomic organization and chromosomal location of the mousevasoactive intestinal polypeptide 1(VPAC-1)receptor).Genomics 5890-93，1999.3.Libert，F.；Passage，E.；Parmentier，M.；Simons1 M.-J.；Vassart，G.；Mattel，M.-G.A1和A2腺苷受体，VIP受体和血清素受体新的亚型的染色体谱图(Chromosomal mapping of A1 and A2 adenosine receptors，VIPreceptor，and a new subtype of serotonin receptor).Genomics 11225-227，1991.4.Sreedharan，S.P.；Huang，J.-X.；Cheung，M.-C.；Goetzl，E.J.I型人血管活性肠肽受体基因的结构，表达和染色体定位(Structure，expression，and chromosomal localization of the type I humanvasoactive intestinal peptide receptor gene.)，Proc.Nat.Acad.Sci.922939-2943，1995.5.Sreedharan，S.P.；Patel，D.R.；Huang，J.-X.；Goetzl，E.J.人神经内分泌血管活性肠肽受体的克隆和功能表达(Cloning and functionalexpression of a human neuroendocrine vasoactive intestinal peptidereceptor)。生物化学生物物理研究通讯(Bioch em.Biophys.Res.Commun.)，193546-553，1993.6.Sreedharan，S.P.；Robichon，A.；Peterson，K.E.；Goetzl，E.J.人血管活性肠肽受体的克隆和表达(Cloning and expression of the humanvasoactive intestinal peptide receptor).国家科学院院刊(Proc.Nat.Acad.Sci.)884986-4990，1991.7.Vassart，G.Personal Communication；Brussels，Belgium，1/1511992.8.Wenger，G.D.Personal Communication.Columbus，Ohio，8/3/1993.关于VPAC2部分的参考文献1.Adamou，J.E.；Aiyar，N.；Van Horn，S.；Elshourbagy，N.A.人血管活性肠肽(VIP)-2受体的克隆和功能表达(Cloning and functionalcharacterization of the human vasoactive intestinal peptide(VIP)-2receptor).生物化学生物物理研究通讯(Bioehem.Biophys.Res.Commmun).209385-392，1995.2.Mackay，M.；Fantes，J.；Scherer，S.；Boyle，S.；West，K.；Tsui，L.-C.；Belloni，E.；Lutz，E.；Van Heyningen，V.；Harmar，A.J.小鼠和人血管活性肠肽2型基因的染色体定位前脑无裂畸型3表型可能的起作用基因(Chromosomal localization in mouse and human of the vasoactiveintestinal peptide receptor type 2 genea possible contributor tothe holoprosencephaly 3 phenotype).Genomics 37345-353，1996.3.Svoboda，M.；Tastenoy，M.；Van Rampelbergh1 J.；Goossens，J.-F.；De Neef，P.；Waelbroeck，M.；Robberecht，P.来自SUP-Ti淋巴母细胞的人VIP受体的分子克隆和功能表征(Molecular cloning and functionalcharacterization ofa human VIP receptor from SUP-Ti lymphoblasts).生物化学生物物理研究通讯(Biochem.Biophy.Res.Commun.)2051617-1624，1994.缩与FSD ＝雌性性功能障碍FSAD＝雌性性唤起失调cAMP＝环腺苷-3’，5’-单磷酸cGMP＝环鸟苷-3’，5’-单磷酸PcAMP＝cAMP的增效剂PcGMP＝cGMP的增效剂AcAMP＝cAMP的激活剂AcGMP＝cGMP的激活剂AMcAMP＝cAMP的反向调节剂AMcGMP＝cGMP的反向调节剂IcAMP＝cAMP的抑制剂IcGMP＝cGMP的抑制剂IIcAMP＝cAMP的抑制剂的抑制剂lIcGMP＝cGMP的抑制剂的抑制剂IAMcAMP＝cAMP的反向调节剂的抑制剂lAMcGMP＝cGMP的反向调节剂的抑制剂UAcAMP＝cAMP的激活剂的正调节物UAcGMP＝CGMP的激活剂的正调节物AC ＝腺苷酸环化酶AAC ＝AC的激活剂NEP ＝中性内肽酶INEP ＝NEP的抑制剂VIP ＝血管活性肠肽VIPr＝VIP的受体(可以表达为VIPR)VlPn＝VIP的受体亚型(例如VI PR1，VIPR2)AVIPr ＝VIPr的激活剂AVIPn＝VlPn的激活剂1VIPr ＝VIPr的抑制剂IVlPr＝VIPn的抑制剂lIVIPr ＝VIPr的抑制剂的抑制剂IlVIPn＝VIPn的抑制剂的抑制剂PDE＝磷酸二酯酶PDEn ＝PDE家族(例如PDE1，PDE2等)PDEcAGP＝cAMP水解PDEPDEcGMP＝cGMP水解PDEIPDEcAMP＝cAMP水解PDE的抑制剂lPDEcGMP＝cAMP水解PDE家族的抑制剂NPY＝神经肽YNPYr ＝NPY的受体(可以表达为NPYR)NPY Yn＝NPY的Yn受体亚型(例如NPY Y1)(例如NPYR1)INPY ＝NPY的抑制剂lNPY Yn＝NPY Yn的抑制剂lNPYn＝NPY Yn的抑制剂kDa＝千道尔顿bp ＝碱基对kb ＝千碱基对序列表1.NEP(EC3.4.24.11)基因座 HSMRNAEN3181bp mRNA PRI12-SEP-1993定义 人脑啡肽酶mRNA(EC3.4.24.11).登记号 X07166NIDg34757译本 X07166.1 GI34757关键词 脑啡肽酶；金属蛋白质；神经内肽酶来源 人生物体 Homo sapiensEukaryota；Metazoa；Chordata；Vertebrata；Mammalia；Eutheria；Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.参比 1(bases 1 to 3181)作者 Malfroy，B.，Kuang，W.J.，Seeburg，P.H.，Mason，A.J.and Schofield，P.R.
题目 人脑啡肽酶(神经内肽酶)的分子克隆和氨基酸序列杂志 FEBS Lett，229(1)，206-210(1988)MEDLINE 88152222特征 Location/Qualifiers来源 1..3181/生物体＝″Homo sapiens″/db xref＝″taxon9606″/组织型＝placenta″/克隆文库＝″lambda gt10″/克隆＝″lambda H7″CDS18..2249/note＝″脑啡肽酶(AA 1-743)″/密码起始＝1/蛋白质号＝″CAA30157.1″/db_xref＝″PIDg34758″/db xref＝″GI34758″/db_xref＝″SWISS-PROTP08473″/翻译 ＝″MDITDINTPKPKKKQRWTPLEISLSVLVLLLTIIAVTMIALYATYDDGICKSSDCIKSAARLIQNMDATTEPCTDFFKYACGGWLKRNVIPETSSRYGNFDILRDELEVVLKDVLQEPKTEDIVAVQKAKALYRSCINESAIDSRGGEPLLKLLPDIYGWPVATENWEQKYGASWTAEKAIAQLNSKYGKKVLINLFVGTDDKNSVNHVIHIDQPRLGLPSRDYYECTGIYKEACTAYVDFMISVARLIRQEERLPIDENQLALEMNKVMELEKEIANATAKPEDRNDPMLLYNKMTLAQIQNNFSLEINGKPFSWLNFTNEIMSTVNISITNEEDVVVYAPEYLTKLKPILTKYSARDLQNLMSWRFIMDLVSSLSRTYKESRNAFRKALYGTTSETATWRRCANYVNGNMENAVGRLYVEAAFAGESKHVVEDLIAQIREVFIQTLDDLTWMDAETKKRAEEKALAIKERIGYPDDIVSNDNKLNNEYLELNYKEDEYFENIIQNLKFSQSKQLKKLREKVDKDEWISGAAVVNAFYSSGRNQIVFPAGILQPPFFSAQQSNSLNYGGIGMVIGHEITHGFDDNGRNFNEIGDLVDWWTQQSASNFKEQSQCMVYQYGNFSWDLAGGQHLNGINTLGENIADNGGLGQAYRAYQNYIKKNGEEKLLPGLDLNHKQLFFLNFAQVWCGTYRPEYAVNSIKTDVHSPGNFRIIGTLQNSAEFSEAFHCRKNSYMNPEKKCRVW″misc_feature 3073..3078/note＝″poly A信号″碱基数 1055a582c657g 887t来源1 gcaagtcaga aagtcagatg gatataactg atatcaacac tccaaagcca aagaagaaac61 agcgatggac tccactggag atcagcctct cggtccttgt cctgctcctc accatcatag121 ctgtgacaat gatcgcactc tatgcaacct acgatgatgg tatttgcaag tcatcagact181 gcataaaatc agctgctcga ctgatccaaa acatggatgc caccactgag ccttgtacag
241 actttttcaa atatgcttgc ggaggctggt tgaaacgtaa tgtcattccc gagaccagct301 cccgttacgg caactttgac attttaagag atgaactaga agtcgttttg aaagatgtcc361 ttcaagaacc caaaactgaa gatatagtag cagtgcagaa agcaaaagca ttgtacaggt421 cttgtataaa tgaatctgct attgatagca gaggtggaga acctctactc aaactgttac481 cagacatata tgggtggcca gtagcaacag aaaactggga gcaaaaatat ggtgcttctt541 ggacagctga aaaagctatt gcacaactga attctaaata tgggaaaaaa gtccttatta601 atttgtttgt tggcactgat gataagaatt ctgtgaatca tgtaattcat attgaccaac661 ctcgacttgg cctcccttct agagattact atgaatgcac tggaatctat aaagaggctt721 gtacagcata tgtggatttt atgatttctg tggccagatt gattcgtcag gaagaaagat781 tgcccatcga tgaaaaccag cttgctttgg aaatgaataa agttatggaa ttggaaaaag841 aaattgccaa tgctacggct aaacctgaag atcgaaatga tccaatgctt ctgtataaca901 agatgacatt ggcccagatc caaaataact tttcactaga gatcaatggg aagccattca961 gctggttgaa tttcacaaat gaaatcatgt caactgtgaa tattagtatt acaaatgagg1021 aagatgtggt tgtttatgct ccagaatatt taaccaaact taagcccatt cttaccaaat1081 attctgccag agatcttcaa 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gttattcatt ctgtgatcat2821 ttattttaag cactcttaaa gcaaaaaatg aatgtctaaa attgtttttt gttgtacctg2881 ctttgactga tgctgagatt cttcaggctt cctgcaattt tctaagcaat ttcttgctct2941 atctctcaaa acttggtatt tttcagagat ttacataaat gtaaaaataa taatttttat3001 atttaattat taactacatt tatgagtaac tattattata ggtaatcaat gaatattgaa3061 gtttcagctt aaaataaaca gttgtgaacc aagatctata aagcgatata cagatgaaaa3121 tttgagacta tttaaactta taaatcatat tgatgaaaag atttaagcac aaactttagg3181 g2.PDE 1型基因座 HSPDE1A3A2008bpmRNA PRI12-APR-1996定义 人3′，5′环核苷酸磷酸二酯酶(HSPDE1A3A)mRNA，完全的cds.登记号 U40370NID g1151108译本 U40370.1 GI1151108关键词钙调蛋白刺激的磷酸二酯酶来源 人生物体 Homo sapiensEukaryota；Metazoa；Chordata；Craniata；Vertebrata；Mammalia；Eutheria；Primates；Catarrhini；Homnidae；Homo.参比 1(bases 1 to 2008)作者Loughney，K.，Martins，T.J.，Harris，E.A.，Sadhu，K.，Hicks，J.B.，Sonnenburg，W.K.，Beavo，J.A.和Ferguson，K.题目与两种人体调节钙，钙调蛋白，3‘，5‘-环核苷酸磷酸二酯酶对应的cDNA的分离和表征杂志J.Biol.Chem.271(2)，796-806(1996)MEDLINE 96132810参比 2(bases 1 to 2008)作者Loughney，K.，Martins，T.J.，Harris，E.A.S.，Sadhu，K.，Hicks，J.B.，Sonnenburg，W.K.，Beavo，J.A.和Ferguson，K.题目Direct Submission杂志Submitted(07-NOV-1995)Kate Loughney，ICOS，22021 20th Ave.S.E.，Bothell，WA 98021，USA特征 Location/Qualifiers来源 1..2008/生物体＝″Homo sapiens″/db xref＝″taxon9606″基因 85..1692/基因＝″PDE1A″CDS85..1692/基因＝″PDE1A″/note＝″PDE1A3；I型磷酸二酯酶″/编码起始＝1/产物＝″3’，5’-环核苷酸磷酸二酯酶″/蛋白质号＝″AAC50436.1″/db_xref＝″PIDg1151109″/db_xref＝″GI1151109″/翻译 ＝″MGSSATEIEELENTTFKYLTGEQTEKMWQRLKGILRCLVKQLERGDVNVVDLKKNIEYAASVLEAVYIDETRRLLDTEDELSDIQTDSVPSEVRDWLASTFTRKMGMTKKKPEEKPKFRSIVHAVQAGIFVERMYRKTYHMVGLAYPAAVIVTLKDVDKWSFDVFALNFASGEHSLKFMIYELFTRYDLINRFKIPVSCLITFAEALEVGYSKYKNPYHNLIHAADVTQTVHYIMLHTGIMHWLTELEILAMVFAAAIHDYEHTGTTNNFHIQTRSDVAILYNDRSVLENHHVSAAYRLMQEEEMNILINLSKDDWRDLRNLVIEMVLSTDMSGHFQQIKNIRNSLQQPEGIDRAKTMSLILHAADISHPAKSWKLHYRWTMALMEEFFLQGDKEAELGLPFSPLCDRKSTMVAQSQIGFIDFIVEPTFSLLTDSTEKIVIPLIEEASKAETSSYVASSSTTIVGLHIADALRRSNTKGSMSDGSYSPDYSLAAVDLKSFKNNLVDIIQQNKERWKELAAQEARTSSQKCEFIHQ″碱基数627a 400c 437g544t来源1 gaattctgat gtgcttcagt gcacagaaca gtaacagatg agctgctttt ggggagagct61 tgagtactca gtcggagcat catcatgggg tctagtgcca cagagattga agaattggaa121 aacaccactt ttaagtatct tacaggagaa cagactgaaa aaatgtggca gcgcctgaaa181 ggaatactaa gatgcttggt gaagcagctg gaaagaggtg atgttaacgt cgtcgactta241 aagaagaata ttgaatatgc ggcatctgtg ctggaagcag tttatatcga tgaaacaaga301 agacttctgg atactgaaga tgagctcagt gacattcaga ctgactcagt cccatctgaa361 gtccgggact ggttggcttc tacctttaca cggaaaatgg ggatgacaaa aaagaaacct421 gaggaaaaac caaaatttcg gagcattgtg catgctgttc aagctggaat ttttgtggaa481 agaatgtacc gaaaaacata tcatatggtt ggtttggcat atccagcagc tgtcatcgta541 acattaaagg atgttgataa atggtctttc gatgtatttg ccctaaatga agcaagtgga601 gagcatagtc tgaagtttat gatttatgaa ctgtttacca gatatgatct tatcaaccgt661 ttcaagattc ctgtttcttg cctaatcacc tttgcagaag ctttagaagt tggttacagc721 aagtacaaaa atccatatca caatttgatt catgcagctg atgtcactca aactgtgcat781 tacataatgc ttcatacagg tatcatgcac tggctcactg aactggaaat tttagcaatg841 gtctttgctg ctgccattca tgattatgag catacaggga caacaaacaa ctttcacatt901 cagacaaggt cagatgttgc cattttgtat aatgatcgct ctgtccttga gaatcaccac961 gtgagtgcag cttatcgact tatgcaagaa gaagaaatga atatcttgat aaatttatcc1021 aaagatgact ggagggatct tcggaaccta gtgattgaaa tggttttatc tacagacatg1081 tcaggtcact tccagcaaat taaaaatata agaaacagtt tgcagcagcc tgaagggatt1141 gacagagcca aaaccatgtc cctgattctc cacgcagcag acatcagcca cccagccaaa1201 tcctggaagc tgcattatcg gtggaccatg gccctaatgg aggagttttt cctgcaggga1261 gataaagaag ctgaattagg gcttccattt tccccacttt gtgatcggaa gtcaaccatg1321 gtggcccagt cacaaatagg tttcatcgat ttcatagtag agccaacatt ttctcttctg1381 acagactcaa cagagaaaat tgttattcct cttatagagg aagcctcaaa agccgaaact1441 tcttcctatg tggcaagcag ctcaaccacc attgtggggt tacacattgc tgatgcacta1501 agacgatcaa atacaaaagg ctccatgagt gatgggtcct attccccaga ctactccctt1561 gcagcagtgg acctgaagag tttcaagaac aacctggtgg acatcattca gcagaacaaa1621 gagaggtgga aagagttagc tgcacaagaa gcaagaacca gttcacagaa gtgtgagttt1681 attcatcagt aaacaccttt aagtaaaacc tcgtgcatgg tggcagctct aatttgacca1741 aaagacttgg agattttgat tatgcttgct ggaaatctac cctgtcctgt gtgagacagg1801 aaatctattt ttgcagattg ctcaataagc atcatgagcc acataaataa cagctgtaaa1861 ctccttaatt caccgggctc aactgctacc gaacagattc atctagtggc tacatcagca1921 ccttgtgctt tcagatatct gtttcaatgg cattttgtgg catttgtctt taccgagtgc1981 caataaattt tctttgagca aaaaaaaa3.PDE 2型基因座HSU677334240bp mRNA PRI21-MAY-1997定义 人cGMP-刺激的3‘，5’-环核苷酸磷酸二酯酶PDE2A3(PDE2A)mRNA，完全的cds登记号U67733NID g2108051译本 U67733.1 GI2108051关键词.来源 人生物体 Homo sapiensEukaryota；Metazoa；Chordata；Craniata；Vertebrata；Mammalia；Eutheria；Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.参比 1(bases 1 to 4240)作者 Rosman，G.J.，Martins，T.J.，Sonnenburg，W.K.，Beavo，J.A.，Ferguson，K.
and Loughney，K.题目 编码cGMP-刺激的3‘，5’-环核苷酸磷酸二酯酶的人cDNA的分离和表征杂志 Gene 191(1)，89-95(1997)MEDLINE 97354299参比2(bases 1 to 4240)作者 Rosman，G.J.，Martins，T.J.，Sonnenburg，W.K.，Beavo，J.A.，Ferguson，K.
and Loughney，K.题目 Direct Submission杂志 Submitted(21-AUG-1996)Icos Corporation，22021 20th Ave.S.E.，Bothell，WA 98021，USA特征 Location/Qualifiers来源1..4240/生物体＝″Homo sapiens″/db_xref＝″taxon9606″基因162..2987/基因＝″PDE2A″CDS 162..2987/基因＝″PDE2A″/功能＝″cGMP-刺激的3’，5’-环核苷酸磷酸二酯酶″/note＝″PDE2家族；剪接变体3″/编码起始＝1/产物＝″PDE2A3″/蛋白质号＝″AAC51320.1″/db_xref＝″PIDg2108052″/db_xref＝″GI2108052″/翻译 ＝″MGQACGHSILCRSQQYPAARPAEPRGQQVFLKPDEPPPPPQPCADSLQDALLSLGSVIDISGLQRAVKEALSAVLPRVETVYTYLLDGESQLVCEDPPHELPQEGKVREAIISQKRLGCNGLGFSDLPGKPLARLVAPLAPDTQVLVMPLADKEAGAVAAVILVHCGQLSDNEEWSLQAVEKHTLVALRRVQVLQQRGPREAPPAVQNPPEGTAEDQKGGAAYTDRDRKILQLCGELYDLDASSLQLKVLQYLQQETRASRCCLLLVSEDNLQLSCKVIGDKVLGEEVSFPLTGCLGQVVEDKKSIQLKDLTSEDVQQLQSMLGCELQAMLCVPVISRATDQVVALACAFNKLEGDLFTDEDEHVIQHCFHYTSTVLTSTLAFQKEQKLKCECQALLQVAKNLFTHLDDVSVLLQEIITEARNLSNAEICSVFLLDQNELVAKVFDGGVVDDESYEIRIPADQGIAGHVATTGQILNIPDAYAHPLFYRGVDDSTGFRTRNILCFPIKNENQEVIGVAELVNKINGPWFSKFDEDLATAFSIYCGISIAHSLLYKKVNEAQYRSHLANEMMMYHMKVSDDEYTKLLHDGIQPVAAIDSNFASFTYTPRSLPEDDTSMAILSMLQDMNFINNYKIDCPTLARFCLMVKKGYRDPPYHNWMHAFSVSHFCYLLYKNLELTNYLEDIEIFALFISCMCHDLDHRGTNNSFQVASKSVLAALYSSEGSVMERHHFAQAIAILNT
HGCNIFDHFSRKDYQRMLDLMRDIILATDLAHHLRIFKDLQKMAEVGYDRNNKQHHRLLLCLLMTSCDLSDQTKGWKTTRKIAELIYKEFFSQGDLEKAMGNRPMEMMDREKAYIPELQISFMEHIAMPIYKLLQDLFPKAAELYERVASNREHWTKVSHKFTIRGLPSNNSLDFLDEEYEVPDLDGTRAPINGCCSLDAE″碱基数902a 1260c 1202g 876t来源1 cagcagagct ggattggggt gttgagtcca ggctgagtag ggggcagccc actgctcttg61 gtccctgtgc ctgctggggg tgccctgccc tgaactccag gcagcgggga cagggcgagg121 tgccacctta gtctggctgg ggaggcggac gatgaggagt gatggggcag gcatgcggcc181 actccatcct ctgcaggagc cagcagtacc cggcagcgcg accggctgag ccgcggggcc241 agcaggtctt cctcaagccg gacgagccgc cgccgccgcc gcagccatgc gccgacagcc301 tgcaggacgc cttgctgagt ctgggctctg tcatcgacat ttcaggcctg caacgtgctg361 tcaaggaggc cctgtcagct gtgctccccc gagtggaaac tgtctacacc tacctactgg421 atggtgagtc ccagctggtg tgtgaggacc ccccacatga gctgccccag gaggggaaag481 tccgggaggc tatcatctcc cagaagcggc tgggctgcaa tgggctgggc ttctcagacc541 tgccagggaa gcccttggcc aggctggtgg ctccactggc tcctgatacc caagtgctgg601 tcatgccgct agcggacaag gaggctgggg ccgtggcagc tgtcatcttg gtgcactgtg661 gccagctgag tgataatgag gaatggagcc tgcaggcggt ggagaagcat accctggtcg721 ccctgcggag ggtgcaggtc ctgcagcagc gcgggcccag ggaggctccc cgagccgtcc781 agaacccccc ggaggggacg gcggaagacc agaagggcgg ggcggcgtac accgaccgcg841 accgcaagat cctccaactg tgcggggaac tctacgacct ggatgcctct tccctgcagc901 tcaaagtgct ccaatacctg cagcaggaga cccgggcatc ccgctgctgc ctcctgctgg961 tgtcggagga caatctccag ctttcttgca aggtcatcgg agacaaagtg ctcggggaag1021 aggtcagctt tcccttgaca ggatgcctgg gccaggtggt ggaagacaag aagtccatcc1081 agctgaagga cctcacctcc gaggatgtac aacagctgca gagcatgttg ggctgtgagc1141 tgcaggccat gctctgtgtc cctgtcatca gccgggccac tgaccaggtg gtggccttgg1201 cctgcgcctt caacaagcta gaaggagact tgttcaccga cgaggacgag catgtgatcc1261 agcactgctt ccactacacc agcaccgtgc tcaccagcac cctggccttc cagaaggaac1321 agaaactcaa gtgtgagtgc caggctcttc tccaagtggc aaagaacctc ttcacccacc1381 tggatgacgt ctctgtcctg ctccaggaga tcatcacgga ggccagaaac ctcagcaacg1441 cagagatctg ctctgtgttc ctgctggatc agaatgagct ggtggccaag gtgttcgacg1501 ggggcgtggt ggatgatgag agctatgaga tccgcatccc ggccgatcag ggcatcgcgg1561 gacacgtggc gaccacgggc cagatcctga acatccctga cgcatatgcc catccgcttt1621 tctaccgcgg cgtggacgac agcaccggct tccgcacgcg caacatcctc tgcttcccca1681 tcaagaacga gaaccaggag gtcatcggtg tggccgagct ggtgaacaag atcaatgggc1741 catggttcag caagttcgac gaggacctgg cgacggcctt ctccatctac tgcggcatca1801 gcatcgccca ttctctccta tacaaaaaag tgaatgaggc tcagtatcgc agccacctgg1861 ccaatgagat gatgatgtac cacatgaagg tctccgacga tgagtatacc aaacttctcc1921 atgatgggat ccagcctgtg gctgccattg actccaattt tgcaagtttc acctataccc1981 ctcgttccct gcccgaggat gacacgtcca tggccatcct gagcatgctg caggacatga2041 atttcatcaa caactacaaa attgactgcc cgaccctggc ccggttctgt ttgatggtga2101 agaagggcta ccgggatccc ccctaccaca actggatgca cgccttttct gtctcccact2161 tctgctacct gctctacaag aacctggagc tcaccaacta cctcgaggac atcgagatct2221 ttgccttgtt tatttcctgc atgtgtcatg acctggacca cagaggcaca aacaactctt2281 tccaggtggc ctcgaaatct gtgctggctg cgctctacag ctctgagggc tccgtcatgg2341 agaggcacca ctttgctcag gccatcgcca tcctcaacac ccacggctgc aacatctttg2401 atcatttctc ccggaaggac tatcagcgca tgctggatct gatgcgggac atcatcttgg2461 ccacagacct ggcccaccat ctccgcatct tcaaggacct ccagaagatg gctgaggtgg2521 gctacgaccg aaacaacaag cagcaccaca gacttctcct ctgcctcctc atgacctcct2581 gtgacctctc tgaccagacc aagggctgga agactacgag aaagatcgcg gagctgatct2641 acaaagaatt cttctcccag ggagacctgg agaaggccat gggcaacagg ccgatggaga2701 tgatggaccg ggagaaggcc tatatccctg agctgcaaat cagcttcatg gagcacattg2761 caatgcccat ctacaagctg ttgcaggacc tgttccccaa agcggcagag ctgtacgagc2821 gcgtggcctc caaccgtgag cactggacca aggtgtccca caagttcacc atccgcggcc2881 tcccaagtaa caactcgctg gacttcctgg atgaggagta cgaggtgcct gatctggatg2941 gcactagggc ccccatcaat ggctgctgca gccttgatgc tgagtgatcc cctccaggac3001 acttccctgc ccaggccacc tcccacagcc ctccactggt ctggccagat gcactgggaa3061 cagagccacg ggtcctgggt cctagaccag gacttcctgt gtgaccctgg acaagtacta
3121 ccttcctggg cctcagcttt ctcgtctgta taatggaagc aagacttcca acctcacgga3181 gactttgtaa tttgcttctc tgagagcaca ggggtgacca atgagcagtg ggccctactc3241 tgcacctctg accacacctt ggcaagtctt tcccaagcca ttctttgtct gagcagcttg3301 atggtttctc cttgccccat ttctgcccca ccagatcttt gctcctttcc ctttgaggac3361 tcccaccctt tgggtctcca ggatcctcat ggaaggggaa ggtgagacat ctgagtgagc3421 agagtgtggc atcttggaaa cagtccttag ttctgtggga ggactagaaa cagccgcggc3481 gaaggccccc tgaggaccac tactatactg atggtgggat tgggacctgg gggatacagg3541 ggccccagga agaagctggc cagaggggca gctcagtgct ctgcagagag gggccctggg3601 gagaagcagg atgggattga tgggcaggag ggatccccgc actgggagac aggcccaggt3661 atgaatgagc cagccatgct tcctcctgcc tgtgtgacgc tgggcgagtc tcttcccctg3721 tctgggccaa acagggagcg ggtaagacaa tccatgctct aagatccatt ttagatcaat3781 gtctaaaata gctctatggc tctgcggagt cccagcagag gctatggaat gtttctgcaa3841 ccctaaggca cagagagcca accctgagtg tctcagaggc cccctgagtg ttccccttgg3901 cctgagcccc ttacccattc ctgcagccag tgagagacct ggcctcagcc tggcagcgct3961 ctcttcaagg ccatatccac ctgtgccctg gggcttggga gaccccatag gccgggactc4021 ttgggtcagc ccgccactgg cttctctctt tttctccgtt tcattctgtg tgcgttgtgg4081 ggtgggggag ggggtccacc tgccttacct ttctgagttg cctttagaga gatgcgtttt4141 tctaggactc tgtgcaactg tcgtatatgg tcccgtgggc tgaccgcttt gtacatgaga4201 ataaatctat ttctttctac caaaaaaaaa aaaaaaaaaa4. NPY基因座 HUMNPY551bp mRNA PRI 07-JAN-1995定义 人神经肽Y(NPY)mRNA，完全的cds.登记号 K01911NIDg189273译本 K01911.1 GI189273关键词 神经肽Y.来源 Human pheochromocytoma，cDNA to mRNA，clone pNPY3-75.生物体 Homo sapiensEukaryota；Metazoa；Chordata；Craniata；Vertebrata；Mammlia；Eutheria；Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.参比 1(bases 1 to 551)作者 Minth，C.D.，Bloom，S.R.，Polak，J.M.and Dixon，J.E.题目 编码神经肽酪氨酸的克隆，表征和DNA序列杂志 Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81(14)，4577-4581(1984)MEDLINE84272678注释 神经肽Y(NPY)是一种哺乳动物神经系统中最丰富的肽，其广泛分布的特点暗示起神经传递或调节作用。NPY在肾上腺髓质的某些嗜铬细胞中也被发现。特征Location/Qualifiers来源1..551/生物体＝″Homo sapiens″/db_xref＝″taxon9606″/组织型＝″嗜铬细胞瘤″/map＝″7pter-q22″mRNA＜1..551/基因＝″NPY″/note＝″G00-119-456″基因1..551/基因＝″NPY″信号肽 87..170/基因＝″NPY″/note＝″G00-119-456″
CDS 87..380/基因＝″NPY″/编码起始＝1/db_xref＝″GDBG00-119-456″/产物＝″神经肽Y″/蛋白质号＝″AAA59944.1″/db_xref＝″PIDg189274″/db_xref＝″GI189274″/翻译 ＝″MLGNKRLGLSGLTLALSLLVCLGALAEAYPSKPDNPGEDAPAEDMARYYSALRHYINLITRQRYGKRSSPETLISDLLMRESTENVPRTRLEDPAMW″成熟肽 171..278/基因＝″NPY″/note＝″G00-119-456″/产物＝″神经肽Y″碱基数131a171c129g120t来源 RsaI位点上游51bp1 accccatccg ctggctctca cccctcggag acgctcgccc gacagcatag tacttgccgc61 ccagccacgc ccgcgcgcca gccaccatgc taggtaacaa gcgactgggg ctgtccggac121 tgaccctcgc cctgtccctg ctcgtgtgcc tgggtgcgct ggccgaggcg tacccctcca181 agccggacaa cccgggcgag gacgcaccag cggaggacat ggccagatac tactcggcgc241 tgcgacacta catcaacctc atcaccaggc agagatatgg aaaacgatcc agcccagaga301 cactgatttc agacctcttg atgagagaaa gcacagaaaa tgttcccaga actcggcttg361 aagaccctgc aatgtggtga tgggaaatga gacttgctct ctggcctttt cctattttca421 gcccatattt catcgtgtaa aacgagaatc cacccatcct accaatgcat gcagccactg481 tgctgaattc tgcaatgttt tcctttgtca tcattgtata tatgtgtgtt taaataaagt541 atcatgcatt c5.NPY Y1受体基因座 A264812624bp mRNAPAT17-OCT-1995定义 人NPY受体Y1基因cDNA.登记号 A26481NID g1247452译本 A26481.1 GI1247452关键词.来源 人生物体 Homo sapiensEukaryota；Metazoa；Chordata；Vertebrata；Mammalia；Eutheria；Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.参比 1(bases 1 to 2624)作者 .题目 人神经肽Y-YI受体杂志 专利WO9309227-A 3 13-MAY-1993；特征 Location/Qualifiers来源 1..2624/生物体＝″Homo sapiens″/db_xref＝″taxon9606″CDS152..1306/编码起始＝1/产物＝″神经肽Y Yl受体″/蛋白质号＝″CAA01819.1″/db_xref＝″PIDe205126″/db_xref＝″PIDg1247453″/db_xfef＝″GI1247453″/db_xref＝″SWISS-PROTP25929″/翻译 ＝″MNSTLFSQVENHSVHSNFSEKNAQLLAFENDDCHLPLAMIFTLALAYGAVIILGVSGNLALIIIILKQKEMRNVTNILIVNLSFSDLLVAIMCLPFTFVYTLMDHWVFGEAMCKLNPFVQCVSITVSIFSLVLIAVERHQLIINPRGWRPNNRHAYVGIAVIWVLAVASSLPFLIYQVMTDEPFQNVTLDAYKDKYVCFDQFPSDSHRLSYTTLLLVLQYFGPLCFIFICYFKIYIRLKRRNNMMDKMRDNKYRSSETKRINIMLLSIVVAFAVCWLPLTIFNTVFDWNHQIIATCNHNLLFLLCHLTAMISTCVNPIFYGFLNKNFQRDLQFFFNFCDFRSRDDDYETIAMSTMHTDVSKTSLKQASPVAFKKINNNDDNEKI″碱基数791a479c473g878t3 others来源1 attgttcagt tcaagggaat gaagaattca gaataatttt ggtaaatgga ttccaatatc61 gggaataaga ataagctgaa cagttgacct gctttgaaga aacatactgt ccatttgtct121 aaaataatct ataacaacca aaccaatcaa aatgaattca acattatttt cccaggttga181 aaatcattca gtccactcta atttctcaga gaagaatgcc cagcttctgg cttttgaaaa241 tgatgattgt catctgccct tggccatgat atttacctta gctcttgctt atggagctgt301 gatcattctt ggtgtctctg gaaacctggc cttgatcata atcatcttga aacaaaagga361 gatgagaaat gttaccaaca tcctgattgt gaacctttcc ttctcagact tgcttgttgc421 catcatgtgt ctccccttta catttgtcta cacattaatg gaccactggg tctttggtga481 ggcgatgtgt aagttgaatc cttttgtgca atgtgtttca atcactgtgt ccattttctc541 tctggttctc attgctgtgg aacgacatca gctgataatc aaccctcgag ggtggagacc601 aaataataga catgcttatg taggtattgc tgtgatttgg gtccttgctg tggcttcttc661 tttgcctttc ctgatctacc aagtaatgac tgatgagccg ttccaaaatg taacacttga721 tgcgtacaaa gacaaatacg tgtgctttga tcaatttcca tcggactctc ataggttgtc781 ttataccact ctcctcttgg tgctgcagta ttttggtcca ctttgtttta tatttatttg841 ctacttcaag atatatatac gcctaaaaag gagaaacaac atgatggaca agatgagaga901 caataagtac aggtccagtg aaaccaaaag aatcaatatc atgctgctct ccattgtggt961 agcatttgca gtctgctggc tccctcttac catctttaac actgtgtttg attggaatca1021 tcagatcatt gctacctgca accacaatct gttattcctg ctctgccacc tcacagcaat
1081 gatatccact tgtgtcaacc ccatatttta tgggttcctg aacaaaaact tccagagaga1141 cttgcagttc ttcttcaact tttgtgattt ccggtctcgg gatgatgatt atgaaacaat1201 agccatgtcc acgatgcaca cagatgtttc caaaacttct ttgaagcaag caagcccagt1261 cgcatttaaa aaaatcaaca acaatgatga taatgaaaaa atctgaaact acttatagcc1321 tatggtcccg gatgacatct gtttaaaaac aagcacaacc tgcaacatac tttgattacc1381 tgttctccca aggaatgggg ttgaaatcat ttgaaaatga ctaagatttt cttgtcttgc1441 ttttttactg cttttgttgt agtgtcataa ttacatttgg aacaaaaggt gtgggctttg1501 gggtcttctg gaaatagttt tgaccagaca tctttgaagt gctttttgtg aatttatgca1561 tataatataa agacttttat actgtactta ttggaatgaa atttctttaa agtattacga1621 tnnnctgact tcagaagtac ctgccatcca atacggtcat tagattgggt catcttgatt1681 agattagatt agattagatt gtcaacagat tgggccatcc ttactttatg ataggcatca1741 ttttagtgtg ttacaatagt aacagtatgc aaaagcagca ttcaggagcc gaaagatagt1801 cttgaagtca ttcagaagtg gtttgaggtt tctgtttttt ggtggttttt gtttgttttt1861 tttttttttc accttaaggg aggctttcat ttcctcccga ctgattgtca cttaaatcaa1921 aatttaaaaa tgaataaaaa gacatacttc tcagctgcaa atattatgga gaattgggca1981 cccacaggaa tgaagagaga aagcagctcc ccaacttcaa aaccattttg gtacctgaca2041 acaagagcat tttagagtaa ttaatttaat aaagtaaatt agtattgctg caaatagcta2101 aattatattt atttgaattg atggtcaaga gattttccat tttttttaca gactgttcag2161 tgtttgtcaa gcttctggtc taatatgtac tcgaaagact ttccgcttac aatttgtaga2221 aacacaaata tcgttttcca tacagcagtg cctatatagt gactgatttt aactttcaat2281 gtccatcttt caaaggaagt aacaccaagg tacaatgtta aaggaatatt cactttacct2341 agcagggaaa aatacacaaa aactgcagat acttcatata gcccatttta acttgtataa2401 actgtgtgac ttgtggcgtc ttataaataa tgcactgtaa agattactga atagttgtgt2461 catgttaatg tgcctaattt catgtatctt gtaatcatga ttgagcctca gaatcatttg2521 gagaaactat attttaaaga acaagacata cttcaatgta ttatacagat aaagtattac2581 atgtgtttga ttttaaaagg gcggacattt tattaaaatc aagg6.NPY Y2受体基因座 HSU362691200bp mRNA PRI14-NOV-1995定义人神经肽Y/肽YY Y2受体mRNA，完全的cds.登记号 U36269NID g1063633译本U36269.1 GI1063 63 3关键词 .来源人生物体 Homo sapiensEukaryota；Metazoa；Chordata；Craniata；Vertebrate；Mammalia；Eutheria；Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.参比1(bases 1 to 1200)作者Gerald，C.，Walker，M.W.，Vaysse，P.J.，He，C.，Branchek，T.A.andWeinshank，R.L.题目人海马神经肽Y/肽YY Y2受体亚型的表达克隆和药理特性杂志J.Biol.Chem.270(45)，26758-26761(1995)MEDLINE 96070760参比2(bases 1 to 1200)作者Gerald，C.A.题目Direct Submission杂志Submitted(13-SEP-1995)Christophe A.Gerald，SynapticPharmaceutical Corporation，Molecular Biology，215 College Road，Paramus，NJ 07652，USA特征 Location/Qualifiers来源1..1200/生物体＝″Homo sapiens″/db_xref＝″taxon9606″
/克隆＝″hhY2″/sex＝″male″/组织型＝″brain hippocampus″/dev_stage＝″adult″5’UTR 1..20CDS 21..1166/note＝″NPY/PYY Y2 receptor″/编码起始＝1/产物＝″neuropeptide Y/peptide YY Y2 receptor″/蛋白质号＝″AAC50281.1″/db_xref＝″PIDg1063634″/db xref＝″GI1063 634″/翻译 ＝″MGPIGAEADENQTVEEMKVEQYGPQTTPRGELVPDPEPELIDSTKLIEVQVVLILAYCSIILLGVIGNSLVIHVVIKFKSMRTVTNFFIANLAVADLLVNTLCLPFTLTYTLMGEWKMGPVLCHLVPYAQGLAVQVSTITLTVIALDRHRCIVYHLESKISKRISFLIIGLAWGISALLASPLAIFREYSLIEIIPDFEIVACTEKWPGEEKSIYGTVYSLSSLLILYVLPLGIISFSYTRIWSKLKNHVSPGAANDHYHQPRQKTTKMLVCVVVVFAVSWLPLHAFQLAVDIDSQVLDLKEYKLIFTVFHIIAMCSTFANPLLYGWMNSNYRKAFLSAFRCEQRLDAIHSEVSVTFKAKKNLEVPKNSGPNDSFTEATNV ″3’UTR 1164..1200碱基数292a295c299g314t来源1 caagtggacc tgtactgaaa atgggtccaa taggtgcaga ggctgatgag aaccagacag61 tggaagaaat gaaggtggaa caatacgggc cacaaacaac tcctagaggt gaactggtcc121 ctgaccctga gccagagctt atagatagta ccaagctgat tgaggtacaa gttgttctca181 tattggccta ctgctccatc atcttgcttg gggtaattgg caactccttg gtgatccatg241 tggtgatcaa attcaagagc atgcgcacag taaccaactt tttcattgcc aatctggctg301 tggcagatct tttggtgaac actctgtgtc taccgttcac tcttacctat accttaatgg361 gggagtggaa aatgggtcct gtcctgtgcc acctggtgcc ctatgcccag ggcctggcag421 tacaagtatc cacaatcacc ttgacagtaa ttgccctgga ccggcacagg tgcatcgtct481 accacctaga gagcaagatc tccaagcgaa tcagcttcct gattattggc ttggcctggg541 gcatcagtgc cctgctggca agtcccctgg ccatcttccg ggagtattcg ctgattgaga601 tcatcccgga ctttgagatt gtggcctgta ctgaaaagtg gcctggcgag gagaagagca661 tctatggcac tgtctatagt ctttcttcct tgttgatctt gtatgttttg cctctgggca721 ttatatcatt ttcctacact cgcatttgga gtaaattgaa gaaccatgtc agtcctggag781 ctgcaaatga ccactaccat cagcgaaggc aaaaaaccac caaaatgctg gtgtgtgtgg841 tggtggtgtt tgcggtcagc tggctgcctc tccatgcctt ccagcttgcc gttgacattg901 acagccaggt cctggacctg aaggagtaca aactcatctt cacagtgttc cacatcatcg961 ccatgtgctc cacttttgcc aatccccttc tctatggctg gatgaacagc aactacagaa1021 aGgctttcct ctcggccttc cgctgtgagc agcggttgga tgccattcac tctgaggtgt1081 ccgtgacatt caaggctaaa aagaacctgg aggtcagaaa gaacagtggc cccaatgact1141 ctttcacaga ggctaccaat gtctaaggaa gctgtggtgt gaaaatgtat ggatgaattc7.NPY Y5受体基因座HSU662751370bp mRNA PRI18-OCT-1996定义 人神经肽Y5受体(NPYR5)mRNA，完全的cds.登记号U66275NID g1620655译本 U66275.1 GI1620655关键词.来源 人生物体Homo sapiensEukaryota；Metazoa；Chordata；Craniata；Vertebrata；Marmmalia；Eutheria；Primates；Catarrhini；Mominidae；Momo.参比 1(bases 1 to 1370)作者 Hu，Y.，Bloomquist，B.T.，Cornfield，L.J.，DeCarr，L.B.，Flores-Riveros，J.R.，Friedman，L.，Jiang，P.，Lewis-Higgins，L.，Sadlowski，Y.，Schaefer，J.，Velazquez，N.and McCaleb.M.L.题目 一种新的与进食行为有关的下丘脑神经肽Y受体的鉴别杂志 J.Biol.Chem.271(42)，26315-26319(1996)MEDLINE 96421636参比 2(bases 1 to 1370)作者 Hu，Y.，Bloomquist，B.T.，Cornfield，L.J.，DeCarr，L.B.，Flores-Riveros，J.R.，Friedman，L.，Jiang，P.，Lewis-Higgins，L.，Sadlowski，Y.，Schaefer，J.，Velazquez，N.and McCaleb，M.L.题目 Direct Submission杂志 Submitted(06-AUG-1996)Metabolic Disorders，Bayer Corporation，400Morgan Lane，West Haven，CT 06516，USA特征 Location/Qualifiers来源 1..1370/生物体＝″Homo sapiens″/db_xref＝″taxon9606″基因 18..1355/基因＝″NPYR5″CDS18..1355/基因＝″NPYR5″/功能＝″G蛋白质-偶联受体″/编码起始＝1/产物＝″神经肽Y5受体″/protein_id＝″AAC50741.1″/db_xref＝″PIDg1620656″/db_xref＝″GI1620656″/翻译 ＝″MDLELDEYYNKTLATENNTAATRNSDFPVWDDYKSSVDDLQYFLIGLYTFVSLLGFMGNLLILMALMQKRNQKTTVNFLIGNLAFSDILVVLFCSPFTLTSVLLDQWMFGKVMCHIMPFLQCVSVLVSTLILISIAIVRYMMIKHPISNNLTANHGYFLIATVWTLGFAICSPLPVFHSLVELQETFGSALLSSRYLCVESWPSDSYRIAFTISLLLVQYILPLVCLTVSHTSVCRSISCGLSNKENRLEENEMINLTLHPSKKSGPQVKLSGSHKWSYSFIKKHRRRYSKKTACVLPAPERPSQENHSRILPENFGSVRSQLSSSSKFIPGVPTCFEIKPEENSDVHELRVKRSVTRIKKRSRSVFYRLTILILVFAVSWMPLHLFHVVTDFNDNLISNRHFKLYYCICHLLGMMSCCLNPILYGFLNNGIKADLVSLIHCLHM″碱基数392a263c257g458t来源1 ccaagcagga ctataatatg gatttagagc tcgacgagta ttataacaag acacttgcca61 cagagaataa tactgctgcc actcggaatt ctgatttccc agtctgggat gactataaaa121 gcagtgtaga tgacttacag tattttctga ttgggctcta tacatttgta agtcttcttg181 gctttatggg gaatctactt attttaatgg ctctcatgaa aaagcgtaat cagaagacta241 cggtaaactt cctcataggc aatctggcct tttctgatat cttggttgtg ctgttttgct301 cacctttcac actgacgtct gtcttgctgg atcagtggat gtttggcaaa gtcatgtgcc361 atattatgcc ttttcttcaa tgtgtgtcag ttttggtttc aactttaatt ttaatatcaa421 ttgccattgt caggtatcat atgataaaac atcccatatc taataattta acagcaaacc481 atggctactt tctgatagct actgtctgga cactaggttt tgccatctgt tctccccttc541 cagtgtttca cagtcttgtg gaacttcaag aaacatttgg ttcagcattg ctgagcagca601 ggtatttatg tgttgagtca tggccatctg attcatacag aattgccttt actatctctt661 tattgctagt tcagtatatt ctgcccttag tttgtcttac tgtaagtcat acaagtgtct721 gcagaagtat aagctgtgga ttgtccaaca aagaaaacag acttgaagaa aatgagatga781 tcaacttaac tcttcatcca tccaaaaaga gtgggcctca ggtgaaactc tctggcagcc841 ataaatggag ttattcattc atcaaaaaac acagaagaag atatagcaag aagacagcat901 gtgtgttacc tgctccagaa agaccttctc aagagaacca ccccagaata cttccagaaa961 actttggctc tgtaagaagt cagctctctt catccagtaa gttcatacca ggggtcccca1021 cttgctttga gataaaacct gaagaaaatt cagatgttca tgaattgaga gtaaaacgtt1081 ctgttacaag aataaaaaag agatctcgaa gtgttttcta cagactgacc atactgatat1141 tagtatttgc tgttagttgg atgccactac accttttcca tgtggtaact gattttaatg
1201 acaatcttat ttcaaatagg catttcaagt tggtgtattg catttgtcat ttgttgggca1261 tgatgtcctg ttgtcttaat ccaattctat atgggtttct taataatggg attaaagctg1321 atttagtgtc ccttatacac tgtcttcata tgtaataatt ctcactgttt8.VIP基因座 VIP1511bp mRNA PRI19-MAR-1999定义 Homo sapiens血管活性肠肽(VIP)mRNA登记号 NM_003381NIDg4507896译本 NM_003381.1 GI4507896关键词 .
来源 人生物体 Homo sapiensEukaryota；Metazoa；Chordata；Craniata；Vertebrata；Mammalia；Eutheria；Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.
参比 1(bases 1 to 1511)作者 DeLamarter，J.F.，Buell，G.N.，Kawashima，E.，Polak，J.M.andBloom，S.R.
题目 血管活性肠肽细菌细胞中激素原的表达杂志 Peptides 6 Suppl 1，95-102(1985)MEDLINE86016352注释 REFSEQ由M36634衍生的参比序列.
临时参比序列这是一种仍未进行人体评价的临时的参比序列。最终处理的参比序列记录可与此略有不同。
特征 Location/Qualifiers来源 1..1511/生物体＝″Homo sapiens″/db_xref＝″taxon9606″/map＝″6q24-q27″/组织型＝″胰腺癌″基因 1..1511/基因＝″VIP″/db xref＝″MIM192320″/db xref＝″LocusID7432″信号肽 67..129/产物＝″血管活性肠肽″CDS67..579/基因＝″VIP″/编码起始＝1/产物＝″血管活性肠肽″/蛋白质号＝″NP_003 372.1″/dt_xref＝″PIDg4507897″/db_xref＝″GI4507897″/翻译 ＝″MDTRNKAQLLVLLTLLSVLFSQTSAWPLYRAPSALRLGDRIPFEGANEPDQVSLKEDIDMLQNALAENDTPYYDVSRNARHADGVFTSDFSKLLGQLSAKKYLESLMGKRVSSNISEDPVPVKRHSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILNGKRSSEGESPDFPEELEK″成熟肽307..387/产物＝″血管活性肠肽″成熟肽439..522/产物＝″血管活性肠肽″polyA信号 1326..1331碱基数541a255c276g439t来源1 ggtcagctcc aaaacaatcc ggaacggcca gctccggggg agcacgactg ggcgagaggc61 acagaaatgg acaccagaaa taaggcccag ctccttgtgc tcctgactct tctcagtgtg121 ctcttctcac agacttcggc atggcctctt tacagggcac cttctgctct caggttgggt181 gacagaatac cctttgaggg agcaaatgaa cctgatcaag tttcattaaa agaagacatt241 gacatgttgc aaaatgcatt agctgaaaat gacacaccct attatgatgt atccagaaat301 gccaggcatg ctgatggagt tttcaccagt gacttcagta aactcttggg tcaactttct361 gccaaaaagt accttgagtc tcttatggga aaacgtgtta gcagtaacat Ctcagaagac421 cctgtaccag tcaaacgtca ctcagatgca gtcttcactg acaactatac ccgccttaga481 aaacaaatgg ctgtaaagaa atatttgaac tcaattctga atggaaagag gagcagtgag541 ggagaatctc ccgactttcc agaagagtta gaaaaatgat gaaaaagacc tttggagcaa601 agctgatgac aacttcccag tgaattcttg aaggaaaatg atacgcaaca taattaaatt661 ttagattcta cataagtaat tcaagaaaac aacttcaata tccaaaccaa ataaaaatat721 tgtgttgtga atgttgtgat gtattctagc taatgtaata actgtgaagt ttacattgta781 aatagtattt gagagttcta aattttgtct ttaactcata aaaagcctgc aatttcatat841 gctgtatatc ctttctaaca aaaaaatata ttttaatgat aagtaatgct aggttaatcc901 aattatatga gacgtttttg gaagagtagt aatagagcaa aattgatgtg tttatttata961 gagtgtactt aactattcag gagagtagaa cagataatca gtgtgtctaa atttgaatgt1021 taagcagatg gaatgctgtg ttaaataaac ctcaaaatgt ctaagatagt aacaatgaag1081 ataaaaagac attcttccaa aaagattttc agaaaatatt atgtgtttcc atattttata1141 ggcaaccttt atttttaatg gtgttttaaa aaatctcaaa tttggattgc taatcaccaa1201 aggctctctc ctgatagtct ttcagttaag gagaacgacc cctgcttctg acactgaaac1261 ttccctttct gcttgtgtta agtatgtgta aaatgtgaag tgaatgaaac actcagttgt1321 tcaataataa atatttttgc cataatgact cagaatattg ctttggtcat atgagcttcc1381 ttctgtgaaa tacattttgg agacacaact atttttccaa aataatttta agaaatcaaa1441 gagagaaaat aaagaccttg cttatgattg cagataaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa1501 aaaaaaaaaa a9.VPAC1受体基因座 VIP 1511bp mRNA PRI 19-MAR-1999定义Homo sapiens vasoactive intestinal peptide(VIP)mRNA.登记号 NM_003381NID g4507896译本NM_003381.1 GI4507896关键词 .来源人生物体 Homo sapiensEukaryota；Metazoa；Chordata；Craniata；Vertebrata；Mammalia；Eutheria；Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.参比1(bases 1 to 1511)作者DeLamarter，J.F.，Buell，G.N.，Kawashima，E.，Polak，J.M.andBloom，S.R.题目血管活性肠肽细菌细胞中激素原的表达杂志Peptides 6 Suppl 1，95-102(1985)MEDLINE 86016352注释RESEQ由M36634衍生的参比序列.
临时参比序列这是一种仍未进行人体评价的临时参比序列。最终处理的参比序列记录可与此略有不同。特征 Location/Qualifiers来源 1..1511/生物体＝″Homo sapiens″/db_xref＝″taxon9606″/map＝″6q24-q27″
/组织型＝″胰腺癌″基因 1..1511/基因＝″VIP″/db_xref＝″MIM192320″/db_xref＝″LocusID7432″信号肽67..129/产物＝″血管活性肠肽″CDS 67..579/基因＝″VIP″/编码起始＝1/产物＝″血管活性肠肽″/蛋白质号＝″NP_003 372.1″/db_xref＝″PIDg4507897″/db_xref＝″GI4507897″/翻译 ＝″MDTRNKAQLLVLLTLLSVLFSQTSAWPLYRAPSALRLGDRIPFEGANEPDQVSLKEDIDMLQNALAENDTPYYDVSRNARHADGVFTSDFSKLLGQLSAKKYLESLMGKRVSSNISEDPVPVKRHSDAVFTDNYTRLRKQMAVKKYLNSILNGKRSSEGESPDFPEELEK″成熟肽307..387/产物＝″血管活性肠肽″成熟肽439..522/产物＝″血管活性肠肽″polyA信号1326..1331碱基数541a255c276g439t来源1 ggtcagctcc aaaacaatcc ggaacggcca gctccggggg agcacgactg ggcgagaggc61 acagaaatgg acaccagaaa taaggcccag ctccttgtgc tcctgactct tctcagtgtg121 ctcttctcac agacttcggc atggcctctt tacagggcac cttctgctct caggttgggt181 gacagaatac cctttgaggg agcaaatgaa cctgatcaag tttcattaaa agaagacatt241 gacatgttgc aaaatgcatt agctgaaaat gacacaccct attatgatgt atccagaaat301 gccaggcatg ctgatggagt tttcaccagt gacttcagta aactcttggg tcaactttct361 gccaaaaagt accttgagtc tcttatggga aaacgtgtta gcagtaacat ctcagaagac421 cctgtaccag tcaaacgtca ctcagatgca gtcttcactg acaactatac ccgccttaga481 aaacaaatgg ctgtaaagaa atatttgaac tcaattctga atggaaagag gagcagtgag541 ggagaatctc ccgactttcc agaagagtta gaaaaatgat gaaaaagacc tttggagcaa601 agctgatgac aacttcccag tgaattcttg aaggaaaatg atacgcaaca taattaaatt661 ttagattcta cataagtaat tcaagaaaac aacttcaata tccaaaccaa ataaaaatat721 tgtgttgtga atgttgtgat gtattctagc taatgtaata actgtgaagt ttacattgta781 aatagtattt gagagttcta aattttgtct ttaactcata aaaagcctgc aatttcatat841 gctgtatatc ctttctaaca aaaaaatata ttttaatgat aagtaatgct aggttaatcc901 aattatatga gacgtttttg gaagagtagt aatagagcaa aattgatgtg tttatttata961 gagtgtactt aactattcag gagagtagaa cagataatca gtgtgtctaa atttgaatgt1021 taagcagatg gaatgctgtg ttaaataaac ctcaaaatgt ctaagatagt aacaatgaag1081 ataaaaagac attcttccaa aaagattttc agaaaatatt atgtgtttcc atattttata1141 ggcaaccttt atttttaatg gtgttttaaa aaatctcaaa tttggattgc taatcaccaa1201 aggctctctc ctgatagtct ttcagttaag gagaacgacc cctgcttctg acactgaaac1261 ttccctttct gcttgtgtta agtatgtgta aaatgtgaag tgaatgaaac actcagttgt1321 tcaataataa atatttttgc cataatgact cagaatattg ctttggtcat atgagcttcc1381 ttctgtgaaa tacattttgg agacacaact atttttccaa aataatttta agaaatcaaa1441 gagagaaaat aaagaccttg cttatgattg cagataaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa1501 aaaaaaaaaa a10.VPAC2受体基因座HUMHVRP1640bpm mRNA PRI16-FEB-1995定义 人helodermin-优选VIP受体(VIP2/PACAP受体)mRNA，完全的cds.登记号 L36566NIDg550477译本 L36566.1 GI550477关键词 PACAP受体；VIP受体；helodermin-优选VIP受体。来源 Homo sapiens cDNA to mRNA.生物体 Homo sapiensEukaryota；Metazoa；Chordata；Craniata；Vertebrata；Mammalia；Eutheria；Primates；Catarrhini；Hominidae；Homo.参比 1(bases 1 to 1640)作者 Svoboda，M.，Tastenoy，M.，Van Rampelbergh，J.，Goossens，J.F.，DeNeef，P.，Waelbroeck，M.and Robberecht，P.题目 来自SUP-T1成淋巴细胞的人VIP受体的分子克隆和功能表征杂志 Biochem.Biophys.Res.Commun.205(3)，1617-1624(1994)MEDLINE95110300特征 Location/Qualifiers来源 1..1640/生物体＝″Homo sapiens″/db_xref＝″taxon9606″/细胞系＝″SUP T1淋巴母细胞″/克隆文库＝″lamda ZAP II″信号肽 163..231/note＝″推定的″CDS 163..1479/note＝″人VIP2受体先前称为″helodermin优选VIP受体″；跨膜结构域位于下列位置637-696；772-844；880-948；1003-1071；1147-1209；1243-1302；潜在的糖基化位点位于334-336；424-426；436-438.″/编码起始＝1/功能＝″VIP和PACAP受体″/蛋白质号＝″AAC37569.1″/db_xref＝″PIDg550478″/db_xref＝″GI550478″/翻译 ＝″MRTLLPPALLTCWLLAPVNSIHPECRFHLEIQEEETKCTELLRSQTEKHKACSGVWDNITCWRPANVGETVTVPCPKVFSNFYSKAGNISKNCTSDGWSETFPDFVDACGYSDPEDESKITFYILVKAIYTLGYSVSLMSLATGSIILCLFRKLHCTRNYIHLNLFLSFILRAISVLVKDDVLYSSSGTLHCPDQPSSWVGCKLSLVFLQYCIMANFFWLLVEGLYLHTLLVAMLPPRRCFLAYLLIGWGLPTVCIGAWTAARLYLEDTGCWDTNDHSVPWWVIRIPILISIIVNFVLFISIIRILLQKLTSPDVGGNDQSQYKRLAKSTLLLIPLFGVHYMVFAVFPISISSKYQILFELCLGSFQGLVVAVLYCFLNSEVQCELKRKWRSRCPTPSASRDYRVCGSSFSHNGSEGALQFHRASRAQSFLQTETSVI″成熟肽 232..1476/功能＝″VIP和PACAP受体″碱基数 315a 512c461g 352t来源1 cgggacgagg gggcggcccc cgcgctcggg gcgctcggct acagctgcgg ggcccgaggt61 ctccgcgcac tcgctcccgg cccatgctgg aggcggcgga acccggggga cctaggacgg121 aggcggcggg cgctgggcgg cccccggcac gctgagctcg ggatgcggac gctgctgcct181 cccgcgctgc tgacctgctg gctgctcgcc cccgtgaaca gcattcaccc agaatgccga241 tttcatctgg aaatacagga ggaagaaaca aaatgtacag agcttctgag gtctcaaaca301 gaaaaacaca aagcctgcag tggcgtctgg gacaacatca cgtgctggcg gcctgccaat361 gtgggagaga ccgtcacggt gccctgccca aaagtcttca gcaattttta cagcaaagca421 ggaaacataa gcaaaaactg tacgagtgac ggatggtcag agacgttccc agatttcgtc481 gatgcctgtg gctacagcga cccggaggat gagagcaaga tcacgtttta tattctggtg541 aaggccattt ataccctggg ctacagtgtc tctctgatgt ctcttgcaac aggaagcata601 attctgtgcc tcttcaggaa gctgcactgc accaggaatt acatccacct gaacctgttc661 ctgtccttca tcctgagagc catctcagtg ctggtcaagg acgacgttct ctactccagc721 tctggcacgt tgcactgccc tgaccagcca tcctcctggg tgggctgcaa gctgagcctg781 gtcttcctgc agtactgcat catggccaac ttcttctggc tgctggtgga ggggctctac841 ctccacaccc tcctggtggc catgctcccc cctagaaggt gcttcctggc ctacctcctg901 atcggatggg gcctccccac cgtctgcatc ggtgcatgga ctgcggccag gctctactta961 gaagacaccg gttgctggga tacaaacgac cacagtgtgc cctggtgggt catacgaata1021 ccgattttaa tttccatcat cgtcaatttt gtccttttca ttagtattat acgaattttg1081 ctgcagaagt taacatcccc agatgtcggc ggcaacgacc agtctcagta caagaggctg1141 gccaagtcca cgctcctgct tatcccgctg ttcggcgtcc actacatggt gtttgccgtg1201 tttcccatca gcatctcctc caaataccag atactgtttg agctgtgcct cgggtcgttc1261 cagggcctgg tggtggccgt cctctactgt ttcctgaaca gtgaggtgca gtgcgagctg1321 aagcgaaaat ggcgaagccg gtgcccgacc ccgtccgcga gccgggatta cagggtctgc1381 ggttcctcct tctcccacaa cggctcggag ggcgccctgc agttccaccg cgcgtcccga1441 gcccagtcct tcctgcaaac ggagacctcg gtcatctagc cccacccctg cctgtcggac1501 gcggcgggag gcccacggtt cggggcttct gcggggctga gacgccggct tcctccttcc1561 agatgcccga gcaccgtgtc gggcaggtca gcgcggtcct gactccgtca agctggttgt1621 ccactaaacc ccatacctgg
权利要求
1.一种用于(或在使用时)治疗FSD，优选FSAD的药物组合物；该药物组合物含有能增效患有FSD，优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP的活性剂；其中该活性剂任选地与药学可接受载体，稀释剂或赋形剂混合；其中所活性剂剂是NPY的抑制剂(INPY)。
2.根据权利要求1的药物组合物，其中所述活性剂是生殖器(例如阴道或阴蒂)血管舒张的介体。
3.根据权利要求1或2的药物组合物，其中所述组合物用于口服给药。
4.根据权利要求1-3任一项的药物组合物，其中所述cAMP是内源cAMP。
5.根据权利要求1-4任一项的药物组合物，其中在性刺激之前或过程中施用所述组合物。
6.一种活性剂在制备用于治疗FSD，优选FSAD的药物中的用途；其中该活性剂能增效患有FSD，优选FSAD的雌性性生殖器中cAMP；其中所述活性剂是INPY。
7.根据权利要求6的用途，其中所述活性剂是生殖器(例如阴道或阴蒂)血管舒张的介体。
8.根据权利要求6或7的用途，其中所述药物用于口服给药。
9.根据权利要求6-8任一项的用途，其中所述cAMP是内源cAMP。
10.根据权利要求6-9任一项的用途，其中所述组合物在性刺激之前或期间施用。
11.一种治疗雌性(例如患FSD，优选FSAD的雌性)的方法；所述方法包括对所述雌性施用一种能增效性生殖器中cAMP的活性剂；其中该活性剂的量是引起雌性性生殖器中cAMP增效的量；其中该活性剂任选地与药学可接受载体，稀释剂或赋形剂混合；其中所述活性剂是INPY。
12.根据权利要求11的方法，其中所述活性剂是生殖器(例如阴道或阴蒂)血管舒张的介体。
13.根据权利要求11或12的方法，其中所述药物用于口服给药。
14.根据权利要求11-13任一项的方法，其中所述cAMP是内源cAMP。
15.根据权利要求11-14任一项的药物组合物，其中所述组合物在性刺激之前或期间施用。
16.一种鉴定可以用来治疗FSD，特别是FSAD的活性剂的检测方法，该检测方法包括测定一种活性剂是否能直接或间接增效cAMP；其中在该活性剂存在下的cAMP增效表明该活性剂可以用于治疗FSD，特别是FSAD；其中所述活性剂是INPY。
17.一种包括下面步骤的方法(a)进行根据权利要求16的检测；(b)鉴定一种或多种能直接或间接增效cAMP的活性剂；和(c)制备一定量的那些一种或多种鉴定的活性剂；和其中所述活性剂是INPY。
18.一种通过用一种活性剂体内增效cAMP的治疗FSD优选FSAD的方法；其中所述活性剂在体外检测方法中能直接或间接增效cAMP；其中所述体外检测方法为权利要求16中定义的分析方法；和其中所述活性剂是INPY。
19.一种活性剂在制备用于治疗FSD，优选FSAD的药物组合物中的用途，其中所述活性剂通过根据权利要求16的检测方法体外测定时，能直接或间接增效cAMP；和其中所述活性剂是INPY。
20.通过根据权利要求16的检测方法鉴定的活性剂；和其中所述活性剂是INPY。
21.在药物中使用的根据权利要求20的活性剂；和其中所述活性剂是INPY。
22.在治疗FSD，优选FSAD中使用的根据权利要求21的活性剂；和其中所述活性剂是INPY。
23.口服给药治疗FSD，优选FSAD的药物，其中所述药物包括根据权利要求20的活性剂；和其中所述活性剂是INPY。
24.一种诊断方法，该方法包括从雌性分离样品；测定该样品是否以引起FSD，优选FSAD的量含有一种物质，或其量是否导致FSD，优选地FSAD；其中所述物质对雌性性生殖器中的cAMP的水平或活性有直接或间接的影响；和其中利用一种活性剂可以调节所述物质来实现有益效果；和其中所述活性剂是INPY。
25.一种包括用来检测分离的雌性样品中物质的工具的诊断组合物或试剂盒；其中所述工具可以用来检测该样品是否含有且为引起FSD，优选FSAD的量的该物质，或其量是否导致FSD，优选地FSAD；其中所述物质对雌性性生殖器中的AMP的水平或活性有直接或间接的影响且其中利用一种活性剂可以调节所述物质来实现有益效果；其中所述活性剂是INPY。
26.一种用来鉴定能治疗FSID，优选FSAD的活性剂的动物模型，所述模型包括麻醉雌性动物，该动物包括测定其骨盆神经刺激后所述动物生殖器(例如阴道或阴蒂)血流量变化的工具；其中所述活性剂是INPY。
27.一种鉴定可以直接或间接增效cAMP以治疗FSD，优选FSAD的活性剂的检测方法，该检测方法包括对权利要求26的动物模型施用一种活性剂；测定所述动物生殖器(例如阴道或阴蒂)中任何增效的cAMP和/或血流量增大；其中所述活性剂是INPY。
28.根据权利要求27的检测方法鉴定的活性剂；其中所述活性剂是INPY。
29.一种用于(或使用时)治疗FSD(优选FSAD)的药物组合物；该药物组合物含有一种活性剂；其中所述活性剂任选地与药学可接受载体，稀释剂或赋形剂混合；其中所述活性剂是INPY。
30.一种活性剂在制备用于治疗FSD(优选FSAD)的药物(例如一种药物组合物)中的用途；其中所述活性剂是INPY。
31.一种治疗患有FSD(优选FSAD)的雌性的方法；该方法包括对所述雌性施用一种活性剂；其中所述活性剂任选地与药学可接受载体，稀释剂或赋形剂混合；其中所述活性剂是INPY。
32.一种用于增大雌性生殖器(例如阴道或阴蒂)血流量的药物组合物；所述药物组合物含有一种活性剂；其中所述活性剂任选地与药学可接受载体，稀释剂或赋形剂混合；其中所述活性剂是INPY。
33.一种活性剂在制备用于增大雌性生殖器(例如阴道或阴蒂)血流量的药物(例如一种药物组合物)中的用途；其中所述活性剂是INPY。
34.一种治疗雌性FSD(优选FSAD)或者预防FSD(优选FSAD)的方法；该方法包括对该雌性施用一种活性剂；其中所述活性剂是INPY。
35.根据权利要求29-34任一项的发明，其中所述活性剂增效cAMP。
36.根据前面任一项权利要求的发明，其中所述cAMP是内源cAMP(根基据本文定义)。
37.根据前面任一项权利要求的发明，其中所述活性剂是INPY Y1或INPYY2或NPY Y5。
38.根据权利要求37的发明，其中所述活性剂是INPY Y1。
全文摘要
本发明描述了一种治疗患有FSD,特别是FSAD的女性的方法。该方法包括对所述女性施用一种能增效性生殖器中cAMP的活性剂;其中所述活性剂的量是引起增效女性性生殖器中cAMP的量。所述活性剂可以与药学可接受载体,稀释剂或赋形剂混合。所述活性剂是NPY的一种抑制剂(I:NPY)。
文档编号A61K38/55GK1328824SQ00137670
公开日2002年1月2日 申请日期2000年11月7日 优先权日1999年11月8日
发明者G·N·玛沃, C·P·威曼 申请人:辉瑞大药厂