细胞粘合抑制剂的制作方法

专利名称：细胞粘合抑制剂的制作方法
背景技术：
细胞粘合是一种过程，通过该过程细胞彼此结合并向特定的靶迁移或定位在细胞外基质中。因此，细胞粘合构成初始的许多生物学现象的基本机制。例如，细胞粘合是造血细胞与内皮细胞粘合并随后从血管中迁移出来到达受损部位的原因。因此，细胞粘合在病理学如哺乳动物的炎症和免疫反应中发挥作用。
对细胞粘合的分子基础研究显示，各种细胞表面大分子(统称为粘合分子或受体)介导细胞-细胞和细胞-基质之间的相互作用。例如，称作“整合蛋白”的蛋白质总科是造血细胞与其微环境之间粘合作用的关键介质(M.E.Hemler，“VLA Proteins in the Integrin FamilyStructures，Functions，andTheir Role on Leukocytes.”，Ann.Rev.Immunol.，8，p.365(1990))。整合蛋白是由称作α和β的两种亚单位组成的非共价杂二聚体络合物。至少有12种不同的α亚单位(α1-α6，α-L，α-M，α-X，α-IIB，α-V和α-E)和至少有9种不同的β(β1-β9)亚单位。基于其α和β组分的类型，将各整合蛋白分子分类成亚科。
α4β1整合蛋白，也称作极迟抗原-4(“VLA-4”)，CD49d/CD29是参与各种细胞-细胞和细胞-基质粘合作用的白细胞表面受体(M.E.Hemler，Ann.Rev.Immunol.，8，p.365(1990))。它可用作细胞因子诱导的细胞表面蛋白、血管细胞粘合分子-1(“VCAM-1”)以及细胞外基质蛋白纤连蛋白的受体(“FN”)(Ruegg等人，J.Cell Biol.，177，p.179(1991)；Wayner等人，J.CellBiol.，105，p.1873(1987)；Kramer等人，J.Biol.Chem.，264，p.4684(1989)；Gehlsen等人，Science，24，p.1228(1988))。抗-VLA4单克隆抗体(“mAb′s”)已显示在体内和体外抑制VLA4-依赖性粘合作用(Ferguson等人Proc.Natl.Acad.Sci.，88，p.8072(1991)；Ferguson等人，J.Immunol.，150，p.1172(1993))。体内试验结果提示，所述抑制VLA4-依赖性的细胞粘合作用可预防和抑制几种炎症和自身免疫性疾病(R.L.Lobb等人，“The PathophysiologicRole of α4 Integrins In Vivo”，J.Clin.Invest.，94，pp.1722-28(1994))。
尽管有这些进展，但仍然需要小的特异性VLA4-依赖性细胞粘合的抑制剂。理想的是所述抑制剂可通过口服给药。这样的化合物将为治疗、预防或抑制各种由细胞粘合和VLSA-4结合介导的病症提供有效的药物。
发明概述本发明涉及特异性抑制配体与VLA-4结合的新的非-肽化合物。这些化合物用于抑制、预防和消除VLA-4介导的细胞粘合和与所述粘合有关的病症，如炎症和免疫反应。本发明化合物可单独使用或与其它治疗或预防剂联合使用来抑制、预防和消除细胞粘合。本发明也提供包含本发明化合物的药物组合物以及利用本发明化合物和组合物来抑制细胞粘合的方法。
按照本发明具体实施方式
，这些新的化合物、组合物和方法有效地用于治疗炎性和免疫性疾病。本发明也提供制备本发明化合物及其中间体的方法。
本发明一方面涉及式(I)细胞粘合抑制剂R3-L-L′-R1(I)R1为H、C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、Cy、Cy-C1-10烷基、Cy-C1-10链烯基或Cy-C1-10链炔基。
L′为具有1-5个碳原子的烃连接部分并且为(i)任选地由一个或多个下列基团间隔的或在末端连接到一个或多个下列基团上的-C(O)-、-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-、-NRc-C(O)-NRd-、-NRc-C(O)-O-、-O-C(O)-NRc-、-S(O)m-、-SO2-NRc-、-NRc-SO2-、-NRc-C(NRm)-、-O-、-NRc-和-Cy；或者为(ii)未取代的或由一个或多个独立地选自Rb的取代基取代的。
L为具有1-4个碳原子的烃连接部分并且为(i)任选地由一个或多个(例如1-5，1-4或1-3个)下列基团间隔的或在末端连接到一个或多个下列基团上的-C(O)-、-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-、-NRc-C(O)-NRd-、-NRc-C(O)-O-、-O-C(O)-NRc-、-S(O)m-、-SO2-NRc-、-NRc-SO2-、-O-、-NRc-和-Cy；或者为(ii)未取代的或由一个或多个独立地选自Rb的取代基取代的。
R3为烷基、链烯基、链炔基、环烷基、芳基稠合的环烷基、环烯基、芳基、芳烷基、芳基取代的链烯基或链炔基、环烷基取代的烷基、环烯基取代的环烷基、二芳基、烯氧基、炔氧基、芳烷氧基，芳基取代的烯氧基、芳基取代的炔氧基、烷基氨基、烯基氨基、炔基氨基、芳基取代的烷基氨基、芳基取代的烯氨基、芳基取代的炔基氨基、芳氧基、芳基氨基、杂环基、杂环基取代的烷基、杂环基取代的氨基、羧基烷基取代的芳烷基、或羰环稠合的芳基；或者R3为式(i)部分 其中Y5为-CO-、-O-CO-、-SO2-或-PO2-。
R4和R6各独立地为烷基、链烯基、链炔基、环烷基、芳基稠合的环烷基、环烯基、芳基、芳烷基、芳基取代的链烯基或链炔基、环烷基取代的烷基、环烯基取代的环烷基、二芳基、烯氧基、炔氧基、芳烷氧基，芳基取代的烯氧基、芳基取代的炔氧基、烷基氨基、烯基氨基、炔基氨基、芳基取代的烷基氨基、芳基取代的烯基氨基、芳基取代的炔基氨基、芳氧基、芳基氨基、杂环基、杂环基取代的烷基、杂环基取代的氨基、羧基烷基取代的芳烷基、羰环稠合的芳基、或氨基酸侧链，所述氨基酸侧链选自精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、S-甲基半胱氨酸、甲硫氨酸及其相应的亚砜和砜衍生物、环己基丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、别-异亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、苯丙氨酸、苯甘氨酸、酪氨酸、色氨酸、脯氨酸、丙氨酸、鸟氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、正缬氨酸、缬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、β-氰基丙氨酸、2-氨基丁酸和别苏氨酸。
R5为氢、芳基、烷基、链烯基、链炔基、环烷基、环烯基或芳基取代的烷基。注意R5和R6可以与它们所连接的原子一起形成5-7元杂环。
上述各Cy代表环烷基、环烯基、杂环基、芳基或杂芳基。上述各烷基、链烯基和链炔基为未取代的或由1-4个独立地选自Ra的取代基取代的。此外，上述各环烷基、环烯基、杂环基、芳基和杂芳基为未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的。
Ra选自Cy(未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的)、-ORc、-NO2、-卤素、-S(O)mRc、-SRc、-S(O)2ORc、-S(O)2NRcRd、-NRcRd、-O(CReRf)nNRcRd、-C(O)Rd、-CO2Rc、-P(O)(ORc)(ORd)、-P(O)(Rc)(ORd)、-S(O)mORc、-C(O)NRcRj、-CO2(CReRf)nCONRcRd、-OC(O)Rc、-CN、-NRcC(O)Rd、-OC(O)NRcRd、-NRcC(O)ORd、-NRcC(O)NRdRe、-CRc(NORd)、-CF3、-OCF3和氧代。
Rb选自Ra、C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、芳基-C1-10烷基和杂芳基-C1-10烷基；其中各烷基、链烯基、链炔基、芳基和杂芳基为未取代的或由独立地选自Rg的取代基取代的。
Rc、Rd、Re和Rf各独立地选自H、C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、Cy和Cy-C1-10烷基；其中各烷基、链烯基、链炔基和Cy为未取代的或由1-4个独立地选自Rg的取代基取代的。
Rg为卤素、氨基(包括-NH2、(一或二)烷基氨基、(一或二)链烯基氨基、(一或二)链炔基氨基、(一或二)环烷基氨基、(一或二)环烯基氨基、(一或二)杂环基氨基、(一或二)芳基氨基和(一或二)杂芳基氨基)、羧基、-COO-C1-4烷基、-P(O)(OH)2、-P(O)(OH)(O-C1-4烷基)、-P(O)(C1-4烷基)2、-P(O)(OH)(C1-4烷基)、-P(O)(O-C1-4烷基)(C1-4烷基)、-SO2-C1-4烷基、-CO-NH2、-CO-NH(C1-4烷基)、-CO-NH(C1-4烷基)2、-C1-4烷基、-C1-4烷氧基、芳基、芳基-C1-4烷氧基、羟基、CF3和芳氧基。
Rm为H、C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、Cy、Cy-C1-10烷基、C1-10酰基、C1-10烷基-磺酰基或C1-10烷氧基。
Rj为H、C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、氰基、芳基、芳基-C1-10烷基、杂芳基、杂芳基C1-10烷基或-SO2Rk(Rk为C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基或芳基)。
Rc和Rd可以与它们所连接的原子一起不形成或形成含0-2个独立地选自O、N和S杂原子的5-7元杂环。类似地，Re和Rf可以与它们所连接的原子一起不形成或形成含0-2个独立地选自O、N和S杂原子的5-7元杂环。
m为0、1或2；并且n为1-10的整数。
注意，当L是饱和的(例如C1-4亚烷基链)并且具有1-4个碳原子时，L必须包含选自O、S和N的杂原子；或者R3必须包含邻-甲基苯基-脲基-苯基-CH2-部分；或者R1必须仅包含一个环状基团(例如环烷基、环烯基、杂环基、芳基或杂芳基)。
在一个
具体实施例方式
中，本发明化合物包含具有式Z1-La-Z2-结构的R1，其中Z1为环烷基、环烷基-C1-10烷基、环烯基、环烯基-C1-10烷基、芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基、或杂芳基-C1-10烷基；La为-C(O)-、-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc、-NRc-C(O)-、-NRc-C(O)-NRd-、-NRc-C(O)-O-、-O-C(O)-NRc-、-S(O)m-、-SO2-NRc-、-NRc-SO2-、-O-、-NRc-或键(m、Rc和Rd如上定义)；并且Z2为环烷基、环烷基-C1-10烷基、环烯基、环烯基-C1-10烷基、芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基或键。在一个具体实施方式
中，Z1为环烷基、环烷基-C1-10烷基、芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基或杂芳基-C1-10烷基；La为-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc、-NRc-C(O)-、-S(O)2、-SO2-NRc-、-NRc-SO2-、-O-、-NRc-或键；并且Z2为芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基或键。在一个具体实施方式
中，Z1为芳基、芳基-C1-5烷基、杂环基、杂环基-C1-5烷基、杂芳基或杂芳基-C1-5烷基；La为-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc、-NRc-C(O)-、-SO2-或键；并且Z2为杂环基、杂环基-C1-5烷基或键。在一个具体实施方式
中，Z1为未取代的或由Cy、-C(O)-Rd、卤素、氧代、芳基取代的链烯基取代的苯基；La为-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc、-NRc-C(O)-或-SO2-；并且Z2为杂环基或键。
在一个
具体实施例方式
中，本发明化合物包含聚式(ii)结构的R1 其中R9为C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、Cy、Cy-C1-10烷基、Cy-C2-10链烯基或Cy-C2-10链炔基；R10和R11各独立地为氢、烷基、链烯基或链炔基、环烷基、环烯基或芳基取代的烷基；并且R12为H、C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、芳基、芳基-C1-10烷基、杂芳基或杂芳基-C1-10烷基。Cy具有如上所述相同的定义。烷基、链烯基和链炔基各为未取代的或由1-4个独立地选自Ra的取代基取代的，并且芳基和杂芳基为未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的。Ra和Rb如上定义。注意，R11、R12和它们所连接的碳原子一起不形成或形成包含0-2个选自N、O和S杂原子的3-7元单环或二环。
在一个
具体实施例方式
中，本发明化合物包含具有式(iii)结构的R1 其中R14为C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、Cy、Cy-C1-10烷基、Cy-C2-10链烯基或Cy-C2-10链炔基；R15为H、C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、芳基、芳基-C1-10烷基、杂芳基或杂芳基-C1-10烷基；R16、R17和R18各独立地为H、C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、Cy、Cy-C1-10烷基、Cy-C2-10链烯基、Cy-C2-10链炔基或选自Ra的基团。Cy具有上述相同的含义(即Cy代表环烷基、杂环基、芳基或杂芳基)是未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基或一个下列基团取代的-NRc-C(O)NRcSO2Rd、-NRcS(O)mRd、-OS(O)2ORc或-OP(O)(ORc)2。Rb如上定义。当与公用环原子连接时，R16、R17和R18中的两个与共用环原子一起不形成或形成包含0-3个选自N、O或S杂原子的5-7元饱和或不饱和单环。当与两个毗邻的环原子连接时，R16、R17和R18中的两个与这两个环原子一起不形成或形成包含0-3个选自N、O或S杂原子的5-7元饱和或不饱和单环。下式环代表3-7元饱和的或不饱和的杂环基或杂芳基 其中Z、A、B1和B2各独立地为键、-C-、-C-C-、-C＝C-、选自N、O和S的杂原子或-S(O)m-(m为0、1或2)。Y7为-C(O)-、-C(O)O-、-C(O)-NRc-、-S(O)2-、-P(O)(ORc)或-C(O)-C(O)-。Rc具有如上所述相同的含义。烷基、链烯基和链炔基各为未取代的或由1-4个独立地选自Ra的取代基取代的，并且每个Cy为未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的。Ra和Rb如上定义。在一个具体实施方式
中，上述式(iii)中的环 代表氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、咪唑、吡唑、三唑、吡啶、哌啶、吡嗪、哌嗪、嘧啶、噁唑、噻唑或吗啉。在一个具体实施方式
中，所述环代表氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、咪唑、哌啶或吗啉。在一个具体实施方式
中，所述环代表吡咯烷。在一个具体实施方式
中，R15为H或C1-5烷基。在一个具体实施方式
中，R16、R17和R18各独立地为H、C1-10烷基、Cy、-ORc、-卤素、-S(O)mRc、-NRcRd、-NRcC(O)Rd、-NRcC(O)ORd、-NRcC(O)NRdRe或氧代(Rc、Rd、Re和m各如上定义)。在一个具体实施方式
中，Y7为-O-C(O)-、-C(O)-O-或-SO2-(例如Y7为-SO2-)。在一个具体实施方式
中，R14为Cy或Cy-C1-5烷基(例如R14为苯基)。
在一个
具体实施例方式
中，本发明化合物包含具有2-4个(例如2或3个)碳原子的L′。
在一个
具体实施例方式
中，L′为式(iv) 其中Y1为-C(O)-、-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-、-NRc-C(O)-NRd-、-NRc-C(O)-O-、-OC(O)-NRc-、-S(O)m-、-S(O)2-NRc-、-NRc-S(O)2-、-NRc-C(NRm)-、-O-或-NRc-(Rc、Rd、Rm和m各如上定义)；R2为H、C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、Cy、Cy-C1-10烷基、Cy-C1-10链烯基、或Cy-C1-10链炔基；Y2为键或-C(Rh)(Rj)-，其中Rh和Rj各独立地选自H、C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、芳基、芳基-C1-10烷基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基，并且Rh和Rj与它们所连接的碳原子一起形成含0-2个选自N、O和S杂原子的3-7元环；X为-C(O)ORc、-P(O)(ORc)(ORd)、-P(O)(Rc)(ORd)、-S(O)mORc、-C(O)NRcRj或-5-四唑基。m如上定义。所述各烷基、链烯基和链炔基为未取代的或由1-4个独立地选自Ra的取代基取代的；各芳基和杂芳基为未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的。并且Cy为环烷基、杂环基、芳基或杂芳基。Ra和Rb如上定义。注意，Y2不为键，X为-COOH、-COO-C1-4烷基、P(O)(OH)2、-P(O)(OH)(O-C1-4烷基)、-P(O)(C1-4烷基)2、-P(O)(OH)(C1-4烷基)、-P(O)(O-C1-4烷基)(C1-4烷基)、-SO2-C1-4烷基、-CO-NH2、-CO-NH(C1-4烷基)、-CO-N(C1-4烷基)2或-5-四唑基。在一个具体实施方式
中，Y1为-NRc-C(O)-、-NRc-、-NRc-S(O)2-或-NRc-C(NRm)-。在一个具体实施方式
中，Y1为-NRc-C(O)-(例如-NH-CO-或-N(C1-4烷基)-CO-；其中羰基与R1连接)。在一个具体实施方式
中，R2为H或C1-5烷基。在一个具体实施方式
中，R2为H。在一个具体实施方式
中，Y2为键或-C(Rh)(Rj)-，其中Rh和Rj各独立地选自H或C1-5烷基。在一个具体实施方式
中，Y2为键或-CH2-。在一个具体实施方式
中，X为-C(O)ORc(例如-COOH或-COO-C1-5烷基如-COO-CH3或-COO-CH2CH3)或-C(O)NRcRj-。在一个具体实施方式
中，Y1为-NRc-C(O)-(例如-NH-CO-)；R2为H或C1-5烷基(例如H)；Y2为键或-CH2-(例如键)；并且X为-C(O)ORc，其中Rc独立地为H或C1-5烷基。
在一个
具体实施例方式
中，本发明化合物包含具有4-10个(例如4-8或4-6个)碳原子的L。
在一个
具体实施例方式
中，L为式(v) 其中Y3为键、C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、芳基、芳基-C1-10烷基、杂芳基或杂芳基-C1-10烷基；并且，Y4为键、-C(O)-、-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-、-NRc-C(O)-NRd-、-NRc-C(O)-O-、-OC(O)-NRc-、-S(O)m-、-S(O)2-NRc-、-NRc-S(O)2-、-NRc-C(NRd)-、-O-或-NRc-(Rc、Rd和m各如上定义)。各烷基、链烯基和链炔基不含或含(间隔或末端连接到)1-4个独立地选自N、O、S和-S(O)m-的杂原子；并且各烷基、链烯基和链炔基为未取代的或由1-4个独立地选自Ra的取代基取代的；各芳基和杂芳基为未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的。Ra、Rb、Rc和Rd和m如上定义。注意，Y3和Y4不同时为键。在一个具体实施方式
中，Y3为键、C1-5烷基或C1-5链烯基(例如、Y3为键或C1-5烷基)；并且Y4为键、-C(O)-NRc-、-C(O)-、-NRc-或-O-，其中Rc为H或C1-5烷基(例如Y4为-C(O)-NH-)。
在一个
具体实施例方式
中，本发明化合物包含具有式Z3-Lb-Z4-结构的R3，其中Z3为Cy、Cy-C1-10烷基、Cy-C1-10链烯基或Cy-C1-10链炔基；Lb为-C(O)-、-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-、-NRc-C(O)-NRd-、-NRc-C(O)-O-、-O-C(O)-NRc-、-S(O)m-、-SO2-NRc-、-NRc-SO2-、-O-、-NRc-或键(Rc、Rd和m如上定义)；并且Z4为环烷基、环烷基-C1-10烷基、环烯基、环烯基-C1-10烷基、芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基或键；或者，R3为式(i)部分 m、Rc、Rd、R4、R5、R6和Y5各如权利要求1中定义。在一个具体实施方式
中，R4为式Z5-Lc-Z6-，其中Z5为Cy、Cy-C1-10烷基、Cy-C1-10链烯基或Cy-C1-10链炔基；Lc为-C(O)-、-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-、-NRc-C(O)-NRd-、-NRc-C(O)-O-、-O-C(O)-NRc-、-S(O)m-、-SO2-NRc-、-NRc-SO2-、-O-、-NRc-或键；并且Z6为环烷基、环烷基-C1-10烷基、环烯基、环烯基-C1-10烷基、芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基或键。Rc、Rd和m如上定义。在一个具体实施方式
中，Z3和Z5各独立地为芳基、芳基-C1-10烷基、芳基-C1-10链烯基、芳基-C1-10链炔基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基、杂芳基-C1-10链烯基或杂芳基-C1-10链炔基；Lb和Lc各独立地为-C(O)-、-S(O)m-、-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-、-NRc-C(O)-NRd-、-SO2-NRc-、-NRc-SO2-、-O-、-NRc-或键；并且Z4和Z6各独立地为芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基或键。在一个具体实施方式
中，Z3和Z5各独立地为芳基、芳基-C1-10烷基、杂芳基或杂芳基-C1-10烷基；Lb和Lc各独立地为-C(O)-、-S(O)2-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-或-NRc-C(O)-NRd-；其中，Rc和Rd各独立地为H或C1-5烷基；并且Z4和Z6各独立地为芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基或键。在一个具体实施方式
中，Z3和Z5各独立地为芳基(例如苯基或萘基)；Lb和Lc各独立地为-NRc-C(O)-NRd-(例如-NH-CO-NH-、-N(甲基)-CO-NH-或-NH-CO-N(甲基)-)；并且Z4和Z6各独立地为芳基(例如苯基或萘基)。在一个具体实施方式
中，Y5为-CO-或-O-CO-(例如-CO-)。在一个具体实施方式
中，R5为H或C1-5烷基(例如H、甲基或乙基)。在一个具体实施方式
中，R6为选自环己基丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、别-异亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、苯丙氨酸、苯甘氨酸、丙氨酸、正缬氨酸、缬氨酸和2-氨基丁酸的氨基酸侧链。在一个具体实施方式
中，R6为选自亮氨酸、异亮氨酸、别-异亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、丙氨酸、正缬氨酸、缬氨酸和2-氨基丁酸的氨基酸侧链。在一个具体实施方式
中，R6为亮氨酸或异亮氨酸侧链。
在一个
具体实施例方式
中，式(I)化合物包含具有式Z1-La-Z2-结构的R1，其中Z1为未取代的或由Cy、-CO-Rd、卤素、氧代或芳基取代的链烯基取代的芳基(例如苯基)；La为-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-或-SO2-(例如-SO2-)；并且Z2为键、杂芳基、杂环基(例如氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、咪唑、哌啶或吗啉)；具有上述式(iv)结构的L′，其中Y1为-NRc-C(O)-、-NRc-、-NRc-S(O)2-或-NRc-C(NRd)-；R2为H或C1-5烷基；Y2为键或-C(Rh)(Ri)-；并且X为-C(O)ORc；其中Rc、Rh和R1各独立地为H或C1-5烷基(例如Y1为-NH-C(O)-)；R2为H；Y2为键；并且X为-C(O)OH；具有上述式(v)结构的L，其中Y3为键、C1-5烷基或C1-5链烯基；并且Y4为键、-C(O)-NRc-、-C(O)-、-NRc-或-O-，其中Rc-为H或C1-5烷基(例如Y3为键或C1-5烷基并且Y4为-C(O)-NH-)；和具有上述式Z3-Lb-Z4-或式(i)结构的R3。当R3具有式(i)结构时，R4为Z5-Lc-Z6-，其中R5为芳基、芳基-C1-10烷基、芳基-C1-10链烯基、芳基-C1-10链炔基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基、杂芳基-C1-10链烯基或杂芳基-C1-10链炔基；Lc为-C(O)-、-S(O)m-、-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-、-NRc-C(O)-NRd-、-S(O)2-NRc-、-NRc-S(O)2-、-O-、-NRc-或键，Rc和Rd各独立地为H或C1-5烷基；并且Z6为芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基或键。在一个具体实施方式
中，Z5为芳基(例如苯基或萘基)；Lc为-NRc-C(O)-NRd-(例如-NH-CO-NH-或-NH-CO-N(甲基)-)；并且Z6为芳基(例如苯基或萘基)。在一个具体实施方式
中，R4为邻-甲基苯基-脲基-苯基-CH2-。在一个具体实施方式
中，Y5为-CO-或-O-CO-(例如-CO-)。在一个具体实施方式
中，R5为H或C1-2烷基。在一个具体实施方式
中，R6为选自亮氨酸、异亮氨酸、别-异亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、丙氨酸、正缬氨酸、缬氨酸和2-氨基丁酸的氨基酸侧链(例如亮氨酸或异亮氨酸)。
在一个
具体实施例方式
中，式(I)化合物包含具有上述式(ii)结构的R1，其中R9为C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、Cy、Cy-C1-10烷基、Cy-C1-10链烯基或Cy-C1-10链炔基(例如芳基或杂芳基)；R10和R11各独立地为氢、芳基、烷基、链烯基或链炔基、环烷基、环烯基或芳基取代的烷基(例如H、烷基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基)；并且R12为H、C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、芳基、芳基-C1-10烷基、杂芳基或杂芳基-C1-10烷基(例如H、烷基、链烯基、链炔基、杂环基或芳基)。Cy具有上述相同的定义。各烷基、链烯基和链炔基为未取代的或由1-4个独立地选自Ra的取代基取代的，并且芳基和杂芳基为未取代的或由1-4个独立地选自Rb(例如卤素)的取代基取代的。Ra和Rb如上定义。注意，R11、R12和它们所连接的碳原子一起不形成或形成包含0-2个选自N、O和S杂原子的3-7元单环或二环。在该具体实施方式
中，所述化合物也包含具有上述式(iv)结构的L′，其中Y1为-NRc-C(O)-、-NRc-、-NRc-S(O)2-或-NRc-C(NRd)-；R2为H或C1-5烷基；Y2为键或-C(Rh)(Ri)-；并且X为-C(O)ORc；其中Rc、Rh和RI各独立地为H或C1-5烷基(例如Y1为-NH-C(O)-)；R2为H；Y2为键；并且X为-C(O)OH；具有上述式(v)结构的L，其中Y3为键、C1-5烷基或C1-5链烯基；并且Y4为键、-C(O)-NRc-、-C(O)-、-NRc-或-O-，其中Rc-为H或C1-5烷基(例如Y3为键或C1-5烷基并且Y4为-C(O)-NH-)；和具有上述式Z3-Lb-Z4-或式(i)结构的R3。当R3具有式(i)结构时，R4为Z5-Lc-Z6-，其中R5为芳基、芳基-C1-10烷基、芳基-C1-10链烯基、芳基-C1-10链炔基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基、杂芳基-C1-10链烯基或杂芳基-C1-10链炔基；Lc为-C(O)-、-S(O)m-、-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-、-NRc-C(O)-NRd-、-S(O)2-NRc-、-NRc-S(O)2-、-O-、-NRc-或键，Rc和Rd各独立地为H或C1-5烷基；并且Z6为芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基或键。在一个具体实施方式
中，Z5为芳基(例如苯基或萘基)；Lc为-NRc-C(O)-NRd-(例如-NH-CO-NH-或-NH-CO-N(甲基)-)；并且Z6为芳基(例如苯基或萘基)。在一个具体实施方式
中，R4为邻-甲基苯基-脲基-苯基-CH2-。在一个具体实施方式
中，Y5为-CO-或-O-CO-(例如-CO-)。在一个具体实施方式
中，R5为H或C1-2烷基。在一个具体实施方式
中，R6为选自亮氨酸、异亮氨酸、别-异亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、丙氨酸、正缬氨酸、缬氨酸和2-氨基丁酸的氨基酸例链(例如亮氨酸或异亮氨酸)。
在一个
具体实施例方式
中，式(I)化合物包含具有上述式(iii)结构的R1，其中R14为Cy或Cy-C1-5烷基(例如R14为苯基)；R15为H或C1-5烷基；R16、R17和R18各独立地为H、C1-10烷基、Cy、-ORc、卤素、-S(O)mRc、NRcRd、-NRcC(O)Rd、-NRcC(O)ORd、-NRcC(O)NRdRe或氧代(当与两个毗邻的环原子连接时，R16、R17和R18中的两个与这两个环原子一起不形成或形成5-7元环烷基、杂环基、芳基或杂芳基)；环 代表氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、咪唑、哌啶或吗啉(例如吡咯烷)；Y7为-O-C(O)-、-C(O)-O-或-SO2-(例如Y7为-SO2-)。所述化合物也包含具有上述式(iv)结构的L′，其中Y1为-NRc-C(O)-、-NRc-、-NRc-S(O)2-或-NRc-C(NRd)-；R2为H或C1-5烷基；Y2为键或-C(Rh)(Ri)-；并且X为-C(O)ORc；其中Rc、Rh和RI各独立地为H或C1-5烷基(例如Y1为-NH-C(O)-)；R2为H；Y2为键；并且X为-C(O)OH；具有上述式(v)结构的L，其中Y3为键、C1-5烷基或C1-5链烯基；并且Y4为键、-C(O)-NRc-、-C(O)-、-NRc-或-O-，其中Rc为H或C1-5烷基(例如Y3为键或C1-5烷基并且Y4为-C(O)-NH-)；和具有上述式Z3-Lb-Z4-或式(i)结构的R3。当R3是式(i)结构时，R4为Z5-Lc-Z6-，其中R5为芳基、芳基-C1-10烷基、芳基-C1-10链烯基、芳基-C1-10链炔基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基、杂芳基-C1-10链烯基或杂芳基-C1-10链炔基；Lc为-C(O)-、-S(O)m-、-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-、-NRc-C(O)-NRd-、-S(O)2-NRc-、-NRc-S(O)2-、-O-、-NRc-或键，Rc和Rd各独立地为H或C1-5烷基；并且Z6为芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基或键。在一个具体实施方式
中，Z5为芳基(例如苯基或萘基)；Lc为-NRc-C(O)-NRd-(例如-NH-CO-NH-或-NH-CO-N(甲基)-)；并且Z6为芳基(例如苯基或萘基)。在一个具体实施方式
中，R4为邻-甲基苯基-脲基-苯基-CH2-。在一个具体实施方式
中，Y5为-CO-或-O-CO-(例如-CO-)。在一个具体实施方式
中，R5为H或C1-2烷基。在一个具体实施方式
中，R6为选自亮氨酸、异亮氨酸、别-异亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、丙氨酸、正缬氨酸、缬氨酸和2-氨基丁酸(例如亮氨酸或异亮氨酸)的氨基酸侧链。
在一个
具体实施例方式
中，本发明化合物为式(I)化合物，其中R1为芳基或杂环基-SO2-芳基(例如未取代的或由烷基或卤素如氯、溴或碘取代的吡咯烷-SO2-苯基)；具有上述式(iv)结构的L′，其中Y1为-NH-CO-、-NH-或-NH-C(NRm)-NH-，R2为H，Y2为键或-CH2-，并且X为-COOH；具有上述式(v)结构的L，其中Y3为-(CH2)0-5-，并且Y4为-CO-NH-；并且R3为邻-甲基苯基-脲基-苯基-CH2-或具有上述式(i)结构，其中R4为邻-甲基苯基-脲基-苯基-CH2-，Y5为-CO-或-O-CO-(例如-CO-)，R5为H或甲基，并且R6为亮氨酸或异亮氨酸侧链。
在一个
具体实施例方式
中，本发明化合物包含作为连接基部分的L′和L，优选地由连接R1和R3并且允许R1和R3与VLA-4分子相互作用，优选结合的含C、O、S或N原子的链组成。
在一个
具体实施例方式
中，本发明化合物具有两个位于末端的式Zα-Lα-Zβ部分。Zα和Zβ各独立地为未取代的或由Cy取代的，并且Lα为键或连接Zα和Zβ的连接基部分并且可包含-C(O)-、-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-、-NRc-C(O)-NRd-、-NRc-C(O)-O-、-O-C(O)-NRc-、-S(O)m-、-S(O)2-NRc-、-NRc-S(O)2-、-NRc-C(NRd)-、-O-或-NRc-。“位于末端的”是指通过单价连接到所述分子剩余部分的部分。
在一个
具体实施例方式
中，本发明化合物具有5nM或更低，2nM或更低，1nM或更低，0.5nM或更低的IC50。IC50值可通过下文所述结合试验测定或其它已知的常规方法测定。在一个具体实施方式
中，本发明化合物与Mn激活形式的VLA-4分子的结合％为50％或更高，75％或更高，90％或更高或者95％或更高。在一个具体实施方式
中，本发明化合物与Ca/Mg激活形式的VLA-4分子的结合％为50％或更高，75％或更高，90％或更高或者95％或更高。与VLA-4分子的结合％可通过下文所述的生物学测定方法测定。
在一个
具体实施例方式
中，本发明化合物为式(II)化合物 其中R1、Y1、Y2、X、Y3、Y4和R3各如上定义。
在一个
具体实施例方式
中，本发明化合物为式(III)化合物 R21和R22各独立地为Cy、-ORc、-NO2、-卤素、-S(O)mRc、-SRc、-S(O)2ORc、-S(O)2NRcRd、-NRcRd、-O(CReRf)nNRcRd、-C(O)Rd、-CO2Rc、-CO2(CReRf)nCONRcRd、-OC(O)Rc、-CN、-C(O)NRcRd、-NRcC(O)Rd、-OC(O)NRcRd、-NRcC(O)ORd、-RcC(O)NRdRe、-CRc(NORd)、-CF3、-OCF3、氧代、C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、芳基-C1-10烷基或杂芳基-C1-10烷基；其中R21和R22的各烷基、链烯基、链炔基、芳基、杂芳基为未取代的或由独立地选自Rg的取代基取代的。R23为H、C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、芳基、芳基-C1-10烷基、杂芳基或杂芳基-C1-10烷基；其中，R23的各烷基、链烯基和链炔基为未取代的或由1-4个独立地选自Ra的取代基取代的，并且芳基和杂芳基为未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的。Ra、Rb和Rg如上定义。
在一个
具体实施例方式
中，本发明化合物为式(IV)化合物 其中R1、Y1、R2、Y2、X、Y3、Y4和R3各如上定义。
在一个
具体实施例方式
中，本发明化合物为式(V)化合物 其中R1、Y1、Y2、X、Y3、Y4、R6、R5、Y5和R4如上定义。
在一个
具体实施例方式
中，本发明化合物为式(VI)化合物 其中R1、X、Y3、Y4、R6、R5和R4如上定义。
在一个
具体实施例方式
中，本发明化合物为式(VII)化合物 其中R1、X、Y3、R6、R5和R4如上定义。
下文描述的是本发明化合物的一些实施例。为方便起见，式“N(R5)-CH(R6)”中的氮原子和碳原子代表所表示的氨基酸的α-氮原子和α-碳原子。例如“Leu”表示R5为H并且R6为异丁基。

本发明另一方面涉及一种或多种上述抑制剂或其盐在生产治疗上述疾病的药物中的用途。
本发明另一方面还涉及包含可药用载体和有效量上述式(I)化合物的组合物。
本发明另一方面还涉及抑制VLA-4依赖性细胞粘合的方法，该方法包括给予需要治疗的患者服用有效量的上述式(I)化合物。
本发明化合物拮抗VLA4作用的能力使得它们可用于预防、治疗或逆转由VLA4与其配体结合引起的症状、障碍和疾病。这样，这些拮抗剂将抑制细胞粘合过程包括细胞激活、迁移、增殖和分化。因此，本发明另一方面提供治疗、预防、减轻或抑制由VLA4途径介导的疾病或病症。例如，所述疾病和病症包括哮喘、多发性硬化、变应性鼻炎、过敏性结膜炎、炎性肺疾病、类风湿性关节炎、脓毒性关节炎、I型糖尿病、器官移植排斥、炎性肠疾病等等。
本发明化合物包含一个或多个不对称中心并因此可以以外消旋体和外消旋混合物、单一的对映体、非对映体混合物和单独的非对映体形式存在。本发明是指包括本发明化合物的所有所述异构体形式。
所要求保护的本发明也是指包括式I化合物的可药用盐。术语“可药用盐”是指由可药用无毒碱或酸包括无机或有机碱和无机或有机酸制备的盐。得自无机碱的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。特别优选的是铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。
得自可药用有机无毒碱的盐包括伯、仲和叔胺，取代的胺包括天然存在的取代胺、环胺和碱性离子交换树脂如精氨酸、甜菜碱、咖啡碱、胆碱、N，N′-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基-吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、壳糖胺、组氨酸、羟基胺(hydrabamine)、isopropyulamine、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨基三丁醇等的盐。
当本发明化合物为碱性时，可用药用无毒酸包括无机酸和有机酸制备盐。所述酸包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙基磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、杏仁酸、甲磺酸、粘液酸、硝酸、双羟萘酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对-甲苯磺酸等。特别优选的是柠檬酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸和酒石酸。
本文单独或联合使用的术语“烷基”是指包含1-10，优选1-6并且更优选1-4个碳原子的直链和支链烷基。所述基团的实例包括但不限制于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基、癸基等。
单独或联合使用的术语“链烯基”是指包含2-10，优选2-6并且更优选2-4个碳原子的直链和支链链烯基。所述基团的实例包括但不限制于乙烯基、E-和Z-丙烯基、异丙烯基、E-和Z-丁烯基、E-和Z-异丁烯基、E-和Z-戊烯基、癸烯基等。
单独或联合使用的术语“链炔基”是指包含2-10，优选2-6并且更优选2-4个碳原子的直链和支链链烯基。所述基团的实例包括但不限制于乙炔基、丙炔基、炔丙基、丁炔基、己炔基、癸烯基等。
术语“烃连接基部分”是指可包含一个或多个双键或三键的亚烷基部分。例如，L可以是由酰胺键(-NH-CO-)间隔或在末端连接到该酰胺键上的3-甲基辛烯(即包含8个碳原子的直链)。
单独或联合使用的术语“环烷基”是指包含3-8，优选3-6个碳原子的环状烷基。所述环烷基的实例包括但不限制于环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。
单独或联合使用的术语“环烯基”是指包含4-8，优选4-6个碳原子和一个或多个双键的环状碳环。所述环烯基的实例包括但不限制于环戊烯基、环己烯基、环戊二烯基等。
术语“芳基”是指选自苯基、萘基、茚基、二氢化茚基、环戊并环庚五烯基、芴基和蒽基的碳环状芳基；或选自呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、异噁唑基、异噻唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，3-三唑基、1，3，4-噻二唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1，3，5-三嗪基、1，3，5-三噻烷基、吲嗪基、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、二氢吲哚基、苯并[b]呋喃基、2，3-二氢苯并呋喃基、苯并[b]苯硫基、1H-吲唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、2，3-二氮杂萘基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-萘啶基、蝶啶基、咔唑基基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基和吩卓嗪基的杂环芳基。
本申请所定义的术语“芳基”各自可包含1-3个取代基，所述取代基独立地选自氢、卤素、羟基、氨基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、烷基、链烯基、链炔基、氰基、羧基、烷氧羰基、Ar′-取代的烷基、Ar′-取代的链烯基或链炔基、1，2-二氧亚甲基、1，2-二氧亚乙基、烷氧基、烯氧基或炔氧基、Ar′-取代的烷氧基、Ar′-取代的烯氧基或炔氧基、烷基氨基、链烯基氨基或链炔基氨基、Ar′-取代的烷基氨基、Ar′-取代的链烯基氨基或链炔基氨基、Ar′-取代的羧基(carbonyloxy)、烷基羧基、脂族或芳族酰基、Ar′-取代的酰基、Ar′-取代的烷基羧基、Ar′-取代的羰基氨基Ar′-取代的氨基、Ar′-取代的氧基、Ar′-取代的羰基、烷基羰基氨基、Ar′-取代的烷基羰基氨基、烷氧基羰基氨基、Ar′-取代的烷氧基羰基氨基、Ar′-氧基羰基氨基、烷基磺酰基氨基、一或二-(Ar′-磺酰基)氨基、Ar′-取代的烷基磺酰基氨基、吗啉羰基氨基、硫代吗啉羰基氨基、N-烷基胍基、N-Ar′-胍基、N-N-(Ar′，烷基)胍基、N，N-(Ar′，Ar′)胍基、N，N-二烷基胍基、N，N，N-三烷基胍基、N-烷基脲、N，N-二烷基脲、N-Ar′脲、N，N-(Ar′，烷基)脲和N，N-(At′)2脲；其中“Ar′”为上述具有1-3个选自下列取代基的碳环芳基或杂环芳基，所述取代基选自氢、卤素、羟基、氨基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、烷基、链烯基、链炔基、1，2-二氧亚甲基、1，2-二氧亚乙基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、烷基氨基、链烯基氨基或链炔基氨基、烷基羧基、脂族或芳族酰基、烷基羰基氨基、烷氧基羰基氨基、烷基磺酰基氨基、N-烷基或N，N-二烷基脲。
单独或联合使用的术语“烷氧基”是指烷基醚基，其中术语“烷基”如上定义。适宜的烷基醚基的实例包括但不限制于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。
单独或联合使用的术语“烯氧基”是指具有链烯基-O-通式结构的基团，其中术语“链烯基”如上定义，前提条件是所述基团不是烯醇醚。适宜的烯氧基的实例包括但不限制于烯丙氧基、E-和Z-3-甲基-2-丙烯氧基等。单独或联合使用的术语“炔氧基”是指具有式链炔基-O-结构的基团，其中术语“链炔基”如上定义，前提条件是所述基团不是炔醇醚。适宜的炔氧基的实例包括但不限制于丙炔氧基、2-丁炔氧基等。
术语“硫代烷氧基”是指具有式烷基-S-结构的硫代醚基团，其中烷基如上定义。
单独或联合使用的术语“烷基氨基”是指一-或二-烷基取代的氨基(即具有式烷基-NH-或(烷基)2-NH-结构的基团)，其中术语“烷基”如上定义。适宜的烷基氨基的实例包括但不限制于甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、异丙基氨基、叔丁基氨基、N，N-二乙基氨基等。
单独或联合使用的术语“链烯基氨基”是指具有式链烯基-NH-或(链烯基)2-N-结构的基团，其中术语“链烯基”如上定义。前提条件是所述基团不是烯胺。所述链烯基氨基的实例为烯丙基氨基。
单独或联合使用的术语“链炔基氨基”是指具有式链炔基-NH-或(链炔基)2-N-结构的基团，其中术语“链炔基”如上定义。前提条件是所述基团不是炔胺。所述链炔基氨基的实例为丙炔基氨基。
单独或联合使用的术语“芳氧基”是指具有式芳基-O-结构的基团，其中芳基如上定义。芳氧基的实例包括但不限制于苯氧基、萘氧基、吡啶氧基等。
单独或联合使用的术语“芳基氨基”是指具有式芳基-NH-结构的基团，其中芳基如上定义。芳基氨基的实例包括但不限制于苯基氨基(anilido)、萘基氨基、2-3-和4-吡啶基氨基等。
单独或联合使用的术语“二芳基”是指式芳基-芳基-基团，其中，术语“芳基”如上定义。
单独或联合使用的术语“硫代芳基”是指具有式芳基-S-结构的基团，其中术语“芳基”如上定义。硫代芳基的实例为硫苯基。
单独或联合使用的术语“芳基稠合的环烷基”是指与芳基共用两个毗邻原子环烷基，其中术语“环烷基”和“芳基”如上定义。芳基稠合的环烷基的实例为苯并环丁基。
单独或联合使用的术语“脂族酰基”是指具有由链烷烃-、链烯烃-或链炔烃羧酸衍生的式烷基-CO-、链烯基-CO-和链炔基-CO-结构的基团，其中术语“烷基”、“链烯基”和“链炔基”如上定义。所述脂族酰基的实例包括但不限制于乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、4-甲基戊酰基、丙烯酰基、巴豆基、丙炔酰基、甲基丙炔酰基等。
单独或联合使用的术语“芳族酰基”是指具有式芳基-CO-结构的基团，其中术语“芳基”如上定义。适宜的芳族酰基的实例包括但不限制于苯甲酰基、4-卤代苯甲酰基、4-羧基苯甲酰基、萘甲酰基、吡啶基羰基等。
单独或与其它术语联合使用的术语“吗啉羰基”和“硫代吗啉羰基”分别是指N-羰基化吗啉基和N-羰基化硫代吗啉基。
单独或联合使用的术语“烷基羰基氨基”是指具有式烷基-CONH结构的基团，其中术语“烷基”如上定义。
单独或联合使用的术语“烷氧基羰基氨基”是指具有式烷基-OCONH结构的基团，其中术语“烷基”如上定义。
单独或联合使用的术语“芳基磺酰基氨基”是指具有式芳基-SO2-NH结构的基团，其中术语“芳基”如上定义。
单独或联合使用的术语“N-烷基脲”是指具有式烷基-NH-CO-NH结构的基团，其中术语“烷基”如上定义单独或联合使用的术语“N-芳基脲”是指具有式芳基-NH-CO-NH结构的基团，其中术语“芳基”如上定义术语“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
术语“离去基团”通常是指容易被亲核试剂如胺，和醇或硫醇亲核试剂替换的基团。所述离去基团是公知的并且包括羧酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基苯并三唑、卤素(卤化物)、三氟甲磺酸根、甲苯磺酸根、甲磺酸根、烷氧基、硫代烷氧基。
术语“激活的适当保护α-氨基酸衍生物”和“激活的取代苯乙酸衍生物”是指相应的酰基卤(例如酰基氟、酰基氯和酰基溴)、相应的激活酯(例如硝基苯的酯、1-羟基苯并三唑的酯、HOBT、或羟基琥珀酰亚胺的酯、HOSu)和本领域范围内的其它常规衍生物。
在本申请中所使用的术语“患者”是指哺乳动物包括人。并且术语“细胞”是指哺乳动物的细胞，包括人的细胞。
从上述定义，本领域技术人员可以很容易地理解本申请中所使用的其它化学术语。术语可以单独或以其任何组合使用。基团中优选的和更优选的基团链长度适用于所有这些组合。
本发明的其它特征和优点体现在下列几个具体实施方式
的详细描述和权利要求中。
发明详述本发明化合物可利用任何常规技术合成，本文举例说明其中的几种。优选地，这些化合物是通过化学方法，由容易获得的起始物质，如α-氨基酸及其功能等价物合成的。用于合成这些化合物的模型法和汇集法也是优选的。例如，在汇集法中，终产物的大分段在合成的最后阶段产生，而不是通过在生长的分子链上一小段一小段逐渐增加的方法。
在一个
具体实施例方式
中，本发明化合物R3-L-L′-R1可表示为R3-Y4-Y3-CH(X)-Y1-R1。该化合物可看作二肽衍生物其中R1为氨基酸残基或其衍生物；Y1为两个残基之间的酰胺键或其衍生物；X为羧酸根或其衍生物；C为第二个残基的α-碳原子；并且R3-Y4-Y3-为第二个残基的侧链。
在下文所描述的一般方法中，化合物R3-Y4-Y3-CH(X)-Y1-R1可通过首先将适当保护的Y4′-Y3-CH(X)-Y1′与适当保护的R3′偶联制备。Y3和X如上定义。Y4′、Y1′和R3′分别为Y4、Y1和R3的前体。
式Y4′-Y3-CH(X)-Y1′化合物可通过商业渠道获得或者可通过本领域普通技术人员已知的方法制备。例如，如果Y1′为氨基；X为羧酸根；并且Y4′-Y3-为NH2-(CH2)3-那么，化合物Y4′-Y3-CH(X)-Y1′为鸟氨酸。另外例如，如果Y1′为氨基；X为羧酸根并且Y4′-Y3-为4-NH2-苯基-CH2-，那么，化合物Y4′-Y3-CH(X)-Y1′为4-氨基苯丙氨酸，可通过还原市售产物4-硝基苯丙氨酸获得。进一步还原苯基部分得到其中Y1′为氨基，X为羧酸根；并且Y4′-Y3-为4-NH2-环己基-CH2-，或4-氨基环己基丙氨酸的化合物，可通过商业渠道获得其顺式和反式异构体混合物。如上所述，需要适宜的保护基来防止某些官能团进行不需要的反应。以鸟氨酸为例，Y1′和X是第一步偶联反应中不涉及的官能团，并且应该用通用的氨基保护基如氨基甲酸酯(如氨基甲酸叔丁基酯(BOC)和氨基甲酸苄基酯(CBZ))和通用的羧基保护基如取代的酯(例如乙酯和甲氧基甲酯)保护。更适宜的保护基参见T.W.Greene，ProtectingGroups in Organic Synthesis，John Wiley & sons，New York，1981及其所引用的参考。
化合物R3′可用式Z3-Lb-Z4-T或R4-Y5-N(R5)-CH(R6)-T′表示。T和T′各为与Y4′连接形成Y4的官能团。例如，如果所需要的Y4为酰胺连接键，它可通过将氨基(Y4′)与羧基(T或T′)在通用的偶联剂如苯并三唑-1-基盐基三(二甲基氨基)-膦六氟磷酸盐(BOP)或O-苯并-三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)存在下反应形成。在另一实施例中，通过所需要的Y4为芳基醚，它可通过将酚与醇在二乙基偶氮二羧酸酯(EDAD)和三苯基膦存在下反应形成。
当R3′为式Z3-Lb-Z4-T时，所述化合物可通过商业渠道获得或者可通过本领域普通技术人员已知的方法制备。例如，当Z3为2-甲基苯基；Z4为苯基甲基；Lb为-NH-CO-NH-并且T为-COOH时，R3′为邻-甲基苯基-脲基-苯基乙酸并且可通过将4-氨基苯基乙酸与2-甲基苯基异氰酸酯反应获得。另外例如，当Z3为3-吲哚；Z4为苯基甲基；Lb为-CO-NH-并且T为-COOH时，R3′为3-吲哚甲酰氨基-苯基乙酸并且可通过将4-氨基苯基乙酸与吲哚-3-碳酰氯反应获得。
当R3′为式R4-Y5-N(R5)-CH(R6)-T′时，Y4′-Y3-CH(X)-Y1′可以与NH(R5)-CH(R6)-T′偶联形成中间体NH(R5)-CH(R6)-Y4-Y3-CH(X)-Y1′，然后进一步与R4-Y5′偶联形成R4-Y5-N(R5)-CH(R6)-Y4-Y3-CH(X)-Y1′。Y5′为当进一步进行偶联反应时产生Y5的官能团。注意，化合物NH(R5)-CH(R6)-T′为可通过商业渠道获得的氨基酸衍生物并且可通过本领域普通技术人员已知的方法制备。例如，当T′为羧基；R6为异丁基；并且R5为甲基时，化合物NH(R5)-CH(R6)-T′为N-甲基亮氨酸。R4-Y5′可通过通常使用的合成方法与NH(R5)-CH(R6)-Y4-Y3-CH(X)-Y1′偶联。例如，如果Y5′为羧基，那么所得到的Y5为酰胺键并且可如上所述用一般肽合成试剂制备。在另一例中，如果Y5′为卤化物或磺酸盐，那么所得到的Y5为起始胺酰化得到的仲或叔胺。或者，为形成化合物R4-Y5-N(R5)-CH(R6)-Y4-Y3-CH(X)-Y1′，NH(R5)-CH(R6)-T′可首先与R4-Y5′偶联形成中间体R4-Y5-N(R5)-CH(R6)-T′，然后进一步与Y4′-Y3-CH(X)-Y1′偶联。下文实施例1提供了其中R3-为式R4-Y5-N(R5)-CH(R6)-化合物的详细制备过程。
或者，当R3为式Z3-Lb-Z4-T时，它可以与Y4′-Y3-CH(X)-Y1′反应形成Z3-Lb-Z4-Y4-Y3-CH(X)-Y1。参见实施例2。
然后，终产物R3-Y4-Y3-CH(X)-Y1可通过将R4-Y5-N(R5)-CH(R6)-Y4-Y3-CH(X)-Y1′或Z3-Lb-Z4-Y4-Y3-CH(X)-Y1′与R1′(R1的前体)反应形成。Y1这部分可按类似于Y4的方法形成。 本发明细胞粘合抑制剂可通过常规方法如色谱层析或结晶来纯化。
下文描述的是制备本发明化合物的5种一般方法。一般方法A-固相制备二氨基丙酸盐衍生物 正交Fmoc/Dde保护的Wang树脂(II)将S-N-α-Fmoc-N-β-Dde-二氨基丙酸I(4.95g，10.0mmol)通过与2，6-二氯苯甲酰氯(1.45ml，10.1mmol)和无水吡啶(1.35ml)在40ml无水DMF中反应与Wang树脂(7.88g，0.64mmol/g，100-200目)结合。该混合物在室温下振摇16小时。通过过滤分离树脂并用DMF和二氯甲烷洗涤三次。通过与二氯苯甲酰氯和吡啶(各2ml)反应2小时，然后如上洗涤，将树脂封端。通过哌啶处理和A290测量确定，所得到的树脂包含0.64mmol/g Fmoc。
N-α的脱保护和酰化将二氨基丙酸盐树脂II用20％的哌啶DMF溶液处理15分钟，然后过滤并用DMF和二氯甲烷洗涤。脱保护的树脂立即通过用R1CO2H(2eq)、HATU(2eq)和二异丙基乙胺(4eq)处理进行酰化。将反应物振摇2小时，过滤并重复进行酰化。通过阴性Kaiser试验确定酰化反应完成。过滤树脂并用DMF和二氯甲烷洗涤。如果R1CO2H为Fmoc保护的氨基酸，如上所述重复进行脱保护和酰化。将树脂过滤并用DMF和二氯甲烷洗涤。
N-β的脱保护和酰化将酰化的二氨基丙酸盐树脂III用2％的肼DMF溶液处理1小时，然后过滤并用DMF和二氯甲烷洗涤。脱保护的树脂立即通过用R3CO2H(2eq)、HATU(2eq)和二异丙基乙胺(4eq)处理进行酰化。将反应物振摇2小时，过滤并重复进行酰化。将木树脂过滤并用DMF和二氯甲烷洗涤。
终产物从树脂上裂解将二酰基二氨基丙酸盐树脂IV用95％ TFA、5％水处理1小时。通过过滤除去溶剂并用两小部分TFA洗涤树脂。合并的TFA溶液真空浓缩，所得到的残渣通过反向hplc纯化得到纯的二酰基二氨基丙酸盐衍生物。一般方法B-制备β赖氨酸衍生物 ω-N-Cbz-β-N-BOC-β-高赖氨酸甲酯(II)将ω-N-Cbz-β-N-BOC-β-高赖氨酸I溶解在N，N-二甲基甲酰胺中。向该溶液中加入碳酸氢钠(10eq)，然后在搅拌下加入碘甲烷(6eq)。在室温下搅拌过夜后，反应混合物在水和乙酸乙酯之间分配。有机层用饱和氯化钠溶液洗涤，然后用硫酸钠干燥。硅胶色谱层析(己烷/乙酸乙酯)后，过滤并蒸发溶剂得到酯II。
β-N-BOC-β-高赖氨酸甲酯(III)将N-Cbz氨基甲酸酯II溶解在甲醇中。向该溶液中加入10％披钯碳。用氮冲洗该混合物，然后加入氢(50psi)。搅拌过夜后，用Whatman PTFE滤器除去催化剂并将溶液浓缩得到粗品胺III。
N-ω酰化将胺III(111mg)，2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3，-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU，1.1eq)和R1CO2H(1.1eq)溶解在N，N-二甲基甲酰胺中。向该溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(2.5eq)。搅拌过夜后，该反应用5％柠檬酸水溶液淬灭，然后用乙酸乙酯提取。有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，然后用硫酸钠干燥。过滤并通过旋转蒸发除去溶剂得到不必进一步纯化即可使用的粗品胺IV。
N-β脱保护和酰化将粗品N-BOC氨基甲酸酯IV用通过将氯化氢通入冷(0℃)乙酸乙酯溶液中30分钟制备的饱和氯化氢乙酸乙酯溶液处理。将反应物搅拌1小时，然后浓缩至干得到不必进一步纯化即可使用的粗品胺V。将粗品胺V与R3CO2H(1eq)和HBTU(1.1eq)一起溶解在N，N-二甲基甲酰胺。在搅拌下加入N，N-二异丙基乙胺(7.5eq)。搅拌过夜后，反应物在5％柠檬酸水溶液和乙酸乙酯之间分配。有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤，然后用硫酸钠干燥。过滤干燥剂并蒸发溶剂得到不必纯化即可进一步使用的粗品胺VI。
最后的脱保护将甲酯VI溶解在1∶1四氢呋喃/甲醇中。在搅拌下加入氢氧化锂(2N)。搅拌1小时后，将反应混合物浓缩至干。残渣在1N氯化氢水溶液和乙酸乙酯之间分配，有机层用饱和氯化钠洗涤。用硫酸钠干燥，过滤并蒸发得到粗品酸。通过反向高效液相色谱层析纯化得到纯品酸。一般方法C-固相制备赖氨酸衍生物 Fmoc/Dde赖氨酸Wang树脂(II)将N-α-Fmoc-N-β-Dde-赖氨酸I(5.0g，9.39mmol)通过与2，6-二氯苯甲酰氯(1.33ml，10.1mmol)和无水吡啶(1.27ml)在50ml无水DMF中反应而与Wang树脂(7.34g，0.64mmol/g，100-200目)结合。该混合物在室温下振摇16小时。通过过滤分离树脂并用DMF和二氯甲烷各洗涤三次。通过与二氯苯甲酰氯和吡啶(各2ml)反应2小时，然后如上洗涤，将树脂封端。通过哌啶处理和A290测量确定，所得到的树脂包含0.56mmol/g Fmoc。
N-α的脱保护和酰化将二氨基丙酸盐树脂II用20％的哌啶DMF溶液处理15分钟，然后过滤并用DMF和二氯甲烷洗涤。脱保护的树脂立即通过用R1CO2H(2eq)、HATU(2eq)和二异丙基乙胺(4eq)处理进行酰化。将反应物振摇2小时，过滤并重复进行酰化。通过阴性Kaiser试验确定酰化反应结束。过滤树脂并用DMF和二氯甲烷洗涤。如果R1CO2H为Fmoc保护的氨基酸，如上所述重复进行脱保护和酰化。
N-ε的脱保护和酰化将酰化的赖氨酸树脂III用2％的肼DMF溶液处理1小时，然后过滤并用DMF和二氯甲烷洗涤。脱保护的树脂立即通过用R3CO2H(2eq)、HATU(2eq)和二异丙基乙胺(4eq)处理进行酰化。将反应物振摇2小时，过滤并重复进行酰化。过滤树脂并用DMF和二氯甲烷洗涤。
终产物从树脂上裂解将二酰基赖氨酸树脂IV用95％ TFA、5％水处理1小时。通过过滤除去溶剂并用两小部分TFA洗涤树脂。合并的TFA溶液真空浓缩，所得到的残渣通过反向hplc纯化得到纯的二酰基赖氨酸盐衍生物。一般方法D制备oMePUPA-N-MeLeu-α，γ-二氨基丁酸衍生物
N-α-CBZ-L-2，4-二氨基丁酸甲酯盐酸盐(I)在500ml RB烧瓶中，在搅拌下，将8.4g(33.3mmol)N-α-CBZ-L-2，4-二氨基丁酸悬浮在200ml甲醇中。冷却至0℃(冰浴)，然后用15分钟的时间滴加14.6ml(200mmol)SOCl2得到无色溶液。该溶液放置至室温并搅拌过夜。将溶液浓缩，再溶解在MeOH中并再浓缩，然后溶解在CH2Cl2中，浓缩并真空下放置16小时得到化合物I的淡黄色泡沫物，产量10.33g(34.2mmol，103％)。M/z＝267.1(M+H+)。
BOC-N-甲基-亮氨酸基-(N-α-CBZ)-GABA甲酯(II)在500ml RB烧瓶中，在搅拌下，将10.33g(33.3mmol)I(MW＝302)溶解在100ml无水二甲基甲酰胺(DMF)中得到无色溶液。向该溶液中加入17.4ml(100mmol)二异丙基乙胺(DIEA)，然后加入7.96g(32.5mmol)BOC-N-Me-亮氨酸，并且最后加入14.83g(39.0mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基尿六氟磷酸盐(HATU)得到黄色溶液。该溶液搅拌过夜后，HPLC显示无起始物质。该溶液用乙酸乙酯(EtOAc，500ml)稀释并用1N HCl(2×)、1N NaOH(2×)和盐水(1×)洗涤。有机相用无水MgSO4干燥，过滤并浓缩至红色油状物。用2∶1己烷/EtOAc与二氧化硅进行色谱层析得到12.56g(25.5mmol，78％)II(Rf＝0.46，1∶1Hex/EtOAc vs.二氧化硅)的黄色糖浆(HPLC，＞99％)。M/z＝494.3(M+H+)。
H-N-甲基-亮氨酸基-(N-α-CBZ)-GABA甲酯三氟乙酸盐(III)在50ml RB烧瓶中，在搅拌下，将0.50g(1.01mmol)II(MW＝493)溶解在10ml CH2Cl2中得到无色溶液。向该溶液中加入2ml(26mmol，大量过量)三氟乙酸并将所得到的溶液搅拌4小时后，HPLC显示无起始物质。该溶液浓缩，再溶解在CH2Cl2中并浓缩(2×)，然后在真空下放置过夜得到0.52g(～定量的)III的非常淡黄色油状物。M/z＝394.4(M+H+)。原料反应完全。
oMePUPA-N-甲基-亮氨酸基-(N-α-CBZ)-GABA甲酯(IV)在10ml小瓶中，在搅拌下，将0.52g(1.01mmol)III(MW＝507)溶解在5ml DMF中得到淡黄色溶液。向该溶液中加入525μl(3.0mmol)DIEA，然后加入284mg(1.0mmol)oMePUPA游离酸(Ricerca；MW＝284)，并最后加入0.42g(1.1mmol)HATU得到黄色溶液。搅拌过夜后，HPLC显示无起始物质。将该溶液用EtOAc(75ml)稀释并用1N HCl(3×)、1N NaOH(3×)和盐水(1×)洗涤。有机相用无水MgSO4干燥，过滤，滤液浓缩至黄色油状物/固体混合物。用1∶2乙腈/CH2Cl2与二氧化硅进行色谱层析得到0.49g(0.74mmol，74％)VI(Rf＝0.46，1∶1 乙腈/CH2Cl2vs.二氧化硅)的亮白色泡沫样固体(HPLC，＞99％)。M/z＝660.1(M+H+)。
oMePUPA-N-甲基-亮氨酸基-(N-α-CBZ)-GABA甲酯盐酸盐(V)在85ml高压容器中，在搅拌下，将400mg(0.61mmol)IV(MW＝659)溶解在10mlMeOH中得到淡无色溶液。将该容器中充满氮并加入～50mg(催化剂)10％披钯碳。将容器侧壁用额外的MeOH洗涤，容器用氢化的塞子塞紧。容器中充入60psi的H2，将该混合物搅拌过夜，然后将容器与环境大气交换。混合物通过硅藻土545过滤，滤板用额外的(10ml)MeOH洗涤，滤液浓缩。残渣溶解在最小量(2ml)MeOH中并滴加到冰冷却的1.0M HCl的乙醚溶液中得到白色沉淀。固体在HCl/乙醚中研制20分钟，然后过滤，固体用研磨洗涤，空气干燥1小时。然后将白色固体用铲碾成粉末，用额外的乙醚洗涤，空气干燥过夜得到336mg(0.60mmol，98％)V的白色粉末(HPLC，＞99％)。ESMSm/z＝526.6(M+H+)。
酰化和最终水解将粗品胺V与R3CO2H(1eq)和HBTU(1.1eq)一起溶解在N，N-二甲基甲酰胺中。搅拌下加入N，N-二异丙基乙胺(4当量)。搅拌过夜后，反应物在5％柠檬酸和乙酸乙酯之间分配。有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，然后用硫酸钠干燥。过滤干燥剂并蒸发溶剂得通过反向hplc纯化的粗品胺。将甲酯溶解在1∶1四氢呋喃和甲醇中。在搅拌下加入氢氧化锂水溶液(2N)。搅拌1小时后，将反应混合物浓缩至干。残渣在1N氯化氢水溶液和乙酸乙酯之间分配，有机层用饱和氯化钠洗涤。用硫酸钠干燥，过滤并蒸发得到粗品酸。通过制备反向高效液相色谱纯化得到纯品。一般方法E-从二氨基酸开始的溶液相合成 正交N-α-Boc/Cbz保护的二胺I通过在室温下在丙酮中与碘甲烷(5eq)和碳酸钾(5eq)一起反应16小时转化为甲酯II。该反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯提取。有机相用水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，用硫酸钠干燥并过滤。该产物通过在二氧化硅上用乙酸乙酯和己烷洗脱。
N-α-脱保护和酰化将充分保护的二胺II溶解在3N HCl的EtOAc溶液中并在室温下搅拌1小时。该溶液减压浓缩。所得到的固体悬浮在乙酸乙酯中，通过过滤分离，用乙醚洗涤并真空干燥。将由此分离到的盐酸盐III用HATU(1.25eq)、二异丙基乙胺(4eq)和R1CO2H(1.25eq)的无水DMF溶液处理并在氮环境下搅拌16小时。反应混合物用5％柠檬酸稀释并用EtOAc提取。有机相用水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，用硫酸钠干燥并过滤。将溶液减压浓缩，残渣通过在硅胶上用EtOAc和己烷洗脱来纯化得到纯品IV。
末梢氮的脱保护和酰化将CBz保护的中间体IV溶解在甲醇中并脱气。加入10％钯/激活碳，混合物在60psi氢环境下搅拌3-16小时。将反应物过滤并浓缩。所得到的游离胺通过立即与HATU(1.25eq)、二异丙基乙胺(4eq)和R3CO2H(1.25eq)的无水DMF溶液反应并在氮环境下搅拌16小时。反应混合物用5％柠檬酸稀释并用EtOAc提取。有机相用水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，用硫酸钠干燥并过滤。产物VI通过在硅胶上用乙酸乙酯和己烷洗脱来纯化。
水解至终产物将甲酯VI溶解在1∶1四氢呋喃和甲醇中。在搅拌下加入氢氧化锂水溶液(2N)。搅拌1小时后，反应混合物浓缩至干。残渣在1N氯化氢水溶液和乙酸乙酯之间分配，有机层用饱和氯化钠稀释。用硫酸钠干燥，过滤或蒸发得到粗品酸。通过制备反向高效液相色谱层析纯化得到纯品酸VII。
本发明化合物也可以通过附加适宜的官能团进行修饰以便提高生物学选择性。所述修饰是本领域公知的并包括增加生物学渗透进入指定生物学系统(例如血、淋巴系统、中枢神经系统)，增加口服生物利用度，增加水溶性以便容许通过注射给药，改变代谢并改变排泄速度。这些修饰的实例包括但不限制于用聚乙二醇酯化，用pivolate或脂肪酸取代基衍生，转化为氨基甲酸酯，水解芳环，和在芳环中用杂原子取代。
也包括非典型异构体如CO2H、SO2NHR、SO3H、PO(OH)NH2、PO(OH)OEt、CONHCN、 一经合成，本发明化合物的活性和VLA-特性可通过体外和体内分析进行测定。
例如，这些化合物的细胞粘合抑制剂活性可通过测定阻断VLA-4表达细胞结合到涂有纤连蛋白或CS1的培养皿上所需要的抑制剂浓度测定。在该测定中，微量滴定孔涂纤连蛋白(包含CS-1序列)或CS-1。如果使用CS-1，它必须轭合到载体蛋白如牛血清白蛋白上，以便于结合到所述孔上。所述孔一经涂敷后，改变浓度的试验化合物和适当标记的VLA-4表达细胞一起加入。或者，可以首先加入试验化合物并在加入所述细胞前让其与涂敷孔一起培养。将所述细胞在所述涂敷孔中培养至少30分钟。培养后，将所述孔倒空并洗涤。通过测定各浓度试验化合物以及不含试验化合物的对照物结合到培养皿上荧光性或放射性的量来测定结合的抑制作用。
可用于该测定的VLA-4表达细胞包括Ramos细胞、Jurkat细胞、A375黑素瘤细胞以及人外周血淋巴细胞(PBLs)。该测定中所使用的细胞可以是荧光或放射性标记的。
也可以用直接结合测定来确定本发明化合物的抑制活性。在该测定中，包含附着在IgG1分子(“VCAM2D-IgG”)铰链区上最初两个VCAM(D1D2)免疫球蛋白区域的VCAM-IgG熔合蛋白轭合到标记酶如碱性磷酸酯酶(“AP”)上。该VCAM-IgG熔合物的合成描述于PCT出版物WO 90/13300中，该公开引入本文供参考。所述熔合物与标记酶的轭合通过本领域公知的交联方法获得。
然后，将VCAM-IgG酶轭合物放到多孔过滤板如Millipore MultiscreenAssay System(Millipore Corp.，Bedford，MA)中所包含的多孔过滤板的孔中。然后将改变浓度的试验抑制化合物加到所述孔中，接着加入VLA-4-表达细胞。将所述细胞、化合物和VCAM-IgG酶轭合物一起混合并在室温下培养。
培养后，所述孔进行真空排液，留下细胞和任何结合的VCAM。通过加入与VCAM-IgG轭合的酶适宜的比色底物并测定反应产物的量来测定结合VCAM的量。反应产物减少表示结合抑制活性增加。
为了确定本发明化合物的VLA-4抑制特异性，测定整合蛋白的其它主要基团，即β2和β3，以及其它β1整合蛋白，如VLA-5、VLA-6和α4β7。通过取代适宜的整合蛋白表达细胞和相应的配体，这些测定可以是与上述粘合抑制法和直接结合测定法类似的。例如，多形核的细胞(PMNs)在其表面表达β2整合蛋白并且与ICAM结合。在血小板聚集中涉及β3整合蛋白并且可在标准血小板聚集分析中测定其抑制作用。VLA-5特异性地与Arg-Gly-Asp序列结合而VLA-6与层粘连蛋白结合。α4β7是近期发现的VLA-4同系物，它也可以与纤连蛋白和VCAM结合。通过结合测定法，利用上述VCAM-IgG-酶标记轭合物和表达α4β7而不是VLA-4的细胞系如RPMI-8866细胞来测定α4β7的特异性。
VLA-4-特异性抑制剂一经确定，它们可进一步通过体内测定法来确定其特性。这种试验是测定动物中接触性过敏反应的抑制作用，如P.L.Chisholm等人，“Monoclonal Antibodies to the Integrin α-4 Subunit Inhibitthe Murine Contact Hypersensitivity Response”，Eur.J.Immunol.，23，pp.682-688(1993)和“Current Protocols in Immunology”，J.E.Cologan等人，Eds.，JohnWiley & Sons，New Yoprk，1，pp.4.2.1.-4.2.5(1991)所述，该公开引入本文供参考。在该测定中，动物的皮肤通过暴露到刺激物如二硝基氟苯中，然后通过轻微的物理性刺激如用锋利的刀刃轻轻地刮皮肤而致敏。恢复期过后，将动物按相同的方法再致敏。致敏后几天，将动物的一只耳朵暴露到化学刺激物中，而另一只耳朵用非刺激性对照溶液处理。耳朵处理后不久，通过皮下注射给所述动物各种剂量的VLA-4抑制剂。通过测定处理和未处理耳朵的动物其耳朵的肿胀反应来确定细胞粘合相关炎症的体内抑制作用。利用卡钳或其它适宜的测定耳朵厚度的仅器来测定肿胀程度。通过该方式，就可以确定那些最适用于抑制炎症的本发明抑制剂。
可用于测试本发明抑制剂的另一体内测定法是羊哮喘测定法。该测定法基本上如W.M.Abraham等人，“α-Integrins Mediate Antigen-induced LateBronchial Responses and Prolonged Airway Hyperresponsiveness in Sheep”，J.Clin.Invest.，93，PP.776-87(1994)所述进行，所述公开文献引入本文供参考。该测定法用于测定对哮喘羊蛔虫抗原诱导的晚期气道反应和气道高反应性的抑制作用。
本发明化合物可以以其无机或有机酸和碱衍生的可药用盐的形式使用。其中酸式盐包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、偏硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、扑酸盐、果胶酯酸盐、过硫酸盐、3-苯基-丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。碱式盐包括铵盐、碱金属盐如钠盐和钾盐、碱土金属盐如钙盐和镁盐、有机碱盐如二环己胺盐、N-甲基-D-葡糖胺和氨基酸如精氨酸、赖氨酸等的盐。碱性含氮基也可以用低级烷基卤如甲基、乙基、丙基和丁基氯、溴和碘；二烷基硫酸酯如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯；长链卤化物如癸基、十二烷基、十四烷基、十八烷酰基氯、溴和碘；芳烷基卤如苯甲基和苯乙基溴等季铵化。因此得到水溶性或油溶性或可分散产物。
本发明化合物可配制成可通过口服、非肠道、吸入喷雾、局部、直肠、鼻、颊、阴道或通过植入库给予的可药用组合物。本文所使用的“非肠道”包括皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、损害内(intralesional)和颅内注射或输注技术。
本发明可药用组合物包含本发明的任一化合物或其可药用盐和任何可药用载体。本文所使用的术语“载体”包括适宜的助剂和赋形剂。可在本发明药物组合物中使用的可药用载体包括但不限制于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、部分饱和植物脂肪酸甘油酯的混合物、水、盐或电解质如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素类物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
本发明可药用组合物可以以灭菌注射剂，例如灭菌注射水或油悬浮液形式存在。所述悬浮液可以按照本领域公知的技术，通过使用适宜的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制。灭菌注射剂也可以是在无毒非肠道用稀释剂或溶剂中的灭菌注射溶液或悬浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。可以使用的适宜的载体和溶剂为水、林格溶液和等渗氯化钠溶液。另外，灭菌不挥发油通常用作溶剂或悬浮介质。为此，可使用任何温和的不挥发油包括合成的一-或二-甘油酯。如天然可药用油如橄榄油或蓖麻油，特别是其聚氧化乙烯的类型那样，脂肪酸如油酸及其甘油酯衍生物用于制备注射剂。这些油溶液或悬浮液也可以包含长链醇稀释剂或分散剂，如P.Helv或类似的醇。
本发明药物组合物可以以任何可口服剂型口服给予，所述剂型包括但不限制于胶囊剂、片剂、水悬浮液或溶液。
在口服用片剂情况下，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。典型地也加入润滑剂如硬脂酸镁。在以胶囊剂形式口服给药情况下，所使用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当需要用水悬浮液口服给药时，将活性组分与乳化剂或悬浮剂联合使用。如果需要，也可以加入某些甜味剂、矫味剂或着色剂。
或者，本发明药物组合物可以以直肠给药的栓剂形式给予。这些栓剂可通过将所述药物与适宜的、在室温下为固体但在直肠温度下为液体并因此可在直肠中熔化以便释放药物的非刺激性赋形剂混合来制备。所述物质包括椰子油、蜂蜡和聚乙二醇。
本发明药物组合物也可以局部给药，特别是当治疗靶包括易受局部应用影响的区域或器官，包括眼、皮肤或下肠道疾病时。对于这些区域或器官来说，适宜的局部用制剂是容易制备的。
在下肠道应用情况下，可通过直肠栓剂(如上所述)或适宜的灌肠剂实现局部应用。也可以使用局部透皮贴剂。
在局部应用情况下，药物组合物可配制成适宜的包含悬浮或溶解在一种或多种载体中活性组分的软膏剂。局部给药的本发明化合物的载体包括但不限制于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧化乙烯、聚氧化丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，该药物组合物可配制成适宜的包含悬浮或溶解在一种或多种载体中活性组分的洗剂或霜剂。适宜的载体包括但不限制于矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六酯蜡、十八/十六烷基醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
在眼科应用情况下，该药物组合物可在等渗、调整pH灭菌盐水中配制成微粒化悬浮液，或者优选地，在含有或不含防腐剂如氯苄烷铵的等渗、调整pH灭菌盐水中配制成溶液剂。或者，在眼科应用情况下，该药物组合物可在软膏如凡士林中配制。
本发明药物组合物也可以通过鼻气雾剂或通过使用雾化器、干粉吸入器或可计量剂量的吸入器吸入给予。所述组合物按照制药领域公知的技术制备并且可以通过使用苯甲醇或其它适宜的防腐剂、增加生物利用度的促吸收剂、碳氟化合物和/或其它常规的增溶剂或分散剂制成盐溶液。
可以与载体物质组合产生单一剂型的活性组分的量将依赖于治疗的宿主和特定给药方式改变。然而，应该理解，对于任何特定患者来说，特定剂量和治疗方案将依赖于各种因素，包括所使用特定化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、排泄速度、药物组合和治疗医生的判断以及所治疗特定疾病的严重性。活性组分的量也可以依赖于治疗剂或预防剂和(若有的话)联合给予的组分。
如上所述，包含有效量本发明化合物的有效量药物组合物也在本发明范围内。有效量可规定为提供被治疗患者治疗作用所需要的量并且将依赖于各种因素，如抑制剂的性质，患者的年龄、治疗的目的，所治疗疾病的性质、所使用的特定药物组合物和治疗医生的判断。参见Freircich等人，Cancer Chemother.Rep.1966，50，219和Scientific Tables，GeigyPharmaceuticals，Ardley，New York，1970，537。大约0.001-100mg活性组分/kg体重/天，优选大约0.1-10mg活性组分/kg体重/天的剂量水平是有效的。
按照另一具体实施方式
，包含本发明化合物的组合物也可以包含其它药物，所述药物，选自皮质类固醇、支气管扩张药、平喘药(肥大细胞稳定剂)、抗炎剂、抗风湿剂、免疫抑制剂、抗代谢药、免疫调节剂、治牛皮癣药和治疗糖尿病药。各类具体化合物选自“Comprehensive MedicinalChemistry”，Pergamon Press，Oxford，England，pp.970-986(1990)中适宜的基团标题下所列出的任一种化合物，将所述公开文献引入本文供参考。在所选的组内的也包括的化合物如茶叶碱、柳氯磺胺吡啶和氨基水杨酸盐(抗炎的)；环孢菌素、FK-506和雷帕霉素(免疫抑制剂)；环磷酰胺和甲氨蝶呤(抗代谢药)；和干扰素(免疫调节剂)。
按照其它具体实施方式
，本发明提供预防、抑制或消除与细胞粘合有关的炎症和与细胞粘合有关的免疫或自身免疫反应的方法。与VLA4有关的细胞粘合在多种炎症、免疫和自身免疫疾病中起着核心作用。因此，通过本发明化合物抑制细胞粘合可在治疗或预防炎性、免疫和自身免疫性疾病的方法中应用。优选地，用本发明方法治疗的疾病选自哮喘、关节炎、牛皮癣、移植排斥、多发性硬化、糖尿病和炎性肠疾病。
这些方法可在单独治疗或与抗炎剂或免疫抑制剂联合治疗中使用本发明化合物。所述联合治疗包括在相同的时间或在不同的时间给予单剂量形式或多剂量形式的药物。
为了更充分地理解本发明，阐述下列实施例。这些实施例仅用于说明并不以任何方式限制本发明范围。中间体14-(2-甲基苯基氨基羰基氨基)苯乙酸(oMePUPA-OH)向对-氨基苯乙基(56.8g，376mmol)的DMS(150ml)悬浮液中滴加邻-甲苯基异氰酸酯(50g，376mmol)。反应混合物搅拌1小时，并在搅拌下倾入EtOAc(1.75L)中。收集沉淀并用EtOAc(400ml)和MeCN(400ml)洗涤，得到oMePUPA(80g，75％)。ESMS m/z(M+H+)285.1。中间体2OMePUPA-Leu-OH将oMePUPA-OH(0.78g)与亮氨酸甲酯盐酸盐(0.50g，1.0eq)、HATU(1.10g，1.05eq)和二异丙基乙胺(1.9ml，4eq)在10ml无水DMF中合并。反应物在室温下搅拌16小时，然后用50ml EtOAc稀释，用5％柠檬酸、水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。所得到的有机溶液用硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到1.13g白色固体。将该产物溶解在10ml THF中。加入5ml 2NLiOH并将反应物搅拌16小时。减压除去THF，溶液用40ml水稀释并用EtOAc洗涤。水层用1N HCl酸化并用EtOAc提取。有机提取物用稀HCl和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩得到0.77g白色固体。ESMS m/z(M+H+)398.5。中间体3N-(3，5-二氯苯磺酰基)-脯氨酸甲酯在搅拌下，向24.8g(0.15mol)L-脯氨酸甲酯盐酸盐的CH2Cl2(500ml)溶液中加入70ml(0.5mol)三乙胺得到大量白色沉淀。将混合物过滤，滤液在搅拌下冷却至0℃(冰浴)。用5分钟的时间快速向该冷却的溶液中滴加36.8g(0.15mol)3，5-二氯苯磺酰氯的CH2Cl2(70ml)溶液。加液漏斗再用30ml CH2Cl2冲洗，混浊的黄色混合物在搅拌下过夜，升温至室温。该混合物用400ml 1N HCl(2×)、400ml 1N NaOH(2×)和盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)，过滤并浓缩至在放置下结晶的黄色油状物。将该物质在乙酸乙酯/己烷中重结晶3次得到39.3g(0.116mol，77％)N-(3，5-二氯苯磺酰基)-脯氨酸甲酯(MV＝338)的白色针状物(在二氧化硅上和在2∶1己烷/乙酸乙酯中进行TLC，Rf＝0.51)。M/z＝339.3(M+H+)。
N-(3，5-二氯苯磺酰基)-脯氨酸在搅拌下，向39.3g(0.116mol)上述甲酯的甲醇(250ml)溶液中加入115ml(0.23mol)新制备的2M LiOH水溶液得到无色溶液。将溶液搅拌3小时，然后HPLC显示无起始物质。将溶液真空减少50％并在1N HCl和CH2Cl2(各约200mml)之间分配。分离两相，水层再用CH2Cl2洗涤。合并有机相，干燥(MgSO4)，并浓缩至白色泡沫固体。将该物质在乙酸乙酯/己烷中重结晶2次得到33.8g(0.104mol，90％)标题化合物的无色、宽带、扁针状物。M/z＝325.2(M+H+)。中间体4N-(苯磺酰基)-脯氨酸甲酯在搅拌下，向25g(0.15mol)L-脯氨酸甲酯盐酸盐的CH2Cl2(500ml)溶液中加入70ml(0.5mol)三乙胺得到大量白色沉淀。将混合物过滤，滤液在搅拌下冷却至0℃(冰浴)。用15分钟的时间向该冷却的溶液中滴加20ml(0.15mol)苯磺酰氯的CH2Cl2(50ml)溶液。加液漏斗再用25ml CH2Cl2冲洗，混浊的无色混合物在搅拌下放置过夜，升温至室温。该溶液用400ml 1N HCl(2×)、400ml 1N NaOH(2×)和盐水(1×)洗涤，然后干燥(MgSO4)，过滤并浓缩至淡黄色固体。将该物质在乙酸乙酯/己烷中重结晶3次得到38.2g(0.142mol，95％)N-(苯磺酰基)-脯氨酸甲酯(MV＝269)的宽、白色针状物(在二氧化硅上和在2∶1己烷/乙酸乙酯中进行TLC，Rf＝0.35)。M/z＝270.2(M+H+)。
N-(苯磺酰基)-脯氨酸在搅拌下，向38.2g(0.142mol)上述甲酯的甲醇(500ml)溶液中加入140ml(0.28mol)新制备的2M LiOH水溶液得到无色溶液。将溶液搅拌过夜，然后HPLC显示无起始物质。将溶液真空减少50％并在1N HCl和CH2Cl2(各约200mml)之间分配。分离两相，水层再用CH2Cl2洗涤。合并有机相，干燥(MgSO4)，并浓缩至白色固体。将该物质在乙酸乙酯/己烷中重结晶2次得到34.7g(0.136mol，96％)标题化合物的细小、白色针状物。M/z＝256.2(M+H+)。实施例1化合物IX的合成 甲酯乙酸乙酯I在500ml RB烧瓶中，在搅拌下，将8.4g(33.3mmol)2-N-CBZ-L-2，4-二氨基丁酸悬浮在200ml甲醇(MeOH)中。冷却至0℃(冰浴)，然后用15分钟的时间滴加14.6ml(200mmol)SOCl2得到无色溶液。该溶液放置至室温并搅拌过夜。然后，等分试样的质子NMR谱显示反应结束。将溶液浓缩，再溶解在MeOH中并浓缩2×，然后溶解在CH2Cl2中，浓缩并在高真空下放置16小时得到化合物I的淡黄色泡沫物，产量10.33g(34.2mmol，103％)。MSm/z＝267(M+H)+。
叔丁氧基羰基甲酯II在500ml RB烧瓶中，在搅拌下，将10.33g(33.3mmol)I溶解在无水二甲基甲酰胺(DMF)中得到无色溶液。向该溶液中加入17.4ml(100mmol)二异丙基乙胺(DIEA)，然后加入7.96g(32.5mmol)BOC-N-甲基-亮氨酸，并且最后加入14.83g(39.0mmol)O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基尿六氟磷酸盐(HATU)得到黄色溶液。该溶液搅拌过夜后，HPLC显示无起始物质。该溶液用乙酸乙酯(EtOAc，500ml)稀释并用1N HCl(2×)、1N NaOH(2×)和盐水(1×)洗涤。有机相用无水MgSO4干燥，过滤并浓缩至红色油状物。用2∶1己烷/EtOAc与二氧化硅进行色谱层析得到12.56g(25.5mmol，78％)II的黄色糖浆(HPLC，＞99％)。MSm/z＝393(M-BOC)+，494(M+H)+。
氨基酯(III)在280ml高压容器中，在搅拌下，将11.38g(23.08mmol)II溶解在75ml MeOH中得到橙色溶液。将该容器中充满氮并加入～200mg(催化量)10％披钯碳(Pd/C)。将容器侧壁用额外的MeOH洗涤，容器用氢化头罩住。将混合物在60psi H2下放置并搅拌过夜后，HPLC显示无起始物质。混合物通过硅藻土545过滤，滤板用另外的MeOH洗涤，滤液浓缩得到无色油状物III，产量8.29g(～定量的)。原料反应完全。MSm/z＝360(M+H)+。
苄基氨基甲酸酯甲酯IV在500ml RB烧瓶中，在搅拌下，将8.29g(23.08mmol)III溶解在100ml CH2Cl2中得到无色溶液。向该溶液中加入7.0ml(50mmol)三乙胺(Et3N)，然后加入7.96g(23.0mmol)CBZ-脯氨酸羟基琥珀酰胺酯(CBZ-Pro-Osu)得到无色溶液。该溶液搅拌过夜后，HPLC显示无起始物质。该溶液用另外的CH2Cl2稀释，用1N HCl(2×)、1N NaOH(2×)洗涤，有机相用MgSO4干燥，过滤，滤液浓缩至无色油状物。用3∶1EtOAc/己烷与二氧化硅进行色谱层析得到12.22g(20.7mmol，90％)IV的泡沫无色玻璃物(HPLC，＞99％)。MSm/z＝490(M-BOC)+，591(M+H)+。
三氟乙酸胺盐V在500ml RB烧瓶中，在搅拌下，将11.80g(20.0mmol)IV溶解在120ml CH2Cl2中得到无色溶液。向该溶液中加入20ml(260mmol，大量过量)三氟乙酸(TFA)，并将所得到的溶液搅拌4小时，然后HPLC小时无起始物质。将溶液浓缩，在溶解在CH2Cl2中并浓缩(2×)，然后在高真空下放置得到12.1g(～定量的)V的淡黄色油状物。原料反应完全。MSm/z＝491(M+H)+。
二芳基脲甲酯VI在500ml RB烧瓶中，在搅拌下，将12.1g(20mmol)V溶解在100ml DMF中得到淡黄色溶液。向该溶液中加入17.4ml(100mmol)DIEA，然后加入5.68g(20.0mmol)中间体1(oMePUPA-OH)，最后加入9.12g(24mmol)HATU得到淡黄色溶液。该溶液搅拌过夜后，HPLC显示无起始物质。该溶液用EtOAc(500ml)稀释并用1N HCl(2×)、1NNaOH(2×)和盐水(1×)洗涤，有机相用MgSO4干燥，过滤，滤液浓缩至黄色油状物/固体混合物。用2∶1乙腈/CH2Cl2与二氧化硅进行色谱层析得到11.35g(15.0mmol，75％)VI的浅黄色泡沫固体(HPLC，＞99％)。MSm/z＝757(M+H)+，779(M+Na+)。
氨基甲酯VII在280ml高压容器中，在搅拌下，将8.0g(10.6mmol)VI溶解在50ml MeOH中得到淡黄色溶液。将该容器中充满氮并加入～250mg(催化量)10％Pd/C。将容器侧壁用额外的MeOH洗涤，容器用氢化头罩住。将混合物在60psi H2下放置并搅拌过夜后，HPLC显示无起始物质。混合物通过硅藻土545过滤，滤板用额外的MeOH洗涤，滤液浓缩得到6.6g(～定量的)VII的白色固体。原料反应完全。MSm/z＝623(M+H)+。
磺酰胺甲酯VIII在500ml RB烧瓶中，在搅拌下，将6.6g(10.6mmol)VII溶解在100ml无水CH2Cl2中得到无色溶液。该溶液冷却至0℃(冰浴)，加入4.2ml(30mmol)Et3N，然后用10分钟的时间滴加3.68g(15mmol)3，5-二氯苯磺酰氯的CH2Cl2(25ml)溶液。所得到的溶液放置至室温并搅拌2小时后，HPLC显示无起始物质。该溶液用额外的CH2Cl2稀释并用1N HCl(2×)和1NNaOH(2×)洗涤，用MgSO4干燥，过滤，滤液浓缩至黄色固体。用2∶1CH2Cl2/乙腈与二氧化硅进行色谱层析得到6.68g(8.0mmol，75％)VIII的白色固体(HPLC，＞99％)。MSm/z＝832/833(M+H)+。
羧酸IX在500ml RB烧瓶中，在搅拌下，将6.26g(7.53mmol)VIII溶解在150ml MeOH中得到无色溶液。该溶液冷却至0℃(冰浴)，并在搅拌下向该溶液中通入氮30分钟。用10分钟的时间向溶液中滴加19ml(38mmol)新制备的2M LiOH溶液，然后，将该溶液在0℃氮环境下搅拌，反应过程通过HPLC密切监视。3小时后，HPLC显示无起始物质。溶液在略加热下浓缩(体积减少～50％)，并分次缓慢倾入冰冷却1N HCl中得到大量亮白色沉淀。通过过滤分离该固体，用冷却的蒸馏水洗涤并晾干过夜。所得到的细小的白色固体转移到玻璃罐中并在高真空下放置72小时。最终产量为6.02g(7.36mmol，98％)IX的白色粉末(HPLC，＞98％)。MSm/z＝818/819(M+H)+，841(M+Na+)。实施例2化合物XVI的合成 高丝氨酸4-硝基苯基醚苄基酯向N-Boc高丝氨酸苄基酯I(1.2g，3.89mmol)、4-硝基苯酚(485mg，4.08mmol)和三苯基膦(1.2g，4.66mmol)的THF(10ml)溶液中滴加二乙基偶氮二羧酸酯(EDAD)(0.74ml，4.66mmol)并将反应物在室温下搅拌12-24小时。当通过LC判断反应结束时除去溶剂得到粘稠的糖浆。快速加入4N HCl的二噁烷(10ml)溶液，溶液在室温下搅拌3-6小时或者通过LC判断反应结束。将反应物浓缩至原体积的1/4并将产物从乙酸乙酯中沉淀出来得到盐酸盐II(96％纯品，LC)的白色固体(867mg，2.36mmol，61％)。ESMS(M-Cl)＝331。
向中间体4(117mg，0.46mmol)的DMF(3ml)溶液中加入DIPEA(0.27ml，1.84mmol)，然后相继加入盐酸盐II(160mg，0.48mmol)和HATU(239mg，0.63mmol)。溶液在室温下搅拌2-4小时直至通过LC判断反应结束。反应物用乙酸乙酯(30ml)稀释并用5％碳酸氢盐(10ml)、水(10ml)、柠檬酸(10ml)、盐水(2×10)洗涤，用硫酸钠干燥，得到粗品III可直接使用的黄褐色泡沫物(213mg，0.37mmol，82％)。ESMS(M+H)＝568。
将上述物质溶解在乙酸乙酯(15ml)中，加入10％ Pd/C(200mg)，反应物在50psi下氢解4-6小时直至通过LC判断反应结束。通过硅藻土过滤并浓缩得到粗品苯胺IV(144mg，0.32mmol，87％)可立即使用的黄褐色泡沫物。ESMS(M+H)＝448。
将上述得到的苯胺(74mg，0.17mmol)溶解在DMF(3ml)中并加入oMePUPA(52mg，0.18mmol)，然后加入DIPEA(0.08ml，0.43mmol)和HATU(69mg，0.18mmol)，反应物在室温下搅拌3-4小时直至通过LC判断反应结束。通过HPLC纯化得到Bio-8355(39mg，0.054mmol，30％)的白色固体。ESMS(M+H)＝714，(M-H)＝712。
按照上述方法制备下表中所显示的本发明化合物。按照一般方法A制备的化合物包括 按照一般方法B制备的化合物包括 按照一般方法C制备的化合物包括 按照一般方法D制备的化合物包括 按照一般方法E制备的化合物包括 其它具体实施方式
从上述说明书中，本领域任一技术人员都可以很容易地确定本发明基本特性，并且不偏离本发明构思和范围，可以对本发明进行各种改变和修饰使得它适应各种用法和疾病。因此，其它具体实施方式
也在权利要求范围内。
权利要求
1.式R3-L-L′-R1化合物或其可药用盐其中R1为1)H，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)Cy，6)Cy-C1-10烷基，7)Cy-C1-10链烯基，或8)Cy-C1-10链炔基；L′为具有1-5个碳原子的烃连接基部分并且为(i)任选地由一个或多个下列基团间隔的或在末端与一个或多个下列基团连接的1)-C(O)-，2)-O-C(O)-，3)-C(O)-O-，4)-C(O)-NRc-，5)-NRc-C(O)-，6)-NRc-C(O)-NRd-，7)-NRc-C(O)-O-，8)-O-C(O)-NRc-，9)-S(O)m-，10)-SO2-NRc-，11)-NRc-SO2-，12)-NRc-C(NRm)-，13)-O-，14)-NRc-，或15)-Cy；或者(ii)未取代的或由一个或多个独立地选自Rb的取代基取代的；L为具有1-4个碳原子的烃连接基部分并且为(i)任选地由一个或多个下列基团间隔的或在末端与一个或多个下列基团连接的1)-C(O)-，2)-O-C(O)-，3)-C(O)-O-，4)-C(O)-NRc-，5)-NRc-C(O)-，6)-NRc-C(O)-NRd-，7)-NRc-C(O)-O-，8)-O-C(O)-NRc-，9)-S(O)m-，10)-SO2-NRc-，11)-NRc-SO2-，12)-O-，13)-NRc-，或14)Cy；或者(ii)未取代的或由一个或多个独立地选自Rb的取代基取代的；并且R3为烷基、链烯基、链炔基、环烷基、芳基稠合的环烷基、环烯基、芳基、芳烷基、芳基取代的链烯基或链炔基、环烷基取代的烷基、环烯基取代的环烷基、二芳基、烯氧基、炔氧基、芳烷氧基，芳基取代的烯氧基或炔氧基、烷基氨基、烯基氨基或炔基氨基、芳基取代的烷基氨基、芳基取代的烯基氨基或炔基氨基、芳氧基、芳基氨基、杂环基、杂环基取代的烷基、杂环基取代的氨基、羧基烷基取代的芳烷基、或羰环稠合的芳基；或者R3为下式部分 其中Y5选自-CO-、-O-CO-、-SO2-或-PO2-；R4和R6各独立地为烷基、链烯基、链炔基、环烷基、芳基稠合的环烷基、环烯基、芳基、芳烷基、芳基取代的链烯基或链炔基、环烷基取代的烷基、环烯基取代的环烷基、二芳基、烯氧基、炔氧基、芳烷氧基，芳基取代的烯氧基或炔氧基、烷基氨基、烯基氨基或炔基氨基、芳基取代的烷基氨基、芳基取代的烯基氨基或炔基氨基、芳氧基、芳基氨基、杂环基、杂环基取代的烷基、杂环基取代的氨基、羧基烷基取代的芳烷基、羰环稠合的芳基或氨基酸侧链，所述氨基酸侧链选自精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、S-甲基半胱氨酸、甲硫氨酸及其相应的亚砜和砜衍生物、环己基丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、别-异亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、苯丙氨酸、苯甘氨酸、酪氨酸、色氨酸、脯氨酸、丙氨酸、鸟氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、正缬氨酸、缬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、β-氰基丙氨酸、2-氨基丁酸和别苏氨酸；并且R5为氢、芳基、烷基、链烯基、链炔基、环烷基、环烯基或芳基取代的烷基。R5和R6可以与它们所连接的原子一起形成5-7元杂环；上述各Cy代表环烷基、环烯基、杂环基、芳基或杂芳基；上述各烷基、链烯基和链炔基为未取代的或由1-4个独立地选自Ra的取代基取代的；并且上述各环烷基、环烯基、杂环基、芳基和杂芳基为未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的；Ra为1)Cy，2)-ORc，3)-NO2，4)-卤素，5)-S(O)mRc，6)-SRc7)-S(O)2ORc，8)-S(O)2NRcRd，9)-NRcRd，10)-O(CReRf)nNRcRd，11)-C(O)Rd，12)-CO2Rc，13)-P(O)(ORc)(ORd)，14)-P(O)(Rc)(ORd)，15)-S(O)mORc，16)-C(O)NRcRj，17)-CO2(CReRf)nCONRcRd，18)-OC(O)Rc，19)-CN，20)-NRcC(O)Rd，21)-OC(O)NRcRd，22)-NRcC(O)ORd，23)-NRcC(O)NRdRe，24)-CRc(NORd)，25)-CF3，26)-OCF3或27)氧代其中Cy是未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的，Rb为1)选自Ra的基团，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)芳基-C1-10烷基，或6)杂芳基-C1-10烷基，其中各烷基、链烯基、链炔基、芳基和杂芳基为未取代的或由独立地选自Rg的取代基取代的。Rc、Rd、Re和Rf各独立地为1)H，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)Cy或6)Cy-C1-10烷基；其中各烷基、链烯基、链炔基和Cy为未取代的或由1-4个独立地选自Rg的取代基取代的。Rg为1)卤素，2)氨基，3)羧基，4)-COO-C1-4烷基，5)-P(O)(OH)2，6)-P(O)(OH)(O-C1-4烷基，7)-P(O)(C1-4烷基)2，8)-P(O)(OH)(C1-4烷基)，9)-P(O)(O-C1-4烷基)(C1-4烷基)，10)-SO2-C1-4烷基，11)-CO-NH2，12)-CO-NH(C1-4烷基)，13)-CO-NH(C1-4烷基)2，14)C1-4烷基，15)C1-4烷氧基，16)芳基，17)芳基-C1-4烷氧基，18)羟基，19)CF3或20)芳氧基；Rm为1)H，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)Cy，6)Cy-C1-10烷基，7)C1-10酰基，8)氰基，9)C1-10烷基-磺酰基，或10)C1-10烷氧基；并且Rj为1)H，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)氰基，6)芳基，7)芳基-C1-10烷基，8)杂芳基，9)杂芳基C1-10烷基，或10)-SO2Rk，其中Rk为C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基和芳基；Rc和Rd可以与它们所连接的原子一起不形成或形成5-7元杂环，所述环含0-2个独立地选自O、N和S的杂原子；Re和Rf可以与它们所连接的原子一起不形成或形成5-7元杂环，所述环含0-2个独立地选自O、N和S的杂原子；m为0、1或2；n为1-10的整数；前提条件是当L是饱和的并且具有1-4个碳原子时，(i)L必须包含选自O、S和N的杂原子；或者(ii)R3必须包含邻-甲基苯基-脲基-苯基-CH2-部分；或者(iii)R1必须仅包含一个Cy基。
2.权利要求1的化合物，其中R1为Z1-La-Z2-，其中Z1为环烷基、环烷基-C1-10烷基、环烯基、环烯基-C1-10烷基、芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基、或杂芳基-C1-10烷基；La为-C(O)-、-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc、-NRc-C(O)-、-NRc-C(O)-NRd-、-NRc-C(O)-O-、-O-C(O)-NRc-、-S(O)m-、-SO2-NRc-、-NRc-SO2-、-O-、-NRc-、或键；m、Rc和Rd如权利要求1定义；并且Z2为环烷基、环烷基-C1-10烷基、环烯基、环烯基-C1-10烷基、芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基、或键。
3.权利要求2的化合物，其中Z1为环烷基、环烷基-C1-10烷基、芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基、或杂芳基-C1-10烷基；La为-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc、-NRc-C(O)-、-S(O)2、-SO2-NRc-、-NRc-SO2-、-O-、-NRc-、或键；并且Z2为芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、或键。
4.权利要求3的化合物，其中Z1为芳基、芳基-C1-5烷基、杂环基、杂环基-C1-5烷基、杂芳基、或杂芳基-C1-5烷基；La为-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc、-NRc-C(O)-、-SO2-、或键；并且Z2为杂环基、杂环基-C1-5烷基、或键。
5.权利要求4的化合物，其中Z1为未取代的或由Cy、-C(O)-Rd、卤素、氧代、芳基取代的链烯基取代的苯基；La为-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc、-NRc-C(O)-或-SO2-；并且Z2为杂环基或键。
6.权利要求1的化合物，其中R1为 R9为1)C1-10烷基，2)C2-10链烯基，3)C2-10链炔基，4)Cy，5)Cy-C1-10烷基，6)Cy-C2-10链烯基，或7)Cy-C2-10链炔基；R10和R11各独立地选自氢、芳基、烷基、链烯基或链炔基、环烷基、环烯基或芳基取代的烷基；R12为1)H，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)芳基，6)芳基-C1-10烷基，7)杂芳基，或8)杂芳基-C1-10烷基；其中烷基、链烯基和链炔基各为未取代的或由1-4个独立地选自Ra的取代基取代的，并且芳基和杂芳基为未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的；R11、R12和它们所连接的碳原子一起形成包含0-2个选自N、O和S杂原子的3-7元单环或二环。
7.权利要求1的化合物，其中R1为 R14为8)C1-10烷基，9)C2-10链烯基，10)C2-10链炔基，11)Cy，12)Cy-C1-10烷基，13)Cy-C2-10链烯基，或14)Cy-C2-10链炔基；R15为1)H，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)芳基，6)芳基-C1-10烷基，7)杂芳基，或8)杂芳基-C1-10烷基，R16、R17和R18各独立地为1)H，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)Cy，6)Cy-C1-10烷基，7)Cy-C2-10链烯基，8)Cy-C2-10链炔基，或9)选自Ra的基团其中Cy是未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基或一个下列基团取代的1)-NRc-C(O)NRcSO2Rd，2)-NRcS(O)mRd，3)-OS(O)2ORc，或4)-OP(O)(ORc)2；当与公用环原子连接时，R16、R17和R18中的两个与共用环原子一起形成包含0-3个选自N、O或S杂原子的5-7元饱和或不饱和单环；或者，当与两个毗邻的环原子连接时，R16、R17和R18中的两个与这两个环原子一起形成包含0-3个选自N、O或S杂原子的5-7元饱和或不饱和单环；环 代表3-7元饱和的或不饱和的杂环基或杂芳基其中Z、A、B1和B2各独立地为1)键，2)-C-，3)-C-C-，4)-C＝C-，5)选自N、O和S的杂原子，或6)-S(O)m-；m如权利要求1定义；Y7为1)-C(O)-，2)-C(O)O-，3)-C(O)-NRc-，4)-S(O)2-，5)-P(O)(ORc)，或6)-C(O)-C(O)-；所述烷基、链烯基和链炔基各为未取代的或由1-4个独立地选自Ra的取代基取代的，并且所述Cy为未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的。
8.权利要求7的化合物，其中环 代表氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、咪唑、吡唑、三唑、吡啶、哌啶、吡嗪、哌嗪、嘧啶、噁唑、噻唑或吗啉。
9.权利要求8的化合物，其中环 代表氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、咪唑、哌啶或吗啉。
10.权利要求9的化合物，其中环 代表吡咯烷。
11.权利要求7的化合物，其中R15为H或C1-5烷基。
12.权利要求7的化合物，其中R16、R17和R18各独立地选自H、C1-10烷基、Cy、-ORc、-卤素、-S(O)mRc、-NRcRd、-NRcC(O)Rd、-NRcC(O)ORd、-NRcC(O)NRdRe和氧代；Rc、Rd、Re和m各如权利要求1定义。
13.权利要求7的化合物，其中Y7为-O-C(O)-、-C(O)-O-或-SO2-。
14.权利要求7的化合物，其中R7为-SO2-。
15.权利要求7的化合物，其中R14为Cy或Cy-C1-5烷基。
16.权利要求15的化合物，其中Cy为苯基。
17.权利要求1的化合物，其中L′包含2-4个碳原子。
18.权利要求1的化合物，其中L′为 其中Y1为15)-C(O)-，16)-O-C(O)-，17)-C(O)-O-，18)-C(O)-NRc-，19)-NRc-C(O)-，20)-NRc-C(O)-NRd-，21)-NRc-C(O)-O-，22)-OC(O)-NRc-，23)-S(O)m-，24)-S(O)2-NRc-，25)-NRc-S(O)2-，26)-NRc-C(NRm)-，27)-O-或28)-NRc-；R2为1)H，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)Cy，6)Cy-C1-10烷基，7)Cy-C1-10链烯基或8)Cy-C1-10链炔基；Y2为键或-C(Rh)(Rj)-；其中Rh和Rj各独立地选自1)H，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)芳基，6)芳基-C1-10烷基，7)杂芳基，和8)杂芳基-C1-10烷基，Rh和Rj与它们所连接的碳原子一起不形成或形成含0-2个选自N、O和S杂原子的3-7元环；X为1)-C(O)ORc，2)-P(O)(ORc)(ORd)，3)-P(O)(Rc)(ORd)，4)-S(O)mORc，5)-C(O)NRcRj，或6)-5-四唑基；m如权利要求1定义；其中各烷基、链烯基和链炔基为未取代的或由1-4个独立地选自Ra的取代基取代的；各芳基和杂芳基为未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的。并且Cy为环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；并且前提条件是当Y2不为键时，X为-COOH、-COO-C1-4烷基、P(O)(OH)2、-P(O)(OH)(O-C1-4烷基)、-P(O)(C1-4烷基)2、-P(O)(OH)(C1-4烷基)、-P(O)(O-C1-4烷基)(C1-4烷基)、-SO2-C1-4烷基、-CO-NH2、-CO-NH(C1-4烷基)、-CO-N(C1-4烷基)2、或-5-四唑基。
19.权利要求18的化合物，其中Y1为-NRc-C(O)-、-NRc-、-NRc-S(O)2-或-NRc-C(NRm)-。
20.权利要求19的化合物，其中Y1为-NRc-C(O)-。
21.权利要求18的化合物，其中R2为H或C1-5烷基。
22.权利要求21的化合物，其中R2为H。
23.权利要求18的化合物，其中Y2为键或-C(Rh)(Rj)-，其中Rh和Rj各独立地为H或C1-5烷基。
24.权利要求23的化合物，其中Rh和Rj各独立地为H。
25.权利要求23的化合物，其中Y2为键。
26.权利要求18的化合物，其中X为-C(O)ORc或-C(O)NRcRj-。
27.权利要求26的化合物，其中X为-C(O)ORc，其中Rc为C1-5烷基。
28.权利要求18的化合物，其中Y1为-NRc-C(O)-；R2为H或C1-5烷基；Y2为键或-CH2-；并且X为-C(O)ORc，其中Rc独立地为H或C1-5烷基。
29.权利要求1的化合物，其中L包含4-10个碳原子的。
30.权利要求1的化合物，其中L为 其中Y3为9)键，10)C1-10烷基，11)C2-10链烯基，12)C2-10链炔基，13)芳基，14)芳基-C1-10烷基，15)杂芳基，或16)杂芳基-C1-10烷基；并且Y4为1)键，2)-C(O)-，3)-O-C(O)-，4)-C(O)-O-，5)-C(O)-NRc-，6)-NRc-C(O)-，7)-NRc-C(O)-NRd-，8)-NRc-C(O)-O-，9)-OC(O)-NRc-，17)-S(O)m-，18)-S(O)2-NRc-，19)-NRc-S(O)2-，20)-NRc-C(NRd)-，21)-O-，或22)-NRc-。各烷基、链烯基和链炔基不含或含1-4个独立地选自N、O、S和-S(O)m-的杂原子；并且各烷基、链烯基和链炔基为未取代的或由1-4个独立地选自Ra的取代基取代的；各芳基和杂芳基为未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的。Ra、Rb、Rc和Rd和m每个均如权利要求1定义；并且前提条件是Y3和Y4不同时为键。
31.权利要求30的化合物，其中Y3为键、C1-5烷基或C1-5链烯基；并且Y4为键、-C(O)-NRc-、-C(O)-、-NRc-或-O-，其中Rc为H或C1-5烷基。
32.权利要求的化合物，其中R3为Z3-Lb-Z4-，其中Z3为Cy、Cy-C1-10烷基、Cy-C1-10链烯基或Cy-C1-10链炔基；Lb为-C(O)-、-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-、-NRc-C(O)-NRd-、-NRc-C(O)-O-、-O-C(O)-NRc-、-S(O)m-、-SO2-NRc-、-NRc-SO2-、-O-、-NRc-或键；并且Z4为环烷基、环烷基-C1-10烷基、环烯基、环烯基-C1-10烷基、芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基或键；或者R3为下式部分 m、Rc、Rd、R4、R5、R6和Y5每个均如权利要求1中定义。
33.权利要求32的化合物，其中R4为式Z5-Lc-Z6-，其中Z5为Cy、Cy-C1-10烷基、Cy-C1-10链烯基或Cy-C1-10链炔基；Lc为-C(O)-、-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-、-NRc-C(O)-NRd-、-NRc-C(O)-O-、-O-C(O)-NRc-、-S(O)m-、-SO2-NRc-、-NRc-SO2-、-O-、-NRc-、或键；并且Z6为环烷基、环烷基-C1-10烷基、环烯基、环烯基-C1-10烷基、芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基或键。Rc、Rd和m每个均如权利要求1定义。
34.权利要求3的化合物，其中Z3和Z5各独立地为芳基、芳基-C1-10烷基、芳基-C1-10链烯基、芳基-C1-10链炔基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基、杂芳基-C1-10链烯基或杂芳基-C1-10链炔基；Lb和Lc各独立地为-C(O)-、-S(O)m-、-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-、-NRc-C(O)-NRd-、-SO2-NRc-、-NRc-SO2-、-O-、-NRc-、或键；并且Z4和Z6各独立地为芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基、或键。
35.权利要求34的化合物，其中Z3和Z5各独立地为芳基、芳基-C1-10烷基、杂芳基或杂芳基-C1-10烷基；Lb和Lc各独立地为-C(O)-、-S(O)2-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-或-NRc-C(O)-NRd-；其中，Rc和Rd各独立地为H或C1-5烷基；并且Z4和Z6各独立地为芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基、或键。
36.权利要求35的化合物，其中Z3和Z5各独立地为芳基；Lb和Lc各独立地为-NRc-C(O)-NRd-；并且Z4和Z6各独立地为芳基。
37.权利要求32的化合物，其中Y5为-CO-或-O-CO-。
38.权利要求37的化合物，其中Y5为-CO-。
39.权利要求32的化合物，其中R5为H或C1-5烷基。
40.权利要求39的化合物，其中R5为H或C1-2烷基。
41.权利要求32的化合物，其中R6为选自环己基丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、别-异亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、苯丙氨酸、苯甘氨酸、丙氨酸、正缬氨酸、缬氨酸和2-氨基丁酸的氨基酸侧链。
42.权利要求41的化合物，其中R6为选自亮氨酸、异亮氨酸、别-异亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、丙氨酸、正缬氨酸、缬氨酸和2-氨基丁酸的氨基酸侧链。
43.权利要求42的化合物，其中R6为亮氨酸或异亮氨酸侧链。
44.权利要求32的化合物，其中R1为Z1-La-Z2-，其中Z1为未取代的或由Cy、-CO-Rd、卤素、氧代或芳基取代的链烯基取代的芳基；La为-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-或-SO2-；并且Z2为杂芳基、杂环基或键。
45.权利要求44的化合物，其中Z1为苯基；La为-SO2-；并且Z2为氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、咪唑、哌啶或吗啉。
46.权利要求44的化合物，其中L′为 其中Y1为-NRc-C(O)-、-NRc-、-NRc-S(O)2-或-NRc-C(NRd)-；R2为H或C1-5烷基；Y2为键或-C(Rh)(Ri)-；并且X为-C(O)ORc；其中Rc、Rh和R1各独立地为H或C1-5烷基。
47.权利要求46的化合物，其中Y1为-NH-C(O)-；R2为H；Y2为键；并且X为-C(O)OH。
48.权利要求46的化合物，其中L为 其中Y3为键、C1-5烷基或C1-5链烯基；并且Y4为键、-C(O)-NRc-、-C(O)-、-NRc-或-O-，其中Rc-为H或C1-5烷基。
49.权利要求48的化合物，其中Y3为键或C1-5烷基；并且Y4为-C(O)-NH-。50、权利要求48的化合物，其中R3为式(i)部分 其中R4为Z5-Lc-Z6-，其中R5为芳基、芳基-C1-10烷基、芳基-C1-10链烯基、芳基-C1-10链炔基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基、杂芳基-C1-10链烯基或杂芳基-C1-10链炔基；Lc为-C(O)-、-S(O)m-、-O-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NRc-、-NRc-C(O)-、-NRc-C(O)-NRd-、-S(O)2-NRc-、-NRc-S(O)2-、-O-、-NRc-、或键，Rc和Rd各独立地为H或C1-5烷基；并且Z6为芳基、芳基-C1-10烷基、杂环基、杂环基-C1-10烷基、杂芳基、杂芳基-C1-10烷基、或键。
51.权利要求50的化合物，其中Z5为芳基；Lc为-NRc-C(O)-NRd-；并且Z6为芳基。
52.权利要求51的化合物，其中R4为邻-甲基苯基-脲基-苯基-CH2-。
53.叔利要求51的化合物，其中Y5为-CO-或-O-CO-。
54.权利要求53的化合物，其中R5为H或C1-2烷基。
55.权利要求54的化合物，其中R6为选自亮氨酸、异亮氨酸、别-异亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、丙氨酸、正缬氨酸、缬氨酸和2-氨基丁酸的氨基酸侧链。
56.权利要求55的化合物，其中R6为亮氨酸或异亮氨酸侧链。
57.权利要求1的化合物，其中所述化合物的化学结构为
58.权利要求1的化合物，其中所述化合物的化学结构为 其中R21和R22各独立地选自23)Cy，24)-ORc，25)-NO2，26)-卤素，27)-S(O)mRc，28)-SRc，29)-S(O)2ORc，30)-S(O)2NRcRd，31)-NRcRd，32)-O(CReRf)nNRcRd，33)-C(O)Rd，34)-CO2Rc，35)-CO2(CReRf)nCONRcRd，36)-OC(O)Rc，37)-CN，38)-C(O)NRcRd，39)-NRcC(O)Rd，40)-OC(O)NRcRd，41)-NRcC(O)ORd，42)-RcC(O)NRdRe，43)-CRc(NORd)，44)-CF3，45)-OCF3，46)氧代，47)C1-10烷基，48)C2-10链烯基，49)C2-10链炔基，50)芳基-C1-10烷基，或51)杂芳基-C1-10烷基其中各烷基、链烯基、链炔基、芳基、杂芳基为未取代的或由独立地选自Rg的取代基取代的；R23选自1)H，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)芳基，6)芳基-C1-10烷基，7)杂芳基，或8)杂芳基-C1-10烷基，其中烷基、链烯基和链炔基为未取代的或由1-4个独立地选自Ra的取代基取代的，并且芳基和杂芳基为未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的。
59.权利要求1的化合物，其中所述化合物为化合物5192、5283、6696、6697、6714、7234、7256、7578、7662、8221、8308、8309、8341、8342、8343、8367、8368、8469、8491、8554、8555、8571、8642、8646、8685、8689、8690、8698、8749、8758、8796、8797、8809、9120、9169、9171、9182、9227、9264、9271、9315、9418、9621、7083、7200、7328、7399、7788、7855、8205、8290、8291、8294、8295、8304、8557、8582、8583、8585、8586、8606、8607、8628、8674、8684、8723、8746、8929、9273或9275。
60.权利要求1的化合物，其中所述化合物为化合物7083、7200、7328、7399、7788、7855、8205、8290、8291、8294、8295、8304、8557、8582、8583、8585、8586、8606、8607、8628、8674、8684、8723、8746、8929、9273或9275。
61.一种包含药用载体和有效量下式化合物或其可药用盐的组合物R3-L-L′-R1其中R1为52)H，53)C1-10烷基，54)C2-10链烯基，55)C2-10链炔基，56)Cy，57)Cy-C1-10烷基，58)Cy-C1-10链烯基，或59)Cy-C1-10链炔基；L′为具有1-5个碳原子的烃连接基部分并且为(i)任选地由一个或多个下列基团间隔的或在末端与一个或多个下列基团连接的1)-C(O)-，2)-O-C(O)-，3)-C(O)-O-，4)-C(O)-NRc-，5)-NRc-C(O)-，6)-NRc-C(O)-NRd-，7)-NRc-C(O)-O-，8)-O-C(O)-NRc-，9)-S(O)m-，10)-SO2-NRc-，11)-NRc-SO2-，12)-NRc-C(NRm)-，13)-O-，14)-NRc-，或15)-Cy；或者(ii)未取代的或由一个或多个独立地选自Rb的取代基取代的；L为具有1-4个碳原子的烃连接基部分并且为(i)任选地由一个或多个下列基团间隔的或在末端与一个或多个下列基团连接的1)-C(O)-，2)-O-C(O)-，3)-C(O)-O-，4)-C(O)-NRc-，5)-NRc-C(O)-，6)-NRc-C(O)-NRd-，7)-NRc-C(O)-O-，8)-O-C(O)-NRc-，9)-S(O)m-，10)-SO2-NRc-，11)-NRc-SO2-，12)-O-，13)-NRc-，或14)Cy；或者(ii)未取代的或由一个或多个独立地选自Rb的取代基取代的；并且R3为烷基、链烯基、链炔基、环烷基、芳基稠合的环烷基、环烯基、芳基、芳烷基、芳基取代的链烯基或链炔基、环烷基取代的烷基、环烯基取代的环烷基、二芳基、烯氧基、炔氧基、芳烷氧基，芳基取代的烯氧基或炔氧基、烷基氨基、烯基氨基或炔基氨基、芳基取代的烷基氨基、芳基取代的烯基氨基或炔基氨基、芳氧基、芳基氨基、杂环基、杂环基取代的烷基、杂环基取代的氨基、羧基烷基取代的芳烷基或羰环稠合的芳基；或者R3为下式(i)部分 其中Y5选自-CO-、-O-CO-、-SO2-或-PO2-；R4和R6各独立地为烷基、链烯基、链炔基、环烷基、芳基稠合的环烷基、环烯基、芳基、芳烷基、芳基取代的链烯基或链炔基、环烷基取代的烷基、环烯基取代的环烷基、二芳基、烯氧基、炔氧基、芳烷氧基，芳基取代的烯氧基或炔氧基、烷基氨基、烯基氨基或炔基氨基、芳基取代的烷基氨基、芳基取代的烯基氨基或炔基氨基、芳氧基、芳基氨基、杂环基、杂环基取代的烷基、杂环基取代的氨基、羧基烷基取代的芳烷基、羰环稠合的芳基、或氨基酸侧链，所述氨基酸侧链选自精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、S-甲基半胱氨酸、甲硫氨酸及其相应的亚砜和砜衍生物、环己基丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、别-异亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、苯丙氨酸、苯甘氨酸、酪氨酸、色氨酸、脯氨酸、丙氨酸、鸟氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、正缬氨酸、缬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、β-氰基丙氨酸、2-氨基丁酸和别苏氨酸；并且R5为氢、芳基、烷基、链烯基、链炔基、环烷基、环烯基或芳基取代的烷基。R5和R6可以与它们所连接的原子一起形成5-7元杂环；上述各Cy代表环烷基、环烯基、杂环基、芳基或杂芳基；上述各烷基、链烯基和链炔基为未取代的或由1-4个独立地选自Ra的取代基取代的；并且上述各环烷基、环烯基、杂环基、芳基和杂芳基为未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的；Ra为1)Cy，2)-ORc，3)-NO2，4)-卤素，5)-S(O)mRc，6)-SRc，7)-S(O)2ORc，8)-S(O)2NRcRd，9)-NRcRd，10)-O(CReRf)nNRcRd，11)-C(O)Rd，12)-CO2Rc，13)-P(O)(ORc)(ORd)，14)-P(O)(Rc)(ORd)，15)-S(O)mORc，16)-C(O)NRcRj，17)-CO2(CReRf)nCONRcRd，18)-OC(O)Rc，19)-CN，20)-NRcC(O)Rd，21)-OC(O)NRcRd，22)-NRcC(O)ORd，23)-NRcC(O)NRdRe，24)-CRc(NORd)，25)-CF3，26)-OCF3或27)氧代其中Cy是未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的，Rb为1)选自Ra的基团，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)芳基-C1-10烷基，或6)杂芳基-C1-10烷基，其中各烷基、链烯基、链炔基、芳基和杂芳基为未取代的或由独立地选自Rg的取代基取代的。Rc、Rd、Re和Rf各独立地为1)H，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)Cy或6)Cy-C1-10烷基；其中各烷基、链烯基、链炔基和Cy为未取代的或由1-4个独立地选自Rg的取代基取代的。Rg为1)卤素，2)氨基，3)羧基，4)-COO-C1-4烷基，5)-P(O)(OH)2，6)-P(O)(OH)(O-C1-4烷基，7)-P(O)(C1-4烷基)2，8)-P(O)(OH)(C1-4烷基)，9)-P(O)(O-C1-4烷基)(C1-4烷基)，10)-SO2-C1-4烷基，11)-CO-NH2，12)-CO-NH(C1-4烷基)，13)-CO-NH(C1-4烷基)2，14)C1-4烷基，15)C1-4烷氧基，16)芳基，17)芳基-C1-4烷氧基，18)羟基，19)CF3或20)芳氧基；Rm为1)H，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)Cy，6)Cy-C1-10烷基，7)C1-10酰基，8)氰基，9)C1-10烷基-磺酰基，或10)C1-10烷氧基；并且Rj为1)H，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)氰基，6)芳基，7)芳基-C1-10烷基，8)杂芳基，9)杂芳基C1-10烷基，或10)-SO2Rk，其中Rk为C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基和芳基；Rc和Rd可以与它们所连接的原子一起不形成或形成5-7元杂环，所述环含0-2个独立地选自O、N和S的杂原子；Re和Rf可以与它们所连接的原子一起不形成或形成5-7元杂环，所述环含0-2个独立地选自O、N和S的杂原子；m为0、1或2；n为1-10的整数；前提条件是当L是饱和的并且具有1-4个碳原子时，(i)L必须包含选自O、S和N的杂原子；或者(ii)R3必须包含邻-甲基苯基-脲基-苯基-CH2-部分；或者(iii)R1必须仅包含一个Cy基。
62.权利要求61的化合物，其中所述化合物为化合物5192、5283、6696、6697、6714、7234、7256、7578、7662、8221、8308、8309、8341、8342、8343、8367、8368、8469、8491、8554、8555、8571、8642、8646、8685、8689、8690、8698、8749、8758、8796、8797、8809、9120、9169、9171、9182、9227、9264、9271、9315、9418、9621、7083、7200、7328、7399、7788、7855、8205、8290、8291、8294、8295、8304、8557、8582、8583、8585、8586、8606、8607、8628、8674、8684、8723、8746、8929、9273或9275。
63.一种抑制VLA-4-依赖性细胞粘合的方法，它包括给予需要治疗的患者有效量下式化合物或其可药用盐R3-L-L′-R1其中R1为60)H，61)C1-10烷基，62)C2-10链烯基，63)C2-10链炔基，64)Cy，65)Cy-C1-10烷基，66)Cy-C1-10链烯基，或67)Cy-C1-10链炔基；L′为具有1-5个碳原子的烃连接基部分并且为(i)任选地由一个或多个下列基团间隔的或在末端与一个或多个下列基团连接的1)-C(O)-，2)-O-C(O)-，3)-C(O)-O-，4)-C(O)-NRc-，5)-NRc-C(O)-，6)-NRc-C(O)-NRd-，7)-NRc-C(O)-O-，8)-O-C(O)-NRc-，9)-S(O)m-，10)-SO2-NRc-，11)-NRc-SO2-，12)-NRc-C(NRm)-，13)-O-，14)-NRc-，或15)-Cy；或者(ii)未取代的或由一个或多个独立地选自Rb的取代基取代的；L为具有1-4个碳原子的烃连接基部分并且为(i)任选地由一个或多个下列基团间隔的或在末端与一个或多个下列基团连接的1)-C(O)-，2)-O-C(O)-，3)-C(O)-O-，4)-C(O)-NRc-，5)-NRc-C(O)-，6)-NRc-C(O)-NRd-，7)-NRc-C(O)-O-，8)-O-C(O)-NRc-，9)-S(O)m-，10)-SO2-NRc-，11)-NRc-SO2-，12)-O-，13)-NRc-，或14)Cy；或者(ii)未取代的或由一个或多个独立地选自Rb的取代基取代的；并且R3为烷基、链烯基、链炔基、环烷基、芳基稠合的环烷基、环烯基、芳基、芳烷基、芳基取代的链烯基或链炔基、环烷基取代的烷基、环烯基取代的环烷基、二芳基、烯氧基、炔氧基、芳烷氧基，芳基取代的烯氧基或炔氧基、烷基氨基、烯基氨基或炔基氨基、芳基取代的烷基氨基、芳基取代的烯基氨基或炔基氨基、芳氧基、芳基氨基、杂环基、杂环基取代的烷基、杂环基取代的氨基、羧基烷基取代的芳烷基、或羰环稠合的芳基；或者R3为下式部分 其中Y5选自-CO-、-O-CO-、-SO2-或-PO2-；R4和R6各独立地为烷基、链烯基、链炔基、环烷基、芳基稠合的环烷基、环烯基、芳基、芳烷基、芳基取代的链烯基或链炔基、环烷基取代的烷基、环烯基取代的环烷基、二芳基、烯氧基、炔氧基、芳烷氧基，芳基取代的烯氧基或炔氧基、烷基氨基、烯基氨基或炔基氨基、芳基取代的烷基氨基、芳基取代的烯基氨基或炔基氨基、芳氧基、芳基氨基、杂环基、杂环基取代的烷基、杂环基取代的氨基、羧基烷基取代的芳烷基、羰环稠合的芳基、或氨基酸侧链，所述氨基酸侧链选自精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、S-甲基半胱氨酸、甲硫氨酸及其相应的亚砜和砜衍生物、环己基丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、别-异亮氨酸、叔亮氨酸、正亮氨酸、苯丙氨酸、苯甘氨酸、酪氨酸、色氨酸、脯氨酸、丙氨酸、鸟氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、正缬氨酸、缬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、β-氰基丙氨酸、2-氨基丁酸和别苏氨酸；并且R5为氢、芳基、烷基、链烯基、链炔基、环烷基、环烯基或芳基取代的烷基。R5和R6可以与它们所连接的原子一起形成5-7元杂环；上述各Cy代表环烷基、环烯基、杂环基、芳基或杂芳基；上述各烷基、链烯基和链炔基为未取代的或由1-4个独立地选自Ra的取代基取代的；并且上述各环烷基、环烯基、杂环基、芳基和杂芳基为未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的；Ra为1)Cy，2)-ORc，3)-NO2，4)-卤素，5)-S(O)mRc，6)-SRc，7)-S(O)2ORc，8)-S(O)2NRcRd，9)-NRcRd，10)-O(CReRf)nNRcRd，11)-C(O)Rd，12)-CO2Rc，13)-P(O)(ORc)(ORd)，14)-P(O)(Rc)(ORd)，15)-S(O)mORc，16)-C(O)NRcRj，17)-CO2(CReRf)nCONRcRd，18)-OC(O)Rc，19)-CN，20)-NRcC(O)Rd，21)-OC(O)NRcRd，22)-NRcC(O)ORd，23)-NRcC(O)NRdRe，24)-CRc(NORd)，25)-CF3，26)-OCF3或27)氧代其中Cy是未取代的或由1-4个独立地选自Rb的取代基取代的，Rb为1)选自Ra的基团，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)芳基-C1-10烷基，或6)杂芳基-C1-10烷基，其中各烷基、链烯基、链炔基、芳基和杂芳基为未取代的或由独立地选自Rg的取代基取代的。Rc、Rd、Re和Rf各独立地为1)H，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)Cy或6)Cy-C1-10烷基；其中各烷基、链烯基、链炔基和Cy为未取代的或由1-4个独立地选自Rg的取代基取代的；Rg为1)卤素，2)氨基，3)羧基，4)-COO-C1-4烷基，5)-P(O)(OH)2，6)-P(O)(OH)(O-C1-4烷基，7)-P(O)(C1-4烷基)2，8)-P(O)(OH)(C1-4烷基)，9)-P(O)(O-C1-4烷基)(C1-4烷基)，10)-SO2-C1-4烷基，11)-CO-NH2，12)-CO-NH(C1-4烷基)，13)-CO-NH(C1-4烷基)2，14)C1-4烷基，15)C1-4烷氧基，16)芳基，17)芳基-C1-4烷氧基，18)羟基，19)CF3或20)芳氧基；Rm为1)H，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)Cy，6)Cy-C1-10烷基，7)C1-10酰基，8)氰基，9)C1-10烷基-磺酰基，或10)C1-10烷氧基；并且Rj为1)H，2)C1-10烷基，3)C2-10链烯基，4)C2-10链炔基，5)氰基，6)芳基，7)芳基-C1-10烷基，8)杂芳基，9)杂芳基C1-10烷基，或10)-SO2Rk，其中Rk为C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基和芳基；Rc和Rd可以与它们所连接的原子一起不形成或形成5-7元杂环，所述环含0-2个独立地选自O、N和S的杂原子；Re和Rf可以与它们所连接的原子一起不形成或形成5-7元杂环，所述环含0-2个独立地选自O、N和S的杂原子；m为0、1或2；n为1-10的整数；前提条件是当L是饱和的并且具有1-4个碳原子时，(i)L必须包含选自O、S和N的杂原子；或者(ii)R3必须包含邻-甲基苯基-脲基-苯基-CH2-部分；或者(iii)R1必须仅包含一个Cy基。
64.权利要求63的方法，其中所述化合物为化合物5192、5283、6696、6697、6714、7234、7256、7578、7662、8221、8308、8309、8341、8342、8343、8367、8368、8469、8491、8554、8555、8571、8642、8646、8685、8689、8690、8698、8749、8758、8796、8797、8809、9120、9169、9171、9182、9227、9264、9271、9315、9418、9621、7083、7200、7328、7399、7788、7855、8205、8290、8291、8294、8295、8304、8557、8582、8583、8585、8586、8606、8607、8628、8674、8684、8723、8746、8929、9273或9275。
全文摘要
本发明公开了一种具有通式R
文档编号A61P27/14GK1377268SQ00813728
公开日2002年10月30日 申请日期2000年8月14日 优先权日1999年8月13日
发明者李文成, 丹尼尔·斯科特, 马克·科尼比斯, 拉塞尔·彼得 申请人:比奥根公司