专利名称：一种造血因子及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种蛋白质及其应用，特别是涉及一种具有促进造血机能的蛋白质及其应用。
骨髓移植是各种血液肿瘤、部分实体瘤、再生不良性贫血症、重度地中海型贫血症以及一些先天性免疫缺乏症或代谢性疾病的根本治疗方法。近年来世界上接受骨髓移植的病患逐年增加，显示骨髓移植已经成为目前治疗的趋势。1993年以来外周血造血干细胞移植迅速崛起和发展。采集外周血和脐带血造血干细胞简单、安全，避免了全身麻醉采集骨髓的痛苦，容易为病人所接受；移植后重建造血功能早而迅速；感染、出血症状轻，对症治疗少；住院时间短，节省住院开支，尤其重要的是脐带血中含有更加原始的造血干细胞，不仅具有更强的增殖和分化的潜力还具有更低的配型要求，所以目前脐带血造血干细胞移植大有取代骨髓移植的趋势。
放化疗后白细胞-中性粒细胞、红细胞和血小板数量都会大大降低。白细胞-中性粒细胞水平降低可能会导致病人感染，临床治疗药物主要是rhG-CSF和rhGM-CSF，它们的作用主要是通过短时间内增加白细胞数量来提高机体抗感染的能力；放化疗后短期的血小板减少症是造成病人死亡的一个重要原因，IL-11是临床常用的促血小板生成的因子；EPO用于增加红细胞的数量。为了达到综合的造血效果，特别是在骨髓和外周血造血干细胞移植中，临床上往往要同时使用几种因子，不仅大大提高了治疗成本也增加了治疗程序和风险。另外，许多肿瘤细胞都有G-CSF和GM-CSF的受体，所以注射这些因子反而有导致放化疗后残存的癌细胞的增殖，而使肿瘤复发率升高的潜在危险。
本发明所提供的造血因子，它的氨基酸残基序列为N-MYGFGG-C。
上述由六个氨基酸残基组成的造血因子可以用常规的化学合成方法获得，也可以用常规的生物学方法进行合成。合成的造血因子可以用HPLC-C18进行纯化，纯度可以达到95％以上。
本发明的另一个目的是提供氨基酸残基序列为N-MYGFGG-C的造血因子在制药领域中的应用。
以本发明的造血因子为活性成分，可以制成促进造血机能恢复、治疗贫血、促进骨形成、造血干细胞移植体外动员剂、促进干细胞增殖和分化、抗疲劳，特别是用于运动员体力恢复的药物。
为了应用方便，本发明的药物中还可以加有医学上可接受的载体和辅剂。本发明药物的剂型是多种多样的，可以根据不同的需要，制成注射剂、口服剂、外用制剂等多种剂型。
本发明药物的一般用量为每天0.1-100微克/公斤体重，一般3-7天为一疗程。
本发明的造血因子在体外、体内均可促进造血干细胞的增殖和分化。目前包括临床实验和公开的文献报道，还没有一种因子能够象本发明的造血因子一样具有促进各系血细胞平衡增加的造血效果。这种效果在提高了白细胞—粒细胞水平，使机体抗感染能力增强的同时还降低了血小板减少症带来的危险。
本发明造血因子的特点使得它具有以下的治疗效果和应用前景1)在癌瘤化疗、放疗引起的骨髓抑制以及放射线引起的意外损伤中，本发明的造血因子能促进放化疗后癌症病人造血机能的全面恢复。
2)骨髓移植本发明的造血因子可以在短时间内刺激骨髓移植物的生长，这样就能够减少骨髓移植恢复的时间，并缩短骨髓移植之前放化疗后血小板减少症的时间，从而减少患者被感染的机会、减少住院时间以及降低死亡率；另外，它还是骨髓移植、外周血移植以及脐带血造血干细胞移植最理想的干细胞动员剂和体外扩增剂。
3)用于治疗肾性贫血、慢性癌性贫血、再生障碍性贫血和其它各种贫血病。
4)提高运动员体能水平和促进体能恢复本发明的造血因子能促进各种血液细胞的平衡增加，其中包括红细胞，因此对于提高运动员体能水平和促进体能恢复有帮助，并且用量很少。
5)治疗骨质疏松和促进骨折愈合本发明的造血因子具有促进骨形成和增加骨密度的作用，因此也可以用于骨质疏松的治疗。由于本发明的造血因子直接作用于成骨细胞，因此不会产生其它激素类药物带来的副作用。由于本发明的造血因子对成骨和骨髓修复的促进作用，在促进骨折愈合、减轻骨痛等方面是一个很好的候选药物。
6)在爱滋病中的应用能纠正骨髓抑制药物所致的白细胞减少及贫血。
下面结合附图对本发明的实施例做进一步说明。
图2显示本发明造血因子刺激爆炸式红细胞系集落形成图3显示本发明造血因子刺激粒细胞巨噬细胞系集落形成图4显示本发明造血因子刺激巨核细胞系集落形成图5显示本发明造血因子刺激CD34+类群细胞的扩增表1本发明的造血因子促进化疗后小鼠外周血中各种血细胞数量平衡增加
实施例2、本发明造血因子促进人脐带血造血干细胞的非定向分化和增殖CD34+细胞从脐带血中用淋巴细胞分离液分离，加入阳性对照和不同浓度的本发明造血因子，培养约一周后，发现红系、粒系和巨噬细胞细胞系祖细胞集落均达到或超过阳性对照，结果如
图1-4所示，其中，图1中1-8组用本发明造血因子作为细胞培养的刺激因子，浓度依次为10-12-10-5M，9组为阳性对照(用EPO处理)；图2中1-8组用本发明造血因子作为细胞培养的刺激因子，浓度依次为10-12-10-5M，9组为阳性对照(用EPO处理)；图3中1-8组用本发明造血因子作为细胞培养的刺激因子，浓度依次为10-12-10-5M，9组为阳性对照(用G-CSF处理)；图4中1-8组用本发明造血因子作为细胞培养的刺激因子，浓度依次为10-12-10-5M，9组为阳性对照(用IL-11处理)从图中可以看出，脐带血造血干细胞在体外培养过程中加入不同浓度的本发明造血因子，可以刺激CD34+细胞的增殖。另外一部分样品用流氏细胞仪检测CD34+细胞的百分率，单克隆抗体采用鼠抗人CD34+PE抗体，结果发现脐带血造血干细胞中CD34+细胞的数目在加入本发明造血因子组5天后扩增了13.4倍，而IL3+IL11+IL6+SCF+EPO联合使用组扩增效率为15.6倍，两者几乎相同，远远高于IL3组的5.5倍和G-CSF组的8.6倍(如图5所示，其中混合组的细胞因子包括IL-3、IL-6、IL-11、SCF、EPO；加入本发明造血因子的实验组不同剂量分别为10-11M、10-8M、10-5M。)，而且10天后这几个因子联合使用组的CD34+细胞已经检测不到，CD34+细胞的数目为原始数目0.34倍，说明经这几个因子扩增后的造血干细胞和早期的祖细胞几乎全部分化，而加入本发明造血因子组依然可以检测到1.5倍水平的CD34+细胞，说明单独使用本发明造血因子就可以达到几个因子合用的效果，甚至更好，这个结果显示了本发明造血因子在骨髓移植、脐带血移植、骨髓抑制症等的治疗中潜在的应用价值。
实施例3、游泳耐力及缺氧条件下的存活时间小鼠随机分组，对照组注射生理盐水，给药组注射本发明造血因子，连续5天，末次给予受试物3天后，置小鼠在游泳箱中游泳，水深不少于30cm，水温25±0.5，鼠尾根部负荷5％体重的铅皮。记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，作为小鼠游泳时间(min)。另外，于末次给药后第3天分别放入装有碱石灰10g的250ML密闭广口瓶内，记录小鼠的存活时间作为缺氧能力实验，结果如表2所示，从表中可以看出，给药组能明显提高小鼠常压下的抗缺氧能力，并且能显著延长小鼠的负重游泳时间，具有抗疲劳作用(P＜0.01)。
表2本发明造血因子对小鼠耐缺氧及抗疲劳能力的影响(n＝10)
与对照组比较1P＜0.01，2P＜0.0权利要求
1.一种造血因子，它的氨基酸残基序列为N-MYGFGG-C。
2.以权利要求1所述的造血因子为活性成分的促进造血机能恢复的药物。
3.以权利要求1所述的造血因子为活性成分的治疗贫血的药物。
4.以权利要求1所述的造血因子为活性成分的促进骨形成的药物。
5.以权利要求1所述的造血因子为活性成分的用做造血干细胞移植体外动员剂的药物。
6.以权利要求1所述的造血因子为活性成分的用于抗疲劳的药物。
7.权利要求1的造血因子在制造促进造血机能恢复的药物中的应用。
8.权利要求1的造血因子在制造治疗贫血的药物中的应用。
9.权利要求1的造血因子在制造用做造血干细胞移植体外动员剂中的应用。
10.权利要求1的造血因子在制造抗疲劳药物中的应用。
全文摘要
本发明的名称为一种造血因子及其应用。本发明的目的是提供一种效果显著的造血因子。本发明所提供的造血因子，它的氨基酸残基序列为N－MYGFGG－C。以本发明的造血因子为活性成分，可以制成促进造血机能恢复、治疗贫血、促进骨形成、造血干细胞移植体外动员剂、促进干细胞增殖和分化、抗疲劳的药物，具有重要意义和广阔的应用前景。
文档编号A61P7/06GK1427011SQ0114480
公开日2003年7月2日 申请日期2001年12月20日 优先权日2001年12月20日
发明者朱蕾 申请人:朱蕾