专利名称：N－脱乙酰基硫代秋水仙素衍生物及包含其的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及式(I)的N-脱乙酰基硫代秋水仙素或其电子等排物的衍生物。 其中n为0到8的整数；Y为CH2基，或者当n等于1时，也可以是式NH的基团。
秋水仙素和硫代秋水仙素是已知的抑菌化合物，能够通过和微管蛋白相互作用使微管去稳定。
秋水仙素目前用于治疗痛风和相关的炎症，但由于其很高的胃肠毒性，它的用途被限制在急性期。
鉴于它们可能被用作抗肿瘤药物，人们研究了大量的秋水仙素或硫代秋水仙素的衍生物，但是由于这类化合物的治疗指数常非常有限，研究者们的努力至今没有成功。
过去仅有一种秋水仙素衍生物，即脱羰秋水仙素在临床治疗白血病中使用过，但极不成功。
现在发现式(I)的化合物具有抗增殖活性，尤其是对表达MDR(广谱抗药性)表型的细胞，其中对敏感性细胞的活性与对抗性细胞的活性的比例大约为1∶1。
事实上，本发明的化合物有很强的抗有丝分裂活性，其特征在于具有令人满意的治疗指数，这使它们适合治疗各种形式的肿瘤、以及变性类风湿关节炎(一种以白细胞过度增殖和不正常迁移为特征的疾病)。
化合物(I)与最有效的抗肿瘤药物相比具有类似的细胞毒性，但其具有显著较宽的作用谱，尤其能作用于对已知药物有抗性的细胞。
其中Y为CH2基的化合物(I)是由N-脱乙酰基硫代秋水仙素和二羧酸活性衍生物在无水溶剂中反应制备的。合适的二羧酸活性衍生物的例子包括氯化物、活性酸酐或酯类，尤其是所述酸类和N-羟基琥珀酰亚胺反应制得的N-羟基琥珀酰二酯。反应优选在碱例如三乙胺存在下，在诸如乙醚，二噁烷或四氢呋喃的溶剂中完成。
另一方面，其中Y为NH基且n等于1的化合物(I)，是在胺和缩合剂例如二环己基碳二亚胺(DCC)存在下由N-脱乙酰基硫代秋水仙素和N-羟基琥珀酰亚胺在合适的非质子溶剂中反应制得的，所述非质子溶剂优选为氯化烃(二氯甲烷、氯仿)。所述化合物也可以作为二羧酸N-羟基琥珀酰二酯和N-脱乙酰基硫代秋水仙素反应的副产品而获得。
我们评价了这些化合物对众多表达MDR表型的抗性肿瘤细胞的活性；证明这些化合物对表达MDR的不同敏感性结肠系尤其有效。
以下表格以举例的方式报导了这两种化合物的活性，以硫代秋水仙素和紫杉酚作为参考分子，对比了它们的生物活性。
表
根据M.C.Alley等，Cancer Research，48，589-601，1998评价细胞毒性。
如上报导的数据证明本发明的化合物在敏感性细胞系和对于各种抗肿瘤药物具不同的耐药性的细胞系中均有很高的细胞毒性。
因此本发明的化合物在治疗增生疾病中是有用的，尤其可用于治疗不同起因的肿瘤、类风湿性关节炎和其中表现出需要抗增生和抗炎症的其它变性疾病。
为了这个目的，化合物(I)以药物组合物形式给药，所述药物组合物形式适合口服、肠胃外、表皮、或经皮给药。化合物(I)的剂量依给药途径在1至100mg/m2身体面积的范围内变化。化合物优选通过口服给药。
组合物的例子包括胶囊、片剂、瓶、乳膏、溶液、颗粒。
以下实施例更详细地阐释了本发明。
实施例1其中Y为CH2且n等于2的化合物(I)(Tiocol 39)的制备在氮气下，于室温将100mg N-脱乙酰基硫代秋水仙素(M.W.＝373g/mol，0.27mmol)溶于6ml无水二噁烷中。加入46mg活化为N-羟基琥珀酰二酯的己二酸(M.W.＝340g/mol，0.135mmol)和40μl无水三乙胺(M.W.＝101g/mol，d＝0.726g/ml，0.27mmol)。混合物在氮气下于室温搅拌48小时(TLC监控CHCl3∶MeOH＝95∶5)，蒸去溶剂，产物在二氧化硅上快速层析(洗脱剂CHCl3∶MeOH＝75∶1)回收。
产率85％实施例2其中Y为NH且n等于1的化合物(I)(Tiocol 54)的制备在溶有1g脱乙酰基硫代秋水仙素的40ml无水CH2Cl2溶液中，加入154mg N-羟基琥珀酰亚胺，276mgDCC和476μl二异丙基乙胺，混合物在氮气下回流至少两天。反应过程用TLC(CH2Cl2-EtOH＝95/5)监控。将混合物浓缩至少量，用乙酸乙酯吸收残余物。对产物进行结晶，然后通过快速层析(洗脱剂AcOEt-己烷7/3或(CH2Cl2-EtOH＝95/5)进一步纯化，得500mg产品。
1H-NMR(DMSO-d6-300Mhz)8.80d；7.82br s；7.75-7.60S；7.37；7.18；6.59；4.90m；4.66m；4.52dd；3.96sppm.
13C-NMR(CDCl3)182.5；181.9；172.2；158.0；175.5；157.1；153.8；153.7；153；152.3；151.3；151.2；141.6；141.5；139.4；139.3；135.5；135.5d，134.8；134.7；129.0；128.4(d).
MS(m/z)866.4[(M+Na)+]实施例3其中Y为CH2且n等于6的化合物(I)(Tiocol 33)的制备在氮气下，于室温将200mg N-脱乙酰基硫代秋水仙素(M.W.＝373g/mol，0.54mmol)溶于12ml无水二噁烷，加入91.8mg活化为N-羟基琥珀酰二酯的癸二酸(M.W.＝396g/mol，0.27mmol)和75μl无水三乙胺(M.W.＝101g/mol，d＝0.726g/ml，0.54mmol)。混合物在氮气下于室温搅拌48小时(TLC监控CHCl3∶MeOH＝95∶5)，20小时后加热至50℃，蒸去溶剂。粗产物在二氧化硅上快速层析纯化(洗脱剂CHCl3∶MeOH＝40∶1)，得30mg标题化合物(Rf＝0.3)和实施例2的化合物的混合物.
实施例4其中Y为CH2且n等于0的化合物(I)(Tiocol 43)的制备方法A在氮气下，于室温将190mg N-脱乙酰基硫代秋水仙素(M.W.＝373g/mol，0.512mmol)溶于6ml无水二噁烷。加入80mg活化为N-羟基琥珀酰二酯的琥珀酸(M.W.＝312g/mol，0.256mmol)和70μl无水三乙胺(M.W.＝101g/mol，d＝0.726g/ml，0.512mmol)。混合物在氮气下于室温搅拌48小时(TLC监控CHCl3∶MeON＝95∶5)。蒸去溶剂，剩余物用AcOEt吸收以除去残余的N-脱乙酰基硫代秋水仙素和三乙胺(产品是不溶性的)。
产率45％方法B
在氮气下于室温将100mg N-脱乙酰基-N-琥珀酰基硫代秋水仙素(M.W.＝437g/mol，0.21mmol)溶于8ml无水CH2Cl2。加入93mg BOP(M.W.＝442.3g/mol，0.21mmol)和60μl无水三乙胺(M.W.＝101g/mol，d＝0.726g/ml，0.42mmol)。10分钟后，将80mg N-脱乙酰基硫代秋水仙素(M.W.＝101g/mol，d＝0.726g/ml，0.42mmol)加入混合物中，在氮气下于室温搅拌48小时(TLC监控CHCl3∶MeON＝95∶5)。蒸去溶剂，剩余物用AcOEt吸收以除去残余的N-脱乙酰基硫代秋水仙素和三乙胺(产品是不溶性的)。
产率45％
权利要求
1.式(1)的化合物 其中n为0到8的整数；Y为CH2基，或当n等于1时，也可以为式NH的基团。
2.权利要求1的化合物，其中Y为CH2。
3.权利要求1的组合物，其中Y为NH。
4.含有权利要求1-3的化合物的药物组合物。
5.权利要求1-3的化合物在制备治疗肿瘤和类风湿性关节炎药物中的用途。
全文摘要
式(I)的N－脱乙酰基硫代秋水仙素或其电子等排物的衍生物，其中n为0到8的整数；Y为CH
文档编号A61K31/165GK1418190SQ01806483
公开日2003年5月14日 申请日期2001年3月12日 优先权日2000年3月17日
发明者E·邦巴尔代利, A·蓬迪罗利 申请人:因德纳有限公司