专利名称：Il－8受体拮抗剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的氨磺酰取代的二苯脲化合物、药物组合物、它们的制备方法、及其在治疗IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2和ENA-78介导的疾病中的用途。
背景技术：
许多不同的名称已经应用于白介素-8(IL-8)，例如嗜中性白细胞诱引剂/活化蛋白质-1(NAP-1)、单核细胞衍生的中性粒细胞趋化因子(MDNCF)、嗜中性白细胞活化因子(NAF)和T-细胞淋巴细胞趋化因子。白介素-8是用于嗜中性白细胞、嗜碱细胞和亚群T-细胞的化学诱引剂。它是通过大多数有核细胞包括巨噬细胞、成纤维细胞、内皮和上皮细胞接触TNF、IL-1α、IL-1β或LPS而生成的，以及当接触LPS或者趋化性因子例如FMLP时由嗜中性白细胞本身生成的。M.Baggiolini等人，J.Clin.Invest.84，1045(1989)；J.Schroder等人，J.Immunol.139，3474(1987)和J.Immunol.144，2223(1990)；Strieter，等人，Science 243，1467(1989)和J.Biol.Chem.264，10621(1989)；Cassatella等人，J.Immunol.148，3216(1992)。
GROα、GROβ、GROγ和NAP-2也属于趋化因子族。像IL-8这些趋化因子s也涉及不同的名称。例如GROα、β、γ已经被分别称为MGSAα、β和Y(黑瘤生长刺激活性)，参见Richmond等人，J.Cell Physiology 129，375(1986)和Chang等人，J.Immunol 148，451(1992)。所有具有正好在CXC主体之前的ELR主体的α-族的趋化因子s与IL-8B受体(CXCR2)结合起来。
IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2和ENA-78在体外刺激许多功能。所有它们均显示具有用于嗜中性白细胞的化学诱引剂特性，而IL-8和GROα已经证明具有T-淋巴细胞和嗜碱的趋化性活性。此外IL-8可以诱导从来自正常和特异反应性个体中的嗜碱细胞中释放组胺。GRO-α和IL-8此外可以诱导溶菌酶(lysozomal enzyme)释放以及嗜中性白细胞呼吸的爆裂。也已经显示IL-8增加Mac-1(CD1 1b/CD18)在嗜中性白细胞上的表面显示，无需从头合成。这也许有助于嗜中性白细胞对血管内皮细胞粘附力的增加。许多已知的疾病的特点在于大量的嗜中性白细胞浸润。由于IL-8、GROα、GROβ、GROγ和NAP-2促进嗜中性白细胞的累积和活化，这些趋化因子s已经涉及大量急性和慢性炎症性病症包括牛皮癣和类风湿性关节炎，Baggiolini等人，FEBS Lett.307，97(1992)；Miller等人，Crit.Rev.Immunol.12，17(1992)；Oppenheim等人，Annu.Rev.Immunol.9，617(1991)；Seitz等人，J.Clin.Invest.87，463(1991)；Miller等人，Am.Rev.Respir.Dis.146，427(1992)；Donnely等人，Lancet 341，643(1993)。此外ELR趋化因子s(含有正好在CXC主体之前的氨基酸ELR主体的那些)也已经涉及出血素质(angiostasis)，Strieter等人，Science 258，1798(1992)。
在体外，IL-8、GROα、GROβ、GROγ和NAP-2通过结合和激活7-横跨膜、连接G-蛋白族的受体，尤其是通过结合IL-8受体、最特别的是IL-8β受体(CXCR2)诱导嗜中性白细胞形变、趋化性、颗粒释放以及呼吸的爆裂。Thomas等人，J.Biol.Chem.266，14839(1991)；以及Holmes等人，Science253，1278(1991)。开发用于该受体族成员的非肽小分子拮抗剂已有先例。关于评论参见R.Freidinger在Progreβin Drug Research，40卷，第33-98页，Birkhauser Verlag，Basel 1993。因此，IL-8受体代表用于开发新的消炎剂的有希望的靶。
两种高度亲合力的人的IL-8受体(77％同源)已经被表征为IL-8Rα，仅仅结合IL-8具有高度亲合力，以及IL-8Rβ，其对于IL-8以及GROa、GROβ、GROγ和NAP-2具有高度亲合力。参见Holmes等人，supRa；Murphy等人，Science 253，1280(1991)；Lee等人，J.Biol.Chem.267，16283(1992)；LaRosa等人，J.Biol.Chem.267，25402(1992)；以及Gayle等人，J.Biol.Chem.268，7283(1993)。
在该领域还有需要处理能够结合IL-8α或β受体的化合物。因此，与IL-8产量增加有关的条件(其引起嗜中性白细胞和T-细胞亚群趋化至炎症位置)将得益于作为IL-8受体结合抑制剂的化合物。
发明概述本发明提供治疗趋化因子介导的疾病的方法，其中趋化因子是结合IL-8a或b受体的一种，该方法包括施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。尤其是趋化因子为IL-8。
本发明也涉及在需要其的哺乳动物中抑制IL-8结合其受体的方法，包括给所述的哺乳动物施用有效量的式(I)化合物。
本发明还提供新的式(I)化合物，以及包括式(I)化合物和药物载体或稀释剂的药物组合物。
用于本发明中的式(I)化合物由如下结构表示 其中Rb独立地选自氢、NR6R7、OH、ORa、C1-5烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4烯基、环烷基、环烷基C1-5烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂芳基C2-4烯基、杂环、杂环C1-4烷基，和杂环C2-4烯基部分，所有部分可以被选自卤素、硝基，卤代的C1-4烷基、C1-4烷基、氨基、单或二C1-4烷基取代的胺、ORa、C(O)Ra、NRaC(O)ORa、OC(O)NR6R7、羟基、NR9C(O)Ra、S(O)m′Ra、C(O)NR6R7、C(O)OH、C(O)ORa、S(O)2NR6R7和NHS(O)2Ra的取代基取代1-3次；或者两个Rb取代基连接形成3-10元环，该环任选被取代并且除了碳之外还独立地含有1-3个任选取代的部分选自NRa、O、S、SO和SO2；Ra选自烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环、COORa和杂环C1-4烷基部分，所有部分可以任选被取代；m是1-3的整数；m′是0，或者1或2的整数；n是1-5的整数；q是0，或者1-10的整数；t是0，或者1或2的整数；s是1-3的整数；R1独立地选自氢、卤素、硝基、氰基、C1-10烷基、卤代的C1-10烷基、C2-10烯基、C1-10烷氧基、卤代的C1-10烷氧基、叠氮化物、S(O)tR4、(CR8R8)qS(O)tR4、羟基、羟基取代的C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳基C2-10烯基、芳氧基、芳基C1-4烷氧基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基C2-10烯基、杂芳基C1-4烷氧基、杂环、杂环C1-4烷基、杂环C1-4烷氧基、杂环C2-10烯基、(CR8R8)qNR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、C2-10烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3R8、(CR8R8)qC(O)R11、C2-10烯基C(O)R11、C2-10烯基C(O)OR11、(CR8R8)qC(O)OR11、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qC(NR4)NR4R5、(CR8R8)qNR4C(NR5)R11、(CR8R8)qNHS(O)2R13、和(CR8R8)qS(O)2NR4R5；或者两个R1部分一起可以形成O-(CH2)sO或5-6元饱和或不饱和的环，使得烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、或杂环部分可以任选被取代；R4和R5独立地选自氢、任选被取代的C1-4烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基C1-4烷基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂芳基C1-4烷基、杂环和杂环C1-4烷基，或者R4和R5连同连接它们的氮一起形成5-7元环，该环可以任选包括其他选自O、N和S的杂原子；R6和R7独立地选自氢、C1-4烷基、杂芳基、芳基、烷基芳基、和烷基C1-4杂烷基；或者R6和R7连同连接它们的氮一起形成5-7元环，该环可以任选含有其他选自氧、氮或硫的杂原子，并且该环可以任选被取代；R8是氢或C1-4烷基；R9是C1-4烷基；R10是C1-10烷基C(O)2R8；R11选自氢、任选被取代的C1-4烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基C1-4烷基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂芳基C1-4烷基、任选被取代的杂环、和任选被取代的杂环C1-4烷基；以及R13和R14独立地选自氢、任选被取代的C1-4烷基、任选被取代的C1-4炔基、任选被取代的C1-4烯基任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂芳基C1-4烷基、任选被取代的杂环、任选被取代的杂环C1-4烷基、卤素、硝基、ORa、NR6R7、C(O)Ra、NR11C(O)ORa、OC(O)NR6R7、NR11C(O)Ra、S(O)mRa、C(O)NR6R7、C(O)OH、C(O)ORa、S(O)2NR6R7、和NR11S(O)2Ra；和R20选自氢、烷基、炔基、烯基、杂环基、和杂芳基，所有这些基团可任选地被取代；或其药学上可接受的盐。
发明详述式(I)化合物也可以用于联合兽医治疗除了人之外的哺乳动物，其需要抑制IL-8或其它结合IL-8α和β受体的趋化因子s。用于动物中治疗或预防性治疗的趋化因子介导的疾病包括例如在治疗方法部分中记录的那些疾病。
合适的是，Rb独立地是氢、NR6R7、OH、ORa、C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4烯基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂芳基C2-4烯基、杂环、杂环C1-4烷基、或杂环C2-4烯基部分，所有部分可以任选独立地被卤素、硝基、卤代的C1-4烷基、C1-4烷基、氨基、单或二C1-4烷基取代的胺、环烷基、环烷基C1-5烷基、ORa、C(O)Ra、NRaC(O)ORa、OC(O)NR6R7、芳氧基、芳基C1-4氧、羟基、C1-4烷氧基、NR9C(O)Ra、S(O)m′Ra、C(O)NR6R7、C(O)OH、C(O)ORa、S(O)2NR6R7、NHS(O)2Ra取代1-3次。另外，两个Rb取代基可以连接形成3-10元任选被取代的环，并且该环独立地含有除了碳之外1-3个NR9、O、S、SO或SO2部分，该部分可以任选被取代。
合适的是，Ra是烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环、、或杂环C1-4烷基部分，所有部分可以任选被取代。
合适的是，R1独立地选自氢；卤素；硝基；氰基；卤代的C1-10烷基例如CF3，C1-10烷基例如甲基、乙基、异丙基或正丙基，C2-10烯基，C1-10烷氧基例如甲氧基或乙氧基；卤代的C1-10烷氧基例如三氟甲氧基，叠氮化物，(CR8R8)qS(O)tR4其中t是0、1或2，羟基，羟基C1-4烷基例如甲醇或乙醇，芳基例如苯基或萘基，芳基C1-4烷基例如苄基，芳氧基例如苯氧基，芳基C1-4烷氧基例如苄氧基；杂芳基，杂芳烷基，杂芳基C1-4烷氧基；芳基C2-10烯基，杂芳基C2-10烯基，杂环C2-10烯基，(CR8R8)qNR4R5，C2-10烯基C(O)NR4R5，(CR8R8)qC(O)NR4R5，(CR8R8)qC(O)NR4R10，S(O)3H，S(O)3R8，(CR8R8)qC(O)R11，C2-10烯基C(O)R11，C2-10烯基C(O)OR11，(CR8R8)qC(O)R11，(CR8R8)qC(O)OR11，(CR8R8)qOC(O)R11，(CR8R8)qNR4C(O)R11，(CR8R8)qC(NR4)NR4R5，(CR8R8)qNR4C(NR5)R11，(CR8R8)qNHS(O)2R13，(CR8R8)qS(O)2NR4R5。所有的芳基、杂芳基和含有杂环的部分可以任选被取代，如在此下面所定义。
这里使用的术语″芳基、杂芳基、和含有杂环的部分″指的是环和烷基两者，或如果包括，烯基环，例如芳基、芳烷基和芳烯基环。术语″部分″和″环″可以到处交换使用。
合适的是，R4和R5独立地是氢、任选被取代的C1-4烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基C1-4烷基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂芳基C1-4烷基、杂环、杂环C1-4烷基，或R4和R5连同连接它们的氮一起形成5-7元环，该环可以任选包括其他选自O、N和S的杂原子。
合适的是，R8独立地是氢或C1-4烷基。
合适的是，R9独立地是氢或C1-4烷基；合适的是，q是0或者1-10的整数。
合适的是，R10是C1-10烷基C(O)2R8，例如CH2C(O)2H或CH2C(O)2CH3。合适的是，R11是氢、C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环、或杂环C1-4烷基。
合适的是，R12是氢、C1-10烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的芳烷基。
合适的是，Ra是烷基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环、或杂环C1-4烷基，其中所有这些部分都可以任选被取代。
合适的是，R13和R14是氢、任选被取代的C1-4烷基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂芳基C1-4烷基、任选被取代的杂环、任选被取代的杂环C1-4烷基、卤素、硝基、ORa、NR6R7、NR11C(O)ORa、OC(O)NR6R7、NR11C(O)Ra、C(O)NR6R7、S(O)2NR6R7、和NR11S(O)2Ra。
合适的是，R20是C1-4烷基、烯基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环、或杂环C1-4烷基，所有这些基团可任选地被取代。
除非具体地定义，这里使用的″任选被取代″应该是指这样的基团如卤素例如氟、氯、溴或者碘，羟基；羟基取代的C1-10烷基，C1-10烷氧基例如甲氧基或者乙氧基，S(O)mC1-10烷基，其中m′是0、1或者2，例如甲硫基、甲亚磺酰基或者甲磺酰基；氨基，单和二取代的氨基例如NR4R5基团，NHC(O)R4，C(O)NR4R5，C(O)OH，S(O)2NR4R5，NHS(O)2R20，C1-10烷基例如甲基、乙基、丙基、异丙基或者叔丁基，卤代的C1-10烷基如CF3，任选取代的芳基例如苯基，或者任选取代的芳烷基例如苄基或者苯乙基，任选取代的杂环，任选取代的杂环烷基，任选取代的杂芳基，任选取代的杂芳基烷基，其中这些芳基、杂芳基或者杂环部分可以被卤素；羟基；羟基取代的烷基，C1-10烷氧基；S(O)mC1-10烷基；氨基，单和二取代的烷基氨基例如NR4R5基团；C1-10烷基，或者卤代的C1-10烷基例如CF3取代。
R20合适是C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环、或杂环C1-4烷基。
合适的药学上可接受的盐对于本领域技术人员是熟知的，包括基本的无机和有机酸的盐，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、乙酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、草酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、苯甲酸、水杨酸、苯乙酸和苦杏仁酸。此外，式(I)化合物的药学上可接受的盐还可以与药学上可接受的阳离子形成。合适的药学上可接受的阳离子对于本领域技术人员是熟知的，包括碱、碱土、铵和季铵阳离子。
这里使用的下列术语，指的是●″卤″-所有卤素，也就是说氯、氟、溴和碘。
●″C1-10烷基″或者″烷基″-1-10个碳原子的直链和支链部分，除非链长度另外限制，包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基等。
●这里使用的″环烷基″是指优选为3-8个碳的环状部分，包括但不限于环丙基、环戊基、环己基等。
●这里使用的在所有出现中的″烯基″是指2-10个碳原子的直链或者支链部分，除非链长度局限于此，包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基等。
●″芳基″-苯基和萘基；●″杂芳基″(自己或者在任何结合中，例如″杂芳氧基″、或者″杂芳烷基″)-5-10元芳环体系，其中一个或多个环含有一个或多个选自N、O或者S的杂原子，例如但不局限于吡咯、吡唑、呋喃、噻吩、喹啉、异喹啉、喹唑啉基、吡啶、嘧啶、噁唑、四唑、噻唑、噻二唑、三唑、咪唑、或者苯并咪唑。
●″杂环″(自己或者任何结合中，例如″杂环烷基″)-饱和或者部分不饱和的4-10元环系，其中一个或多个环含有一个或多个选自N、O或者S的杂原子；例如，但不局限于吡咯烷、哌啶、哌嗪、吗啉、四氢吡喃、硫代吗啉、或者咪唑啉。此外，硫可以被任选氧化成砜或者亚砜。
●这里使用的″芳烷基″或者″杂芳烷基″或者″杂环烷基″是指定义如上的C1-10烷基，附着于芳基、杂芳基或者杂环部分，也如这里所定义的，除非另有说明。
●″亚硫酰基″-相应硫化物的氧化物S(O)，术语″硫代″指的是硫化物，术语″磺酰基″指的是完全氧化的S(O)2部分。
●这里使用的″其中两个R1部分可以一起形成5或6元饱和或者不饱和的环″是指形成芳环体系，例如萘，或者连接6元部分饱和或者不饱和环例如C6环烯基即己烯、或者C5环烯基部分例如环戊烯的苯基部分。
说明性的式(I)化合物包括N-烯丙基-N′-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)脲；N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N′-异丙基脲；N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N′-乙基脲；N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N′-丙基脲；N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N′-(乙氧羰基)甲基脲；6-氯-2-羟基-3-(3-苯乙基-脲基)-苯基磺酰胺；3-(3-仲丁基-脲基)-6-氯-2-羟基-苯基磺酰胺；6-氯-3-[3-(1-乙丙基)-脲基]-2-羟基-苯基磺酰胺；6-氯-2-羟基-3-[3-(1-甲丁基)-脲基]-苯基磺酰胺；(2S，3S)-2-[3-(4-氯-2-羟基-3-氨磺酰基-苯基)-脲基]-3-甲基-戊酸甲酯；和(S)-2-[3-(4-氯-2-羟基-3-氨磺酰基-苯基)-脲基]-3-甲基-戊酸。
制备方法式(I)化合物可以通过使用合成步骤获得，其中一些在下面路线中说明。提供用于这些路线中的合成可用于生成具有许多不同的反应的R、Rb和R20基团的式(I)化合物，使用任选的被合适保护的取代基以达到与这里概括的反应相容。在那些情况下随后脱保护，然后获得一般公开的自然化合物。一旦脲核已经建立，另外这些分子式的化合物可以通过应用用于官能团互变的本领域熟知的标准技术来制备。路线1 从市购的的2，6-二氯苯硫酚用上面概括的路线1的路线，可合成所要的4-氯N-(3-磺酰氨基-2-羟苯基)-N″-烷基脲。硫醇可以使用卤化剂例如NCS、NBS、氯或溴在质子溶剂例如醇、乙酸或水或组合存在下氧化成相应的磺酰基卤化物。若在反应混合物中包括缓冲剂如乙酸钠或乙酸钾，且反应在室温或低于室温下进行，可提高产率。然后，相应的磺酰基卤化物在碱如吡啶、三乙胺、碳酸钾或氢化钠存在下与胺缩合，形成类似的磺酰胺2-路线1。二氯磺酰胺2-路线1可用强硝化条件例如在硫酸中的硝酸被硝化形成芳香硝基化合物3-路线1。相对于硝基邻位的氯可用乙酸盐如乙酸钠在冠醚如18-冠-6存在下选择性水解，形成乙酸盐4-路线1。在酸性条件下在醇溶剂如甲醇或乙醇中用催化剂量的酸可水解乙酸根，形成苯酚5-路线1。硝基可通过本领域公知的条件如氢和在碳上的钯、在甲醇中的氯化锡、在乙酸或硫醇中的锌来还原，形成相应的苯胺5-路线1。苯胺然后可与商购的异氰酸酯或硫代异氰酸酯偶合，形成所需的脲或硫脲。或者，所要的异氰酸酯可通过在碱(如碳酸钾)存在下用三光气缩合或在碱(如三乙胺)存在下羧酸与二苯基磷酰基叠氮化物反应来制备。路线2 如果磺酰胺1-路线2(3-路线1)是未官能化的R`＝R″＝H，则其如这里所要求的通过烷基化来被官能化。磺酰胺用碱如氢化钠脱保护，然后用烷基卤如苄基溴或甲基碘烷基化形成2-路线2。然后把磺酰胺用氢化钠和另外的烷基卤第二次烷基化，形成3-路线2。接着用路线1所示的方法可把该化合物转化成所需的脲。路线3 上面示出了得到5-路线3的另外一种途径，在路线3中，商购的2，6-二氯硫醇可以使用卤化剂例如NCS、NBS、氯或溴在质子溶剂例如醇、乙酸或水存在下氧化成磺酰基卤化物。磺酰基卤化物可以通过使用金属氢氧化物例如氢氧化钠或氢氧化钾水解形成相应的磺酸盐。磺酸盐然后可以在硝化条件例如硝酸下在强酸例如硫酸溶剂中被硝化形成硝基苯基磺酸3-路线3。磺酸3-路线3可以使用三步骤工艺被转化为磺酰胺5-路线3，该工艺涉及使用碱例如氢氧化钠、氢化钠或碳酸钠形成金属盐的三步骤形成4-路线3。磺酸盐然后被转化为磺酰氯，使用PCl5与POCl3作为溶剂。磺酰氯然后可以被转化为相应的磺酰胺，使用希望的胺HNR’R”在三乙胺中在-78℃-60℃的温度范围下形成相应的磺酰胺5-路线3。磺酰胺在路线1的方法中作了详细说明。该方法不局限于2，6-二氯苯基硫醇，它还可以被用于2，6-二氟硫醇、2，6-二溴硫醇和2，6-二碘硫醇。这些化合物中的卤素可以通过使用亲核试剂例如烷基硫醇盐、醇盐、胺和氰化物的亲核置换反应转化为相应的氰基、氨基、硫醇或烷氧基化合物。卤素还可以通过本领域熟知的钯偶合和羰化反应进一步被官能化形成相应的式(I)要求的氨基、羰基、烯基、烷基、苯基和杂环取代的产物。
合成实施例本发明将参考下列实施例进行描述，实施例仅仅是说明性的，不能被理解为对本发明范围的限制。所有温度是以摄氏度给出所有溶剂是可获得的最高纯度，所有反应在无水条件下在氩气氛中运行，除非另有说明。
在实施例中，所有温度是摄氏度(℃)。除非另有说明，质谱是在VGZab质谱仪上使用快速原子轰击来进行。1H-NMR(在下文中″NMR″)光谱在250MHz下使用Bruker AM250或Am400光谱仪记录。标明的多重性是s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，m＝多重峰以及br表示宽的信号。Sat.表示饱和溶液，eq表示相对于主要的反应物，反应物的摩尔当量的比例。
2-羟基-3-氨基-6-氯苯基磺酰胺的一般合成合成a)2，6-二氯苯磺酰基氯向200毫升(在下文中″mL″)乙酸、水和二氯甲烷(3/1/4，v/v/v)的混合物中，加入2，6-二氯苯硫醇(10.0克(在下文中″g″))、55.8毫摩尔(在下文中″mmol″)、N-氯代琥珀酰亚胺(37.28g，279mmol)和乙酸钾(2.29g，27.9mmol)。得到的混合物在0℃下搅拌，然后加温至室温过夜。然后用200mL二氯甲烷稀释混合物，然后用水(100mL x3)洗涤。干燥(Na2SO4)有机层并且浓缩得到目标产物(11g，80％)。1HNMR(CDCl3)δ7.57(d，2H)，7.47(t，1H)。
b)2，6-二氯苯磺酰胺把2，6-二氯苯磺酰氯(10.5g，42.77mmol)在100mL吡啶中的溶液滴加到100mL吡啶中，同时在0℃下把无水氨气通过该溶液4小时。用6N盐酸水溶液把该混合物酸化至pH＞1，然后用乙酸乙酯萃取。然后干燥(Na2SO4)合并的有机层并浓缩，得到目标产物(8.69g，90％)。EI-MS(ms/z)225.0，227.1(M)。
c)2，6-二氯-3-硝基苯磺酰胺向在0℃30mL的浓硫酸的2，6-二氯-苯磺酰胺(7.8g，32.5mmol)溶液中滴加硝酸(1.74mL，41.4mmol)。把混合物在0℃下搅拌2小时，然后加入200mL水来得到沉淀。过滤生成的混合物。收集白色固体物，用水洗涤并在真空中干燥，得到目标产物(7.17g，76％)。1HNMR(DMSO-d6)δ8.25(s，2H)，8.20(d，1H)，7.92(d，1H)。
d)6-乙酰氧基-3-硝基-6-氯苯磺酰胺把2，6-二氯-3-硝基苯磺酰胺(2.04g，7.5mmol)、乙酸钾(2.21g，22.5mmol)和18-冠-6(5.95g，22.5mmol)在50mL二甲基亚砜的溶液加热到45℃7天。用1N含水的HCl酸化该混合物，并用乙酸乙酯萃取。浓缩有机层得到粗产物。在硅胶上进行柱色谱法，用乙酸乙酯/己烷/乙酸(50/49/1，v/v/v)洗脱，得到目标产物(1.67g，76％)。EI-MS(m/z)293.1，295.1(M-)。
e)2-羟基-3-硝基-6-氯苯磺酰胺把6-乙酰氧基-3-硝基-6-氯苯磺酰胺(1.72g，5.83mmol)、氯代三甲基硅烷(2mL)和发烟硫酸(0.5mL)在甲酸中的溶液加热到回流20小时。蒸发溶剂，把残余物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。然后干燥(Na2SO4)有机层并浓缩，得到目标产物(1.0g，68％)。EI-MS(m/z)251.1 253.2(M-)。
f)2-羟基-3-氨基-6-氯苯基磺酰胺向2-羟基-3-硝基-6-氯苯磺酰胺(1.1g，4.36mmol)在乙酸乙酯的溶液中加入10％Pd/C(500mg)。用氢气冲洗该混合物，然后在氢气氛下在球压下在室温下搅拌4小时。用才利特(celite)过滤并用甲醇洗涤才利特。蒸发溶剂得到目标产物(91％)。EI-MS(m/z)221.1 223.1(M-)。
实施例1苯胺和异氰酸酯的缩合的标准方法。N-烯丙基-N`-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)脲的制备在室温下把3-氨基-6-氯-2-羟基苯磺酰胺(40mg，0.18mmol)和异氰酸酯烯丙基酯(19μL，0.22mmol)在1mL N，N-二甲基甲酰胺溶液搅拌20小时。混合物用乙酸乙酯稀释、用水洗涤，得到粗产物。用柱色谱在硅凝胶上纯化，用乙酸乙酯/已烷(70/30，v/v)洗脱，得到目标产物(15mg，27％)。LC-MS(m/z)304.1(M-)。
实施例2N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N`-异丙基脲的制备在室温下把3-氨基-6-氯-2-羟基苯磺酰胺(150mg，0.67mmol)和异氰酸异丙基酯(80μL，0.81mmol)在1mL N，N-二甲基甲酰胺中的溶液搅拌20小时。混合物用乙酸乙酯稀释、用水洗涤，得到粗产物。用柱色谱在硅凝胶上纯化，用乙酸乙酯/已烷(50/50，v/v)洗脱，接着从丙酮和己烷中重结晶，得到目标产物(111mg，54％)。LC-MS(m/z)308.0(M+)。
实施例3N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N`-乙基脲的制备在室温下把3-氨基-6-氯-2-羟基苯磺酰胺(150mg，0.67mmol)和异氰酸乙基酯(64μL，0.81mmol)在1mL N，N-二甲基甲酰胺中的溶液搅拌20小时。混合物用乙酸乙酯稀释、用水洗涤，得到粗产物。用柱色谱在硅凝胶上纯化，用乙酸乙酯/已烷(50/50，v/v)洗脱，接着从丙酮和已烷中重结晶，得到目标产物(88mg，44％)。LC-MS(m/z)294.0(M+)。
实施例4N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N`-丙基脲的制备在室温下把3-氨基-6-氯-2-羟基苯磺酰胺(150mg，0.67mmol)和异氰酸丙基酯(76μL，0.81mmol)在1mL N，N-二甲基甲酰胺中的溶液搅拌20小时。混合物用乙酸乙酯稀释、用水洗涤，得到粗产物。用柱色谱在硅凝胶上纯化，用乙酸乙酯/已烷(50/50，v/v)洗脱，接着从丙酮和已烷中重结晶，得到目标产物(92mg，44％)。LC-MS(m/z)308.2(M+)。
实施例5N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N`-(乙氧基羰基)甲基脲的制备在室温下把3-氨基-6-氯-2-羟基苯磺酰胺(170mg，0.76mmol)和异氰酸酯基乙酸乙酯(103μL，0.92mmol)在1.5mL N，N-二甲基甲酰胺中的溶液搅拌20小时。混合物用乙酸乙酯稀释、用水洗涤，得到粗产物。用柱色谱在硅凝胶上纯化，用乙酸乙酯/已烷(60/40，v/v)洗脱，接着通过Gilson HPLC分离，得到目标产物(20mg，7％)。LC-MS(m/z)352.0(M+)。
实施例6N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N`-苯乙基脲的制备在室温下把3-氨基-6-氯-2-羟基苯磺酰胺(120mg，0.54mmol)和异氰酸苯乙基酯(82μL，0.59mmo1)在1mL N，N-二甲基甲酰胺中的溶液搅拌20小时。用柱色谱在硅凝胶上纯化，用乙酸乙酯/已烷(50/50，v/v)洗脱，得到目标产物(109mg，55％)。LC-MS(m/z)369.8(M+)。
实施例7N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N`-叔丁基脲的制备在室温下把3-氨基-6-氯-2-羟基苯磺酰胺(200mg，0.90mmol)和异氰酸仲丁基酯(102μL，0.90mmol)在1.5mL N，N-二甲基甲酰胺中的溶液搅拌20小时。用柱色谱在硅凝胶上纯化，用乙酸乙酯/已烷(40/60，v/v)洗脱，得到目标产物(156mg，54％)。LC-MS(m/z)322.2(M+)。
实施例8用苯胺偶合羧酸来合成脲的标准方法。合成6-氯-3-[3-(1-乙丙基)-脲基]-2-羟基-苯基磺酰胺向2-乙基丁酸(0.125mL，1.0mmol)在DMF(0.5mL)的溶液中加入DPPA(0.25mL，1.2mmol)和TEA(0.25mL，1.8mmol)，并把反应混合物在70℃加热。18小时后，加入3-氨基-6-氯-2-羟基苯磺酰胺(1.0mmol)，并把反应混合物在70℃加热。18小时后，用水骤冷反应混合物并用乙酸乙酯萃取。在无水硫酸镁上干燥有机层，并在减压下浓缩。粗产物通过HPLC纯化，得到51mg(15％)6-氯-3-[3-(1-乙丙基)-脲基]-2-羟基-苯基磺酰胺。LC-MS(m/z)336M+。
实施例9N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N′-甲基戊基脲的合成
2-(叠氮羰基)-戊烷在Ar下，在室温下搅拌叠氮三甲基硅烷(1.15g，9.98mmol)和三氧化铬(998mg，9.98mmol)的混合物，直到得到均匀的溶液。加入二甲基戊醛(500mg，4.99mmol)在5mL二氯甲烷中的溶液。把该混合物再搅拌5小时，然后通过硅胶过滤。浓缩过滤物，得到粗材料。FT-IR 2135.80cm-1，2110.9-1。
N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N′-甲基戊基脲的合成在室温下把3-氨基-6-氯-2-羟基苯磺酰胺(175mg，0.78mmol)和粗2-(叠氮羰基)-戊烷在2mL N，N-二甲基甲酰胺中的溶液搅拌20小时。用柱色谱在硅凝胶上纯化，用乙腈/水(10/90至90/10，v/v，10分钟)洗脱，得到目标产物(5mg，2％)。LC-MS(m/z)336.2(M+)。
实施例10N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N′-(异白氨酸甲基酯)脲的合成在室温下把3-氨基-6-氯-2-羟基苯磺酰胺(400mg，1.80mmol)和(2S，3S)-2-异氰酸基-3-甲基戊酸甲酯(338g，1.98mmol)在1.5mL N，N-二甲基甲酰胺中的溶液搅拌20小时。用柱色谱在硅凝胶上纯化，用乙酸乙酯/已烷/AcOH(60/40/1，v/v/v)洗脱，然后用Gilson HPLC分离，得到目标产物(20mg，28％)。LC-MS(m/z)394.2(M+)。
实施例11N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N′-异白氨酸脲在室温下把N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N′-(异白氨酸甲基酯)脲(80mg，0.20mmol)和氢氧化锂(40mg，1.67mmol)在甲醇中的溶液加热至回流18小时。用Gilson HPLC纯化，用乙腈(0.1％TFA)/水(0.1％TFA)(10/90，v/v，10分钟)洗脱，得到目标产物(42mg，55％)。LC-MS(m/z)380.0(M+)。治疗方法式(I)化合物或其药学上可接受的盐可用于生产用于预防性的或治疗人或其它哺乳动物的任何疾病的药物，该疾病由过量的或无限制的通过这样的哺乳动物细胞例如但不局限于单核细胞和/或巨噬细胞产生的IL-8细胞因子，或其它结合IL-8α或β受体、也被称为类型I或类型II受体的趋化因子恶化或引起。因此，本发明提供治疗趋化因子介导的疾病的方法，其中趋化因子是结合IL-8α或β受体的一种，该方法包括施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。尤其，趋化因子是IL-8，GROα，GROβ，GROγ，NAP-2或ENA-78。
式(I)化合物以足以抑制细胞因子机能尤其是IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78的量施用，使得它们被生物学调节降至生理机能的正常水平，或有时降至低于正常的水平，以便改善疾病状态。IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78的异常水平例如在本发明上下文中，组成如下(i)游离的IL-8水平大于或等于1微微克/毫升；(ii)任何结合IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78的细胞在正常生理水平以上；或(iii)在细胞或组织中存在基本水平以上的IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78，其中分别生成IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78。
式(I)化合物一般已经显示具有较长的t1/2和改进的口服生物可利用率，超过WO 96/25157和WO 97/29743中公开的化合物，这些公开在此作为参考并入。
存在许多疾病状况，其中过量的或无限制的IL-8产生涉及恶化和/或引起疾病。趋化因子介导的疾病包括牛皮癣、特应性皮炎、骨关节炎、类风湿性关节炎、气喘、慢性阻塞性肺病、成人呼吸窘迫综合征、炎症性肠病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、中风、脓毒性休克、多发性硬化、内毒素性休克、革兰氏阴性脓毒病、中毒性休克综合症、心脏和肾脏的再灌注损伤、肾小球性肾炎、血栓形成、对主体移植的反应、阿尔茨海默氏病、同种异体移植物的排斥、疟疾、再狭窄、血管生成、动脉粥样硬化、骨质疏松症、齿龈炎和不希望有的造血干细胞释放和由呼吸病毒症、疱疹病毒、和肝炎病毒所引起的疾病、脑膜炎、囊性纤维化、提前分娩、咳嗽、瘙痒症、多器官机能不良、外伤、劳损、扭伤、挫伤、牛皮癣关节炎、疱疹、脑炎、CNS脉管炎、外伤的脑损伤、CNS肿瘤、蛛网膜下出血、外科后的损伤、间隙的肺炎、过敏症、晶体诱导的关节炎、急性和慢性胰腺炎、急性的酒精性肝炎、坏死性小肠结肠炎、慢性窦炎、葡萄膜炎、多肌炎、脉管炎、痤疮、胃和十二指肠溃疡、乳糜泻、食管炎、舌炎、气流障碍、导气管过度响应、闭塞性细支气管炎组织肺炎、支气管扩张症、毛细支气管炎、闭塞性细支气管炎、慢性支气管炎、cor pulmonae、呼吸困难、肺气肿、高钙酸血、过度膨胀、低氧血、氧过多诱导的炎症、氧不足、外科肺容量减少、肺纤维化、肺性高血压症、右心室肥大、肉状瘤病、细微的导气管疾病、通风-灌注失调、喘鸣、感冒和狼疮。
这些疾病主要地特征在于大量的嗜中性白细胞浸润、T-细胞浸润或新血管生长，以及与增加的IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78产生有关，其引起嗜中性白细胞趋化至炎症性的位置或内皮细胞定向的生长。与其它炎症性的细胞因子(IL-1、TNF、和IL-60相比，IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78具有独特的促进嗜中性白细胞趋化性、酶释放包括但不局限于弹性蛋白酶释放以及过氧化物产生和活化的特性。但是特别是贯穿IL-8类型I或II受体的GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78可以通过促进内皮细胞定向的生长促进肿瘤的新血管形成。因此，抑制IL-8诱导的趋化或活化将导致在嗜中性白细胞浸润中的直接减少。
最近的证据也涉及趋化因子在治疗HIV感染中的作用，Littleman等人，Nature 381，第661页(1996)和Koup等人，Nature 381，第667页(1996)。
现在的证据也显示IL-8抑制剂在治疗动脉粥样硬化中的用途。第一个参考文献，Boisvert等人，J.Clin.Invest，1998，101353363显示通过骨髓移植在干细胞(以及，因此在单核细胞/巨噬细胞)上没有IL-8受体，导致在LDL受体缺乏的小鼠中动脉粥样硬化的血小板演变减少。另外支持的参考文献是Apostolopoulos，等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.1996，161007-1012；Liu，等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol，1997，17317323；Rus，等人，Atherosclerosis.1996，127263-271.；Wang等人，J.Biol.Chem.1996，2718837-8842；Yue，等人，Eur.J.Pharmacol.1993，24081-84；Kαh，等人，Am.J.Pathol.，1993，1421423-1431.；Lee，等人，Immunol.Lett.，1996，53，109-113.；以及Terkeltaub等人，Arterioscler.Thromb.，1994，1447-53。
本发明还提供在急性环境下治疗以及在那些被认为容易受到式(I)趋化因子所示的受体拮抗剂化合物的CNS损伤的个体中的预防的方法。
这里定义的CNS损伤包括例如通过手术切开或穿透头盖外伤，或例如通过对头部区域损伤的闭合的头部损伤。还包括在该定义中的是缺血性的中风，特别是直到大脑区域。
缺血性的中风可以解释为由给特定的大脑区域供血不足引起的病灶的神经病症，通常由于栓子、血栓、或血管局部的粥样的封闭。炎症性的细胞因子在该区域中的作用已经出现，本发明提供潜在治疗这些损伤的方法。用于例如这些的急性损伤相对小的治疗已经可以利用。
TNF-α是具有前炎症性作用的细胞因子，包括内皮性白细胞粘连分子的表现。白细胞渗入缺血性的大脑损害，因此抑制或降低TNF水平的化合物将可用于治疗缺血性的脑损伤。参见Liu等人，Stroke，25卷，第7期，第148l-88页(1994)，其公开在此作为参考并入。
在Shohami等人，J.of Vaisc ＆ Clinical Physiology and Pharmacology，3卷，第2期，第99-107页(1992)中讨论了闭合的头部损伤的模型以及用混合的5-LO/CO剂的治疗，其公开内容在此作为参考并入。在治疗的那些动物中发现降低水肿形成的治疗有改进机能的结果。
式(I)化合物以足以抑制结合IL-8α或β受体的IL-8与这些受体结合的量施用，例如通过嗜中性白细胞趋化性以及活化的减少证明。发现式(I)化合物是IL-8结合的抑制剂是根据式(I)化合物在这里所述的体外受体结合试验中的效果。式(I)化合物已经被证明是类型II IL-8受体的抑制剂。
如这里使用的术语″IL-8介导的疾病或疾病状况″指的是任何以及所有其中IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78起作用的疾病状况，这种作用或者通过本身产生IL-8、、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78，或者通过IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78引起另一个单细胞因子被释放例如但不局限于IL-1、IL-6或TNF。因此其中例如IL-1是主要组分以及响应IL-8其产生或者作用被恶化或者隐藏的疾病状况将被认为是由IL-8介导的疾病状况。
如这里使用的术语″趋化因子介导的疾病或者疾病状况″指的是任何以及所有其中结合IL-8α或者β受体的趋化因子起作用，例如但不局限于IL-8、GRO-α、GRO-β、GROγ、NAP-2或者ENA-78的疾病。这将包括其中IL-8或者通过本身产生IL-8、或者通过IL-8引起另一个单细胞因子释放例如但不局限于IL-1、IL-6或者TNF起作用的疾病状况。因此其中例如IL-1是主要组分以及响应IL-8其产生或者作用被恶化或者隐藏的疾病状况将被认为是由IL-8介导的疾病状况。
如这里使用的术语″细胞因子″指的是任何影响细胞机能的隐藏的多肽，以及是在免疫的、炎症性的或者造血的反应中调整细胞之间相互作用的分子。细胞因子包括，但是不局限于单细胞因子和淋巴细胞因子，与哪个细胞生成它们无关。例如，单细胞因子一般被认为是通过单核细胞例如巨噬细胞和/或单核细胞生成和隐藏。然而许多其它的细胞也生成单细胞因子，例如天然的杀伤细胞、成纤维细胞、嗜碱细胞、嗜中性白细胞、内皮细胞、大脑星形细胞、骨髓基质的细胞、epideral角质化细胞和B-淋巴细胞。淋巴细胞因子一般被认为是由淋巴细胞生成。细胞因子的例子包括，但是不局限于白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肿瘤坏死因子β(TNF-β)。
如这里使用的术语″趋化因子″指的是任何影响细胞机能的隐藏的多肽，以及是在免疫的、炎症性的或者造血的反应中调整细胞之间相互作用的分子，与上述术语″细胞因子″相似。趋化因子主要通过细胞跨膜隐藏，并且引起特定的白血球细胞和白细胞、嗜中性白细胞、单核细胞、巨噬细胞、T-细胞、B-细胞、内皮细胞和平滑肌细胞趋化性和活化。趋化因子s的例子包括，但是不局限于IL-8、GRO-α、GRO-β、GRO-y、NAP-2、ENA-78、IP-10、、MIP-1α、MIP-β、PF4和MCP1，2和3。
为了在治疗中使用式(I)化合物或者其药学上可接受的盐，通常按照标准的药物实行将其配制成药物组合物。因此，本发明也涉及包括有效的、无毒量的式(I)化合物和药学上可接受的载体或者稀释剂的药物组合物。
式(I)化合物、其药学上可接受的盐和包括这样的药物组合物可以通过任何通常用于给药的途径例如口服、局部、不经肠道或者吸入方便地施用。式(I)化合物可以以常规的剂型施用，该剂型按照常规步骤通过将式(I)化合物与标准的药物载体结合来制备。式(I)化合物还可以以常规的剂量与已知的、第二治疗地活性化合物结合施用。这些步骤可以包括混合、粒化和压缩或者溶解成分，视情况而定至所希望的制剂。将领会的是药学上可接受的载体或者稀释剂的形式和特性通过其结合的活性成分的量、给药途径及其他熟知的变量来规定。从与制剂的另一个成分相容以及对其受者没有害的意义上讲，载体必须是″可接受的″。
使用的药物载体可以是例如固体或液体。示范的固体载体是乳糖、白土、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸等。示范的液体载体是糖浆、花生油、橄榄油、水等。同样，载体或稀释剂可以包括本领域熟知的时间延迟材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，单独或与蜡混合。
可以使用各式各样的药物形式。因此，如果使用固体载体，制剂可以被压成片，以粉末或者小药丸形式或者以锭剂或糖锭形式放入硬胶囊中。固体载体的量变化广泛，但是优选为大约25mg-大约1g。当使用液体载体时，制剂将是糖浆、乳剂、软胶胶囊、无菌的可注射的液体例如安瓿或者非水的液体悬浮液的形式。
式(I)化合物可以局部地施用，也就是说非全身的施用。这包括将式(I)化合物外部应用到表皮或者口腔前庭中，以及将这样的化合物滴注至耳朵、眼睛和鼻子中，使得化合物不会显著地进入血流中。相反，全身施用指的是口服、静脉内、腹膜内以及肌肉内的施用。
适合于局部施用的制剂包括适合于渗入皮肤至炎症位置的液体或者半液体的制剂，例如搽剂、洗液、乳膏、软膏或者糊剂，以及适合于施用到眼睛、耳朵或者鼻子的滴剂。对于局部施用，活性成分可以包括0.001％-10％w/w，例如1％-2％(重量)的制剂。然而它可以包括10％w/w那么多，但是优选包括小于5％w/w、更优选0.1％-1％w/w的制剂。
根据本发明的洗液包括适合于施用到皮肤或者眼睛的那些。眼部洗液可以包括任选含有杀菌剂的无菌的水溶液，可以通过与制备滴剂相似的方法来制备。施用到皮肤的洗液或者搽剂也可以包括促进干燥以及冷却皮肤的试剂，例如醇或者丙酮，和/或增湿剂例如甘油或者油例如蓖麻油或者花生油。
根据本发明的乳膏、软膏或者糊剂是供外用的半固体的活性成分制剂。它们可以通过借助于适当的机器将细碎或者粉未状的活性成分单独或者在溶液或悬浮液中、在含水或者不含水的流体中与油腻的或者非油腻的基料混合制备。该基料可以包括烃例如硬的、软的或液体石蜡，甘油，蜂蜡，金属皂；胶浆；天然产生的油例如杏仁、玉米、落花生、蓖麻或橄榄油；羊毛脂或其衍生物或者脂肪酸例如硬脂酸或油酸连同醇例如丙二醇或大粒凝胶。该制剂可以包括任何合适的表面活性剂例如阴离子的、阳离子的或者非离子型表面活性剂例如脱水山梨醇酯或者其聚氧乙烯衍生物。也可以包括悬浮剂例如天然的树胶、纤维素衍生物或者无机物质例如含硅的二氧化硅，及其他成分例如羊毛脂。
根据本发明的滴剂可以包括无菌的含水的或者油的溶液或者悬浮液，可以通过将活性成分溶解在合适的杀菌和/或杀真菌试剂和/或任何其它合适的防腐剂以及优选包括表面活性剂的水溶液中来制备。得到的溶液然后可以通过过滤澄清，转移到合适的容器中，然后将其密封并且通过高压灭菌法或者维持在98-100℃下半小时灭菌。另外，该溶液可以通过过滤灭菌然后通过无菌技术转移到容器中。适合于包含在滴剂中的杀菌和杀真菌的试剂的例子是苯汞硝酸酯或者乙酸酯(0.002％)、氯化苯甲烃铵(0.01％)和醋酸洗必太(0.01％)。用于制备油状溶液的合适的溶剂包括甘油、稀醇和丙二醇。
式(I)化合物可以不经肠道施用，也就是说通过静脉内、肌肉内、皮下、鼻内、直肠内、阴道内或者腹膜内施用。一般优选皮下和肌肉内形式的肠胃外投药。用于这样施用的合适的剂型可以通过常规技术来制备。式(I)化合物也可以吸入施用，也就是说通过鼻内和口的吸入施用。用于这样施用的合适的剂型，例如烟雾剂或者计量剂量的吸入器，可以通过常规技术来制备。
对于所有这里公开的式(I)化合物的使用方法，每天口服剂量的服法将优选为大约0.01-大约80毫克/千克总体重。每天肠胃外的剂量服法大约0.001-大约80毫克/千克总体重。每天局部的剂量服法优选为0.1毫克-150毫克，每天施用1-4、优选2或3次。每天吸入剂量服法优选为每天大约0.01毫克/千克-大约1毫克/千克。本领域技术人员还将认识到的是式(I)化合物或者其药学上可接受的盐的单个剂量的最佳量和间隔将由治疗条件的性质和程度，给药的形式、途径和位置以及被治疗的特定的病人决定，而且这样的最适条件可以通过常规技术测定。本领域技术人员还将领会的是最佳的疗程即规定天数的每天给定的式(I)化合物或者其药学上可接受的盐剂量数目，可以由本领域技术人员使用常规的疗程测定试验来确定。
本发明现将参考下列生物学的实施例进行描述，实施例仅仅是说明性的，不能被理解为对本发明范围的限制。
生物学实施例本发明化合物的IL-8、和GRO-α趋化因子抑制作用通过下列体外试验测定。
受体结合试验IL-8(人的重组体)从Amersham公司，Arlington Heights，IL获得，比活度为2000Ci/mmol。GRO-a从NEN-New England Nuclear获得。所有其它的化学物质是分析级的。高水平的人的重组体IL-8类型α和B受体各自表示在如前面所述的中国仓鼠卵巢细胞中(Holmes，等人，Science，1991，253，1278)。根据前面所述的记录均化中国仓鼠卵巢膜(Haour，等人，J.Biol.Chem.，249，第2195-2205页(1974))。除了均化作用缓冲剂改为1OmM Tris-HCL，1mM MgSO4，0.5mM EDTA(乙二胺四乙酸)，1mM PMSF(α-甲苯磺酰氟)，0.5mg/L亮肽素，pH7.5之外。使用Pierce公司微试验装置、使用牛血清清蛋白作为标准测定膜蛋白浓度。在96井的微板格式中进行所有试验。每个反应混合物含有125I IL-8(0.25nM)或者125I GRO-α和0.5ug/mL IL-8Ra或者在20mM Bis-Trispropane中1.0ug/mL mL IL-8Rb膜和含有1.2mM MgSO4、0.1mM EDTA、、25mM Na和0.03％CHAPS的0.4mM Tris HCl缓冲剂，pH8.0。此外，加入预先溶于DMSO中的所研究的药物或者化合物以便最后浓度达到O.OlnM-100uM。通过加入125I-IL-8开始试验。在室温下1小时之后，使用Tomtec 96-井的采集装置将该板采集到用1％多亚乙基亚胺/0.5％BSA上，用25mM NaCI、10mM TrisHCl、1mM MgSO4、0.5mM EDTA、0.03％CHAPS，pH7.4洗涤3次。然后干燥过滤器并且在Betaplate液体闪烁计数器上计数。重组体IL-8Rα或者类型I受体这里也被称为非容许的受体，重组体IL-8Rp或者类型II受体被称为容许的受体。
式(I)代表性的化合物，实施例1-106在该试验中、在IC50水平＜30uM下已经显示正的抑制活性。
趋化性试验这些化合物在体外的抑制特性在如在Current Protαols in Immunology，vol.I，Suppl l，Unit 6.12.3.中所述的嗜中性白细胞趋化性试验中测定，其公开内容在此作为参考全部并入。嗜中性白细胞从人的血液中分离，如在Current Protαols in Immunology Vol.I，Suppl1 Unit 7.23.1中所述的，其公开内容在此作为参考全部并入。化学诱引剂IL-8、GRO-α、GRO-β、GRO-γ和NAP-2放置在48多井室的下室中(Neuro Probe，Cabin John，MD)，浓度在0.1-100nM之间。二个室通过5uM的聚碳酸酯过滤器分离。当测试本发明的化合物时，正好在将细胞加入到上室之前，它们与细胞(0.001-1000nM)混合。使得培养在大约37℃、在含有5％CO2的湿润的恒温箱中进行大约45-90分钟。在培养期结束时，移去聚碳酸酯膜，洗涤干舷部，然后使用Diff快速染色记录将膜染色(Baxter Products，McGaw Park，IL，USA)。已经趋化(chemotaxed)至趋化因子的细胞使用显微镜凭视力计数。
一般来说，对于每个样品计数四个区域，平均这些数字得到已经移动的细胞的平均数。每个样品分三份测试，每个化合物重复至少四次。特定的细胞(正的对照细胞)中没有加入化合物，这些细胞代表细胞的最大趋化性反应。在希望负对照(未刺激的)的情况下，没有趋化因子加入到下室中。正对照和负对照之间的差异代表细胞的趋化活性。
弹性蛋白酶释放试验测试本发明的化合物防止弹性蛋白酶从人的嗜中性白细胞中释放的能力。嗜中性白细胞从人的血液中分离，如在Current Protαols in ImmunologyVol.I，Suppl 1 Unit 7.23.1中所述。将悬浮在林格氏溶液(NaCl118，KCl 4.56，NaHCO325，KH2PO41.03，葡萄糖11.1，HEPES 5mM，pH7.4)中的PMNs0.88x106细胞放置在体积为50ul的96井板的每个井中。该板加入50ul体积的测试化合物(0.001-1000nM)、50ul体积(20ug/ml)的细胞松弛素B细胞松弛素B和50ul体积的林格氏缓冲剂。在加入最后浓度为0.01-1000nM的IL-8、GROα、GROβ、GROγ或者NAP-2之前，使得这些细胞加温(37℃，5％CO2，95％RH) 5分钟。在离心96井板(800xg 5分钟〕之前，使得反应进行45分钟，除去100ul的上层清液。将该上层清液加入到第二个96井板中，随后将最后浓度为6ug/ml的人造的弹性蛋白酶基质(MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC，NovaBiochem，La Jolla，CA)溶于磷酸盐缓冲盐水。立即将该板放置在有荧光的96井板阅读器(Cytofluor 2350，Millipore，Bedford，MA)中，根据Nakajima等人J.Biol.Chem.254 4027(1979)的方法在3分钟间隔时收集数据。通过测定MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC降解的速度计算从PMNs中释放弹性蛋白酶的量。
TNF-a在外伤的脑损伤中的试验该试验提供检查在特定的大脑区域中肿瘤坏死因子mRNA的表现，其在实验上跟随大鼠大鼠中诱导的外侧流体敲打(fluidpercussion)外伤的脑损伤(TBI)。用戊巴比妥钠(60mg/kg，i.p.)麻醉成年的SpRague-Dawley大鼠(n＝42)然后进行中心在左侧tempoRaparietal皮层上的适度强度(2.4大气压)的外侧的流体敲打的脑损伤(n＝18)，或者″sham″治疗(没有损伤的麻醉和手术，n＝18)。通过在损伤后(post injury)1、6和24小时断头杀死动物，移去大脑，制备左边(伤害的)周壁皮层(LC)、在对侧的右边皮层相应区域(RC)、与损害的周壁皮层邻接的皮层(LA)、在右边皮层中相应的邻接区域(RA)、左边海马(LH)和右边海马(RH)的组织样品。分离全部的RNA，进行Northem污点杂化作用并且相对于TNF-α正对照RNA(巨噬细胞＝100％)测定。在跟随损伤1小时的损伤的大脑半球中，在LH(104±17％的正对照，与sham相比较p＜0.05)、LC(105±21％，p＜0.05)和LA(69±8％，p＜0.01)中观察到TNF-αmRNA表达显著的增加。在通过跟随损伤24小时解析，在6小时处、在LH(46±8％468％，p＜0.05)、LC(30±3％，p＜0.01)和LA(32±3％，p＜0.01)中观察到TNF-αmRNA表达的增加。在对侧的大脑半球中，在1小时处、在RH(46±2％，p＜0.01)、RC(43％)和RA(22±8％)中以及在6小时而不是在损伤之后24小时处、在RH(28±11％)、RC(75％)和RA(26±6％，p＜0.05)中TNF-αmRNA的表达增加。在sham(没有损伤的手术)或者幼稚的动物中，任何时候在(两者之中)任一大脑半球的6个大脑区域中的任何一个中没有观察到TNF-αmRNA表达的一致的变化。这些结果表明下述的旁矢状面的液体-敲打脑损伤、TNF-cxmRNA的暂时表达在特定的大脑区域包括那些未损伤的大脑半球中改变。由于TNF-α能够诱导神经生长因子(NGF)并且刺激其它细胞因子从激活的星形细胞中释放，在TNF-α的基因表达中这种外伤后的变化在急性和再生的CNS损伤反应中起重要作用。
用于IL-1B mRNA的CNS损伤模型该试验特征在于继在大鼠中实验的外侧的流体-敲打的外伤的脑损伤(TBI)之后在特定的大脑区域中白介素-113(IL-113)的区域的表达。用戊巴比妥钠(60mg/kg，i.p.)麻醉成年的SpRague-Dawley大鼠(n＝42)然后进行中心在左侧tempoRaparietal皮层上的适度强度(2.4大气压〕的外侧的流体敲打的脑损伤(n＝18)，或者″sham″治疗(没有损伤的麻醉和手术)。通过在损伤后(postinjury)1、6和24小时断头杀死动物，移去大脑，制备左边(伤害的)周壁皮层(LC)、在对侧的右边皮层相应区域(RC)、与损害的周壁皮层邻接的皮层(LA)、在右边皮层中相应的邻接区域(RA)、左边海马(LH)和右边海马(RH)的组织样品。分离全部的RNA，进行Northem污点杂化作用(blothybridization)，脑组织IL-113 mRNA的数量以加载在相同的凝胶上的IL-113正性巨噬细胞RNA的相对放射性的百分数表示。在脑损伤之后1小时，在受伤的大脑半球中，在LC(20.0±0.7％正对照，n＝6，与sham动物相比较p＜0.05)、LH(24.5±0.9％，p＜0.05)和LA(21.5±3.1％，p＜0.05)中观察到1L-1βmRNA的表达显著的增加，在LC(4.0±0.4％，n＝6，p＜0.05)和LH(5.0±1.3％，p＜0.05)中损伤后其保持升高多达6小时。在sham或者幼稚的动物中，在任何相应的大脑区域中没有观察到IL-1βmRNA的表达。这些结果表明下述的TBI，IL-1βmRNA的暂时的表达是在特定的大脑区域被局部地刺激。在细胞因子例如IL-1β方面这些区域的改变在外伤后中起一定的作用。
本说明书中引用的所有公开包括但不局限于专利和专利申请在此作为参考并入，好像每个单个的公开仿佛完全提出一样，具体地和各自地在此作为参考并入。
上述说明书完全地公开本发明包括其优选的实施方案。在此具体公开的实施方案的改变和改进在下列权利要求的范围之内。无需进一步煞费苦心，可以相信本领域技术人员能够使用前面的说明书最大程度地利用本发明。因此这里的实施例被理解为仅仅说明性的，而不是以任何方式限制本发明的范围。其中要求排他的所有权或者特权的本发明的实施方案定义如下。
权利要求
1.式(I)化合物 其中Rb独立地选自氢、NR6R7、OH、ORa、C1-5烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4烯基、环烷基、环烷基C1-5烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂芳基C2-4烯基、杂环、杂环C1-4烷基，和杂环C2-4烯基部分，所有部分可以任选被选自卤素、硝基，卤代的C1-4烷基、C1-4烷基、氨基、单或二C1-4烷基取代的胺、ORa、C(O)Ra、NRaC(O)ORa、OC(O)NR6R7、羟基、NR9C(O)Ra、S(O)m′Ra、C(O)NR6R7、C(O)OH、C(O)ORa、S(O)2NR6R7和NHS(O)2Ra的取代基取代1-3次；或者，两个Rb取代基连接形成3-10元环，该环任选被取代并且除了碳之外还独立地含有1-3个为任选不饱和的选自NRa、O、S、SO和SO2的部分；Ra选自烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环、COORa和杂环C1-4烷基部分，所有部分可以任选被取代；m是1-3的整数；m′是0，或者1或2的整数；n是1-5的整数；q是0，或者1-10的整数；t是0，或者1或2的整数；s是1-3的整数；R1独立地选自氢、卤素、硝基、氰基、C1-10烷基、卤代的C1-10烷基、C2-10烯基、C1-10烷氧基、卤代的C1-10烷氧基、叠氮化物、S(O)tR4、(CR8R8)qS(O)tR4、羟基、羟基取代的C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳基C2-10烯基、芳氧基、芳基C1-4烷氧基、杂芳基、杂芳基烷基、杂芳基C2-10烯基、杂芳基C1-4烷氧基、杂环、杂环C1-4烷基、杂环C1-4烷氧基、杂环C2-10烯基、(CR8R8)qNR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、C2-10烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3R8、(CR8R8)qC(O)R11、C2-10烯基C(O)R11、C2-10烯基C(O)OR11、(CR8R8)qC(O)OR11、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qC(NR4)NR4R5、(CR8R8)qNR4C(NR5)R11、(CR8R8)qNHS(O)2R13、和(CR8R8)qS(O)2NR4R5；或者两个R1部分一起可以形成0-(CH2)sO或5-6元饱和或不饱和的环，其中烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、或杂环部分可以任选被取代；R4和R5独立地选自氢、任选被取代的C1-4烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基C1-4烷基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂芳基C1-4烷基、杂环和杂环C1-4烷基，或者R4和R5连同连接它们的氮一起形成5-7元环，该环可以任选包括其他选自O、N和S的杂原子；R6和R7独立地选自氢、C1-4烷基、杂芳基、芳基、烷基芳基、和烷基C1-4杂烷基；或者R6和R7连同连接它们的氮一起形成5-7元环，该环可以任选含有其他选自氧、氮或硫的杂原子，并且该环可以任选被取代；R8是氢或C1-4烷基；R9是C1-4烷基；R10是C1-10烷基C(O)2R8；R11选自氢、任选被取代的C1-4烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基C1-4烷基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂芳基C1-4烷基、任选被取代的杂环、和任选被取代的杂环C1-4烷基；以及R13和R14独立地选自氢、任选被取代的C1-4烷基、任选被取代的C1-4炔基、任选被取代的C1-4烯基任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂芳基C1-4烷基、任选被取代的杂环、任选被取代的杂环C1-4烷基、卤素、硝基、ORa、NR6R7、C(O)Ra、NR11C(O)ORa、OC(O)NR6R7、NR11C(O)Ra、S(O)mRa、C(O)NR6R7、C(O)OH、C(O)ORa、S(O)2NR6R7、和NR11S(O)2Ra；和R20选自氢、烷基、炔基、烯基、杂环基、和杂芳基，所有这些基团可任选地被取代。或其药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1的化合物，其中R1在4-位被吸电子部分取代。
3.根据权利要求2的化合物，其中R1是卤素、氰基或者硝基。
4.根据权利要求3的化合物，其中R1是卤素。
5.根据权利要求4的化合物，其中R1独立地是氟、氯或者溴。
6.根据权利要求1的化合物，其中Rb是氢、C1-4烷基、或用C(O)OH或C(O)ORa取代的C1-4烷基。
7.根据权利要求1的化合物，是N-烯丙基-N′-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)脲；N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N′-异丙基脲；N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N′-乙基脲；N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N′-丙基脲；N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N′-(乙氧羰基)甲基脲；6-氯-2-羟基-3-(3-苯乙基-脲基)-苯基磺酰胺；3-(3-仲丁基-脲基)-6-氯-2-羟基-苯基磺酰胺；6-氯-3-[3-(1-乙丙基)-脲基]-2-羟基-苯基磺酰胺；6-氯-2-羟基-3-[3-(1-甲丁基)-脲基]-苯基磺酰胺；(2S，3S)-2-[3-(4-氯-2-羟基-3-氨磺酰基-苯基)-脲基]-3-甲基-戊酸甲酯；和(S)-2-[3-(4-氯-2-羟基-3-氨磺酰基-苯基)-脲基]-3-甲基-戊酸。
8.根椐权利要求7的化合物，选自N-烯丙基-N′-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)脲、和N-(3-氨基磺酰基-4-氯-2-羟苯基)-N′-异丙基脲。
9.根据权利要求7的化合物，其中化合物呈其钠盐的形式。
10.根据权利要求10的化合物，其中化合物呈其钾盐的形式。
11.包括权利要求1-10中任何一项要求的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。
12.治疗趋化因子介导的疾病的方法，其中在哺乳动物中趋化因子结合IL-8a或b受体，该方法包括给所述的哺乳动物施用有效量的根据权利要求1-10中任何一项的式中的化合物。
13.根据权利要求12的方法，其中哺乳动物患有选自如下的趋化因子介导的疾病牛皮癣、特应性皮炎、骨关节炎、类风湿性关节炎、气喘、慢性阻塞性肺病、成人呼吸窘迫综合征、炎症性肠病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、中风、脓毒性休克、多发性硬化、内毒素性休克、革兰氏阴性脓毒病、中毒性休克综合症、心脏和肾脏的再灌注损伤、肾小球性肾炎、血栓形成、对主体移植的反应、阿尔茨海默氏病、同种异体移植物的排斥、疟疾、再狭窄、血管生成、动脉粥样硬化、骨质疏松症、齿龈炎和不希望有的造血干细胞释放和由呼吸病毒症、疱疹病毒、和肝炎病毒所引起的疾病、脑膜炎、囊性纤维化、提前分娩、咳嗽、瘙痒症、多器官机能不良、外伤、劳损、扭伤、挫伤、牛皮癣关节炎、疱疹、脑炎、CNS脉管炎、外伤的脑损伤、CNS肿瘤、蛛网膜下出血、外科后的损伤、间隙的肺炎、过敏症、晶体诱导的关节炎、急性和慢性胰腺炎、急性的酒精性肝炎、坏死性小肠结肠炎、慢性窦炎、葡萄膜炎、多肌炎、脉管炎、痤疮、胃和十二指肠溃疡、乳糜泻、食管炎、舌炎、气流障碍、导气管过度响应、闭塞性细支气管炎组织肺炎、支气管扩张症、毛细支气管炎、闭塞性细支气管炎、慢性支气管炎、cor pulmonae、呼吸困难、肺气肿、高钙酸血、过度膨胀、低氧血、氧过多诱导的炎症、氧不足、外科肺容量减少、肺纤维化、肺性高血压症、右心室肥大、肉状瘤病、细微的导气管疾病、通风-灌注失调、喘鸣、感冒和狼疮。
全文摘要
本发明涉及新的式(I)－(VII)化合物，以及用于治疗通过趋化因子、白介素－8(IL－8)介导的疾病状况的组合物。
文档编号A61P33/00GK1418096SQ01806488
公开日2003年5月14日 申请日期2001年3月14日 优先权日2000年3月14日
发明者凯瑟琳·L·威多森, 金琦 申请人:史密丝克莱恩比彻姆公司