一枝黄花注射用脂肪乳剂及制备方法

专利名称：一枝黄花注射用脂肪乳剂及制备方法
技术领域：
本发明属中药制剂技术领域。具体涉及一种一枝黄花注射用脂肪乳剂及制备方法。
背景技术：
原因不明的发热是医院门诊、急诊地最常见的疾病之一，由于绝大多数并非细菌性感染，目前西医尚无良好的治疗方法，现在临床上常采用抗生素治疗，加重了病人的经济负担，而且实质上属于抗生素的滥用，其后果是非常严重的，即使合并了细菌感染，由于病因较为复杂，抗生素的单独应用，效果常不满意，致使病情迁延。
大量的临床实践表明，这些原因不明的发热病人，多为“上感”，常用疏风清热、消肿解毒之中药，可获良好的疗效，但是传统中药的汤剂，因运输贮存困难，不利推广，即使应用冲剂、片剂等剂型，亦因患者发热较高，而这些剂型的中药见效较慢，所以颇感不便。
近年来部分医院应用几种静注剂型之中药，取得了一定的效果，但该药常有沉淀现象，临床上也有溶血、过敏等多方面的副作用，而有的药，至今尚未确定其最终产品的质量标准，或者剂型的稳定性等方面尚存在一定的问题。随着医药事业的发展和中医中药科研的进步，社会和市场都急需新一代中药的出现。
一枝黄花[Solidago Virgo-aurea L.Var.Leiocarpa(Benth)A.Gray]属菊科植物，早载于“植物名实图考”和“本草纲目”等书，中药大辞典也有收录，俗名金钥匙、满山黄、黄花草等。该药之冲剂已于70年代早期作为正式产品生产、销售，并在临床使用。
该药性温味苦，主治散火疏风、清热解毒，植化研究已证明该药含酚、鞣质、挥发油、皂甙、黄酮等，酚性成分中含绿原酸(ChlorogenicAcid)、咖啡酸(Caffeic Acid)，黄酮类中含榭皮素、榭皮甙、芸香甙(Kutin)、山萘酚葡萄糖甙(黄耆甙Astragalin)、双甙(Cyainidin3-gentiobioside)全草的热水提出液有抗菌作用，其抗菌成分能由酸化沉淀，并溶于乙醇，上述成分也提示该药可能具有解热、镇痛、消炎、抗感染、平喘及免疫调节作用。
70年代应用该药之冲剂显示了对上呼吸道感染具有良好的疗效，而有些医院曾利用其挥发油成分作静脉注射用对上呼吸道感染显示了确实的疗效，具有退热快，毒性小等特点。对顽固感染抗生素无效时，加用该药可迅速控制病情。

发明内容
本发明所要解决的技术问题是对一枝黄花进一步研究开发，获取其有效组分，扩展其临床应用。
本发明提供了一枝黄花注射用脂肪乳剂，该脂肪乳剂是以一枝黄花油为活性成分与药用辅料组成的，包括
一枝黄花油1.0-100g
注射用磷脂3-50g
注射用豆油50-300g
甘油 25g
注射用水加至 1000ml
本品活性成分为一枝黄花油，处方中浓度为0.1-10％。辅料为注射用豆油，处方中浓度为5-30％(W/W)；注射用磷脂，处方中浓度为0.3-5％(W/W)；甘油和注射用水。在处方中注射用豆油作为油相，注射用磷脂作为表面活性剂，甘油作为等渗剂，注射用水作为水相。
本发明所要解决的另一技术问题是一枝黄花注射用脂肪乳剂的制备方法，该方法包括下列步骤
①称取处方量的一枝黄花油入处方量的注射用豆油中，混匀，为油相；
②称取处方量的注射用磷脂入高速搅拌机中，加入适量的注射用水和处方量的甘油，开动搅拌，使磷脂完全溶解，为水相；
③在高速搅拌下，将油相以线状加入水相中，待油相加毕，继续搅拌10分钟，即得乳白色的初乳液；
④将初乳置二步均质机的加料斗中，开动机器，待管道中无气泡时，先将低压调节至5-15kg/cm2；待低压稳定后，将高压调节至30-50kg/cm2，连续循环数次后将乳剂转移至贮液桶内；
⑤用0.1N的氢氧化钠溶液将乳液调节到pH7左右，再用注射用水稀释到1000ml；
⑥乳液用3号垂熔漏斗滤过；
⑦进行中间质量检测；
⑧将乳液灌封于适当的容器内；
⑨灌封后的乳液经100℃流通蒸汽消毒30分钟，即得。
本发明对一枝黄花的有效部位进行了分离提取，并作了药效学筛选，方法如下
(1)挥发油部位
(2)水煎醇沉正丁醇萃取部位
(3)水煎醇沉大孔树脂乙醇洗脱部位
(4)水煎醇沉大孔树脂洗脱液经硅胶H柱层析部位
一枝黄花提取工艺流程
一枝黄花抗感染有效组分静脉制剂药效学研究
(一)一枝黄花抗感染有效组分药效初筛
摘要一枝黄花提取工艺获得的4个部位经镇痛、抗炎、解热药理试验，证明其供静脉注射的有效部位为挥发油。
1.实验目的
以镇痛、抗炎、解热药理实验筛选一枝黄花提取工艺获得的4个有效部位药理活性，从而决定可供静脉注射的组分。
2.受试药物
2.1.名称一枝黄花正丁醇部位(B)
一枝黄花大孔树脂柱洗脱部位(E)
一枝黄花挥发油部位(A)
单体(水杨甙)(F)
2.2.提供单位上海医药工业研究院中药室
2.3.含量
一枝黄花正丁醇部位(B) 1g相当于生药27.7g
一枝黄花大孔树脂柱洗脱部位(E) 1g相当于生药17.3g
一枝黄花挥发油部位(A) 1mg相当于生药1.2g
单体(水杨甙)(F)
2.4.配制方法
除一枝黄花挥发油溶解在花生油中外，其余均溶解在0.5％CMC配成混悬液。
2.5.剂量设置
因提取物含量不同，剂量折合生药量计算，实验取30g生药/kg的剂量筛选。
2.6.给药途径腹腔注射或静脉注射
2.7.用量0.5ml/20g小鼠，1ml/150g大鼠，1ml/kg家兔
2.8.其它材料
致炎剂角叉莱胶，1％，进口。
致热剂大肠杆菌提取物，本室自备。
3.动物
3.1.品系、种属、合格证
小鼠，昆明种，雌雄均有，18-20g，上海医药工业研究院动物房供应，合格证沪动合证字107号。
大鼠，SD系，雄性，130-150g，中科院上海实验动物中心供应，合格证中科动管会第005号。
家兔，雌雄均有，体重2-2.2kg，中科院上海实验动物中心供应，
合格证中科动管会第005号。
4.对照药
4.1.阿斯匹林新华制药厂原料，本次作为阳性对照品。
4.2.一枝黄花水针剂上海龙华医院提供，1mI相当于2g生药，供实验动物用。
4.3.双黄连针剂哈尔滨中药二厂，批号9803172，600mg/支，临床用量60mg/kg，i.p gtt。
5.实验方法
5.1.一枝黄花提取物有效组分对大鼠的镇痛作用一醋酸扭体法
5.1.1.昆明种小鼠50只，随机分为5组，对照组用相应溶剂，其余分别口服一枝黄花柱洗脱液、一枝黄花正丁醇部位、一枝黄花挥发油及阳性对照药阿斯匹林，给药后半小时每鼠均ip 0.7％醋酸10ml/kg，对照组小鼠ip醋酸后出现扭体反应，扭曲躯体，腹部贴地，5分钟后记录注射醋酸后10分钟内扭体次数，计算抑制率，与对照组比较。
5.1.2.实验结果
实验结果见表1
对照组小鼠注射醋酸后出现扭体反应，扭曲躯体，腹部贴地，给药的各组小鼠均明显的抑制扭体动作，其中一枝黄花柱洗脱液的小鼠扭体动作减少几乎为零，而一枝黄花挥发油小鼠活动如常，扭体次数都减少。
表1 一枝黄花各组分对小鼠醋酸扭体法的影响
**P＜0.01与对照组比较
5.2.一枝黄花第二次提取得到的各组分对小鼠醋酸扭体法的镇痛作用
5.2.1.实验目的
再一次决定一枝黄花正丁醇部位I、II及单体、一枝黄花挥发油各组分的活性并与双黄连比较。
5.2.2实验方法
昆明种小鼠80只，随机分为8组，除对照组给予相应溶剂外，其余各组分别为一枝黄花正丁醇I、II、单体、一枝黄花挥发油、对照药双黄连、一枝黄花针、阿斯匹林，各组动物给药后半小时均腹腔注射0.7％醋酸10mi/kg，5分钟后记录小时10分钟内的扭体次数。
5.2.3实验结果
结果见表2
动物在注射醋酸后一枝黄花各组分均明显抑制小鼠的扭体次数，其中一枝黄花正丁醇II的小鼠活动明显减少，而单体及一枝黄花挥发油部位的小鼠活动如常，而动物扭体次数明显减少，双黄连及一枝黄花针均有一定的镇痛作用。
表2 一枝黄花组分对小鼠醋酸扭体法的影响
**P＜0.01与对照组比较
5.3.一枝黄花各组分对大鼠由角叉莱胶致急性炎症的影响
5.3.1.实验目的
初筛一枝黄花各组分对大鼠有角叉莱胶致急性炎症的作用
5.3.2实验方法
大鼠50只，随机分为5组，即相应溶剂组、一枝黄花挥发油、一枝黄花正丁醇部位、一枝黄花水提取物及阿斯匹林组，实验前先用排水法测各组大鼠右后足的正常体积，实验当日给各组动物口服喂药1次，一小时后给各组大鼠右后足跖皮内注射1％角叉莱胶0.05ml致炎，测定致炎后1、2、3、4、5、小时内的右后足体积，大鼠致炎前后右足跖体积的差值为肿胀值，计算肿胀值及抑制率，并与对照组比较。
En＝致炎后不同时间的足跖肿胀值
E0＝致炎前的足跖肿胀值
C＝对照组的肿胀率
T＝治疗组的肿胀率
5.3.3.实验结果
结果见表3，一枝黄花各组分对角叉莱胶致急性炎症大鼠均有不同程度的抑制作用，但以一枝黄花正丁醇部位及水提取部位的抗炎活性比挥发油好。
表3 一枝黄花对大鼠由角叉莱胶致急性炎症的抗炎作用
( )内为抑制率
5.4.一枝黄花各组分对家兔由大肠杆菌致热的影响
5.4.1.实验目的
初筛一枝黄花各组分对家兔由大肠杆菌致热的解热作用。
5.4.2.实验方法
取以测体温并已稳定在38.5-39.6℃的家兔，由静脉注射灭活的大肠杆菌菌体，0.5-1hr后选择体温升高1℃以上的发热家兔18只，随机分为6组，分别静脉注射一枝黄花挥发油、一枝黄花水蒸馏液、单体、一枝黄花正丁醇部位及阿斯匹林，对照组给予生理盐水，给药后每1小时由肛门测体温1次。
5.4.3.实验结果
结果见表4，家兔在注射大肠杆菌菌体后体温迅速上升，对照组体温在1-2小时上升较快，3小时后稍有下降，而一枝黄花水蒸馏液及单体体温上升及下降均较均匀，一枝黄花正丁醇部位家兔ip注射后立即死亡，只有一枝黄花挥发油部位在致热剂注射后2小时体温开始下降，阿斯匹林组在2小时后体温开始下降。
表4 一枝黄花各组分对家兔大肠杆菌致热的影响
(二)一枝黄花各组分溶血试验
1.实验目的
观察一枝黄花各组分对家兔的溶血情况，从而决定可供静脉制剂的有效部位。
2.动物家兔，体重2.5kg，中科院上海实验动物中心供应。
合格证中科动管会第005号。
3.受试样品
一枝黄花正丁醇部位浓度10mg/ml
一枝黄花柱洗脱物浓度10mg/ml
一枝黄花挥发油浓度10mg/ml
4.溶剂生理盐水
5.实验方法
取新鲜兔血2ml，用竹签搅拌以去除纤维蛋白，再用生理盐水冲洗3-5次，离心，直至上清液红色不再呈现，离心取沉淀，按所得红细胞容积，用生理盐水配成2％的悬液。以下列方法加入各种溶液，第6管不加供试品，作为空白对照，第7管加蒸馏水作为溶血对照，37℃水浴中保温1小时观察结果。
6.结果
一枝黄花正丁醇部位溶血
一枝黄花柱洗脱物溶血
一枝黄花挥发油不溶血
7.结论
由于一枝黄花正丁醇部位及一枝黄花柱洗脱物均有溶血现象产生，并给家兔静脉注射后产生死亡。进一步的提取又无法将溶血组分分离，故只有采取一枝黄花挥发油作为有效活性组分，制备供静脉注射的制剂。
一枝黄花挥发油成分及质控标准的研究
挥发油通常是一些成分非常复杂的混合物，但是根据二类中药的要求，对其成分进行适当的研究是必不可少的，为此我们采用气相色谱和气相色谱—质谱联用的方法对一枝黄花挥发油的成分进行了研究。
(一)一枝黄花挥发油的理化性质
一枝黄花挥发油颜色呈淡棕色，二次测定的理化性质如下
比重 旋光 折光率
0.96 [α]20-11.16°o1.5036
0.95 [α]20-10.34°o1.5015
(二)一枝黄花挥发油成分研究
挥发油为含多种成分的混合物，其组成极其复杂，通常有几十种到上百种的化合物。对于挥发油成分的分析，气相色谱法与测定物化常数的方法相比，具有分离效率强、灵敏度高的特点。为此，采用程序升温毛细管气相色谱法，对一枝黄花挥发油分别在非极性柱(HP-1，HP-5)和极性柱(SUPELCOWAX)上进行了分析考察，从而建立了气相色谱分离分析方法，对一枝黄花挥发油中各成分进行分离，并采用面积归一法确定各成分的百分含量。
关于各组分的定性研究工作挥发油的定性分析一般采用标准品对照、参考文献值或结合其它分析手段来进行。由于除个别成分外难以得到成分的标准品，而且文献值既少又散。因此采用了气相色谱一质谱联用的方法，通过气相色谱的高分离能力和质谱方法鉴定化合物的功能，结合质谱谱库检索，对一枝黄花挥发油成分进行定性研究。以下是对目前已完成的工作进行归纳。
1.一枝黄花挥发油的气相色谱分析
色谱条件的选择
为了实现多组分的良好分离，采用程序升温毛细管气相色谱法，选择极性不同的色谱柱考察挥发油(样品编号1#)中成分的色谱行为，样品在非极性色谱柱(HP-1，HP-5)分离效果较差，而在极性色谱柱(SUPELCOWAX)上分离效果好。分别改变程序初温、载气线速、升温速率等参数，观察色谱条件的适用性，确定了一枝黄花挥发油的气相色谱分离分析条件。
2.一枝黄花挥发油的定性研究
一枝黄花挥发油经毛细管气相色谱法对其成分进行了分离，但是由于除个别成分(β-石竹烯)难以得到标准品，通过色谱法保留时间对各个组分进行对照鉴别。鉴于气相色谱—质谱联用技术是当今分析中草药挥发油成分的首选方法，为此我们采用气质联用技术对一枝黄花挥发油的成分进行了定性研究。
(1)仪器及实验条件
仪器FinniganMATGCQ气相色谱一质谱联用仪
色谱条件色谱柱Supelcowax 30m 0.25mmlD o.25film
载气He 分流比80∶1 进样口温度230℃
程序升温条件50℃(hold3min)→2℃/min→160℃
(hold9min)→3℃/min→200℃
质谱条件
电离方式El.离子源温度190℃
电子能量70eP. 扫描质量范围25-350
分辩率1000
GCQ数据处理系统
(2)实验结果
一枝黄花挥发油1#样品经GC-MS分析，获得质谱数据后直接由仪器数据处理系统进行谱库检索，再进一步与质谱标准图谱EPA/NIHMass Spetral Data Base和The Wiley/NBS Registry Of MassSpectral Data核对，从而鉴别了一枝黄花挥发油的主要成分。
所得总离子流图及实验结果如表4所示
表4 一枝黄花挥发油化学成分及含量
(4)不同季节、批号样品药效学研究
考虑到不同批号(即不同季节所采样品)上述几种成分的含量不。一致，故决定以7#和8#样品进行药效学测定。
结果如下
表5 20010820对醋酸扭体法的镇痛效果
**P＜0.01与对照组比较。
20010820批号疗效远不如以前的实验结果。
表6 一枝黄花挥发油不同批号对醋酸扭体法的镇痛效果
混合批7#和8#样品的混合
表720011030对醋酸扭体法的镇痛效果
**P＜0.01与对照组比较 注20011030即混合批。
3.小结
经过已进行的工作，总结以下几点
(1)采用程序升温毛细管气相色谱法较好的分离分析了一枝黄花挥发油的成分，所含组分多，而且大多是若干沸点很接近，或是同分异构体的化合物，目前采用峰面积归一法对一枝黄花挥发油进行定量分析，得到的是各组分的相对百分含量。
(2)气相色谱一质谱联用法是分离鉴定未知化学成分的最有效的方法之一。通过气一质联用技术和谱库检索鉴定了一枝黄花挥发油主要成分。
(3)实验表明，从同一原料产地和采集季节提取的一枝黄花挥发油具有相似的组分，不同季节(批号)的挥发油成分基本相同，只是组分的含量上有差异。含量较高的几个组分经鉴别为p-石竹烯(β-Caryophyliene)保留时间约36.7分钟、大牻牛儿烯保留时间约42.5分钟、氧化石竹烯(Caryophyliene oxide)保留时间约59.3分钟、匙叶桉油烯醇保留时间约66分钟、环丙奥-7-醇保留时间约75分钟。经过对几批样品的测定发现这几种组分的含量高低各有不同，但它们含量之和在34-43％之间。
一支黄花初步药效学研究
1.一支黄花的镇痛作用
1.1.实验目的
证实一支黄花制剂的镇痛效果。
1.2.供试样品
名称一支黄花针剂
提供单位上海医药工业研究院中药室
成分一支黄花+吐温80以1∶8的比例混合后，得到的水溶
性针剂，每支针剂1ml含挥发油4mg，可供静脉注射用。
剂量1、2、4mg/kg
用量0.5ml/20g小鼠
用法iv×1
1.3.动物
来源、品系、合格证小鼠，昆明种，雄性，19-21g，上海医药工业研究院动物房供应。
合格证沪动合证字107号。
1.4.对照药阿斯匹林，本室自备(新华药厂原料)
双黄连，哈尔滨中药二厂，批号980372，每支含
600mg，剂量60mg/kg，iv，gtt。
1.5.实验方法
昆明种小鼠60只，分为6组，一支黄花分别为1、2、4mg/kg，双黄连60mg/kg，阿斯匹林100mg/kg，对照组给予相应溶剂，均为iv×1，给药后半小时每鼠ip 0.3％醋酸10ml/kg，5分钟后记录10分钟内的小鼠扭体次数，并与对照组比较。
1.6.实验结果
结果见表1，一支黄花有明显的抑制醋酸引起小鼠的疼痛，并有——定的剂量效应，双黄连及阿斯匹林也均有明显的抑制疼痛的作用。
表8 一支黄花对小鼠醋酸法的镇痛作用
**P＜0.01与对照组比较
2.一支黄花对家兔由大肠杆菌引起的发热反应影响
2.1.实验目的
观察一支黄花的解热作用，并与双黄连作比较。
2.2.供试样品
名称一支黄花针剂
提供单位上海医药工业研究院中药室
成分一支黄花+吐温80以1∶8的比例混合后，得到的水溶性针剂，每支针剂1ml含挥发油4mg，可供静脉注射用。
剂量2、4mg/kg
用量0.5ml/kg
用法iv×1
2.3.对照药阿斯匹林，本室自备(新华药厂原料)
双黄连，哈尔滨中药二厂，600mg/支，60mg/kg，
批号980372。
2.4.致热剂大肠杆菌菌体，本室自行制备。
2.5.动物来源、品系、合格证
家兔，雌雄均有，2.0-2.2kg，中科院上海实验动物中心提供。
合格证中科动管会第005号。
2.6.实验方法
取以测体温并已稳定在38.5-39.6℃的家兔，由静脉注射灭活的大肠杆菌菌体，0.5-1hr后选择体温升高1℃以上的发热家兔15只，随机分为5组，一支黄花分别静脉注射2、4mg/kg，双黄连60mg/kg，阿斯匹林100mg/kg，对照组给予生理盐水，给药后每1小时由肛门测体温1次，观察体温变化。
2.7.实验结果
结果见表9，对照组家兔注射致热剂后体温迅速上升，在6小时后内基本稳定，给一支黄花组动物1-3小时内体温上升较慢，4小时开始逐渐下降，双黄连组动物体温下降不明显。
表9 一支黄花对家兔由大肠杆菌致热的影响
3.一支黄花对大鼠由角叉莱胶致急性炎症的抑制作用
3.1.实验目的
观察一支黄花针剂对大鼠致急性炎症的抗炎作用。
3.2.供试样品
名称一支黄花针剂
提供单位上海医药工业研究院中药室
成分一支黄花+吐温80以1∶8的比例混合后，得到的水溶性针剂，每支针剂1mi含挥发油4mg，可供静脉注射用。
剂量1、2、4mg/kg
用量1ml/只大鼠
用法ip×1
3.3.动物来源、品系、合格证
大鼠，SD系，130-150g，雄性，中科院上海实验动物中心提供。
合格证中科动管会第005号。
3.4.对照药阿斯匹林，本室自备(新华药厂原料)
双黄连，哈尔滨中药二厂，600mg/支，60mg/kg，
批号980372。
3.5.致炎剂角叉莱胶，1％，进口。
3.6.实验方法
大鼠50只，随机分为5组，即相应溶剂组、一支黄花分别为1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg及阿斯匹林100mg/kg，实验前先用排水法测各组大鼠右后足的正常体积，实验当日给各组动物口服喂药1次，一小时后给各组大鼠右后足跖皮内注射1％角叉莱胶0.05ml致炎，测定致炎后1、2、3、4、5、小时内的右后足体积，大鼠致炎前后右足跖体积的差值为肿胀值，计算肿胀值及抑制率，并与对照组比较。
En＝致炎后不同时间的足跖肿胀值
E0＝致炎前的足跖肿胀值
C＝对照组的肿胀率
T＝治疗组的肿胀率
3.7.实验结果
结果见表3，一支黄花对角叉莱胶致炎大鼠有不同程度的抑制作用，并呈现一定的量效关系，阳性药阿斯匹林也有抑制炎症的作用。
表10一支黄花对大鼠由角叉莱胶致急性炎症的抗炎作用
P＜0.05，**P＜0.01与对照组比较
4.一支黄花对小鼠免疫功能的影响
4.1.一支黄花针剂对小鼠脾淋巴细胞转化的影响(体内)
摘要一支黄花针剂能明显促进对小鼠脾淋巴细胞转化，有一定的量效关系。
4.1.1.实验目的
测试一支黄花针剂对小鼠脾淋巴细胞转化的影响。
4.1.2.供试样品
名称一支黄花针剂
提供单位上海医药工业研究院中药室
成分一支黄花+吐温80以1∶8的比例混合后，得到的水溶性针剂，每支针剂1mI含挥发油4mg，可供静脉注射用。
剂量2、4mg/kg
用量0.5ml/20g小鼠
用法ip×6
4.1.3.动物来源、品系、合格证
小鼠，057BE16，19-21g，雄性，每组5只。中科院上海实验动物中心提供。合格证中科动管会第005号。
4.1.4.对照药双黄连，哈尔滨中药二厂，600mg/支，60mg/kg，
批号980372。
4.1.5.其它材料
刀豆球蛋白ConAsigma，50μg/ml。
3H-TdR上海原子核研究所，放射性浓度1mci/ml。
1640培养基Difco产品
4.1.6.实验方法
C57BL/6小鼠，随机分组，一支黄花分别给予2mg/kg、4mg/kg、双黄连60mg/kg、对照组为生理盐水，均为腹腔注射，每日1次，共6次，给药结束后，处死动物，无菌条件下取脾，计数脾细胞，并调整细胞浓度为1×107/ml，在96孔细胞培养板上每孔加细胞悬液100μl，ConA 50μl和培养液，每组均设三复孔，37℃，5％CO2条件下培养48小时，加入3H-TdR 0.5μci/孔，继续培养18小时，用多头细胞收集器收集细胞，在液闪仪上测CPM值，并与对照组比较。
4.1.7.结果
结果见表11。
一支黄花针剂对小鼠脾淋巴细胞转化在2、4mg/kg时有较明显的促进作用。
表11 一支黄花对小鼠脾淋巴细胞转化的影响(体内)
**P＜0.01与对照组比较
4.2.一支黄花对小鼠脾淋巴细胞转化的影响(体外)
4.2.1.供试样品
名称一支黄花针剂
提供单位上海医药工业研究院中药室
成分一支黄花+吐温80以1’8的比例混合后，得到的水溶性针剂，每支针剂1mI含挥发油4mg，可供静脉注射用。
4.2.2.动物来源、品系、合格证
小鼠，C57BL/6，19-21g，雄性，中科院上海实验动物中心提供。
合格证中科动管会第005号。
4.2.3.对照药双黄连，哈尔滨中药二厂，600mg/支，60mg/kg，
批号980372。
4.2.4.其它材料
刀豆球蛋白ConAsigma，50μg/ml。
3H-TdR上海原子核研究所，放射性浓度1mci/ml。
1640培养基Difco产品
4.2.5.实验方法
C57BL/6小鼠，无菌条件下取脾，分离脾细胞，并调整细胞浓度为1×107/ml，一支黄花用培养基小鼠成1、0.1、0.01、0.001μg/ml，双黄连稀释成6、0.6、0.06、0.006μg/ml，在96孔细胞培养板上每孔加各种药液100μl，ConA 50μl，培养基100μl，37℃，5％CO2条件下培养48小时，加入3H-TdR 0.5μci/孔，继续培养18小时，用多头细胞收集器收集细胞，液闪仪上测CPM值，并与对照组比较。
4.2.6.结果
结果见表12，一支黄花在不同剂量对小鼠脾淋巴细胞转化有不同的作用，双黄连也有同样作用。
表12一支黄花对小鼠脾淋巴细胞转化的影响(体外)
**P＜0.01与对照组比较
4.3.一支黄花对小鼠自然杀伤细胞(NK细胞)的影响
摘要一支黄花对小鼠NK细胞有一定的激活作用。
4.3.1.实验目的
测试一支黄花针剂对小鼠NK细胞的影响。
4.3.2.供试样品
名称一支黄花
提供单位上海医药工业研究院中药室
成分一支黄花+吐温80以1∶8的比例混合后，得到的水溶性针剂，每支针剂1ml含挥发油4mg，可供静脉注射用。
剂量2、4mg/kg
用量0.5ml/20g小鼠
用法ip×6
4.3.3.动物来源、品系、合格证
小鼠，C57BL/6，19-21g，雌性，每组5只。
中科院上海实验动物中心提供。
合格证中科动管会第005号。
4.3.4.对照药双黄连，哈尔滨中药二厂，600mg/支，60mg/kg，
批号980372。
4.3.5其它材料
YAC-1细胞上海医药工业研究院药理室传代。
1640培养基Difco产品
3H-TdR上海原子核研究所，放射性浓度1mci/ml。
4.3.6.实验方法
C57BL/6小鼠，随机分组，一支黄花分别为2mg/kg、4mg/kg、双黄连60mg/kg，均ip×6，末次给药结束后，处死动物，无菌条件下取脾，计数脾细胞，并调整细胞浓度为1×106/ml作为效应细胞，另取已培养24小时的YAC-1细胞，调整细胞浓度为1×104/ml作为靶细胞，以靶细胞与效应细胞之比为1∶100的浓度加在96孔细胞培养板上，加入3H-TdR 0.5μci/孔，每组均设三复孔，37℃5％CO2条件下培养24小时，收集细胞，测CPM值，计算特异性百分率(pi)表示NK细胞活性。
4.3.7.结果
结果见表13，一支黄花对小鼠NK细胞有一定的促进作用，双黄连也有一定的作用。
表13一支黄花对小鼠NK细胞的影响(体内) **P＜0.01与对照组比较
4.4.一支黄花对小鼠NK细胞的影响(体外法)
4.4.1.供试样品
名称一支黄花针剂
提供单位上海医药工业研究院中药室
成分一支黄花+吐温80以1∶8的比例混合后，得到的水溶性针剂，每支针剂1mI含挥发油4mg，可供静脉注射用。
4.4.2.动物来源、品系、合格证
小鼠，C57BL/6，19-21g，雄性，中科院上海实验动物中心提供。合格证中科动管会第005号。
4.4.3.对照药双黄连，哈尔滨中药二厂，600mg/支，60mg/kg，
批号980372。
4.4.4.其它材料
YAC-1细胞上海医药工业研究院药理室传代。
3H-TdR上海原子核研究所，放射性浓度1mci/ml。
1640培养基Difco产品
4.4.5.实验方法
C57BL/6小鼠，无菌条件下取脾，调整细胞浓度为1×106/ml作为效应细胞，另取测试样品调整浓度为1、0.1、0.01、0.001gg/ml，双黄连调整浓度为6、0.6、0.06、0.006gg/mI，另取已培养24小时的YAC-1细胞并调整细胞浓度为1×101/ml，作为靶细胞，以靶细胞与效应细胞之比为1∶100的比例加入96孔细胞培养板上，加入3H-TdR0.5μci/孔，每组均设三复孔，37℃，5％CO2条件下培养24小时，收集细胞，测CPM值，计算特异性百分率(pi)表示NK细胞活性。
4.4.6.结果
结果见表14，一支黄花对小鼠NK细胞在不同浓度呈现不同的作用。
表14一支黄花对小鼠NK细胞的影响(体外)
**P＜0.01与对照组比较
4.5.一支黄花对小鼠IL-2产生的影响
摘要一支黄花对小鼠IL-2在低剂量时呈现抑制作用。
4.5.1实验目的
观察一支黄花对小鼠产生IL-2的影响。
4.5.2供试样品
名称一支黄花
提供单位上海医药工业研究院中药室
成分一支黄花+温80以1∶8的比例混合后，得到的水溶性针剂，每支针剂1ml含挥发油4mg，可供静脉注射用。
剂量2、4mg/kg
用量0.5ml/20g小鼠
用法ip×6
4.5.3动物来源、品系、合格证
小鼠，C57BL/6，19-21g，雌性，中科院上海实验动物中心提供。
合格证中科动管会第005号。
4.5.4.对照药双黄连，哈尔滨中药二厂，600mg/支，60mg/kg，
批号980372。
4.5.5.其它材料
CTLL细胞上海医药工业研究院药理室自备。
培养基1640，Difco产品
3H-TdR上海原子核研究所，放射性浓度1mci/ml。
4.5.6.实验方法
C57BL/6小鼠20只，随机分为4组，一支黄花分别为2mg/kg、4mg/kg、双黄连60mg/kg及对照组，对照组给生理盐水，每组药物均ip×6，给药结束后，处死动物，无菌条件下取脾，分离脾细胞，并调整细胞浓度为1×107/mi，在24孔细胞培养板上每孔加细胞悬液2ml及ConA 50μg/ml(终浓度)，37℃，5％CO2条件下培养24小时，收集上清液作为待测样品，用IL-2依赖细胞CTLL以3H-TdR掺入法测CPM值，比较对照组与给药组的CPM值。
4.5.7实验结果
结果见表15，一支黄花对小鼠产生IL-2产生抑制作用。
表15一支黄花对小鼠产生IL-2的影响(体内)
*P＜0.05，**P＜0.01与对照组比较
一支黄花抗病毒作用的研究
一支黄花在250pg/ml浓度下体外未发现对流感病毒及腺病毒有明显的抑制作用，同时做双黄连进行比较(1mg/ml浓度)亦未见双黄连有明显的作用。
一支黄花抗真菌作用的研究
用一支黄花体外于200μg/ml浓度下，对白色念珠菌、新生隐球菌、红色毛癣菌、石膏毛癣菌均无抑制作用，同时作双黄连在1mg/ml浓度下，亦未见明显的抑制作用。
一支黄花对细菌的抑制作用
一支黄花对肺炎双球菌在30μg/ml浓度下有抑菌作用，双黄连亦在低至30μg/ml浓度下有抑菌作用。
一支黄花对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等均无明显的抑制作用。
一支黄花急性毒性的研究
以一支黄花静注液0.5ml(含2.5mg挥发油)静脉注射20只小鼠(体重18-20g，雌雄各10只)，观察一周，无动物死亡，未见有任何异常反应，所以一支黄花的LD50大于125mg/kg。
一支黄花脂肪乳剂药效学试验
摘要一支黄花制备成脂肪乳剂后小鼠镇痛试验证明它有明显的镇痛作用。
1.实验目的
一支黄花脂肪乳剂对小鼠醋酸扭体法的镇痛作用。
2.待测样品
名称一支黄花脂肪乳剂
提供单位上海医药工业研究院中药室
含量每1mi含8mg一支黄花
3.动物
来源、品系、合格证
小鼠，昆明种，19-21g，雄性，上海医药工业研究院动物房提供，合格证沪动合证字107号。
4.实验方法
昆明种小鼠40只，随机分为4组，每组10只，分为一支黄花脂肪乳剂2mg/kg、4mg/kg，均为iv×1，阿斯匹林100mg/kg，ip×1，对照组给予生理盐水，给药后半小时ip 0.7％醋酸10ml/kg，5分钟测10分钟内小鼠的扭体次数。
5.实验结果
结果见表16，小鼠iv给脂肪乳剂后，仍能明显抑制小鼠对化学刺激物一醋酸引起的疼痛反应，结果和一支黄花水针剂结果相仿。
表16一枝黄花脂肪乳剂对小鼠醋酸扭体法的影响
上述结果表明一枝黄花注射用脂肪乳剂具有镇痛解热、消炎和调节免疫功能等作用，并且药价较廉，将有较大的经济效益和社会效益。


图1 颗粒数分布图(1)
图2 颗粒数分布图(2)
图3 颗粒数分布图(3)具体实施方式
实施例1
1.处方
一枝黄花油 10g
注射用磷脂15g
注射用豆油100g
甘油 25g
注射用水加至 1000ml
2.制备方法
(1)称取处方量的一枝黄花油入处方量的注射用豆油中，混匀，为油相；
(2)称取处方量的注射用磷脂入高速搅拌机中，加入适量的注射用水和处方量的甘油，开动搅拌，使磷脂完全溶解，为水相；
(3)在高速搅拌下，将油相以线状加入水相中，待油相加毕，继续搅拌10分钟，即得乳白色的初乳液；
(4)将初乳置二步均质机的加料斗中，开动机器，待管道中无气泡时，先将低压调节至5-15kg/cm2待低压稳定后，将高压调节至30-50kg/cm2，连续循环数次后将乳剂转移至贮液桶内；
(5)用0.1N的氢氧化钠溶液将乳液调节到pH7左右，再用注射用水稀释到1000ml；
(6)乳液用3号垂熔漏斗滤过；
(7)进行中间质量检测；
(8)将乳液灌封于适当的容器内；
(9)灌封后的乳液经100℃流通蒸汽消毒30分钟，即得。
3.结果
(1)有效成分的含量
(2)pH值5.0-7.5
(3)乳粒的大小及范围本品的乳粒的大小平均在1μm以下，结果如图1所示。实施例2
1.处方
一枝黄花油 50g
注射用磷脂 20g
注射用豆油 150g
甘油 25g
注射用水加至 1000ml
2.制备方法同实施例1
3.结果
(1)有效成分的含量
(2)pH值5.0-7.5
(3)乳粒的大小及范围本品的乳粒的大小平均在1μm以下，结果如图2所示。实施例3
1.处方
一枝黄花油 80g
注射用磷脂 20g
注射用豆油 200g
甘油25g
注射用水加至1000ml
2.制备方法同实施例1
3.结果
(1)有效成分的含量
(2)pH值5.0-7.5
(3)乳粒的大小及范围本品的乳粒的大小平均在1μm以下，结果如图3所示。
权利要求
1.一枝黄花注射用脂肪乳剂，其特征在于该乳剂是以一枝黄花油为活性成分与药用辅料组成的，包括
一枝黄花油1.0-100g
注射用磷脂3-50g
注射用豆油50-300g
甘油 25g
注射用水加至 1000ml
本品活性成分为一枝黄花油，处方中浓度为0.1-10％；辅料为注射用豆油，处方中浓度为5-30％(W/W)；注射用磷脂，处方中浓度为0.3-5％(W/W)；甘油和注射用水；在处方中注射用豆油作为油相，注射用磷脂作为表面活性剂，甘油作为等渗剂，注射用水作为水相。
2.一种如权利要求1所述的一枝黄花注射用脂肪乳剂的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤
①称取处方量的一枝黄花油入处方量的注射用豆油中，混匀，为油相；
②称取处方量的注射用磷脂入高速搅拌机中，加入适量的注射用水和处方量的甘油，开动搅拌，使磷脂完全溶解，为水相；
③在高速搅拌下，将油相以线状加入水相中，待油相加毕，继续搅拌10分钟，即得乳白色的初乳液；
④将初乳置二步均质机的加料斗中，开动机器，待管道中无气泡时，先将低压调节至5-15kg/cm2；待低压稳定后，将高压调节至30-50kg/cm2，连续循环数次后将乳剂转移至贮液桶内；
⑤用0.1N的氢氧化钠溶液将乳液调节到pH7左右，再用注射用水稀释到1000ml；
⑥乳液用3号垂熔漏斗滤过；
⑦进行中间质量检测；
⑧将乳液灌封于适当的容器内；
⑨灌封后的乳液经100℃流通蒸汽消毒30分钟，即得。
3.一种如权利要求1所述的一枝黄花在制备具有镇痛解热、消炎和调节免疫功能的注射用脂肪乳剂中的应用。
全文摘要
本发明属中药制剂技术领域。本发明公开了一种一枝黄花注射用脂肪乳剂，该乳剂是由一枝黄花的有效部位挥发油与药用辅料组成的。经药效学研究，本发明的制剂具有镇痛解热、消炎和调节免疫功能。本发明提供了制备方法。
文档编号A61P29/00GK1395961SQ02136369
公开日2003年2月12日 申请日期2002年8月2日 优先权日2002年8月2日
发明者刘全海, 戴静芝, 杨培明, 李悦, 马晋隆 申请人:上海医药工业研究院