专利名称：包括应用zd6474和紫杉烷的联合疗法的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种在温血动物(例如人)体内产生抗血管生成和/或血管通透性降低效应的方法，特别是治疗癌症(包括实体瘤)的方法，所述方法包括联合给予ZD6474和紫杉烷；一种包含ZD6474和紫杉烷的药用组合物；一种包含ZD6474和紫杉烷、用于人或动物体的治疗方法的组合产品；一种包含ZD6474和紫杉烷的药盒；ZD6474和紫杉烷在制备用于在温血动物(例如人)体内产生抗血管生成和/或血管通透性降低效应的药物中的用途，其中所述温血动物任选采用电离辐射进行治疗。
正常的血管生成在各种过程(包括胚胎发育、伤口愈合和雌性生殖功能的几个要素)中起着重要作用。不需要的或病理性的血管生成与如下疾病状态有关糖尿病性视网膜病、牛皮癣、癌症、类风湿性关节炎、动脉粥样化、卡波西肉瘤(Kaposi′s sarcoma)和血管瘤(Fan等，1995，Trends Pharmacol.Sci.1657-66；Folkman，1995，Nature Medicine 127-31)。人们认为，血管通透性的改变在正常和病理性生理过程中都起作用(Cullinan-Bove等，1993，Endocrinology 133829-837；Senger等，1993，Cancer and Metastasis Reviews，12303-324)。已鉴定出几种具有体外内皮细胞生长促进活性的多肽，包括酸性和碱性成纤维细胞生长因子(aFGF和bFGF)以及血管内皮生长因子(VEGF)。由于其受体的限制性表达，VEGF的生长因子活性与FGF的活性相反，相对而言对内皮细胞有特异性。最近的证据表明，VEGF无论对正常的还是对病理性的血管生成(Jakeman等，1993，Endocrinology，133848-859；Kolch等，1995，Breast Cancer Research and Treatment，36139-155)以及血管通透性(Connolly等，1989，J.Biol.Chem.26420017-20024)都是重要的刺激物。通过VEGF与抗体螯合对VEGF所产生的拮抗作用可以导致肿瘤生长受到抑制(Kim等，1993，Nature 362841-844)。
受体酪氨酸激酶(RTK)在生化信号跨细胞质膜传递中是重要的。这些跨膜分子的特征在于由通过质膜中的区段与细胞内酪氨酸激酶结构域连接的细胞外配体结合结构域组成。配体与受体的结合导致刺激受体相关酪氨酸激酶活性，从而引起受体和其它胞内分子上酪氨酸残基的磷酸化。酪氨酸磷酸化的这些变化启动信号级联，从而产生多种细胞反应。迄今为止，根据氨基酸序列同源性来定义，已鉴定出至少19种不同的RTK亚家族。目前，这些亚家族之一由fms样酪氨酸激酶受体即Flt-1、含激酶插入结构域的受体即KDR(也称为Flk-1)和另一个fms样酪氨酸激酶受体即Flt-4组成。已经证明，这些相关RTK中的两种-Flt-1和KDR以高亲和力结合VEGF(De Vries等，1992，Science 255989-991；Terman等，1992，Biochem.Biophys.Res.Comm.1992，1871579-1586)。VEGF与这些在异源细胞中表达的受体的结合与细胞蛋白的酪氨酸磷酸化状态和钙流出方面的变化相关。
作为VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂的喹唑啉衍生物描述于国际专利申请公布号WO 98/13354和WO 01/32651。在WO 98/13354和WO01/32651中描述了具有抗VEGF受体酪氨酸激酶活性同时还具有某些抗EGF受体酪氨酸激酶活性的化合物。
本发明化合物ZD6474属于WO 98/13354的广义一般公开内容，并且在WO 01/32651中有范例说明。
在WO 98/13354和WO 01/32651中，说明了其发明的化合物“可用作单一疗法或者除本发明化合物以外还可包括一种或多种其它物质和/或治疗。可采用同时、序贯或独立给予各单一治疗组分的方式达到这样的联合治疗。”WO 98/13354和WO 01/32651继而还描述了这样的联合治疗的实施例，包括手术、放射疗法和各种类型的化学治疗剂。
无论在WO 98/13354还是在WO 01/32651中都没有描述此中发明的任何化合物与其它治疗的联合应用将会产生令人惊奇的有益效果。
现在，意想不到和令人惊奇的是，我们已经发现将特定化合物ZD6474与从WO 98/13354和WO 01/32651所列举的联合治疗中具体选出的紫杉烷联合使用，与单独使用ZD6474和紫杉烷中的任一种相比，产生显著更好的效果。特别是，将ZD6474与紫杉烷联合用于实体瘤，与单独使用ZD6474和紫杉烷中的任一种相比，产生显著更好的效果。
本发明治疗方法的抗癌效应包括但不限于抗肿瘤效应、应答率、疾病进程的时间和存活率。本发明治疗方法的抗肿瘤效应包括但不限于肿瘤生长抑制、肿瘤生长延迟、肿瘤消退、肿瘤缩小、停止治疗后到肿瘤重新生长时间增加、疾病进程减慢。当将本发明治疗方法用于需要治疗癌症(包括实体瘤)的温血动物(例如人)时，预期所述治疗方法将产生根据以下的一种或多种测量确定的效果抗肿瘤效应的程度、应答率、疾病进程的时间和存活率。
根据本发明，提供一种在温血动物(例如人)体内产生抗血管生成和/或血管通透性降低效应的方法，所述方法包括在给予所述动物有效量的紫杉烷之前、之后或同时给予有效量的4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(也称为ZD6474) 或其药学上可接受的盐。
根据本发明的另一方面，提供一种治疗温血动物(例如人)的癌症的方法，所述方法包括在给予所述动物有效量的紫杉烷之前、之后或同时给予有效量的ZD6474或其药学上可接受的盐。
根据本发明的另一方面，提供一种治疗温血动物(例如人)的癌症(包括实体瘤)的方法，所述方法包括在给予所述动物有效量的紫杉烷之前、之后或同时给予有效量的ZD6474或其药学上可接受的盐。
根据本发明的另一方面，提供一种在温血动物(例如人)体内产生抗血管生成和/或血管通透性降低效应的方法，所述方法包括在给予所述动物有效量的紫杉烷之前、之后或同时给予有效量的ZD6474或其药学上可接受的盐；其中ZD6474和紫杉烷可分别任选与药学上可接受的赋形剂或载体一起给药。
根据本发明的另一方面，提供一种治疗温血动物(例如人)的癌症的方法，所述方法包括在给予所述动物有效量的紫杉烷之前、之后或同时给予有效量的ZD6474或其药学上可接受的盐；其中ZD6474和紫杉烷可分别任选与药学上可接受的赋形剂或载体一起给药。
根据本发明的另一方面，提供一种治疗温血动物(例如人)的癌症(包括实体瘤)的治疗方法，所述方法包括在给予所述动物有效量的紫杉烷之前、之后或同时给予有效量的ZD6474或其药学上可接受的盐；其中ZD6474和紫杉烷可分别任选与药学上可接受的赋形剂或载体一起给药。
根据本发明的另一方面，提供一种药用组合物，所述组合物包含ZD6474或其药学上可接受的盐、和紫杉烷、以及药学上可接受的赋形剂或载体。
根据本发明的另一方面，提供一种组合产品，所述产品包含用于人或动物体治疗方法的ZD6474或其药学上可接受的盐以及紫杉烷。
根据本发明的另一方面，提供一种药盒，所述药盒包含ZD6474或其药学上可接受的盐以及紫杉烷。
根据本发明的另一方面，提供一个药盒，所述药盒包含a)第一单位剂型的ZD6474或其药学上可接受的盐；b)第二单位剂型的紫杉烷；和
c)装有所述第一和第二剂型的容器装置。
根据本发明的另一方面，提供一种药盒，所述药盒包含a)第一单位剂型的ZD6474或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂或载体；b)第二单位剂型的紫杉烷以及药学上可接受的赋形剂或载体；和c)装有所述第一和第二剂型的容器装置。
根据本发明的另一方面，提供ZD6474或其药学上可接受的盐和紫杉烷在制备用于在温血动物(例如人)体内产生抗血管生成和/或血管通透性降低效应的药物中的用途。
根据本发明的另一方面，提供ZD6474或其药学上可接受的盐和紫杉烷在制备用于在温血动物(例如人)体内产生抗癌效应的药物中的用途。
根据本发明的另一方面，提供ZD6474或其药学上可接受的盐和紫杉烷在制备用于在温血动物(例如人)体内产生抗肿瘤效应的药物中的用途。
根据本发明的另一方面，提供一种联合疗法，该疗法包括给予需要这种治疗性治疗的温血动物(例如人)有效量的ZD6474或其药学上可接受的盐，任选一起给予药学上可接受的赋形剂或载体，并且同时、序贯或独立地给予有效量的紫杉烷；其中紫杉烷可任选与药学上可接受的赋形剂或载体一起给予。这种治疗性治疗包括抗血管生成和/或血管通透性效应、抗癌效应和抗肿瘤效应。
通过同时、序贯或独立给予所述治疗的不同组分，可以达到本文定义的本发明联合疗法。本文定义的联合疗法可用作单一治疗或者除本发明联合疗法以外还可以包括手术或放射疗法或其它化学治疗剂。
手术疗法可包括在给予包括本文描述的ZD6474联合疗法之前、期间或之后部分或完全肿瘤切除的步骤。
任选与本发明联合疗法同时使用的其它化学治疗剂包括那些在WO 01/32651中所描述的治疗剂，所述文献通过引用结合到本文中。
这样的化学疗法可包括五大类治疗药物(i)包括血管靶向药物在内的其它抗血管生成剂；(ii)细胞生长抑制剂；(iii)生物反应调节物(例如干扰素)；(iv)抗体(例如依决可单抗)；和(v)如医学肿瘤学中所使用的抗增殖药/抗肿瘤药及其组合。
ZD6474、紫杉烷和电离辐射三者联合给药产生的效应(例如抗肿瘤效应)可以大于ZD6474、紫杉烷和电离辐射中任一种单用所达到的效果，大于ZD6474和紫杉烷联用所达到的效果，大于ZD6474和电离辐射联用所达到的效果，大于紫杉烷和电离辐射联用所达到的效果。
根据本发明，提供一种在温血动物(例如人)体内产生抗血管生成和/或血管通透性降低效应的方法，所述方法包括在给予所述动物有效量的紫杉烷之前、之后或同时，并且在给予有效量的电离辐射之前、之后或同时给予有效量的ZD6474或其药学上可接受的盐。
根据本发明的另一方面，提供一种治疗温血动物(例如人)的癌症的方法，所述方法包括在给予所述动物有效量的紫杉烷之前、之后或同时，并且在给予有效量的电离辐射之前、之后或同时给予有效量的ZD6474或其药学上可接受的盐。
根据本发明的另一方面，提供一种治疗温血动物(例如人)的癌症(包括实体瘤)的方法，所述方法包括在给予所述动物有效量的紫杉烷之前、之后或同时，并且在给予有效量的电离辐射之前、之后或同时给予有效量的ZD6474或其药学上可接受的盐。
根据本发明的另一方面，提供一种在温血动物(例如人)体内产生抗血管生成和/或血管通透性降低效应的方法，所述方法包括在给予所述动物有效量的紫杉烷之前、之后或同时，并且在给予有效量的电离辐射之前、之后或同时给予有效量的ZD6474或其药学上可接受的盐；其中ZD6474和紫杉烷可分别任选与药学上可接受的赋形剂或载体一起给药。
根据本发明的另一方面，提供一种治疗温血动物(例如人)的癌症的方法，所述方法包括在给予所述动物有效量的紫杉烷之前、之后或同时，并且在给予有效量的电离辐射之前、之后或同时给予有效量的ZD6474或其药学上可接受的盐；其中ZD6474和紫杉烷可分别任选与药学上可接受的赋形剂或载体一起给药。
根据本发明的另一方面，提供一种治疗温血动物(例如人)的癌症(包括实体瘤)的方法，所述方法包括在给予所述动物有效量的紫杉烷之前、之后或同时，并且在给予有效量的电离辐射之前、之后或同时给予有效量的ZD6474或其药学上可接受的盐；其中ZD6474和紫杉烷可分别任选与药学上可接受的赋形剂或载体一起给药。
根据本发明的另一方面，提供ZD6474或其药学上可接受的盐和紫杉烷在制备在正在进行电离辐射治疗的温血动物(例如人)体内产生抗血管生成和/或血管通透性降低效应的药物中的用途。
根据本发明的另一方面，提供ZD6474或其药学上可接受的盐以及紫杉烷在制备在正在进行电离辐射治疗的温血动物(例如人)体内产生抗癌效应的药物中的用途。
根据本发明的另一方面，提供ZD6474或其药学上可接受的盐以及紫杉烷在制备在正在进行电离辐射治疗的温血动物(例如人)体内产生抗肿瘤效应的药物中的用途。
根据本发明的另一方面，提供一种治疗性联合疗法，该疗法包括给予需要这种治疗性治疗的温血动物(例如人)有效量的ZD6474或其药学上可接受的盐，任选与药学上可接受的赋形剂或载体一起给药；和给予有效量的紫杉烷，任选与药学上可接受的赋形剂或载体一起给药；以及给予有效量的电离辐射；其中所述ZD6474、紫杉烷和电离辐射可同时、序贯或独立地并以任何顺序给药。
正在进行电离辐射治疗的温血动物(例如人)是指在给予包含ZD6474和紫杉烷的药物或联合疗法之前、之后或同时接受电离辐射治疗的温血动物(例如人)。例如可在给予包含ZD6474和紫杉烷的药物或联合疗法之前一周内至之后一周内，给予所述温血动物(例如人)所述电离辐射。这表明ZD6474、紫杉烷和电离辐射可以独立或按任何顺序序贯给予，或者可以同时给予。所述温血动物可同时经受ZD6474、紫杉烷和辐射中每一种的效应。
根据本发明的一个方面，在给予ZD6474和紫杉烷中的一种之前，或在给予ZD6474和紫杉烷中的一种之后，给予电离辐射。
根据本发明的一个方面，在给予ZD6474和紫杉烷两者之前，或在给予ZD6474和紫杉烷两者之后，给予电离辐射。
根据本发明的一个方面，将ZD6474给予接受电离辐射治疗之后的温血动物。
根据本发明的另一方面，预期本发明治疗方法的效应至少等同于单独使用所述疗法的每种组分的效应之和，即等同于单独使用ZD6474和紫杉烷中的每一种的效应，或者等同于单独使用ZD6474、紫杉烷和电离辐射中的每一种的效应。
根据本发明的另一方面，预期本发明治疗方法的效应大于单独使用所述疗法的每种组分的效应之和，即大于单独使用ZD6474和紫杉烷中的每一种的效应，或者大于单独使用ZD6474、紫杉烷和电离辐射中的每一种的效应。
根据本发明的另一方面，预期本发明治疗方法的效应是协同效应。
根据本发明，当采用例如所述应答的程度、应答率、疾病进程的时间或存活周期进行测试时，如果所述效应在治疗上优于以其常规剂量给予联合疗法中任一组分所达到的效应的话，则定义该联合疗法为提供协同效应。例如，如果所述效应在治疗上优于单独使用ZD6474或紫杉烷或电离辐射所达到的效应的话，则该联合疗法的效应是协同效应。此外，当在一组对单独的ZD6474或紫杉烷或电离辐射无应答(或应答弱)的病人中获得有益的效应时，所述联合疗法的效应是协同效应。另外，当所述组分中的一种以常规剂量给予而其它组分以减少的剂量给予时，采用例如所述应答的程度、应答率、疾病进程的时间或存活周期，测试其治疗效应是等同于给予常规剂量的联合疗法各组分所达到的效应，所述联合疗法的效应则被定义为提供协同效应。特别是，当ZD6474或紫杉烷或电离辐射的常规剂量可减少而不损害应答范围、应答率、疾病进程的时间和存活数据中的一个或多个方面时，特别是在不损害应答持续时间、但与所用各组分的常规剂量所出现的情况相比，几乎和/或完全没有不利副作用时，则认为是产生了协同效应。
如上所述，本文所定义的本发明联合疗法在其抗血管生成和/或血管通透性效应上是有价值的。在各种各样的疾病状态中都存在血管生成和/或血管通透性增加，所述疾病状态包括癌症(包括白血病、多发性骨髓瘤和淋巴瘤)、糖尿病、牛皮癣、类风湿性关节炎、卡波西肉瘤、血管瘤、急性和慢性肾病、动脉粥样化、动脉再狭窄、自身免疫病、急性炎症、淋巴水肿(lymphoedema)、子宫内膜异位、功能失调性子宫出血和视网膜血管增生性眼病。预期本发明的联合疗法在预防和治疗诸如癌症和卡波西肉瘤的疾病中特别有用。特别是，预期本发明的这种联合疗法能有利地减慢原发性和复发性实体瘤(例如结肠、乳房、前列腺、肺和皮肤实体瘤)的生长。在本发明的一个方面，预期本发明的这种联合疗法能有利地减慢乳房的原发性和复发性实体瘤的生长。在本发明的一个方面，预期本发明的这种联合疗法能有利地减慢肺部的原发性和复发性实体瘤例如非小细胞肺癌(NSCLC)的生长。
在本发明的另一方面，预期任选与电离辐射联用的ZD6474和紫杉烷能抑制与EGF相关的原发性和复发性实体瘤、尤其是那些生长和扩散显著依赖于EGF的肿瘤的生长。
在本发明的另一方面，预期任选与电离辐射联用的ZD6474和紫杉烷能抑制与VEGF和EGF相关的原发性和复发性实体瘤、尤其是那些生长和扩散显著依赖于VEGF和EGF的肿瘤的生长。
本文所述组合物可以为适用于口服的形式，例如作为片剂或胶囊剂；适用于鼻腔给药或吸入给药的形式，例如作为散剂或溶液剂；适用于胃肠外注射(包括静脉、皮下、肌内、血管内或输注)的形式，例如作为无菌溶液剂、混悬剂或乳剂；适用于局部给药的形式，例如作为软膏剂或乳膏剂；适用于直肠给药的形式，例如作为栓剂；或者，给药途径可以是直接注射到肿瘤内或者是局部给药。在本发明的其它实施方案中，所述联合疗法的ZD6474可以经内窥镜、气管内、病灶内、经皮、静脉内、皮下、腹膜内或肿瘤内给药。一般来说，可以以常规方法，采用常规赋形剂制备本文描述的组合物。本发明组合物最好为单位剂型。
ZD6474通常以每平方米动物体表面积10-500mg范围内的单位剂量给予温血动物，例如给予人约0.3-15mg/kg。设想单位剂量范围如0.3-15mg/kg，优选0.5-5mg/kg，并且这通常是治疗有效剂量。单位剂量(如一粒片剂或一粒胶囊)通常含有例如25-500mg的活性成分。使用的日用量优选在0.5-5mg/kg范围。
紫杉烷包括紫杉醇和多西他赛。紫杉醇和多西他赛都是市售的。
在本发明的一个实施方案中，紫杉烷是多西他赛。
在本发明的一个实施方案中，紫杉烷是紫杉醇。
紫杉烷可按已知的给药途径和剂量给药。
例如，紫杉醇可每隔3周、在约24小时内、以135-200mg/m2的剂量经输注给药。或者，例如，紫杉醇也可每隔3周、在约3小时内、以135-225mg/m2的剂量经输注给药。或者，例如，紫杉醇可连续多周、每周在约1小时内、以80-100mg/m2的剂量经输注给药。或者，例如，紫杉醇也可每隔3周、在约1小时内、以200mg/m2的剂量经输注给药。或者，例如，紫杉醇也可每隔3周、在约96小时内、以120-140mg/m2的剂量经输注给药。
多西他赛可按已知的给药途径和剂量给药。例如，多西他赛可在每隔3周、在1小时内、以55-100mg/m2的剂量经输注给药。
可按已知的临床放射疗法操作规程进行放射疗法。电离辐射的剂量将是用于临床放射疗法的已知剂量。所采用的放射疗法将包括例如使用γ-射线、X-射线和/或直接给予放射性同位素的辐射。本发明中还包括其它形式的DNA损伤因素，诸如微波和紫外辐射。例如，X-射线的剂量可按1.8-2.0Gy的日剂量，每周给予5天，持续5-6周。通常，分次剂量的总和将在45-60Gy范围内。单次较大剂量(例如5-10Gy)可作为放射疗法过程的一部分来给予。单次剂量可在手术中给予。当在一段时间内有规律地给予小剂量的X-射线(例如在数天内给予0.1Gy/小时)时，可采用高分割放射疗法。放射性同位素的剂量范围变化很大，取决于同位素的半衰期、放射的强度和类型，以及细胞摄入量。
如上所述，对具体疾病状态进行治疗性或预防性治疗所需的每种疗法的剂量大小必需随待治疗宿主、给药途径和待治疗疾病的严重程度而变化。因此，最佳剂量可由治疗任一具体病人的医师来确定。例如，降低上述联合疗法的组分剂量以降低毒性可能是必需的或所要求的。剂量和时间表可根据具体疾病状态和病人的总体状况而变化。当除本发明的联合疗法外还采用一种或多种其它化学治疗剂时，也可改变剂量和时间表。治疗任一具体病人的医师可以制定时间表。
本发明涉及紫杉烷和ZD6474或ZD6474盐的联合使用。
药用组合物中所用的盐将是药学上可接受的盐，但在制备ZD6474和其药学上可接受的盐中也可使用其它盐。这样的盐可用提供药学上可接受的阳离子的无机碱或有机碱形成，这样的与无机碱或有机碱的盐包括例如碱金属盐诸如钠盐或钾盐、碱土金属盐诸如钙盐或镁盐、铵盐或甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、吗啉或三-(2-羟乙基)胺的盐。
例如，可按以下实施例(a)-(c)所示的任一方法制备ZD6474，除非另有说明，其中(i)通过真空旋转蒸发进行蒸发，后处理步骤在通过过滤除去残留固体(例如干燥剂)后进行；(ii)操作在环境温度即18-25℃下、在惰性气氛如氩气中进行；(iii)柱色谱(通过快速方法)和中压液相色谱(MPLC)在得自E.Merck，Darmstadt，Germany的Merck Kieselgel硅胶(Art.9385)或MerckLichroprep RP-18(Art.9303)反相硅胶上进行；(iv)所给出的收率仅用以说明目的，不一定是所能获得的最大收率；(v)熔点未经校正，是用Mettler SP62自动熔点仪、油浴装置或Koffler加热板装置测量的。
(vi)终产物式I的结构通过核(通常是质子)磁共振(NMR)和质谱技术确认；质子磁共振的化学位移值在δ范围内测定，峰的多重性如下所示s，单峰；d，双重峰；t，三重峰；m，多重峰；br，峰宽；q，四重峰；NMR谱在24℃下、在一台400MHz机器上进行。
(vii)中间体一般未完全表征，纯度通过薄层色谱(TLC)、高效液相色谱(HPLC)、红外(IR)或NMR分析确定。
(viii)采用了以下缩写DMF N，N-二甲基甲酰胺DMSO二甲亚砜THF 四氢呋喃TFA 三氟乙酸NMP 1-甲基-2-吡咯烷酮。]方法(a)往4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(139mg，0.3mmol)在THF/甲醇(1.4ml/1.4ml)混合物中的溶液中加入37％甲醛水溶液(50μl，0.6mmol)，再加入氰基硼氢化钠(23mg，0.36mmol)。在环境温度下搅拌1小时后，加入水并真空除去挥发物。残余物用水研磨，过滤，用水洗涤并真空干燥。所得固体经中性氧化铝色谱纯化，用二氯甲烷、继而用二氯甲烷/乙酸乙酯(1/1)、再用二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇(50/45/5)洗脱。将含有所要产物的流分真空蒸发。将所得白色固体溶于二氯甲烷/甲醇(3ml/3ml)中，然后加入溶于乙醚(0.5ml)的3N盐酸，真空除去挥发物。所得固体用乙醚研磨，过滤，用乙醚洗涤并真空干燥，得到4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉盐酸盐(120mg，69％)。
MS-ESI475-477[MH]+4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉盐酸盐的质子化形式的NMR谱显示存在A和B两种构型，A∶B之比约为9∶1。
1H NMR谱(DMSOd6；CF3COOD)1.55-1.7(m，，A型2H)；1.85-2.0(m，B型4H)；2.03(d，A型2H)；2.08-2.14(br s，A型1H)；2.31-2.38(br s，B型1H)；2.79(s，A型3H)；2.82(s，B型3H)；3.03(t，A型2H)；3.21(br s，B型2H)；3.30(br s，B型2H)；3.52(d，A型2H)；4.02(s，3H)；4.12(d，A型2H)；4.30(d，B型2H)；7.41(s，1H)；7.5-7.65(m，2H)；7.81(d，1H)；8.20(s，1H)；8.88(s，1H)元素分析 实测值C 46.0 H 5.2 N 9.6C22H24N4O2BrF0.3H2O2.65HCl理论值C 45.8 H 4.8 N 9.7％原料按下列方法制备将7-苄氧基-4-氯-6-甲氧基喹唑啉盐酸盐(8.35g，27.8mmol)(例如按照WO 97/22596的实施例1中描述的方法制备)和4-溴-2-氟苯胺(5.65g，29.7mmol)的2-丙醇(200ml)溶液在回流下加热4小时。所得沉淀通过过滤收集，先用2-丙醇、然后用乙醚洗涤并真空干燥，得到7-苄氧基-4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基喹唑啉盐酸盐(9.46g，78％)。
1H NMR谱(DMSOd6；CD3COOD)4.0(s，3H)；5.37(s，2H)；7.35-7.5(m，4H)；7.52-7.62(m，4H)；7.8(d，1H)；8.14(9s，1H)；8.79(s，1H)MS-ESI456[MH]+元素分析 实测值C 54.0 H 3.7 N 8.7C22H17N3O2BrF0.9HCl理论值C 54.2 H 3.7 N 8.6％将7-苄氧基-4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基喹唑啉盐酸盐(9.4g，19.1mmol)的TFA(90ml)溶液在回流下加热50分钟。让该混合物冷却，然后倾入到冰中。所得沉淀通过过滤收集并溶于甲醇(70ml)中。用浓氨水溶液将该溶液调至pH9-10。该混合物通过蒸发浓缩至原始体积的一半。所得的沉淀通过过滤收集，先用水、然后用乙醚洗涤并真空干燥，得到4-(4-溴-2-氟苯胺基)-7-羟基-6-甲氧基喹唑啉(5.66g，82％)。
1H NMR谱(DMSOd6；CD3COOD)3.95(s，3H)；7.09(s，1H)；7.48(s，1H)；7.54(t，1H)；7.64(d，1H)；7.79(s，1H)；8.31(s，1H)MS-ESI366[MH]+元素分析 实测值C 49.5 H 3.1 N 11.3C15H11N3O2BrF理论值C 49.5 H 3.0 N 11.5％当保持在0-5℃的温度范围内，将二碳酸二叔丁酯(41.7g，0.19mol)的乙酸乙酯(75ml)溶液分批加入到于5℃冷却的4-哌啶甲酸乙酯(30g，0.19mol)的乙酸乙酯溶液(150ml)中。在环境温度下搅拌48小时后，将该混合物倾入到水(300ml)中，分离有机层，依次用水(200ml)、0.1N盐酸水溶液(200ml)、饱和碳酸氢钠(200ml)和盐水(200ml)洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到4-(1-叔丁氧羰基)哌啶)甲酸乙酯(48g，98％)。
1H NMR谱(CDCl3)1.25(t，3H)；1.45(s，9H)；1.55-1.70(m，2H)；1.8-2.0(d，2H)；2.35-2.5(m，1H)；2.7-2.95(t，2H)；3.9-4.1(br s，2H)；4.15(q，2H)将1M氢化铝锂的THF(133ml，0.133mol)溶液分批加入到于0℃冷却的4-(1-叔丁氧羰基)哌啶)甲酸乙酯(48g，0.19mol)的无水THF(180ml)溶液中。于0℃搅拌2小时，加入水(30ml)，再加入2N氢氧化钠(10ml)。沉淀通过硅藻土过滤而除去并用乙酸乙酯洗涤。滤液用水、盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到1-(叔丁氧羰基)-4-羟甲基哌啶(36.3g，89％)。
MS(EI)215[M.]+1H NMR谱(CDCl3)1.05-1.2(m，2H)；1.35-1.55(m，10H)；1.6-1.8(m，2H)；2.6-2.8(t，2H)；3.4-3.6(t，2H)；4.0-4.2(br s，2H)将1，4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(42.4g，0.378mol)加入到1-(叔丁氧羰基)-4-羟甲基哌啶(52.5g，0.244mol)的叔丁基·甲基醚(525ml)溶液中。在环境温度下搅拌15分钟后，将混合物冷却至5℃，在2小时内分批加入甲苯磺酰氯(62.8g，0.33mmol)的叔丁基·甲基醚(525ml)溶液，同时保持0℃的温度。在环境温度下搅拌1小时后，加入石油醚(1L)。通过过滤除去沉淀。滤液经蒸发，得到固体。将该固体溶于乙醚中并依次用0.5N盐酸水溶液(2×500ml)、水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到1-(叔丁氧羰基)-4-(4-甲基苯基磺酰氧基甲基)哌啶(76.7g，85％)。
MS(ESI)392[MNa]+1H MR谱(CDCl3)1.0-1.2(m，2H)；1.45(s，9H)；1.65(d，2H)；1.75-1.9(m，2H)；2.45(s，3H)；2.55-2.75(m，2H)；3.85(d，1H)；4.0-4.2(br s，2H)；7.35(d，2H)；7.8(d，2H)将碳酸钾(414mg，3mmol)加入到4-(4-溴-2-氟苯胺基)-7-羟基-6-甲氧基喹唑啉(546mg，1.5mmol)的DMF(5ml)悬浮液中。在环境温度下搅拌10分钟后，加入1-(叔丁氧羰基)-4-(4-甲基苯基磺酰氧基甲基)哌啶(636mg，1.72mmol)，将该混合物于95℃加热2小时。冷却后，将该混合物倾入到冷却水(20ml)中。通过过滤收集沉淀，用水洗涤并真空干燥，得到4-(4-溴-2-氟苯胺基)-7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉(665mg，79％)。
MS-ESI561-563[MH]+1H NMR谱(DMSOd6)1.15-1.3(m，2H)，1.46(s，9H)，1.8(d，2H)，2.0-2.1(m，1H)，2.65-2.9(m，2H)，3.95(s，3H)，4.02(br s，2H)，4.05(d，2H)，7.2(s，1H)，7.48(d，1H)，7.55(t，1H)，7.65(d，1H)，7.8(s，1H)，8.35(s，1H)，9.55(br s，1H)将TFA(3ml)加入到4-(4-溴-2-氟苯胺基)-7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉(673mg，1.2mmol)的二氯甲烷(10ml)悬浮液中。在环境温度下搅拌1小时后，真空除去挥发物。该残余物在水/乙醚中研磨。分离有机层。水层再用乙醚洗涤。用2N氢氧化钠水溶液将水层调至pH10。用二氯甲烷萃取水层。干燥(MgSO4)有机层并真空除去溶剂。该固体用乙醚/石油醚(1/1)的混合物研磨，过滤，用乙醚洗涤并真空干燥，得到4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(390mg，70.5％)。
MS-ESI461-463[MH]+1H MR谱(DMSOd6)1.13-1.3(m，2H)，1.75(d，2H)，1.87-2.0(m，1H)，2.5(d，2H)，3.0(d，2H)，3.96(s，3H)，3.98(d，2H)，7.2(s，1H)，7.5(dd，1H)，7.55(t，1H)，7.68(dd，1H)，7.80(s，1H)，8.36(s，1H)，9.55(br s，1H)元素分析 实测值C 54.5 H 4.9 N 12.1C21H22N4O2BrF理论值C 54.7 H 4.8 N 12.1％方法(b)将37％甲醛水溶液(3.5ml，42mmol)加入到4-(4-溴-2-氟苯胺基)-7-(1-叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-6-甲氧基喹唑啉(3.49g，6.22mmol)(按上述方法(a)对原料描述的制备方法来制备)的甲酸(35ml)溶液中。于95℃加热4小时后，真空除去挥发物。将残余物悬浮于水中，通过缓慢加入2N氢氧化钠溶液将混合物调节至pH10.5。悬浮液用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(2.61g，88％)。
MS-ESI475-477[MH]+1H NMR谱(DMSOd6)1.3-1.45(m，2H)，1.8(d，2H)，1.7-1.9(m，1H)，1.95(t，2H)，2.2(s，3H)，2.85(d，2H)，3.96(s，3H)，4.05(d，2H)，7.19(s，1H)，7.5(d，1H)，7.55(t，1H)，7.67(d，1H)，7.81(s，1H)，8.37(s，1H)，9.54(s，1H)元素分析 实测值C 55.4 H 5.1 N 11.6C22H24N4O2BrF理论值C 55.6 H 5.1 N 11.8％方法(c)将4-氯-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(200mg，0.62mmol)和4-溴-2-氟苯胺(142mg，0.74mmol)在含溶于异丙醇的6N盐酸(110μl，0.68ml)的异丙醇(3ml)溶液中在回流下加热1.5小时。冷却后，该沉淀通过过滤收集，先用异丙醇、然后用乙醚洗涤并真空干燥，得到4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉盐酸盐(304mg，90％)。
元素分析 实测值C 47.9 H 4.9 N 10.0C22H24N4O2BrF0.5H2O1.8HCl理论值C 48.2 H 5.0 N 10.1％0.08异丙醇4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉盐酸盐的质子化形式的NMR谱显示存在A和B两种构型，A∶B之比约为9∶1。
1H NMR谱(DMSOd6)1.6-1.78(m，A型2H)；1.81-1.93(br s，B型4H)；1.94-2.07(d，A型2H)；2.08-2.23(br s，A型1H)；2.29-2.37(br s，B型1H)；2.73(d，A型3H)；2.77(d，B型3H)；2.93-3.10(q，A型2H)；3.21(br s，B型2H)；3.27(br s，B型2H)；3.42-3.48(d，A型2H)；4.04(s，3H)；4.10(d，A型2H)；4.29(d，B型2H)；7.49(s，1H)；7.53-7.61(m，2H)；7.78(d，1H)；8.47(s，1H)；8.81(s，1H)；10.48(br s，A型1H)；10.79(br s，B型1H)；11.90(br s，1H)为得到另一NMR读数，将一些固体碳酸钾加入到上述4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉盐酸盐的DMSO溶液中，以便在NMR管中释放游离碱。然后再记录NMR谱，显示出仅有如下所述的一种构型1H NMR谱(DMSOd6；固体碳酸钾)1.3-1.45(m，2H)；1.75(d，2H)；1.7-1.9(m，1H)；1.89(t，2H)；2.18(s，3H)；2.8(d，2H)；3.98(s，3H)；4.0(d，2H)；7.2(s，1H)；7.48(d，1H)；7.55(t，1H)；7.68(d，1H)；7.8(s，1H)；8.35(s，1H)；9.75(s，1H)由4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉盐酸盐(按如上所述方法制备)，如下产生4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(游离碱)样品将4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基喹唑啉盐酸盐(50mg)悬浮于二氯甲烷(2ml)中，然后用饱和碳酸氢钠洗涤。将二氯甲烷溶液干燥(MgSO4)，通过蒸发除去挥发物，得到4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(游离碱)。如此产生的游离碱的NMR显示仅有如下所述的一种构型1H NMR谱(DMSOd6)1.3-1.45(m，2H)；1.76(d，2H)；1.7-1.9(m，1H)；1.9(t，2H)；2.19(s，3H)；2.8(d，2H)；3.95(s，3H)；4.02(d，2H)；7.2(s，1H)；7.48(d，1H)；7.55(t，1H)；7.68(dd，1H)；7.8(s，1H)；8.38(s，1H)；9.55(brs，1H)为了得到另一NMR读数，将一些CF3COOD加入到上述4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(游离碱)的NMR DMSO溶液中，再次记录NMR谱。如此获得的4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉三氟乙酸盐的质子化形式的NMR谱存在A和B两种构型，A∶B之比约为9∶1。
1H NMR谱(DMSOd6；CF3COOD)1.5-1.7(m，A型2H)；1.93(br s，B型4H)；2.0-2.1(d，A型2H)；2.17(br s，A型1H)；2.35(br s，B型1H)；2.71(s，A型3H)；2.73(s，B型3H)；2.97-3.09(t，A型2H)；3.23(br s，B型2H)；3.34(br s，B型2H)；3.47-3.57(d，A型2H)；4.02(s，3H)；4.15(d，A型2H)；4.30(d，B型2H)；7.2(s，1H)；7.3-7.5(m，2H)；7.6(d，1H)；7.9(s，1H)；8.7(s，1H)原料制备如下将1-(叔丁氧羰基)-4-(4-甲基苯基磺酰氧基甲基)哌啶(40g，0.11mol)(按如上方法(a)对原料描述的制备方法来制备)加入到4-羟基-3-甲氧基苯甲酸乙酯(19.6g，0.1mol)和溶于无水DMF(200ml)的碳酸钾(28g，0.2mol)的悬浮液中。于95℃搅拌2.5小时后，让混合物冷却至环境温度并在水和乙酸乙酯/乙醚之间分配。有机层用水、盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发。所得的油状物从石油醚重结晶，悬浮液在5℃保存过夜。通过过滤收集固体，用石油醚洗涤并真空干燥，得到4-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-3-甲氧基苯甲酸乙酯(35g，89％)。
m.p.81-83℃MS(ESI)416[MNa]+
1H NMR谱(CDCl3)1.2-1.35(m，2H)；1.4(t，3H)；1.48(s，9H)；1.8-1.9(d，2H)；2.0-2.15(m，2H)；2.75(t，2H)；3.9(d，2H)；3.95(s，3H)；4.05-4.25(brs，2H)；4.35(q，2H)；6.85(d，1H)；7.55(s，1H)；7.65(d，1H)元素分析 实测值C 63.4 H 8.0 N 3.5C21H31NO60.3H2O理论值C 63.2 H 8.0 N 3.5％将甲醛(12M，37％的水溶液，35ml，420mmol)加入到4-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-3-甲氧基苯甲酸乙酯(35g，89mmol)的甲酸(35ml)溶液中。于95℃搅拌3小时后，通过蒸发除去挥发物，将残余物溶于二氯甲烷中，然后加入溶于乙醚的3M盐酸(40ml，120mmol)。经乙醚稀释后，研磨混合物，直至形成固体。通过过滤收集固体，用乙醚洗涤并于50℃真空干燥过夜，得到3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)苯甲酸乙酯(30.6g，定量)。
MS(ESI)308[MH]+1H NMR谱(DMSOd6)1.29(t，3H)；1.5-1.7(m，2H)；1.95(d，2H)；2.0-2.15(br s，1H)；2.72(s，3H)；2.9-3.1(m，2H)；3.35-3.5(br s，2H)；3.85(s，3H)；3.9-4.05(br s，2H)；4.3(q，2H)；7.1(d，1H)；7.48(s，1H)；7.6(d，1H)将3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)苯甲酸乙酯(30.6g，89mmol)的二氯甲烷(75ml)溶液冷却至0-5℃。加入TFA(37.5ml)，接着在15分钟内滴加24N发烟硝酸(7.42ml，178mmol)的二氯甲烷溶液(15ml)。加入完成后，让该溶液升温并在环境温度下搅拌2小时。真空除去挥发物，将残余物溶于二氯甲烷(50ml)中。将该溶液冷却至0-5℃，然后加入乙醚。通过过滤收集沉淀并于50℃真空干燥。将固体溶于二氯甲烷(500ml)中，然后加入溶于乙醚的3M盐酸(30ml)，再加入乙醚(500ml)。通过过滤收集固体并于50℃真空干燥，得到3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-6-硝基苯甲酸乙酯(28.4g，82％)。
MS(ESI)353[MH]+1H NMR谱(DMSOd6)1.3(t，3H)；1.45-1.65(m，2H)；1.75-2.1(m，3H)；2.75(s，3H)；2.9-3.05(m，2H)；3.4-3.5(d，2H)；3.95(s，3H)；4.05(d，2H)；4.3(q，2H)；7.32(s，1H)；7.66(s，1H)
在1.8个大气压下，将3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-6-硝基苯甲酸乙酯(3.89g，10mmol)在含10％披铂活性炭(湿度50％)(389mg)的甲醇(80ml)中的悬浮液氢化，直至停止吸收氢。过滤该混合物并蒸发滤液。将残余物溶于水(30ml)中，然后用饱和碳酸氢钠溶液调节至pH10。混合物用乙酸乙酯/乙醚(1/1)稀释，然后分离有机层。水层进一步用乙酸乙酯/乙醚萃取，合并有机层。有机层用水、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。所得的固体在乙醚/石油醚混合液中研磨，过滤，用石油醚洗涤并于60℃真空干燥，得到6-氨基-3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)苯甲酸乙酯(2.58g，80％)。
m.p.111-112℃MS(ESI)323[MH]+1H NMR谱(CDCl3)1.35(t，3H)；1.4-1.5(m，2H)；1.85(m，3H)；1.95(t，2H)；2.29(s，3H)；2.9(d，2H)；3.8(s，3H)；3.85(d，2H)；4.3(q，2H)；5.55(br s，2H)；6.13(s，1H)；7.33(s，1H)元素分析 实测值C 62.8 H 8.5 N 8.3C17H26N2O40.2H2O理论值C 62.6 H 8.2 N 8.6％将6-氨基-3-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)苯甲酸乙酯(16.1g，50mmol)的含有乙酸甲脒(5.2g，50mmol)的2-甲氧基乙醇(160ml)溶液于115℃加热2小时。在4小时内每隔30分钟分批加入乙酸甲脒(10.4g，100mmol)，在最后一次加入后继续加热30分钟。冷却后，真空除去挥发物。将固体溶于乙醇(100ml)和二氯甲烷(50ml)中。过滤除去沉淀，滤液浓缩到终体积为100ml。将该悬浮液冷却至5℃，通过过滤收集固体，先用冷乙醇、再用乙醚洗涤，然后于60℃真空干燥过夜，得到6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-3，4-二氢喹唑啉-4-酮(12.7g，70％)。
MS(ESI)304[MH]+1H NMR谱(DMSOd6)1.25-1.4(m，2H)；1.75(d，2H)；1.9(t，1H)；1.9(s，3H)；2.16(s，2H)；2.8(d，2H)；3.9(s，3H)；4.0(d，2H)；7.11(s，1H)；7.44(s，1H)；7.97(s，1H)将6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-3，4-二氢喹唑啉-4-酮(2.8g，9.24mmol)的含有DMF(280μl)的亚硫酰氯(28ml)溶液在回流下于85℃加热1小时。冷却后，通过蒸发除去挥发物。沉淀用乙醚研磨，过滤，用乙醚洗涤，然后真空干燥。将固体溶于二氯甲烷中，然后加入饱和碳酸氢钠水溶液。分离有机层，用水、盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到4-氯-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(2.9g，98％)。
MS(ESI)322[MH]+1H NMR谱(DMSOd6)1.3-1.5(m，2H)；1.75-1.9(m，3H)；2.0(t，1H)；2.25(s，3H)；2.85(d，2H)；4.02(s，3H)；4.12(d，2H)；7.41(s，1H)；7.46(s，1H)；8.9(s，1H)或者，所述6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-3，4-二氢喹唑啉-4-酮可以如下制备将氢化钠(1.44g 60％矿物油悬浮液，36mmol)在20分钟内分批加入到7-苄氧基-6-甲氧基-3，4-二氢喹唑啉-4-酮(8.46g，30mmol)(例如按照WO 97/22596的实施例1中描述的方法制备)的DMF(70ml)溶液中，然后将混合物搅拌1.5小时。分批加入新戊酸氯甲酯(5.65g，37.5mmol)，然后将混合物在环境温度下搅拌2小时。该混合物用乙酸乙酯(100ml)稀释，倾入到冰/水(400ml)和2N盐酸(4ml)中。分离有机层，水层用乙酸乙酯萃取，合并的萃取液用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并通过蒸发除去溶剂。将该残余物在乙醚和石油醚的混合物中研磨，通过过滤收集固体并真空干燥，得到7-苄氧基-6-甲氧基-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑啉-4-酮(10g，84％)。
1H NMR谱(DMSOd6)1.11(s，9H)；3.89(s，3H)；5.3(s，2H)；5.9(s，2H)；7.27(s，1H)；7.35(m，1H)；7.47(t，2H)；7.49(d，2H)；7.51(s，1H)；8.34(s，1H)在大气压下，将7-苄氧基-6-甲氧基-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑啉-4-酮(7g，17.7mmol)和10％披钯炭催化剂(700mg)在乙酸乙酯(250ml)、DMF(50ml)、甲醇(50ml)和乙酸(0.7ml)中的混合物在氢气中搅拌40分钟。通过过滤除去催化剂并通过蒸发除去滤液中的溶剂。残余物用乙醚研磨，通过过滤收集并真空干燥，得到7-羟基-6-甲氧基-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑啉-4-酮(4.36g，80％)。
1H NMR谱(DMSOd6)1.1(s，9H)；3.89(s，3H)；5.89(s，2H)；7.0(s，1H)；7.48(s，1H)；8.5(s，1H)在氮气下，将三苯基膦(1.7g，6.5mmol)加入到7-羟基-6-甲氧基-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑啉-4-酮(1.53g，5mmol)的二氯甲烷(20ml)的悬浮液中，再加入1-(叔丁氧羰基)-4-(羟甲基)哌啶(1.29g，6mmol)(按上述方法(a)对原料描述的方法来制备)，最后加入偶氮二羧酸二乙酯(1.13g，6.5mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液。在环境温度下搅拌30分钟后，将反应混合物倾入到硅胶柱上并用乙酸乙酯/石油醚(1/1，然后6/5、6/4和7/3)洗脱。将含有所需产物的流分蒸发，得到一种油状物，该油状物用戊烷研磨后结晶。通过过滤收集固体并真空干燥，得到7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-6-甲氧基-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑啉-4-酮(232g，92％)。
MS-ESI526[MNa]+1H NMR谱(CDCl3)1.20(s，9H)，1.2-1.35(m，2H)，1.43(s，9H)，1.87(d，2H)，2.05-2.2(m，1H)，2.75(t，2H)，3.96(d，2H)，3.97(s，3H)，4.1-4.25(br s，2H)，5.95(s，2H)，7.07(s，1H)，7.63(s，1H)，8.17(s，1H)元素分析 实测值C 61.8 H 7.5 N 8.3C26H37N3O7理论值C 62.0 H 7.4 N 8.3％将7-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基甲氧基)-6-甲氧基-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑啉-4-酮(2.32g，4.6mmol)的含有TFA(5ml)的二氯甲烷(23ml)溶液在环境温度下搅拌1小时。真空除去挥发物，让残余物在乙酸乙酯和碳酸氢钠之间分配。真空除去有机溶剂并将残余物过滤。沉淀用水洗涤并真空干燥。该固体与甲苯一起共沸并真空干燥，得到6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑啉-4-酮(1.7g，92％)。
MS-ESI404[MH]+1H NMR谱(DMSOd6；CF3COOD)1.15(s，9H)，1.45-1.6(m，2H)，1.95(d，2H)，2.1-2.25(m，1H)，2.95(t，2H)，3.35(d，2H)，3.95(s，3H)，4.1(d，2H)，5.95(s，2H)，7.23(s，1H)，7.54(s，1H)，8.45(s，1H)往6-甲氧基-7-(哌啶-4-基甲氧基)-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑啉-4-酮(1.21g，3mmol)在THF/甲醇(10ml/10ml)混合物中的溶液中分批加入37％甲醛水溶液(501μl，6mmol)，然后加入氰基硼氢化钠(228mg，3.6mmol)。在环境温度下搅拌30分钟后，真空除去有机溶剂，让残余物在二氯甲烷和水之间分配。分离有机层，用水和盐水洗涤、干燥(MgSO4)并通过蒸发除去挥发物。残余物用乙醚研磨，通过过滤收集所得固体，用乙醚洗涤并真空干燥，得到6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑啉-4-酮(1.02g，82％)。
MS-ESI418[MH]+1H NMR谱(CDCl3)1.19(s，9H)，1.4-1.55(m，2H)，1.9(d，2H)，2.0(t，2H)，1.85-2.1(m，1H)，2.3(s，3H)，2.92(d，2H)，3.96(s，3H)，3.99(d，2H)，5.94(s，2H)，7.08(s，1H)，7.63(s，1H)，8.17(s，1H)将在甲醇中饱和的氨水溶液(14ml)加入到6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-3-((新戊酰氧基)甲基)-3，4-二氢喹唑啉-4-酮(1.38g，3.3mmol)的甲醇(5ml)溶液中。在环境温度下搅拌20小时后，用二氯甲烷(10ml)稀释悬浮液。过滤溶液。真空蒸发滤液，残余物用乙醚研磨，通过过滤收集，用乙醚洗涤并真空干燥，得到6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)-3，4-二氢喹唑啉-4-酮(910mg，83％)。
MS-ESI304[MH]+1H NMR谱(DMSOd6)1.3-1.45(m，2H)，1.75(d，2H)，1.7-1.85(m，1H)，1.9(t，2H)，2.2(s，3H)，2.8(d，2H)，3.9(s，3H)，4.0(d，2H)，7.13(s，1H)，7.45(s，1H)，7.99(s，1H)例如，以下试验可用来证明ZD6474在与紫杉烷联合使用时的活性。
(a)GEO人结肠癌异种移植模型腹腔内给予ZD6474在第0天，给4-6周龄雌性BALB/c无胸腺(nu+/nu+)小鼠皮下注射(s.c.)GEO人结肠癌细胞(107细胞，重悬于200μl基质胶中)。在皮下移植GEO细胞后第7天，当平均肿瘤体积为0.25(±0.05)cm3时，开始治疗。每组10只小鼠在第7、14、21和28天腹膜内(i.p)给予紫杉醇(400μg/小鼠)，或者在7-11、14-18、21-25和28-32天给予ZD6474(100mg/kg/天i.p.，悬浮于1％(v/v)的聚氧乙烯(20)山梨聚糖单油酸酯的去离子水溶液中)，或者给予两种药物的组合。就联合疗法而论，如果小鼠在同一天接受这两种药物，则先给予紫杉醇，10-15分钟后，再给予ZD6474。运用公式π/6×较大直径×(较小直径)2，计算肿瘤大小。
表1ZD6474单用或与紫杉醇联用时对GEO人结肠癌异种移植物的抗肿瘤活性
*第110天处死时，该组10只小鼠中有2只没有GEO肿瘤的组织学证据。在计算生长延迟时间时，不包括这两只小鼠的数据。
对照小鼠注射肿瘤细胞后第28天的平均肿瘤体积为1.95(±0.15)cm3，约占裸鼠体重的10％，此时处死该组小鼠。当其肿瘤达到相当大小时，处死每个治疗组的小鼠。
运用Mantel-Cox logrank检验，对肿瘤体积达到2cm3的时间进行统计学评价，结果如下ZD6474(100mg/kg)相对于对照(p＝0.001)；紫杉醇+ZD6474(100mg/kg)相对于对照(p＝0.0001)；紫杉醇+ZD6474(100mg/kg)相对于紫杉醇(p＝0.001)；紫杉醇+ZD6474(100mg/kg)相对于ZD6474(100mg/kg)(p＝0.01)。
结果表明，ZD6474和紫杉醇联用，比ZD6474或紫杉醇单用产生的抗肿瘤效应显著增大。
(b)SW620人结肠癌异种移植模型口服ZD6474给至少8周龄小鼠进行肿瘤植入程序。让人类肿瘤异种移植物在雌性Alderley Park无胸腺(nu/nu基因型，Swiss)小鼠体内生长，所述小鼠在负压隔离器(PFI Systems Ltd.，Oxon，UK)中关养。
将SW620细胞植入无胸腺小鼠(1×106细胞/小鼠，悬浮于含50％基质胶的无血清培养基中；s.c左胁)体内，让其生长例如5天，在该点进行随机抽样(10或12个动物/组)。使用紫杉醇(例如5mg/ml；i.p.每天2次，共3天)或溶媒(3％聚氧乙烯蓖麻油3％甲醇94％PBS/A；i.p.每天2次，共3天)对动物进行治疗。然后以0.1ml/10g体重(p.o)的剂量、每天一次给予动物悬浮于1％(v/v)的聚氧乙烯(20)山梨聚糖单油酸酯的去离子水溶液的ZD6474(口服(p.o.))或相应的溶媒。在不同治疗组中使用不同剂量的ZD6474，例如25mg/kg或50mg/kg。
可以在给予紫杉醇之前、之后或同时给予ZD6474；给药方案可以是不同的。
采用双边游标卡尺测量法，测量跨越肿瘤的最大直径为长度，与之垂直的直径为宽度，运用公式(π/6)×(长×宽)×v(长×宽)进行计算，每周至少两次评价肿瘤体积。通过比较对照组和治疗组间肿瘤体积的差异，评价从治疗开始以来的生长抑制。
运用单侧双样t检验评价统计学显著性。
其中联合给予25mg/kg ZD6474的研究数据示于
图1中。在第17天和第20天，联合给药组的平均肿瘤体积显著小于接受单独的ZD6474的组的平均肿瘤体积(分别是p＝0.008和p＝0.032)。
权利要求
1.一种在温血动物例如人体内产生抗血管生成和/或血管通透性降低效应的方法，所述方法包括在给予所述动物有效量的紫杉烷之前、之后或同时给予有效量的ZD6474或其药学上可接受的盐。
2.一种治疗温血动物例如人的癌症的方法，所述方法包括在给予所述动物有效量的紫杉烷之前、之后或同时给予有效量的ZD6474或其药学上可接受的盐。
3.一种权利要求2的方法，所述方法用于治疗包括实体瘤在内的癌症。
4.一种药用组合物，所述组合物包含ZD6474或其药学上可接受的盐、和紫杉烷、以及药学上可接受的赋形剂或载体。
5.一种药盒，所述药盒包含ZD6474或其药学上可接受的盐以及紫杉烷。
6.ZD6474或其药学上可接受的盐和紫杉烷在制备用于在温血动物例如人体内产生抗血管生成和/或血管通透性降低效应的药物中的用途。
7.ZD6474或其药学上可接受的盐和紫杉烷在制备用于在温血动物例如人体内产生抗癌效应的药物中的用途。
8.权利要求7的用途，其中所述抗癌效应包括抗肿瘤效应。
9.一种在温血动物例如人体内产生抗血管生成和/或血管通透性降低效应的方法，所述方法包括在给予所述动物有效量的紫杉烷之前、之后或同时，并且在给予有效量的电离辐射之前、之后或同时给予有效量的ZD6474或其药学上可接受的盐。
10.一种治疗温血动物例如人的癌症的方法，所述方法包括在给予所述动物有效量的紫杉烷之前、之后或同时，并且在给予有效量的电离辐射之前、之后或同时给予有效量的ZD6474或其药学上可接受的盐。
11.一种权利要求10的方法，所述方法用于治疗包括实体瘤在内的癌症。
12.ZD6474或其药学上可接受的盐和紫杉烷在制备用于在正在进行电离辐射治疗的温血动物例如人体内产生抗血管生成和/或血管通透性降低效应的药物中的用途。
13.ZD6474或其药学上可接受的盐和紫杉烷在制备用于在正在进行电离辐射治疗的温血动物例如人体内产生抗癌效应的药物中的用途。
14.权利要求13的用途，其中所述抗癌效应包括抗肿瘤效应。
全文摘要
本发明涉及一种在温血动物例如人体内产生抗血管生成和/或血管通透性降低效应的方法，特别是癌症(包括实体瘤)的治疗方法，所述方法包括联合给予ZD6474和紫杉烷；一种包含ZD6474和紫杉烷的药用组合物；一种包含ZD6474和紫杉烷、用于人或动物体的治疗方法的组合产品；一种包含ZD6474和紫杉烷的药盒；ZD6474和紫杉烷在制备用于在温血动物例如人体内产生抗血管生成和/或血管通透性降低效应的药物中的用途，其中所述温血动物任选采用电离辐射进行治疗。
文档编号A61P9/00GK1612738SQ02826795
公开日2005年5月4日 申请日期2002年11月6日 优先权日2001年11月8日
发明者S·R·韦奇 申请人:阿斯特拉曾尼卡有限公司