含有肠内细菌的片剂的制作方法

专利名称：含有肠内细菌的片剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有肠内细菌的片剂。
背景技术：
近年来，双尾菌为主的肠内细菌广泛被应用于药品、准药品、食品等。但是，肠内细菌因温度、湿度、光、pH值及制片时的打压等各种原因容易失活，所以关于制剂化存在很多问题。特别是，对于片剂，已知因为制片时的打压而使活菌的生存率下降。而且，片剂中的肠内细菌，在长期保存中容易失活。

发明内容
本发明者，克服上述以往存在的问题，成功开发了含有肠内细菌的片剂，制片时的菌体残存率为20％以上，在40℃、75％RH(相对湿度)条件下保存6个月后的稳定性为20％以上。进而本发明者，通过潜心研究完成了本发明。
即，本发明涉及(1)一种含有肠内细菌的片剂，其特征在于，制片时的菌体残存率为20％以上，在40℃、75％RH条件下保存6个月后的稳定性为20％以上。
(2)根据前述(1)所述的片剂，其特征在于，活菌数为1.0×105～2.0×1011CFU/g。
(3)根据前述(1)所述的片剂，其特征在于，硬度为30～300N。
(4)根据前述(1)所述的片剂，其特征在于，肠内细菌为由双尾菌、乳酸杆菌、乳酸球菌及有孢子性乳酸菌构成的组中选择的细菌。
具体实施例方式
本发明的片剂中含有的肠内细菌为在肠内生存的细菌类的总称，具体来说，可以例举例如，嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、胚芽乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp bulgaricus)、德氏乳杆菌乳亚种(Lactobacillus delbrueckii subsplactis)等乳酸杆菌(Lactobacillus)属；例如，瑞士乳杆菌(Leuconostoc mesenteroides)、粪链(肠)球菌(Streptococcus(Enterococcus)faecalis)、屎链(肠)球菌(Streptococcus(Enterococcus)faecium)、海氏链(肠)球菌(Streptococcus(Enterococcus)hirae)、乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)等乳酸球菌；两岐双岐杆菌(Bifidobacterium bifidum)、长双岐杆菌(Bifidobacterium Longum)、短双岐杆菌(Bifidobacterium breve)、青春双岐杆菌(Bifidobacteriumadolescentis)、婴儿双岐杆菌(Bifidobacterium infantis)、假长双歧杆菌(Bifidobacterium pseudolongum)、嗜热双岐杆菌(Bifidobacteriumthermophirum)等双岐杆菌(Bifidobacterium)属(也称为双尾菌)；例如，凝结牙孢杆菌(Bacillus coagulans)等有孢子性乳酸菌；例如，脆弱类杆菌(fragilis)菌或产黑色素类杆菌等类杆菌(Bacteroides)属；例如，エアロフアシエンス等真杆菌(Eubacterium)属；例如，厌氧消化链球菌(P.anaerobius)等消化链球菌(Peptstreptcoccus)属；例如，粪肠球菌(E.faecalis)等肠球菌(Enterococcus)属；例如，产气肠杆菌(E E.aerogenes)等肠杆菌(Enterobacter)属；疮疱丙酸杆菌(P.acnes)等丙酸杆菌(Propionibacterium)属；例如，变异链球菌(S.mutans)等链球菌(Streptococcus)属；例如，マルチアシダ菌等ミツオケラ(Mitsuokella)属；例如，藤黄八叠球菌等八叠球菌(Sarcina)属；例如，ブロ一ミ菌等瘤胃菌(Ruminococcus)属；例如，小韦荣球菌(Veillonella parvula)等韦荣氏球菌(Veillonella)属；例如，埃氏巨球菌(エルスデニ)等巨球菌(Megasphaera)属的微生物。
本发明的片剂中含有的肠内细菌，优选具有整肠作用的肠内细菌。具体来说，优选例如，两岐双岐杆菌、长双岐杆菌、短双岐杆菌、青春双岐杆菌、婴儿双岐杆菌、假双歧杆菌、嗜热双岐杆菌等双尾菌；例如，嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、加氏乳杆菌、胚芽乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、德氏乳杆菌亚种等乳酸杆菌属；例如，瑞士乳杆菌、粪链(肠)球菌、屎链(肠)球菌、海氏链(肠)球菌、乳酸乳杆菌、嗜热链球菌等乳酸球菌；例如，凝结牙孢杆菌等有孢子性乳酸菌，特别优选两岐双岐杆菌。
本发明所述的片剂，其特征在于，制片时的菌体残存率为约20％以上。制片时的菌体残存率，优选为约20～95％，更加优选30～95％，特别优选为约50～95％。此时，制片时的菌体残存率，可以通过下面式1菌体残存率(％)＝(1g片剂中的活菌数/1g制片原料中的活菌数)×100算出。前式中“1g片剂中的活菌数”的测定，是将制片后的片剂立刻细碎成粉末，测定该粉末中的活菌数。“1g制片原料中的活菌数”，是通过测定制片前的制片原料的活菌数而求得。至于活菌数的测定，只要片剂中活菌数的测定与制片原料中活菌数的测定通过相同方法进行，则没有特别的限定。前述活菌数的测定根据菌体的种类而不同，例如可以通过日本药典外药品成分规格中记载的各种菌体的定量方法容易地测定。
本发明所述的片剂，其特征在于，在40℃、75％RH的条件下保存6个月后的稳定性为约20％以上。保存稳定性优选为约20～95％，更加优选为约30～95％，特别优选为约50～95％。此时，根据制片后片剂中的活菌数、及在40℃、75％RH的条件下保存6个月后片剂中的活菌数，通过下式2保存稳定性(％)＝(1g保存后的片剂中的活菌数/1g制片后的片剂中的活菌数)×100算出保存稳定性。至于活菌数的测定，只要保存后的片剂中的活菌数测定与制片后的片剂中的活菌数的测定通过相同方法进行，则没有特殊的限定。如上所述可以通过例如日本药典外药品成分规格中记载的定量方法等，根据菌体的种类测定活菌数。
本发明所述片剂，优选活菌数为大约1.0×105～为大约2.0×1011CFU/g。更加优选活菌数为大约1.0×106～1.0×1011CFU/g，特别优选为大约1.0×107～1.0×1011CFU/g。片剂中的活菌数根据菌体种类通过日本药典外药品成分规格中记载的定量方法测定。
本发明所述的片剂，除了肠内细菌以外，也可以根据需要进一步含有制剂技术领域中通常使用的赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、抗凝剂等各种添加剂。作为前述赋形剂，可以例举白糖、乳糖、甘露醇或葡萄糖等糖类；玉米淀粉、马铃薯淀粉或部分α化的淀粉等淀粉类；结晶纤维素；磷酸氢钙；磷酸钙等其他可以作为赋形剂使用的各种制酸剂等。作为前述粘合剂，可以例举白糖、葡萄糖、麦芽糖醇等糖类或糖醇类；糊精、淀粉、藻酸钠、角叉菜胶、愈疮树胶、阿拉伯树胶或琼脂等多糖类；黄蓍胶、明胶、或谷蛋白等天然高分子类；羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素或羧甲基纤维素钠等纤维素衍生物；聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、聚乙二醇、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸或聚乙酸乙烯酯树脂等合成高分子化合物等。作为崩解剂，可以例举羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基淀粉钠、玉米淀粉、羟丙基淀粉、部分α化的淀粉、低取代度羟丙基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮或交联羧甲基纤维素钠等。作为润滑剂、抗凝剂，可以例举滑石、硬酯酸镁、硬酯酸钙、硅胶、硬酯酸、轻质无水硅酸、蔗糖脂肪酸酯、蜡类、硬化油、聚乙二醇或安息香酸钠等。上述添加剂的含量，只要是在制剂技术领域中常用范围内则适合使用。赋形剂的含量优选为约10～99重量％，粘合剂的含量优选为约1～30重量％，崩解剂的含量优选为约0～20重量％，润滑剂、抗凝剂的含量优选为约0.5～10重量％。
本发明所述的片剂，除了上述添加剂以外，可以适当含有例如肠内细菌的增殖因子、倍散剂、调味剂、香料、染料等。作为肠内细菌、特别是双尾菌的增殖因子，可以例举乳果糖、低聚乳果糖或低聚异麦芽糖等低聚糖类。作为倍散剂，可以例举砂糖、葡萄糖、糊精、淀粉、脱脂淀粉、乳蛋白或天然物提取类等；作为调味剂，可以例举抗坏血酸或柠檬酸；作为香料，可以例举1-薄荷醇、酸奶粉香料或柠檬粉香料等；作为染料，可以例举天然色素等。这些物质的含量没有特别的限定，可以适当选择。
本发明所述的片剂，也可以含有乳酸菌以外的其他药理活性成分。作为其他药理活性成分，没有特别的限定，可以例举(a)具有整肠作用的成分(例如食物纤维等)，(b)抑制胃酸分泌或中和胃酸而防止因胃酸使肠内细菌失活的成分(例如，碳酸氢钠、氧化镁等制酸剂；噻哌溴铵(timepidium bromide)或甲基硫酸N-甲基莨菪胺等抗胆碱剂；胃溃宁等抗胃液剂；甲腈咪胍、雷尼替丁或法莫替丁等H2受体拮抗剂；奥美拉唑等质子泵抑制剂等)，(c)有关肠疾病(例如，溃疡性大肠炎或节段性肠炎等炎症性肠炎、过敏性肠炎等)的治疗预防药，(d)色甘酸钠等抗过敏剂，(e)普伐他汀钠等高脂血症剂，(f)替加氟等抗癌药，(g)伏格列波糖等糖尿病治疗剂等。
本发明片剂的形态没有特别的限定。例如，本发明的片剂可以是裸片，也可以是薄膜包衣片、咀嚼片、有核片、发泡片或多层片。
作为前述包衣片，可以例举糖衣片或肠溶片等。通过这样的包覆，可以防止服用之后胃酸导致的肠内细菌的失活。作为前述肠溶片，可以例举在裸片表面形成由肠溶性高分子化合物构成的薄膜的片剂。前述肠溶性高分子化合物，只要是溶解于pH5以上水，且不溶于不足pH5的酸性溶液的薄膜形成性高分子化合物，则没有特别的限定，可以使用通常在本领域中使用高分子化合物。作为这样的肠溶性高分子化合物，可以例举纤维素衍生物、聚乙烯衍生物、马来酸-乙烯基共聚物或丙烯酸系共聚物。作为前述纤维素衍生物的具体例，有羧甲基乙基纤维素、邻苯二甲酸醋酸纤维素、琥珀酸醋酸纤维素、邻苯二甲酸甲基纤维素、邻苯二甲酸羟甲基乙基纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素等。作为前述聚乙烯衍生物的具体例，有聚乙烯醇邻苯二甲酸酯、聚丁酸乙烯酯邻苯二甲酸酯、聚乙烯基酰基乙缩醛邻苯二甲酸酯(ポリビニルアセトアセタ一ルフタレ一ト)等。另外，作为前述马来酸-乙烯基共聚物的具体例，有乙酸乙烯酯-马来酸酐共聚物、乙烯基丁基醚-马来酸酐共聚物、苯乙烯-马来酸单酯共聚物等。作为前述丙烯酸系共聚物的具体例，有丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、苯乙烯-丙烯酸共聚物、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸-丙烯酸辛酯共聚物、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物(例如オイドラギツト(商品名、レ一ム·フア一マ公司制造))等。其中，作为肠溶性高分子化合物，优选オイドラギツト。这些肠溶性高分子化合物，可以单独使用一种，也可以组合两种以上使用。
前述咀嚼片，是一种在口腔内溶解或嚼碎而服用的制剂。前述咀嚼片中，也包括在口腔内迅速崩解，优选60秒左右之内崩解的制剂。前述咀嚼片，优选含有选自水溶性粘合剂、水溶性赋性剂及崩解剂的至少一种以上的添加剂。作为前述水溶性粘合剂，优选使用纤维素系或乙烯基系高分子化合物，具体来说有聚乙烯基吡咯烷酮、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇、甲基纤维素、茁霉多糖、琼脂、明胶或藻酸钠等。作为水溶性赋形剂，有糖醇或糖等。作为糖醇，可以例举赤藓糖醇、木糖醇或甘露糖醇等；作为糖，可以例举乳糖或葡萄糖等。作为崩解剂，可以例举前述的物质。崩解剂也可与崩解助剂一起使用。作为崩解助剂，优选易挥发物质，例如具有升华性质的樟脑、尿烷、尿素、碳酸氢铵或安息香酸等。在咀嚼片中上述添加剂的含量没有特别的限制，可以在该技术领域中使用的范围内适当选择。
作为前述多层片，可以例举组合了崩解性不同的层的片剂、具有含有不同肠内细菌的片剂、具有含肠内细菌的层与含有肠内细菌以外成分的层的片剂等。作为组合了崩解性不同的层的片剂，可以例举组合了缓释性层和速释性层的片剂等。前述缓释性层可以利用公知的方法制造，例如将肠内细菌微胶囊化，或如上述将层的周围实施涂布而得到。另外，前述速释性层也可以利用公知的方法制造，可以通过降低制片压力而得到。而且，前述速释性层，与制造上述咀嚼片时一样，也可以通过选择添加水溶性粘合剂、水溶性赋性剂或崩解剂等添加剂的种类或含量而制造。在具有含有肠内细菌的层与含有肠内细菌以外成分的层的片剂中，作为肠内细菌以外的成分没有特别的限定。可以例举(a)维生素类(例如，维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素C、维生素D、维生素E、维生素K、烟酸、泛酸、叶酸、生物素等)、(b)矿物质类(例如，钠、钾、钙、镁、碘、氯、磷、铁、铜、锰、硒、锌、铬、钼等)、(c)氨基酸(例如，色氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、L-半胱氨酸、酪氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、脯氨酸、精氨酸、组氨酸或丝氨酸等)或(d)食物纤维(例如，纤维素、半纤维素、葡聚糖、木质素或角质素等不溶性食物纤维；糊精(难消化性)、果胶质、瓜尔豆胶、黄原胶或甘露聚糖等水溶性食物纤维)等具有营养价值的物质。作为肠内细菌以外的成分，可以例举如上述的其他药理活性成分或如上述肠内细菌的增殖因子等。
作为本发明的片剂的制造方法，例如，将适当的赋形剂、粘合剂、抗凝剂、着色剂、香味剂、甜味剂等添加剂预先造粒，在得到的造粒物中加入并混合肠内细菌的活菌粉末、润滑剂等添加剂，将得到的混合物通过制片机进行制片的间接制片法。另外，也有将肠内细菌的活菌粉末及所需的适当赋形剂、粘合剂、抗凝剂、着色剂、香味剂、甜味剂等添加剂进行混合，将该混合物通过公知的制片机进行制片的直接制片法。
下面，详细论述各个步骤。
肠内细菌的活菌粉末，可以通过喷雾干燥、冷冻干燥、流化床干燥而制造。其中，在本发明中，肠内细菌的活菌粉末优选通过喷雾干燥来制造。
作为利用喷雾干燥制造肠内细菌的活菌粉末的方法，可以例举将含有肠内细菌的溶液或悬浊液在暖风中喷雾并干燥的方法。在前述含有肠内细菌的溶液中使用的溶剂，可以使用该技术领域中公知的溶剂，但是优选使用水。根据需要也可以加入乙醇。在前述含有肠内细菌的悬浊液中使用的悬浊介质，也可以使用该技术领域中公知的悬浊介质，但是优选使用水或添加了乙醇等的水溶液。悬浊时，也可以使用悬浊剂。作为悬浊剂，可以使用例如藻酸钠或甲基纤维素等公知的物质。在上述含有肠内细菌的溶液或悬浊液中，也可以添加保护剂。保护剂可以使用该技术领域中常用的物质，例如，抗坏血酸等维生素类；例如，谷氨酰胺、谷氨酸、L-半胱氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸或苏氨酸等氨基酸；例如，葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇或麦芽糖醇等糖类或糖醇类；例如，乳果糖或低聚乳果糖等低聚糖类、环糊精或糊精等多糖类；例如，从菜籽、大豆或花生等得到的高级脂肪酸类脂肪；例如，从牛奶或大豆等得到的蛋白质、或肽等蛋白质分解物；例如，硫酸镁等无机类；或除此之外，例如，蔗糖脂肪酸酯、苹果酸、核酸类、酵母提取物、脱脂奶粉、胨、明胶或丹宁酸等。该保护剂可以单独使用上述物质，也可以任意组合两种以上使用。而且，该保护剂的添加量大约为湿菌体重量的0.1～5.0倍左右，优选0.5～3.0倍左右。在上述含有肠内细菌的溶液或悬浊液中，也可以进一步以通常的配合比例添加例如赋形剂、粘合剂、崩解剂或防静电剂等该技术领域中通常使用的添加剂。
将上述含有肠内细菌的溶液或悬浊液进行喷雾干燥时，作为该喷雾干燥中使用的喷雾干燥装置，优选使用具备可以形成单微米级喷雾液滴的微粒化装置的喷雾干燥装置。喷雾液滴的粒径非常小时，每单位重量喷雾液滴的表面积增大，与干燥风有效接触，可以有效抑制干燥风的热引起的菌死亡或损伤。在此，所谓单微米级的喷雾液滴，是指喷雾液滴的粒径在小数点后一位四舍五入之后为1～10μm。作为喷雾干燥装置，具体来说，可以例举，其微粒化装置为利用旋转雾化器(旋转圆盘)、加压喷嘴或压缩气体力的双流道喷嘴或四流道喷嘴的喷雾干燥装置。在本发明中，不论其形式，都可以使用上述任一种喷雾干燥装置，但从可以得到微小喷雾液滴的角度考虑，优选使用具有四流道喷嘴的喷雾干燥装置。该喷雾装置可以是公知的装置(例如，日本专利2797080中记载的装置)。在具有四流道喷嘴的喷雾干燥装置中，作为四流道喷嘴的结构，例如，使气体流道与液体流道成为一个系统时，该系统在喷嘴边缘对称设置两个系统，而作为流体流动面的斜面设置在喷嘴边缘。
从上述微粒化装置中喷雾的肠内细菌的喷雾液滴，在喷雾干燥装置的干燥室中被暖风干燥，可以得到肠内细菌的活菌粉末。干燥风的干燥室入口的温度(以下称为“入口温度”)为约2～400℃，优选为约5～250℃，更加优选为约5～150℃。入口温度即使为约200～400℃的高温，由于水分蒸发的气化热，被干燥物的温度不会变得那么高。而且，通过缩短在干燥室内的滞留时间，可以有效抑制活菌的死亡或损伤。另外，干燥风的干燥室出口温度(以下称为“出口温度”)，为约0～120℃，优选为约5～90℃，更加优选为约5～70℃。而且，干燥室也可以减压。通过减压，可以提高干燥效率，缩短干燥时间。干燥室减压后的压力因喷雾液滴的大小而不同，所以不能一概而论，例如低真空范围的压力，具体来说，可例举大约1.0×103～7.0×103pa。
作为利用流化床干燥制造肠内细菌的活菌粉末的方法，可以例举，一边在流化床中用暖风使粉体飞扬，一边将含有肠内细菌的溶液喷雾，包附在粉体上的方法。此时使用的成为核的粉体称为基材。作为基材，没有特别的限定，可以例举玉米渣、大豆粉(黄粉)、脱脂乳(造粒的脱脂奶粉)、米粉(上新粉、包含糯米粉)、小麦粉、维生素类或氨基酸类等，其中优选维生素类或氨基酸类。在含有肠内细菌的溶液中，可加入用于保护肠内细菌的保护剂。作为保护剂，可以使用与喷雾干燥时使用的保护剂相同的物质，但优选糖类。作为糖类，可以例举蔗糖、麦芽糖或乳糖等。作为在本发明中使用的保护剂，优选使用10～20重量％的蔗糖。
作为具体的制造方法，首先向流化床干燥机投入基材。此时同时调整微粒化装置。从流化床干燥机的料罐下方供给暖风，使基材流动。暖风的温度优选为约40～60℃，更加优选为约50～55℃。将含有肠内细菌的溶液在微粒化装置中进行微粒化，喷附到流化床内的基材上。喷雾液滴附着在基材上的同时，喷雾液滴的水分蒸发，在基材表面上形成有肠内细菌和根据需要的保护剂构成的薄层，从而得到活菌粉末。
作为利用冷冻干燥制造肠内细菌的活菌粉末的方法，可以将含有乳酸菌的溶液或悬浊液在0.008～0.8托、约-20～-60℃的低温下进行干燥而制造。在该制造方法中，为了防止干燥或溶解时菌体死亡，优选在含有乳酸菌的溶液或悬浊液中添加保护剂。作为前述保护剂，可以使用公知的物质，例如，脱脂乳、谷氨酸钠、明胶及蔗糖、苯丙氨酸、组氨酸、柠檬酸、琥珀酸、酒石酸及碳酸碱、葡萄糖、海藻糖、脱脂奶粉、抗坏血酸钠、蒟蒻粉中含有的多糖类的部分水解产物等。
利用直接制片法时，在通过如上所述制造的肠内细菌的活菌粉末中，根据需要可以混合适当的赋形剂、粘合剂、润滑剂、凝固防止剂、着色剂、香味剂、甜味剂等添加剂，利用公知的制片机将该混合物进行制片。作为制片机没有特别的限定，但优选具有优良生产率的旋转制片机或单发式制片机。制片时的制片压力，为约1～100kN/cm2，优选为约5～50kN/cm2，更加优选为约10～40kN/cm2。在上述方法中，润滑剂和肠内细菌的活菌粉末不进行混合，作为替代可以在制片用的冲及冲模中加入润滑剂进行制片。
利用间接制片法时，加入适当的赋形剂、粘合剂、抗凝剂、着色剂、香味剂、甜味剂等添加剂而进行造粒，制造制片用的造粒物。造粒物的制造可以通过公知的方法进行，例如可以使用流化床造粒、搅拌造粒、旋转造粒、旋转流化床造粒、挤压造粒或干式造粒等公知的造粒机容易地进行。在得到的制片用的造粒物中，添加混合通过上述制造方法制造的肠内细菌的活菌粉末、润滑剂等添加剂，利用制片机将得到的混合物进行制片。作为制片机没有特别的限定，但是优选具有优良生产率的旋转制片机或单发式制片机。制片时的制片压力为约1～100kN/cm2，优选为约5～50kN/cm2，更加优选为约10～40kN/cm2。在本方法中，润滑剂和肠内细菌的活菌粉末不进行混合，作之以可以在制片用的冲及冲模中加入润滑剂进行制片。
本发明的片剂为咀嚼片的形态时，除了利用通常方法制造之外，可以通过下述方法制造。可以例举在PTP(挤压包装)的泡罩中注入肠内细菌、甘露醇等糖类及琼脂等凝胶化剂的悬浊液，通过冷冻干燥或减压干燥除去水分，在泡罩内形成片剂的方法。可以例举将在肠内细菌的活菌粉末中添加了以糖类为主体的水溶性粘合剂的添加剂的粉体，在低压条件下压缩成形之后，将片剂放置在加湿环境中使其湿润，再将其干燥的方法。在肠内细菌的活菌粉末中添加聚乙二醇(ポリエリレングリコ一ル)等水溶性熔融性粘合剂的粉体，在低压压缩成形之后，在比水溶性熔融性粘合剂的熔点高的温度条件下溶解前述粘合剂，之后将水溶性熔融性粘合剂再次凝固的方法。
本发明的片剂作为多层片的形态时，可以通过下述方法制造。作为第一种方法，有将构成各层的制片原料层状重叠，将该物质制片而形成多层性片剂的方法。此时制片压力优选为约5～50kN/cm2。作为第二种方法，有将构成各层的制片原料预先在低制片压力(5～30kN/cm2)条件下进行制片时，将得到的片剂状各层进行层压，在比起初高的低制片压力(10～50kN/cm2)条件下进行制片而形成多层性片剂的方法。为了在制片时降低对肠内细菌的影响，优选后一方法。多层片为三层以上时，优选含有肠内细菌的层存在于片剂外侧。
本发明中含有肠内细菌的片剂，其用途没有限定，可以在广范围内使用。例如，本发明的片剂可以作为药品、食品或饲料使用。而且，也可以用作农作物的肥料或农药。
例如，乳酸菌类作为有用的肠内细菌之一已被公知，对于健康具有重大影响。特别是对于双尾菌、乳酸球菌或乳酸杆菌的生理学意义出现了许多报道，明确了在肠内产生乳酸或醋酸等有机酸而抑制有害菌的作用，维生素的产生及免疫力的赋活化等。从而，本发明的片剂，可以作为以人、家畜动物或宠物动物等的健康维持强化或疾病的预防或治疗为目的的药品、食品或饲料使用。
本发明的片剂，具有恢复肠粘膜，或肠管的酶电位在应力状况下变化时，具有调节该电位的作用。而且，可以使肠内细菌群的功能正常化，促进维生素及蛋白质的合成、消化过程或酶过程及吸收过程，防止病原性微生物群的形成，也具有刺激免疫应答的作用。因此，本发明的片剂，例如可以用于腹泻、便秘、高胆固醇血症、肝疾病、免疫力下降性疾病、肠炎(例如，胃肠炎或结肠炎等)的治疗或预防；食品、药剂、化学药品或物理药剂引起失调之后，或外科侵入、化疗或接触感染症后的肠的恢复；对于内毒素吸收的阻碍及对内因性毒物生成的拮抗作用。在前述用途中使用时，本发明的片剂中优选含有乳酸菌或双尾菌。
本发明的片剂，可以作为点心类直接摄取，也可以添加在酸奶或奶酪等乳制品、点心类或饮料类等中。而且，乳酸菌类在豆酱、酱油、咸菜或日本酒等食品的制造工序中，对于风味或保存性的提高或质量的维持具有重大意义。因此，本发明的片剂可以用于前述食品的制造。
实施例[实施例1]含肠内细菌片剂的制造[菌体的培养]将利用GAM培养基(日水制药株式会社制造)预先增菌的两岐双岐杆菌的培养液，在同一种培养基中接种0.1重量％，在37℃条件下培养16小时。将其离心分离，得到的沉淀物作为湿菌体。
以甘露醇0.5M、谷氨酸钠0.5M、精氨酸0.1M、琥珀酸钠0.1M、硫酸镁0.01M的浓度调制的水溶液中，以达到35重量％的标准加入糊精调制的分散介质中，将得到的湿菌体悬浊。
将如上述制造的菌悬浊液，使用具有四流道喷嘴(如日本专利2797080号记载)的喷雾干燥机进行喷雾干燥。也就是说，将从两个液体流道以8mL/分(4mL/分/1mm喷嘴)的速度供给菌悬浊液，从两个气体流道以40NL/分(在20℃条件下换算的值)的速度供给压缩气体而产生的喷雾液滴，通过干燥风进行干燥，制造菌末。其中，干燥风的入口温度为100℃，以1.0m3/分的比例向干燥室供给，出口温度为67℃。
在乳糖造粒物中混合通过上述喷雾干燥而得到的菌末及硬脂酸镁，作为制片原料。相对于制片原料总量，菌末的重量比例为1重量％，硬脂酸镁的重量比例为0.5重量％。将该制片原料使用D51型制片机(株式会社菊水制作所制造)，以10kN/cm2的制片压力进行制片。使片剂的直径为9mm，重量为300mg，硬度为49～68.6N(5～7kgf)。
制片原料及片剂中的活菌数的测定制片原料及片剂中的活菌数通过以下方法测定。对于片剂，轻轻碎成粉末，并均匀混合。将制片原料及成为粉末状的片剂各自精确量取10.0g，并加入稀释液，使总量达到100mL。之后强烈振荡混合，在35～37℃条件下大约保温30分钟之后再次振荡混合。准确量取1mL，重复进行加入到另外准确分液的稀释液9mL中的操作，将达到1mL中含有20～200个左右活菌浓度的溶液作为试液。在三个陪替(petri)式培养皿中各加入1mL试液，其中各自加入保持45～48℃的双尾菌定量用的琼脂培养基20mL并迅速混合、固化。在35～37℃条件下无氧培养48～72小时，统计出现的群，求得平均群数。制片原料及片剂各1g中的活菌数通过下式计算。
活菌数(CFU/g)＝平均群数×稀释倍率此时，双尾菌定量用的琼脂培养基通过加热以下成分中马血以外的成分进行溶解，调整至pH为7.2，利用高压蒸汽灭菌器在115℃条件下加热20分钟进行灭菌之后，冷却至50℃，并加入马血来制造。
牛肝脏浸出液 150mL动物肉制胨 10g酪蛋白制胨 5g酵母提取物 5g肉提取物 3g大豆制胨 3g葡萄糖 10g磷酸氢钾 1g磷酸二氢钾 1g淀粉 0.5gL-盐酸半胱氨酸 0.5g硫酸镁 0.2g氯化钠 0.01g硫酸亚铁 0.01g硫酸锰 7mg聚山梨醇酯80 1g琼脂 15g
马血 50mL精制水 790mLpH7.1～7.3另外，上述稀释液通过混合以下成分，利用高压蒸汽灭菌器在121℃条件下加热15分钟进行灭菌而调制。
无水磷酸氢钠 6.0g磷酸二氢钾 4.5g聚山梨醇酯80 0.5gL-盐酸半胱氨酸 0.5g琼脂 1.0g精制水 1000mLpH6.8～7.0[实施例3]制片时残存率的测定制片时的残存率利用下面计算式算出。
制片时的残存率(％)＝1g片剂中的活菌数/1g制片原料中的活菌数×100另外，片剂的硬度利用片剂破坏强度测定器(TH-203RP富山产业株式会社制造)进行测定。
表1
保存稳定性的测定将实施例1中制造的片剂在40℃、75％RH的条件下保存，测定经过规定期间之后的活菌数。片剂中的活菌数，通过如下方法测定。取50片以上的片剂，精确测量其质量，求得平均质量。之后，通过与实施例2相同的方法求得平均群数。根据得到的值，通过下式得到了片剂9片中的活菌数。
片剂9片中的活菌数(CFU/g)＝平均群数×稀释倍率×(平均重量(g)×10/试液采集量(g))×9根据得到的活菌数，通过下式算出稳定性(％)。
稳定性(％)＝{经过规定期间后片剂中的活菌数(CFU/片剂9片)/试验开始时片剂中的活菌数(CFU/片剂9片)}×100表2

工业实用性颗粒剂、散剂或细粒剂，对于服用者会产生粗涩或塞牙的不适感。胶囊剂，在运输时会变形，或被破坏的可能性较高。但是片剂形态，不会产生前述问题，对于利用者可以提供非常容易处理的药品或食品。即，本发明的片剂，容易服用，也不必担心运输时会变形或被破坏。
进而，本发明的片剂，因为制片时的菌体残存率为约20％以上，所以可以有效摄取肠内细菌。而且，本发明的片剂，在40℃、75％RH条件下保存6个月的稳定性为20％以上，所以具有可以长期保存的优点。
权利要求
1.一种含有肠内细菌的片剂，其特征在于，制片时的菌体残存率为20％以上，在40℃、75％RH条件下保存6个月后的稳定性为约20％以上。
2.根据权利要求1所述的片剂，其特征在于，活菌数为1.0×105～2.0×1011CFU/g。
3.根据权利要求1所述的片剂，其特征在于，硬度为30～300N。
4.根据权利要求1所述的片剂，其特征在于，肠内细菌为由双尾菌、乳酸杆菌、乳酸球菌及有孢子性乳酸菌构成的组中选择的菌。
全文摘要
本发明提供可以有效摄取肠内细菌，且可以长期保存的含有肠内细菌的片剂。
文档编号A61K9/20GK1522711SQ0310372
公开日2004年8月25日 申请日期2003年2月17日 优先权日2003年2月17日
发明者水口泰治, 荒井辉彦, 细川好彦, 山口智史, 史, 彦 申请人:表飞鸣制药株式会社